Содержание к диссертации
Введение
Глава I Обзор литературы 15
Глава II Материал и методы исследований 36
II. 1. Характеристика объекта и серий исследований 36
11.2. Постановка экспериментов с моделированием острой соматической боли 41
11.3. Методы исследования белой крови и костного мозга 44
11.4. Цитохимические методы исследования лейкоцитов 47
11.5. Метод определения цитокинов 49
11.6. Методы статистического анализа результатов исследований 50
Глава III Результаты исследования реакции лейкоцитарного пула крыс на острую соматическую боль в раннем постнатальном онтогенезе 52
Ш.1. Характеристика лейкоцитарной формулы в исходном состоянии 52
III.2. Изменения содержания лейкоцитов и лейкоцитарной формулы в периферической крови новорожденных крыс в ответ на слабое болевое раздражение 54
Ш.З. Изменения содержания лейкоцитов в периферической крови
новорожденных крыс в ответ на сильное болевое раздражение 57
Ш.4. Изменение содержания лейкоцитов и лейкоцитарная формула в периферической крови крыс месячного возраста в ответ на слабое болевое
воздействие 61
III.5. Количество лейкоцитов и лейкоцитарная формула крови крыс месячного возраста при действии сильной боли 67
Глава IV Результаты исследования фагоцитарной активности крыс при нанесении болевого раздражения в онтогенезе 73
IV. 1. Характеристика фагоцитарной активности крыс разного возраста в исходном состоянии 73
IV.2. Изменения фагоцитарной активности лейкоцитов новорожденных крыс в ответ на слабое болевое воздействие 75
IV.3. Изменения фагоцитарной активности лейкоцитов новорожденных крыс в ответ на сильное болевое воздействие 77
TV.4. Изменения фагоцитарной активности лейкоцитов крыс месячного возраста в ответ на слабое болевое раздражение 80
IV.5. Изменение фагоцитарной активности лейкоцитов крыс месячного возраста в ответ на сильное болевое раздражение 83
Глава V Изменения миелограммы и синтетической активности клеток костного мозга у крыс при действии соматической боли 88
V.I. Миелограмма крыс разного возраста в исходном состоянии 88
V.2. Изменения миелограммы новорожденных крыс в ответ на сильное болевое раздражение 90
V.3. Изменения миелограммы крыс месячного возраста в ответ на сильное болевое раздражение , . 92
V.4. Изменения синтетической активности клеток костного мозга 94
Глава VI Цитохимические изменения в лейкоцитах при острой соматической боли 98
VI. 1. Характеристика распределения щелочной фосфатазы, пероксидазы и глигогена в нейтрофильных лейкоцитах крыс 98
VI.2. Результаты исследования степени насыщения щелочной фосфатазой цитоплазмы нейтрофильных лейкоцитов новорожденных крыс в ответ на сильное болевое раздражение (50В) 105
VI.3. Результаты исследования степени насыщения щелочной фосфатазой цитоплазмы нейтрофильных лейкоцитов крыс месячного возраста в ответ на сильное болевое раздражение (4-5 степень) 107
VI.4. Результаты исследования содержания пероксидазы в нейтрофильных лейкоцитов новорожденных крыс в ответ на сильное болевое раздражение (4-5
степень) 109
VI.5. Результаты исследования содержания пероксидазы в цитоплазме нейтрофильных лейкоцитов крыс месячного возраста в ответ на сильное болевое раздражение (4-5 степень) 111
VI.6. Результаты исследования степени насыщения гликогеном цитоплазмы нейтрофильных лейкоцитов новорожденных крыс в ответ на сильное болевое раздражение (4-5 степень) 113
VI. 7. Результаты исследования степени насыщения гликогеном цитоплазмы нейтрофильных лейкоцитов крыс месячного возраста в ответ на сильное болевое раздражение (4-5 степень) 114
VI.8. Изменения синтетической активности клеток крови 117
Глава VII Изменения уровня цитокинов у новорожденных и месячных крыс при острой соматической боли 121
VII. 1. Исследования уровня цитокинов у крыс в ответ на сильное болевое раздражение : 125
Обсуждение результатов 135
Выводы: : 152
Список литературы: 154
- Постановка экспериментов с моделированием острой соматической боли
- Характеристика лейкоцитарной формулы в исходном состоянии
- Характеристика фагоцитарной активности крыс разного возраста в исходном состоянии
- Изменения миелограммы новорожденных крыс в ответ на сильное болевое раздражение
Введение к работе
АКТУАЛЬНОСТЬ ИССЛЕДОВАНИЯ
Активно проводимые исследования патогенеза боли, как у нас в стране, так и за рубежом, позволили сформировать достаточно полное представление о тригерных механизмах боли, морфологическом и биохимическом субстратах боли, ее особенностях при различных заболеваниях и принципах патогенетической терапии (Крыжановский Г.Н., 1980, 1997, 1999, 2000; Игнатов Ю.Д., 1982, 1986, 1990; Кукушкин М.Л. с соавт., 2004; Овсянников В.Г., 1990, 2003; Jones А.К.Р. et al., 2003). Налицо концентрация интересов исследователей на «ядре» боли, ее «веерные» механизмы удостоены несравненно меньшего внимания. Поэтому настоящее исследование посвящено актуальной проблеме изучения онтогенетических аспектов изменения фагоцитарной активности лейкоцитов при острой соматической боли различной интенсивности.
В литературе крайне ограничена информация о роли неспецифической резистентности организма в механизмах боли (Филин В.И. с соавт., 1996; Вейн A.M., Авруцкий М.А., 1997; Новиков Г.А. с соавт., 1998; Машфорт М.Л с соавт., 2004; Штрибель Х.В., 2005; Прощаев К.И. с соавт., 2006). Большинство трудов, написанных видными учеными, посвящено изучению специфических иммунологических ответов на системном, органном, клеточном и субклеточном уровнях, а фагоцитозу в них отводится'лишь справочная роль. Однако наиболее верно и целесообразно начинать изучение механизмов защиты с фагоцитоза, как наиболее ранней, срочной и эффективной неспецифической реакции организма (Мазурин А.В., Воронцов И.М., 2000).
Боль мобилизует резервы фагоцитов и, тем самым, превентивно оберегает организм от возможной инфекции, или наоборот истощает их? Так, например, Ф.Г. Углов с соавт. (1985) считал, что боль стимулирует фагоцитоз и предлагал использовать болевое воздействие у больного для этого. Однотипен, стандартен ли процесс вовлечения фагоцитоза в механизмы боли, зависит ли он от интенсивности и продолжительности болевого воздействия и возраста субъекта, испытывающего боль? Эти вопросы сегодня остаются без ответа.
Очевидно, что механизмы фагоцитоза, его регуляция и дисрегуляция мало изучены и приобретают самостоятельное значение в контексте патогенеза боли. Это направление в сранительно-возрастном аспекте практически не изучено, что и определяет актуальность проблемы и интерес к ней.
ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ
Целью настоящей работы является изучение механизмов изменения фагоцитарной активности лейкоцитов при острой соматической боли различной интенсивности в раннем постнатальном онтогенезе.
Для достижения поставленной цели были сформулированы следующие конкретные задачи:
Изучить изменения количества лейкоцитов, лейкоцитарной формулы, лейкоцитарного профиля и синтетической активности клеток крови у новорожденных и месячных крыс при острой соматической боли.;
Определить изменения морфологии костного мозга, как органа, образующего фагоциты, и синтетической активности его клеток у новорожденных и месячных крыс при острой соматической боли;
Оценить цитохимические характеристики (щелочную фосфатазу, пероксидазу, гликоген) лейкоцитов у крыс в раннем постнатальном периоде при острой соматической боли.
Исследовать уровень про- и противовоспалительных цитокинов у крыс раннего возраста при острой соматической боли, особенно тех, которые принимают участие в регуляции фагоцитоза.
На основе сравнительного анализа выявить общие механизмы и особенности фагоцитарной реакции на боль у крыс в разные сроки раннего постнатального онтогенеза.
НАУЧНАЯ НОВИЗНА ИССЛЕДОВАНИЯ
Впервые в онтогенетическом аспекте дана характеристика изменений при острой соматической боли содержания лейкоцитов в периферической крови, параметров, характеризующих фагоцитарную активность нейтрофилов (фагоцитарный индекс, фагоцитарное число, фагоцитарный пул, фагоцитарная емкость, моноцитарно-нейтрофильное соотношение), синтетической активности клеток костного мозга и периферической крови, уровня про- и противовоспалительных цитокинов, ферментативной активности гранулоцитов у новорожденных животных и животных месячного возраста. Установлено, что новорожденные крысы отвечают гиперергической реакцией, как самого фагоцитоза, так и факторов его обеспечивающих, реакция крыс препубертатного возраста более умерена.
ТЕОРЕТИЧЕСКАЯ И ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ РАБОТЫ
Вскрыты ранее неизвестные стороны фагоцитарной реакции, принимающие участие в механизмах формирования боли. Установлены особенности вовлечения фагоцитоза в патогенез боли у новорожденных особей и особей, находящихся в препубертатном возрасте. При этом показано, что эта реакция формируется достаточно быстро и зависит от интенсивности алгогенного раздражения.
Установлено, что реакция на боль у новорожденных животных носит гиперергический характер, при этом она быстро истощается. У животных препубертатного возраста отмечается более скоординированный ответ, но и он не до конца сформирован и также истощаем. Таким образом, результаты работы расширяют теоретические представления о механизмах боли, в частности, неспецифической резистентности при-ней.
Впервые установлено, что острая соматическая боль мобилизует зрелые лейкоциты костного мозга, которые покидают свое депо. При этом, только у животных препубертатного возраста отмечается незначительное повышение синтетической активности клеток костного мозга, синтетическая активность клеток костного мозга новорожденных существенно подавляется.
Полученный материал может представлять интерес для врачей-неонатологов, т.к. ориентирует их на осторожное отношение к коррекции механизмов резистентности при боли, позволяет дифференцированно относиться к появлению лейкоцитоза, т.к. он может носить всего лишь реактивный характер, а не манифестировать патологию. Результаты исследований внедрены в учебный процесс кафедр патологической физиологии, анестезиологии и реаниматологии ГОУ ВПО Рост ГМУ Росздрава.
АПРОБАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ
Основные результаты исследования были доложены на 58-ой итоговой научной конференции молодых ученых и специалистов РостГМУ (Ростов-на-Дону, 2004), 59-ой итоговой научной конференции молодых ученых и специалистов РостГМУ (Ростов-на-Дону, 2005), 60-ой итоговой- научной конференции молодых ученых и специалистов РостГМУ (Ростов-на-Дону, 2006), на межвузовской конференции молодых ученых «Актуальные проблемы патофизиологии» (Санкт-Петербург, 2006), Экстремальная медицина. Проблемы экстремальных состояний (Владикавказ, 2006), 62-ой итоговой научной конференции молодых ученых и специалистов РостГМУ (Ростов-на-Дону, 2008).
ПУБЛИКАЦИИ
По материалам диссертации опубликованы 16 работ. Из них 1 статья напечатана в периодическом научном издании, выпускаемом в Российской Федерации, рекомендованном ВАК для публикации основных положений диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук; 15 - в сборниках научных работ, материалах и тезисах научных конференций, в том числе и с международным участием.
НАУЧНЫЕ ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ
Острая соматическая боль изменяет фагоцитарную активность лейкоцитов.
Новорожденные особи и особи препубертатного возраста реагируют на острую соматическую боль лейкоцитозом и повышением фагоцитарной активности нейтрофилов, которая у новорожденных носит гиперергический характер, у крыс препубертатного возраста реакция более скоординирована.
Реакции фагоцитоза в раннем онтогенезе энергозависимы и быстро истощаемы. Острая соматическая боль вовлекает в процесс костный мозг. У новорожденных животных наблюдается ранняя и прогрессирующая потеря костным мозгом зрелых клеток белой крови, у животных препубертатного возраста эта реакция наступает сразу и не получает дальнейшего развития в течение часа.
У новорожденных животных в нейтрофилах в ответ на боль активируется щелочная фосфатаза, уровень пероксидазы практически не изменяется. У животных препубертатного возраста наблюдается выраженное и однонаправленное вовлечение в процесс щелочной фосфатазы и пероксидазы в сторону увеличения их активности.
Цитокиновая регуляция фагоцитоза у животных разных возрастных групп не одинакова. У новорожденных крыс в ответ на острую соматическую боль наблюдается увеличение содержания ИЛ- 1а и ИЛ-6 при резком снижении ФНО-а. У животных препубертатного возраста динамика изменений ИЛ-1а и ФНО-а синхронизирована и однонаправлена.
ОБЪЁМ И СТРУКТУРА ДИССЕРТАЦИИ
Диссертация изложена на 177 страницах машинописного текста, состоит из введения, главы обзора литературы, главы материала и методов исследования, 5 глав собственных исследований, обсуждения собственных результатов, выводов и указателя литературы. Работа иллюстрирована 41 таблицей и 33 рисунком. Список литературы содержит 250 источников, из них 172 - отечественных и 78 -зарубежных.
Постановка экспериментов с моделированием острой соматической боли
Лейкоцитарный состав крови исследовали общепринятыми микроскопическими методами (Никитин В.Н., 1949; Бокуняева Н.И., 1975). Общее количество лейкоцитов (ОКЛ) определяли путем прямого подсчета клеток в камере Горяева.
Лейкоцитарный профиль крови изучали путем цитологического анализа мазков крови, окрашенных по Романовскому-Гимза с последующим подсчетом отдельных видов лейкоцитов. Мазки готовили на тщательно вымытых обезжиренных предметных стеклах, сушили на воздухе, затем фиксировали этиловым спиртом и окрашивали азур-эозином промышленного производства. Через 30-40 минут окрашенные мазки промывали в проточной дистиллированной воде, высушивали и исследовали с помощью светового микроскопа при увеличении 10x90. На основании подсчета отдельных видов лейкоцитов и их общего количества в единице объема крови составляли лей ко грамму в процентном (лейкоцитарная формула) и абсолютном (профиль Машковского) выражении.
Фагоцитарная активность лейкоцитов
Для определения фагоцитарной активности лейкоцитов использовали метод Д.К. Новикова и В.И. Новикова, 1989 г. in vitro. В основе метода лежит способность полиморфноядерных лейкоцитов, моноцитов периферической крови связывать на своей поверхности, поглощать и переваривать микробную тест-культуру. Использовали взвесь суточной культуры Staphylococcus aureus штамм 209 в концентрации 10 клеток в 1 мл физиологического раствора. После инкубации в термостате нативиой крови (0,2 мл) со взвесью микроорганизмов (0,2 мл) при температуре 37С в течение 60 мин. готовили мазки с последующим окрашиванием их по Романовскому-Гимза.
Фагоцитарную реакцию оценивали после микроскопического исследования мазков и расчета следующих показателей: фагоцитарного индекса- Гамбургера (ФИ - процент фагоцитов, содержащих поглощённые бактериальные частицы) и фагоцитарного числа Райта (ФЧ - среднее число поглощенных бактерий на один фагоцит). Для более глубокого анализа изменений фагоцитарного звена иммунитета нами были использованы расчетные коэффициенты, которые вычислялись по следующим формулам:
1. Фагоцитарный пул (ФП) - сумма фракций фагоцитирующих лейкоцитов по профилю Машковского (сегмептоядерные - нейтрофилы (СЯ)+палочкоядерные нейтрофилы (ПЯ)+моноциты (М)/ мкл).
2. Фагоцитарная емкость (ФЕ) — коэффициент, связывающий ФИ, ФЧ и ФП, характеризующий общее количество микроорганизмов, поглощенных всеми фракциями фагоцитов в единице объема крови — ФЕ=ФПх(ФИ/ 100) хфЧ.
3. Моноцитарно-нейтрофильное соотношение (МНС) - коэффициент, характеризующий изменение баланса между основными клеточными популяциями фагоцитов - М/(СЯ+ПЯ). Цитоструктура костного мозга
Красный костный мозг располагается в губчатом веществе костей и костномозговых полостях. Если у людей для оценки гемопоэза исследуется костный мозг грудины и подвздошных костей, то у белых крыс наиболее доступным для исследования является костный мозг бедренных костей (Пйнчук Л.Б. с соавт., 1991; Канаев СВ. с соавт., 2001; Николаева Н.В., 2001).
В наших экспериментах для получения костного мозга после декапитации животных производили экзартикуляцию бедренных костей на месте коленных и тазобедренных суставов. Бедренную кость осторожно освобождались от мягких тканей; с помощью шприца через инъекционную иглу вымывали костномозговую ткань в направлении от дистального к проксимальному концу бедренной кости физиологическим раствором с добавлением гепарина 1-1,5 ME или 0,2 цитрата натрия. Далее на предметных стеклах делали мазки костного мозга и высушивали при комнатной температуре. Препараты окрашивали по Паппенгейму-Крюкову (фиксатором-красителем Май-Грюнвальда и краской Романовского). На нефиксированный хмазок костного мозга наливали пипеткой 10-15 капель готового красителя-фиксатора Май-Грюнвальда; через 3 мин. по каплям прибавляли такое же количество дистиллированной воды, выдерживали еще 1 мин., после чего краситель смывали водой, а мазок высушивали на воздухе. На высушенный мазок наливали свежеприготовленный водный раствор красителя Романовского (1-2 капли краски на 1 мл дистиллированной воды) и выдерживали 8-15 минут в зависимости от температуры в помещении, смывали краску водой и мазок высушивали в вертикальном положении на воздухе (Первушин Ю.В. с соавт., 1994; Солдаткина Н.В., 2000).
Изучение костномозгового кроветворения начинали с просмотра окрашенных препаратов под малым увеличением микроскопа (10x40) для выделения полей зрения богатых и бедных клеточными элементами, что дает возможность при составлении миелограммы суммировать результаты клеточного состава костного мозга всего гистологического препарата и не ошибиться в характеристике состояния гемопоэза (Канаев СВ., 2001). Под большим увеличением (10x90) с использованием иммерсионной системы светового микроскопа, подсчитывали количество костномозговых клеток различных ростков кроветворения, просматривая в каждом препарате 500 клеток (5-6 полей зрения), определяли их процентное содержание, составляли миелограмму (Линднер Д.П. с соавт., 1993; Шабаева М.М. с соавт.,1995).
Характеристика лейкоцитарной формулы в исходном состоянии
У новорожденных интактных крыс, взятых в эксперимент, количество лейкоцитов колеблется в пределах 3,90 х109 /л до 6,00 х10 /л, в среднем оно составляет 4,74±0,22 xlО9 /л. В лейкоцитарной формуле отсутствуют базофилы, не регулярно встречаются единичные эозинофилы. Нейтрофильный ряд характеризуется отсутствием миелоцитов и метамиелоцитов.
Процентное содержание палочкоядерных нейтрофилов в среднем составляет 4,00±0,5%. Процентное содержание сегментоядерных форм -14,27±1,05%. На долю моноцитов приходится 3,00±0,47%. Относительный лимфоцитоз выражен, носит физиологический характер, и равен в среднем 78,36±1,64%. У животных препубертатного возраста количество лейкоцитов в периферической крови снижается.
Оно колеблется от 2,0 хЮ9 /л до 5,8 х109 /лив среднем составляет 2,9±0,3 х109/л. Базофилы не встречаются, в отдельных мазках обнаруживаются единичные эозинофилы. Палочкоядерные нейтрофилы составляют 2,55±0,43%, а сегментоядерные - 14,55±1,73%.
Количество моноцитов у месячных животных ниже, чем у новорожденных и составляет 1,64±0,2%. Содержание лимфоцитов составляет - 81,00±1,83Таким образом, с возрастом количество лейкоцитов убывает, на лейкоцитарном поле доминируют лимфоциты, а среди нейтрофилов преобладают формы со зрелым ядром.
Полученные нами результаты вполне согласуются с литературными данными о структуре лейкоцитарной формулы крыс (Западнюк И.П. с соавт., 1983; Каркищенко Н.Н., 2004), которые рекомендуются исследователям, как «конституциированны е».
При нанесении слабого болевого раздражения электрическим током напряжением 5 В во всех опытах у новорожденных крыс через 2 минуты регистрируется увеличение количества лейкоцитов в периферической крови с 4,74±0,22 хЮ9 /л до б,79±0,31 хЮ9 /л (р 0,05).
При этом отмечается смещение зрелости ядер лейкоцитов влево. Закономерным является регенеративный сдвиг. Если в исходном состоянии во всех опытах метамиелоциты в периферической крови не определялись, то после болевой стимуляции показатель приобретает значение: 0,8±0,22%. В отдельных опытах отмечался лишь гипорегенеративный сдвиг.
В целом на цифровом поле распределения элементов крови по опытам в семи случаях из 10 отмечается регенеративный сдвиг влево, а в трех -гипорегенеративный. Статистический анализ подтверждает закономерность омоложение ядер элементов белой крови. В лейкоцитарной формуле возрос удельный вес палочкоядерных форм с 4,00±0,5% до 6,6±0,34%, а средняя ошибка, не выходящая за пределы 13,75%, свидетельствует о достаточной компактности рядов.
Несмотря на омоложение ядер, количество сегментированных форм так же возрастает с 14,27±1,05% до 18,3±0,6% (р 0,05). В целом это свидетельствует о нейтрофильном лейкоцитозе со сдвигом влево.
Превалирование полинуклеаров формируется за счет обеднения периферической крови лимфоцитами. Их значение падает с 78,36±1,64% до 70,2±0,62% при (р 0,05), отмечается процентное увеличение моноцитов, но это различие является статистически несущественным.
Характеристика фагоцитарной активности крыс разного возраста в исходном состоянии
Через две минуты после слабого болевого воздействия не отмечено изменения фагоцитарного индекса (49,7±0,8%). Как и в исходном состоянии активна половина из фагоцитов. Тем не менее, активность фагоцитов повышается, но крайне незначительно, различие статистически не существенно: 2,28±0,07 против 2,12±0,14 в исходном состоянии (р 0,05). С другой стороны практически вдвое происходит увеличение числа фагоцитирующих клеток. В исходном состоянии фагоцитарный пул был представлен 1022,18±112,6 клетками в 1 мкл крови, после нанесения слабого болевого раздражения этот показатель составляет 1932,4±92,69 клеток/мкл (р 0,05) (табл.17).
Фагоцитарная емкость, безусловно, более выражена. Общее количество микроорганизмов поглощенных фагоцитами, содержащимися в 1 мкл крови, составило в среднем 2177,94±96,2б, тогда как до нанесения болевого раздражения эта цифра равнялась 1092,3 6± 132,24. Это различие существенно при р 0,05. Отмеченное расширение фагоцитарного пула и удвоение фагоцитарной емкости в первую очередь объясняется увеличением количества лейкоцитов в периферической крови. Вместе с тем, есть основания говорить о повышении фагоцитарной активности, так как увеличение фагоцитарной емкости крови относительно выше, чем прирост количества лейкоцитов в целом.
Моноцитарно-нейтрофильное соотношение осталось без изменения: 0,16±0,02 против 0,15±0,021 в исходном состоянии (табл.17).
Через 1 час общее количество лейкоцитов имеет тенденцию возврата к исходным значениям. Однако это не предполагает арифметического регресса показателей фагоцитарной активности. Хотя процент фагоцитов, участвующих в фагоцитозе практически и не меняется, активность вовлеченных в процесс клеток, очевидно, возрастает за счет увеличения поглотительной способности лейкоцитов (ФЧ=2,4±0,08). Об этом свидетельствует тот факт, что фагоцитарная емкость крови достигает 2416,29±229,41 микроорганизмов в мкл крови. Это на 10% выше, чем в период первичной реакции и в 2,3 раза выше, чем в исходном состоянии. Моноцитарно-нейтрофильное соотношение несколько увеличивается до 0,29±0,02 против 0,26±0,01 (р 0.05) в исходном состоянии, что свидетельствует об активации макрофагального звена, (табл.18).
Через 2 минуты после нанесения сильного болевого раздражения фагоцитарный индекс не имеет статистически существенного отличия от зарегистрированного в исходном состоянии. После сильного болевого воздействия он составляет 47,0±0,65%, в исходном состоянии 50,36±1,77%.
Вместе с тем фагоцитарная активность лейкоцитов, вовлеченных в процесс более значима, чем при слабом раздражении. Так, фагоцитарное число, которое в исходном состоянии имело значение 2,12±0,14 имеет статистически значимое увеличение до 2,68±0,1 (р 0,05), чего не наблюдалось через две минуты после слабого воздействия.
Расширение фагоцитарного пула документировано числом всех фагоцитирующих клеток равным 2242,8±85,9 в мкл, это более чем в два раза превышает исходный показатель (1022,18±112,6 в мкл р 0,05) и больше, чем в ответ на слабое раздражение, где он был равен 1932,4±92,69.
Фагоцитарная емкость значимо свидетельствует в пользу активации процесса фагоцитоза. Она в 2,6 раза превышает исходные значения: 2835,09±164,34 против 1092,36±132,24 (р 0,001) и в 1,3 раза выше, чем при слабом воздействии: 2177,94±96,26 (р 0,05).
Расширение фагоцитарного пула связано с увеличившимся количеством лейкоцитов в периферической крови после раздражения, однако это лишь частично свидетельствует о пассивном характере возросшей активности. Она, вне всякого сомнения, имеет активную составляющую. Такое заключение позволительно на том основании, что количество фагоцитирующих клеток возросло в 2,1 раза, а количество поглощенных микроорганизмов в 2,6 раза (табл.19).
Уменьшилась величина моноцитарно-нейтрофилыюго соотношения до 0,12±0,03 против 0,16±0,02 в исходном состоянии (р 0,05). Макрофаги значительно расширили свое присутствие в лейкоцитарной формуле. В исходном состоянии зрелые клетки нейтрофильного ряда занимали 18,2% от общего количества лейкоцитов, а после сильного болевого раздражения их количество достигло 28,2%. Это также объясняет механизм выявленного повышения фагоцитарной емкости.
Изменения миелограммы новорожденных крыс в ответ на сильное болевое раздражение
Увеличение миелобластов в костном мозге новорожденных крыс, перенесших ОСБ, предполагает восполнение лейкоцитарного пула. Насколько это обосновано, мы попытались прогнозировать путем исследования синтетической активности бластных и условно зрелых клеток в костном мозге. Коэффициент а, т.е. отношение РНК/ДНК ядерного материала, бластных клеток в исходном состоянии у новорожденных животных составляет 0,73±0,06 отн.ед. (табл.28)
Через 2 минуты после ОСБ он падает до 0,51±0,02 отн.ед. Это различие статистически существенно (р 0,05), что свидетельствует о подавлении синтетической активности костного мозга. Через час это различие смягчается, а увеличивается и составляет 0,64±0,04, но не достигает исходных цифр, по-прежнему статистически не отличается от исходного уровня.
Условно зрелые клетки костного мозга новорожденных крыс имеют а=0,65±0,04 отн.ед., через 2 минуты после болевого воздействия коэффициент снижается до 0,49±0,04 (р 0,05), а через 1 час, также как и в бластных клетках в условно зрелых клетках коэффициент а возрастает до 0,56±0,07 отн.ед., однако не достигает исходных цифр (различие существенно, р 0,05) (табл.28).
Таким образом, синтетическая активность клеток костного мозга у новорожденных крыс в ответ на ОСБ значительно снижается, через 1 час прослеживается тенденция ее восстановления. а в ядерном материале бластных клеток следует расценивать, как депрессию репродукции элементов белой крови, по крайней мере, в первый час после ОСБ.
Уменьшение Ка (снижение активности РНК) в ядерном материале условно зрелых клеток а именно, так мы трактуем, уменьшение, свидетельствует о подавлении биосинтеза и дифференцировки структурных элементов клетки.
У крыс месячного возраста при боли отмечался менее выраженный лейкоцитоз, более умеренное изменение синтетической активности клеток костного мозга, в частности, процент миелобластов возрастает весьма умеренно и через час приходит к норме. Судя по уровню миелобластов, интенсивность восполнения клеток костного мозга должна сохранить фоновый характер. Ка бластных клеток костного мозга интактных месячных крыс равен 0,52±0,03 отн.ед. Через 2 минуты после ОСБ Ка практически не изменяется, через 60 минут он достоверно снижается до 0,44±0,02 (табл.29).
Условно зрелые клетки костного мозга крыс месячного возраста также не сразу, а к концу первого часа после болевого воздействия снижают свою синтетическую активность. (Исходные значения Ка = 0,5±0,03 отн.ед., через 2 минуты он равен 0,48±0,04 отн.ед. (р 0,05), через 60 минут снижается до уровня 0,38±0,02 отн.ед. (р 0,05)).
Сделанные наблюдения дают основание заключить, что у животных препубертатного возраста в ответ на ОСБ синтетическая активность менее существенна, первичная реакция бластных клеток направлена на формирование репаративной тенденции, однако реакция не стойка и сменяется депрессией.
Можно полагать, что более бурная, гиперергическая реакция клеток лейкоцитарного пула новорожденных крыс в ответ на ОСБ имеет более выраженное подавление синтетической активности клеток костного мозга всех степеней зрелости по сравнению с животными месячного возраста.
Считается бесспорным клиническим фактом склонность к генерализованному (септическому) процессу у детей в первые дни после рождения (Пигаревский В.Е. с соавт., 1989).
Это связывают с несостоятельностью ферментативных структур, обеспечивающих бактериоцидность фагоцитов. На сниженную активность супероксиддегенерирующих структур указывают, в частности, R.G. Strauss, Е.Т. Snyder (1983).
Пикуза О.И., Гуревич Е.П. (1983), Пикуза О.И., Маянский А.Н. (1986) указывают на то, что метаболическая активность лейкоцитов у новорожденных в два раза ниже, чем у взрослых. В этой связи для нас представлялось мотивированным изучить фоновые значения ключевых ферментов, участвующих в фагоцитозе нейтрофилами, биоэнергетическое обеспечение последних. Результаты исследования цитохимических характеристик нейтрофилов крыс разных возрастов представлены в таблицах 30 и 31.
![Зависимость изменения активности свободнорадикальных процессов от сроков развития острого панкреатита [Электронный ресурс]](/i/i/4282/196469.png "Зависимость изменения активности свободнорадикальных процессов от сроков развития острого панкреатита [Электронный ресурс] Ивченко Глеб Сергеевич")
