Введение к работе
Актуальность проблемы. На основе доказанной роли воспалительных процессов в патофизиологии депрессивных расстройств (Dunn A.J., 2005; Kim Y.K., 2007; Dantzer R. et al., 2007) регуляция содержания провоспалительных цитокинов и параметров субпопуляционного состава иммунокомпетентных клеток рассматривается в качестве возможной мишени фармакологической коррекции депрессии (Brain L.E., 2012; Dean B., 2011). В пользу этого положения свидетельствует увеличение уровней циркулирующих провоспалительных цитокинов у больных депрессией, положительная корреляция между содержанием провоспалительных цитокинов и риском возникновения депрессий, тяжестью депрессивной симптоматики, когнитивными нарушениями. А также данные о развитии дисбаланса субпопуляционного состава Т-лимфоцитов, изменение состава внутри Т-хелперной популяции (Th1/Th2), угнетение фагоцитарных реакций макрофагов и нейтрофилов при депрессивном расстройстве (Cryan J.F., 2004; Кутько И.И.; 2007; Dhabhar F.S., 2007; Maes M., 2011).
Препараты, предупреждающие увеличение содержания провоспалительных цитокинов, могут проявлять антидепрессивный эффект и выступать в качестве средств адьювантной терапии депрессии (. et. al., 2009; Dean B., 2011; Казанцева К.В., 2008). Возможной экспериментальной моделью для их поиска и изучения является депрессия у животных в условиях хронического неизбегаемого стресса, вызванного зоосоциальными поражениями (Кудрявцева Н.Н., 1991; Golden S.A. et. al., 2011; Savignac H.M., 2011; Rygula R. et. al. ,2005; Beitia G., 2005). Она воспроизводит этиологические факторы, вызывающие депрессию у людей (Fano E. et. al., 2001; Августинович Д.Ф., 2004; Rygula R. et. al., 2005) и удовлетворяет критериям сходства с депрессией по симптоматике, чувствительности к антидепрессантам и анксиолитикам, эндокринным, иммунным и нейрохимическим изменениям в мозге (Avitsur R., 2009; Bartolomucci A., 2007; Beitia G., 2005; Keeney A., 2006).
В качестве перспективных для иммунофармакологической коррекции при депрессии могут рассматриваться препараты, сочетающие психо- и иммунофармакологическую активности. Среди них особое внимание привлекают ладастен и афобазол, разработанные и изученный в ФГБУ «НИИ фармакологии им. В.В. Закусова» РАМН. Афобазол, помимо основной анксиолитической активности, обладает нейропротекторным, антиоксидантным, противовоспалительным, антимутагенным и антитератогенным эффектами. Ладастен - антиастенический препарат, обладающий актопротекторными, анксиолитическими, иммуномодулирующими и противовоспалительными свойствами (Середенин С.Б. Воронин М. В., 2009; Дурнев А.Д. и соавт., 2009; Яркова М.А., 2005; Вахитова Ю.В., 2004; Морозов И.С. 2001). Спектр фармакологической активности определил перспективу исследования влияния данных препаратов на цитокиновые медиаторы воспаления, субпопуляционный состав Т-лимфоцитов мышей в экспериментальных моделях воспаления и тревожной депрессии.
Цель исследования. Выявить препарат, эффективно снижающий содержание провоспалительных цитокинов, на основе оценки противоспалительных свойств ладастена и афобазола. Провести комплексное исследование влияния отобранного препарата на иммунофармакологические показатели в экспериментальной модели тревожной депрессии у мышей.
Основные задачи исследования.
Для достижения указанной цели были поставлены следующие задачи:
-
Охарактеризовать противовоспалительные свойства ладастена и афобазола на моделях острого экссудативного воспаления у крыс и мышей.
-
На модели нейроиммунной стимуляции, вызванной введением бактериального липополисахарида (LPS) оценить влияние ладастена и афобазола на профиль провоспалительных цитокинов в сыворотке крови мышей.
-
На модели тревожной депрессии у самцов и самок мышей оценить влияния ладастена на поведение, цитокиновый профиль и субпопуляционный состав Т-лимфоцитов крови и иммунокомпетентных органов.
Научная новизна. Впервые охарактеризованы закономерности изменения содержания провоспалительных цитокинов и параметров субпопуляционного состава Т-лимфоцитов иммунокомпетентных органов и крови мышей линии С57BL/6 в экспериментальной модели тревожно-депрессивного состояния, установлено увеличение содержания медиатора системного воспаления IL-6 в сыворотке крови, снижение процентного содержания Т-лимфоцитов, нарушение индекса иммунорегуляции CD4+/CD8+, развитие дефицита популяции Т-хелперов. Впервые установлена способность противоастенического препарата ладастен (30 мг/кг) одновременно снижать концентрации провоспалительных цитокинов TNF, IL-6, IL-17 и IL-4, предупреждать снижение содержания Т-лимфоцитов и уменьшать проявления тревожно-депрессивного поведения у мышей. Это, в совокупности, позволяет констатировать наличие у ладастена ранее неизвестных фармакологических эффектов.
Научно-практическая значимость. Предложен оригинальный подход к отбору препаратов, корригирующих содержание провоспалительных цитокинов, предполагающий двухступенчатую оценку с последовательным использованием экспериментальных моделей острого экссудативного воспаления у мышей и нейроиммунной стимуляции, вызванной введением LPS мышам. Результаты экспериментального исследования на модели тревожной депрессии, впервые демонстрирующие снижение содержания цитокиновых маркеров воспаления и нормализацию иммунологических параметров под влиянием антиастенического препарата ладастен в дозах, соответствующих терапевтическим, определяют перспективы исследования ладастена в качестве средства адьювантной терапии депрессивных расстройств.
Личный вклад автора. Автором самостоятельно выполнены все эксперименты по изучению противовоспалительной активности исследуемых препаратов и их влияния на уровни провоспалительных цитокинов и субпопуляционный состав Т-лимфоцитов мышей с использованием проточного лазерного цитофлуориметра как у контрольных животных, так и у особей в условиях экспериментальной модели тревожной депрессии. Самостоятельно выполнено моделирование патологии поведения животных в условиях зоосоциального стресса у самцов и «психоэмоционального» воздействия у самок. Проведена обработка и описание полученных результатов, сформулированы выводы. При непосредственном участии автора подготовлены публикации по результатам работы.
Апробация работы. Результаты диссертационной работы были доложены и
обсуждены на 5-ой Международной конференции «Биологические основы индивидуальной чувствительности к психотропным препаратам» (Московская область, 2010), 16th World Congress of Basic and Clinical Pharmacology (Copenhagen, WorldPharma 2010), 14th Congress of Immunology (Kobe, Japan, 14th ICI, 2010), Всероссийской конференции молодых учёных «Проблемы биомедицинской науки третьего тысячелетия» (Санкт-Петербург, 2010), 18-ом и 19-ом Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2011, 2012), V-ом Съезде иммунологов России (Москва, 2011), 11th ECNP Regional Meeting, 14-16 April 2011, St.Petersburg, Russia, VI-ом Национальном конгрессе терапевтов (Москва, 2011).
Публикации. По теме диссертации опубликовано 12 научных работ, из них: 3 статьи опубликованы в ведущих рецензируемых научных журналах, определенных Высшей аттестационной комиссией, 9 тезисов опубликованы в материалах Всероссийских и Международных конференций.
Объём и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 110 страницах компьютерного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, результатов экспериментов, их обсуждения, выводов и списка литературы. Иллюстрирована 15 таблицами и 9 рисунками. Библиографический указатель включает 69 отечественных и 211 иностранных источников.
Основные положения, выносимые на защиту.
-
На модели острого экссудативного воспаления на Кон-А у мышей Ладастен (10, 30, 50 мг/кг) и Афобазол (1, 5, 10 мг/кг) проявляют сходную выраженность противовоспалительного действия.
-
На модели нейроиммунной стимуляции липополисахаридом Ладастен предупреждает LPS индуцированное увеличение содержания IL-6 и на TNF, афобазол не влияет на уровни интерлейкинов при стимуляции LPS.
-
Развитие экспериментальной тревожной депрессии у самцов мышей сопровождается нарушением весовых индексов и субпопуляционного состава Т-лимфоцитов тимуса и селезёнки, динамическими изменениями содержания провоспалительных цитокинов IL-4, IL-6 и IL17 в зависимости от стадии развития тревожно-депрессивного состояния.
-
Ладастен (30 мг/кг, в/б) в экспериментальной модели тревожной депрессии значимо снижает уменьшение массы тимуса и увеличение массы селезёнки экспериментальных животных, предупреждает нарушение субпопуляционного состава Т-лимфоцитов органов и снижает и/или восстанавливает содержание провоспалительных цитокинов до уровня контрольных значений.
