Введение к работе
Актуальность проблемы, Описторхоз - заболевание, вызываемое гельыинтами, паразитирующими в желчных протоках печени человека и некоторых животных. Данное заболевание относится к гельминто-зам с природной очаговостыэ, в силу чего в ряда областей России описторхоз приобрел значение краевой патологии. Очаги описторхо-за локализуются в поймах рек. По данным B.C. Мясоедова (1974), насчитывается б автономных очагов описторхоза - бассейны Немана, Шного Буга, Днепра, Дона, Волго-Камский и Обско-Иртшский. Наиболее крупным из них является Обско-Иртышский бассейн, где пора-жеиность населения данным гельминтозом достигает 85,5 % (Гене-цинская Т.А., 1973). В настоящее время в стране насчитывается более 2 млн человек, пораженных описторхозом, эта величина имеет тенденцию к росту (Павлов Б.А., 1990).
Показано, что описторхоз вызывает значительные изменения в гепагобилиарной системе (Ткаченко Н.П., 1977), является предрасполагающим фактором острого, подострого и особенно хронического панкреатита, рака поджелудочной келезы, большого дуоденального соска и печени (Шгин А.А., 1973; Белозеров Е.С. и соавт., 1981). Описторхозной инвазией обусловлена высокая частота поражения желудочно-кишечного тракта: хронический гастрит, преимущественно с пояияенпой секрецией, симптоматическая язва желудка и двенадцатиперстной кишки, пилородуоденит, хронический колит (Оэе-рецковская Н.Н. и соавт.і 1971, 1972). Описторхозная инвазия оказывает существенное отрицательное влияние на защитно-приспособительные силы организма (Белозеров Е.С. и соавт., 1981) и сопровождается значительным увеличением числа клеток с цитоге-нетичеокими нарушениями (Ильинских Н.Н.,.1976, 1981).
В то же время в литературе практически отсутствуют работы, рассматривающие механизмы онтогенетических нарушений, индуцируемых описторхозной инвазией. Совершенно очевидно, что описторхи не могут оказывать непосредственное влияние на генетический аппарат клеток организма, и индуцируемые ими цитогенетичєские эффекты носят опосредованный характер. Результаты изучения механизмов цитогенотической нестабильности при описторхозной инвазии позволят внести новые данные в существующие представления патогенезе описторхоза и могут служить основой для разработки патогенетически обоснованных методов прогнозирования тяжести течения заболевания и эффективных способов его лечения.
Цель и задачи исследования. Цель работы - изучить механизмы, приводящие к цитогенетичеекой нестабильности при описторхозной ин вазии.
Для реализации этой цели были поставлены следующие задачи:
-
Исследовать цитогенетические нарушения при описторхозной инвазии у человека и зараженных описторхами золотистых хомяков.
-
Изучить активность ДНК-репаративной и иммунокомпетентной систем при описторхозной инвазии.
-
Изучить особенности патогенетических нарушений, вызываемых действием некоторых ксенобиотиков на фоне выраженной описторхозной инвазии.
-
Оценить патогенетическую активность дериватов мариг олис-торхов (описторхина).
-
Исследовать активность микросомальных фракций клеток печени пораженных описторхами золотистых хомяков в биотрансформации ксенобиотиков в активные мутагены.
Научная новизна работы. Впервые установлено, что подавление Т-системы иммунитета и увеличение биотрансформационной активности микросом клеток печени при описторхозной инвазии приводят к возрастанию числа клеток с нарушениями структуры и числа хромосом, несмотря на высокую активность внутриклеточных систем ДНК-репарации. Показано также, что усиление биотрансформационной активности микросомальной фракции клеток печени при описторхозной инвазии приводит к существенному усилении мутагенных потенций некоторых ксенобиотиков. Впервые установлено, что цитогенетические изменения могут вызывать дериваты марит описторхов, а также микроорганизмы ( SafmoneKa t^Umutium ), локализующиеся в маритах описторхов. Дериваты описторхов и сальмонеллы способны также существенно изменять активность ДНК-репаративных процессов и увеличивать число цитогенетических аберраций в лиыфо-идных клетках периферической крови, что сопровождается выраженной депрессией Т-системы иммунитета.
Теоретическое и практическое значение. Полученные в настоя-» щем исследовании данные о фундаментальных механизмах возникновения цитогенетических нарушений при описторхозной инвазии вносят новые сведения в существующие представления о патогенезе описторхоза и могут служить основанием для разработки новых, патогенетически обоснованных подходов к терапии данного заболевания.
Результаты изучения онтогенетической активности дериватов марит огшсторхов и локализующихся в них сальмонелл должны учитываться специалистами при определении тактики лечения больных описторхозом, поскольку гибель и разрушение описторхов в процессе лечения больных описторхозом могут существенно усугубить цитогенетические последствия описторхозной инвазии. Практический аспект могут иметь и результаты исследования мутагенных потенций цитостатических препаратов и процессов их биотрансформации в клетках печени при описторхозной инвазии. Следует полагать, в частности, что лечение циклофосфаном онкологических больных на фоне описторхозной инвазии может привести к более выраженным цитогенегическим нарушениям, чем при использовании тиофосфамида и винкристина.
Основные положения, выносимые на защиту:
-
Подавление Т-сиотемы иммунитета и усиление биотрансформационной активности микросом клеток печени при описторхозной инвазии приводят к увеличению числа клеток с нарушением структуры и числа хромосом, несмотря на высокую актиачость внутриклеточных систем ДНК-репарации.
-
Дериваты марит описторхов й локализувциеея з HHxS.typ-fi'muTlum обладают выраженным патогенетическим эффектом. Механизм цитогекетического действия описторхина связан с угнетением Т-системы иммунитета.
-
Олисторхозная инвазия усиливает цитоген&гический эффект цкклофосфэна и не влняет-на мутагенные потенции тиофосфамида и винкристина.
Апробация работы, {іатериали диссертационной работы докладывались на научном семинаре Томского отделения Всесоюзного общества генетиков (Томск,1988); на региональной конференции "Профессиональная патология в Восточных регионах страны и вопросы диспансеризации работающих" (Новокузнецк,1988); на Всесоюзной конференции "Фундаментальные науки - медицине и здравоохранению" (Иркутск,1989); на заседании секции генетических аспектов проблемы "Человек и биосфера" (Караганда,1990); на региональной конференции "Проблемы экологии человека в Сибири" (Новокузнецк, 1990); на Всесоюзном координационном совещании "Генетические последствия загрязнения окружающей среди мутагенными факторами" (Самарканд,1990); на Всесоюзной научной конференции "Актуальные проблемы лекарственной токсикологии" (Москва,1990); на Всесоюз-
ной конференции "Физиологические и медицинские вопросы нетрадиционных форм производственной деятельности человека"(Тюмень,199 Публикации. По материалам диссертации опубликовано 24 раб оті Структура и обьём работы. Диссертация состоит из введения, четырех глав, выводов, списка литературы из 226 наименований, в том числе на 116 на иностранных языках. Материалы диссертации и; ложены на 114 страницах машинописного текста, включая 2 рисунка и 22 таблицы.
В экспериментах (табл.1) использовали 850 половозрелых золо тистых хомяков-самцов массой 100-120 гр, 650 из которых заражали метацеркариями описторхов путем введения в глотку 50 метацер-кариев на особь. У золотистых хомяков изучали биогрансформаци-ониус активность микросомальных фракций клеток печени, полученных по методу А.А.Ерёминой и соавт. (1985) на базе Пермского НИ1 генетики и селекции микроорганизмов. Одновременно определяли количество эритроцитов с микроядрами в периферической крови (Sc&« raid , 1975), число клеток печени с нарушениями структуры ядра (ffafpoj>crt,Ho*«e, 1966), изучали ДНК-репаративную активность лимфоидных клеток крови (Засухина Г .Д., 1975), Влияние описторхоз-ной инвазии на мутагенную чувствительность организма оценивали ( помощью микроядерного теста и путем анализа активности ДНК-репа-рацли в лимфоидных клетках крови у животных после введения цито-стагических препаратов (дашлофосфан, тиофосфамид, виикристнн) и (или) описторхина.
Объектом цитогенетичеежого обследования служили также культуры лимфоцитов крови здоровых доноров и больных описгорхоэсм людей, а также перевиваемая культура клеток золотистого хомяка BHK-2I. В культуре лимфоидных клеток определяли уровень дак-ре-паративной активности и биотрансформаяионнуо активность микросомальных фракций клеток печени золотистых хомяков (Ames, 1975) с использованием циклофосфана гак мутагенного фактора на штамме ТА-Ї538 t.bffSmnriim, любезно предоставленного в Пермском НИИ генетики и селекции микроорганизмов ст.науч.согр. А.А.Ерёминой.
В специальных сериях экспериментов на культурах клеток (лимфоциты человека и BHK-2I) изучали онтогенетическую активность дериватов марит описторхов и выделенных из них микроорганизмов, тестированных на кафедре микробиологии Тюменского мединститута проф. Г.В.Кондинским как Safmeneffa t^p/iimurinm.
Логическая структура диссертационное работы. Объекты к методы, использованные а работе.
Таблица I
Примечание: Обозначено + - без воздействия; Ц, 0, S , В, Т - после воздействия, соответственно, циклофосфаном, описторхином,(дериваты карит оліїсторхов), сальмонеллами, выделанными из марит огисторхов, винкристйном и тксфосфамидом; И - использованы микросомальнке фракции печени, выделенные от золотистых хомяков, зараденных опистсрхами.
Клинический раздел работы включает материалы хромосомного, иммунологического и ДНК-репаративного анализов клеток крови 21 больного описторхоэом (мужчины в возрасте 18-35 лет, не подвергавшиеся в течение 3 мес рентгеновскому облучению и лечению хи-MHonpenapaTavm), впервые госпитализированных в клинику инфекционных болезней Томского медицинского института и 56 здоровых доноров-добровольцев аналогичного пола и возраста. Весь цифровой материал обрабатывали статистически с помощью t-критерия Стыодента.
Автор выражает глубокую признательность зав. кафедрой инфекционных болезней Сибирского медицинского университета доценту А.В. Лепёхину за предоставленнув возможность выполнения исследований в руководимой им клинике.
