Содержание к диссертации
Введение
ГЛАВА 1 Фено- и генотипические аспекты недифференцированной дисплазии соединительной ткани (обзор литературы). 11
1.1. Полиморфизм и физиологические функции системы HLA. Иммуногенетическая характеристика дисплазии соединительной ткани 13
1.2. Маркеры эритроцитарных систем крови как гено-фенотипические факторы в клинических исследованиях, их диагностическое значение при недифференцированной ДСТ 19
1.3. Тип ушной серы, цвет радужной оболочки и волос как генетические маркеры и их диагностическое значение при недифференцированной ДСТ 25
Глава2 Клиническая характеристика больных 31
Глава 3 Методы исследования .44
3.1. Анализ внешних морфогенетических вариантов 44
3.2. Антропометрические измерения 47
3.3. Типирование эритроцитарных фенотипов и антигенов систем крови.48
3.4. HLA-типирование антигенов I класса локусов -А, -В, -С 49
3.5. HLA-генотипирование аллелей генов DQA1, DQB1, DRB1 II класса.51
3.6. Статистический анализ материала 53
ГЛАВА 4 Ассоциация гено-фенотипических маркеров с клиническими проявлениями недифференцированной дисплазии соединительной ткани (собственные наблюдения)... .56
4.1. Распределение HLA-антигенов I класса локусов -А, -В, -С при недифференцированной дисплазии соединительной ткани .56
4.2. Распределение аллельных вариантов генов DQA1, DQB1, DRB1 HLA II класса при недифференцированной дисплазии соединительной ткани 74
4.3. Распределение маркеров эритроцитарных систем ABO, MN, Kell-Kellano, Рр, Rhesus при недифференцированной дисплазии соединительной ткани 90
4.4. Распределение типов ушной серы, цвета волос и радужной оболочки у пациентов с недифференцированной ДСТ. 101
4.5. «Суммарный эффект» ассоциированных с недифференцированной ДСТ маркерных вариантов HLA I и II классов, эритроцитарных систем крови, генов, контролирующих тип ушной серы, цвет волос, радужной оболочки и экспрессивность внешних и кардиальных диспластических проявлений 109
Обсуждение... '.. 115
Выводы . 131
Практические рекомендации.. 133
Библиография 134
- Маркеры эритроцитарных систем крови как гено-фенотипические факторы в клинических исследованиях, их диагностическое значение при недифференцированной ДСТ
- HLA-типирование антигенов I класса локусов -А, -В, -С
- Распределение аллельных вариантов генов DQA1, DQB1, DRB1 HLA II класса при недифференцированной дисплазии соединительной ткани
- «Суммарный эффект» ассоциированных с недифференцированной ДСТ маркерных вариантов HLA I и II классов, эритроцитарных систем крови, генов, контролирующих тип ушной серы, цвет волос, радужной оболочки и экспрессивность внешних и кардиальных диспластических проявлений
Введение к работе
Актуальность исследования
Широкая распространенность недифференцированной дисплазии соединительной ткани (ДСТ) среди людей призывного, детородного, трудоспособного возраста, с одной стороны, и клинический полиморфизм, прогностическая неопределенность, возможность прогредиентного течения и развития осложнений, с другой, придают актуальность проблеме ее своевременной диагностики (Викторова И.А., 2004; Клеменов А.В., 2005; Нечаева Г.И. и соавт., 2005; Avierinos J.F. et al., 2003).
В основе формирования недифференцированной ДСТ могут лежать генетические дефекты синтеза или катаболизма компонентов внеклеточного матрикса мультифакториальной природы (Кадурина Т. И. и соавт., 2005; Клеменов А.В., 2005). Недостаточная разработанность молекулярно-генетических аспектов ДСТ объясняет тот факт, что на сегодняшний день ведущими в диагностике недифференцированных форм, являются внешние диспластические признаки, эхокардиографические и биохимические критерии (Кадурина Т.И., 2000; Яковлев В.М. и соавт., 2005). Между тем многие клинические и биохимические маркеры ДСТ в разных возрастных группах пациентов теряют свое диагностическое значение (Беленький А.Г. и соавт., 2002; Клеменов А.В., 2002).
Как известно, стабильной и устойчивой связью с врожденным патологическим процессом отличаются генетические факторы. Однако выявление первичных дефектов на уровне генов довольно сложно, кроме того, немногочисленные исследования показали отсутствие определенного генетического дефекта при недифференцированной ДСТ (Ades L.C. et al., 2004; Chou H.T. et al., 2004; Freed L.A. et al., 2002; Trochu J.N. et al., 2000; Hamilton S.P. et al., 2003). В последние годы ведется активный поиск маркеров, которые тесно ассоциированы с генами, предрасполагающими к развитию заболеваний, но, в отличие от молекулярно-генетических методик, могли бы широко применяться в практическом здравоохранении.
Мультифакториальность механизмов развития
недифференцированной ДСТ предполагает ассоциацию данной патологии с гено-фенотипическими маркерами, действие которых практически одинаково при любых условиях окружающей среды (Мутовин Г.Р., 2001). Следует констатировать, что в комплексе эти вопросы при данной патологии практически не изучались. Отсутствуют сведения о своеобразии генетических признаков в этнотерриториальных группах. Вместе с тем учет ряда генетических маркеров будет способствовать не только более глубокому пониманию сущности этиопатогенеза диспластикозависимого процесса, но и позволит создать обоснованную базу для дифференцированной клинической тактики в гетерогенной группе пациентов с недифференцированной дисплазией соединительной ткани.
Цель исследования
Определение клинико-диагностического значения некоторых гено-фенотипических маркеров при недифференцированной дисплазии соединительной ткани.
Задачи исследования:
Определить характер распределения HLA-специфичностей I и II классов, маркеров систем ABO, MN, Kell-kelano, Рр, Rhesus, диморфных вариантов ушной серы, цвета волос, радужной оболочки глаз в здоровой популяции лиц, проживающих в Ставропольском крае.
Выявить при недифференцированной ДСТ особенности распределения HLA-специфичностей, маркеров эритроцитарных систем, диморфных вариантов ушной серы, цвета волос и радужной оболочки глаз.
Определить ассоциированность HLA I и II классов, маркеров эритроцитарных систем, типов ушной серы, цвета волос, радужной
' , "7 '. , .1 ' ''
оболочки глаз с различными внешними и кардиальными диспластическими признаками.
Выяснить: взаимосвязь изучаемых гено-фенотипических маркеров с особенностями клинического течения: ДСТ при" наличии ассоциированных патологических состояний (хронических заболеваний верхних дыхательных путей, артериальной гипотензии).
На основе выявленных гено-фенотипических особенностей разработать дополнительные критерии дифференциальной диагностики и прогнозирования недифференцированной ДСТ.
Научная новизна исследования
Впервые проведено комплексное изучение характера распределения
HLA-специфичностей I и II классов, маркеров систем ABO, MN, Kell-
kelano, Рр, Rhesus, дискретных вариантов ушной серы, цвета волос,
радужной, оболочки глаз у пациентов с недифференцированной ДСТ.
Получены новые данные о положительной ассоциированности с
недифференцированной ДСТ антигенов А1, А2, А25, В8; В27, В35, Cw3,
Cw5, аллельных вариантов генов DQA1 *0102, *0103, DQB1 *0302, *0502,
*0602, DRB1 *13; *14, *15, фенотипов АВ (IV), К, Р-, Е, с, .ei DCcEe
эритроцитарных систем ABO, Kell-kelano, Рр, Rhesus, влажного типа
ушной серы, светлой радужной оболочкой и негативной взаимосвязи' -
HLA-A10, А24, А26, Cw2, DQA1 *0201, 0201/0501, DQB1 *0301, DRB1
*16, *17, 01/07, 04/16, фенотипов 0 (I), P+,,DCcee, DCCee, сухим типом
ушной серы. Впервые представлены сведения об особенностях
ассоциированности" гено-фенотипических маркеров с различными
внешними и кардиальными диспластическими признаками. Значительное
количество позитивных гено-фенотипических маркеров установлено в
случаях воронкообразной деформации грудной клетки, сколиоза,
выраженной суставной , гипермобильности, множественных
внутрисердечных микроаномалий, миксоматозной дегенерации ПМК и
8
ограниченное их число определялось при клинически незначимых
внешних и кардиальных соединительнотканных дисплазиях; Выявлены
особенности ассоциаций некоторых маркеров у пациентов с
недифференцированной ДСТ в зависимости от наличия артериальной
гипотензии, хронических заболеваний верхних дыхательных путей. На
основе полученных данных предложены дополнительные критерии
дифференциальной диагностики и прогнозирования
недифференцированной ДСТ.
Основные положения диссертации, выносимые на защиту:
особенности распределения HLA-специфичностей I и II классов, маркеров систем ABO, MN, Kell-kelano, Рр, Rhesus, дискретных вариантов ушной серы, цвета волос, радужной оболочки глаз у пациентов с недифференцированной ДСТ;
взаимосвязь степени выраженности внешних и кардиальных диспластических признаков с рядом генетических маркеров;
существование взаимосвязи генетических систем крови, cerumen и генов, контролирующих цвет волос и радужной оболочки, с особенностями клинического течения ДСТ при наличии некоторых заболеваний и состояний (артериальной гипотензии, хронической патологии верхних дыхательных путей;
возможность использования гено-фенотипических признаков для целей дифференциального диагноза и прогноза недифференцированной ДСТ.
Научно-практическая значимость работы
Установлены позитивные и негативные ассоциации HLA I и II классов, фенотипов эритроцитарных систем крови, типов ушной серы, цвета волос и радужной оболочки у пациентов с недифференцированной дисплазией соединительной ткани, что может быть использовано для
9
оценки риска данной патологии. Доказано существование зависимости
между рядом клинико-инструментальных характеристик
соединительнотканной дисплазии и генетическими системами, позволяющее выделить дополнительные критерии степени выраженности недифференцированной ДСТ. Особенности распределения генетических маркеров при НДСТ, сопряженной с артериальной гипотензией, могут применяться для целенаправленной диагностики отклонений в регуляции уровня артериального давления, а в случаях хронических заболеваний верхних дыхательных путей - для раннего формирования группы риска развития патологии и проведения профилактических мероприятий. Определение гено-фенотипических маркеров может составить основу регистра генетических данных для прогнозирования развития и изучения особенностей течения ряда заболеваний на фоне недифференцированной соединительнотканной дисплазии.
Практическое использование полученных результатов
Результаты исследования внедрены в практику работы кардиологических отделений №1 и №2 ГУЗ «КККД», терапевтического отделения ГУЗ «СККЦ ОСВМП» г. Ставрополя. Основные положения диссертационной работы используются в учебном процессе на кафедрах внутренних болезней №1 с курсом поликлинической терапии, внутренних болезней педиатрического и стоматологического факультетов Ставропольской государственной медицинской академии.
Материалы диссертации изложены в 8 печатных работах, доложены на XIII, XIV, XV итоговых межрегиональных научных конференциях студентов и молодых ученых (Ставрополь, 2005, 2006, 2007), V съезде кардиологов ЮФО «Диспансеризация, качественная диагностика, лечение и реабилитация - залог успеха кардиологической службы» (Кисловодск, 2006), Всероссийской научно-практической конференции с
10 международным участием «Современная кардиология: наука и практика» (Санкт-Петербург, 2007).
Апробация работы проведена на объединенном заседании кафедр внутренних болезней №1 с курсом поликлинической терапии, внутренних болезней педиатрического и стоматологического факультетов и кафедры общей врачебной практики Ставропольской государственной медицинской академии.
Маркеры эритроцитарных систем крови как гено-фенотипические факторы в клинических исследованиях, их диагностическое значение при недифференцированной ДСТ
Генетическая характеристика организма представлена, в том числе, эритроцитарными антигенами крови. По мнению некоторых исследователей, эритроцитарные антигены являются одними из факторов адаптации человека к окружающей среде [31, 55].
В настоящее время известно не менее 20 систем антигенов эритроцитов с более чем 250 групповыми факторами [26, 56]. Однако существенное значение в клинической практике имеют лишь отдельные системы: АВО, Rhesus, MN, Рр, Kell-kellano [85].
Система АВО является наиболее важной в трансфузионном отношении антигенной системой эритроцитов и включает в себя фенотипы 0 (I), А (II), В (III), АВ (IV). Группоспецифические факторы системы контролируются генами, расположенными на 9-й хромосоме в локусе АВО 9q34 [30, 32, 85].
Система Rhesus - одна из наиболее полиморфных систем, антигены которой кодируются двумя генами (RHD и RHCE), расположенными на коротком плече хромосомы 1 в локусе RH между 1р34.3 и ІрЗб.13 [12].
Для обозначения антигенов системы Rhesus чаще всего используют номенклатуру Wiener (Rh-Hr) или Fisher Race (DCE) [24, 31]. После системы АВО система Rhesus имеет наибольшее значение при переливании крови, в случаях патологии беременности. Наиболее иммуногенным в указанной системе является антиген Rho (D), в зависимости от наличия которого люди подразделяются на резус-положительных и резус-отрицательных [26]. Фенотипы системы, MN (MM;, NN, MN) обнаруживают высокую агглютинационную активность [26].
Антигены системы Kell-kellano (К, к), контролируются- 10 парой1 хромосом. Антиген К (Kell) является наиболее, иммуногенным, а антитела;к нему вызывают посттрансфузионные осложнения,.гемолитическую; желтуху у новорожденных [56].
Фенотип полиаллельной системы Рр определятся: комбинацией трех генов и представлен антигенами Р и р. Имеются данные о роли системы.Рр в трансплантационных реакциях при пересадке тканевых трансплантантов, несовместимых по антигену Р, поскольку его гены локализуются на 6-й. хромосоме, непосредственно вблизи HLA-комплекса [26].
. Эволюционным механизмом, стабилизирующим: жизнеустойчивость человека, является мозаичность географического распределения группоспецифических факторов [26]. В этой связи актуальной задачей является картирование антигенов крови в различных геногеографических зонах с целью выявления, особенностей фенотипа популяции и изучения; предрасположенности к развитию заболеваний.
По, литературным данным, в здоровой популяции русских, проживающих на территории европейской части России, распределение фенотипов эритроцитарных систем крови выглядит следующим образом:. 0 (I) группа крови составляет 29%-45%, А (II) - 30%-40%, В;-(Ш) - 17%-25%, АВ (IV) - 5%-8% [26, 31, 77, 85]. Общая, закономерность геногеографии групп крови системы АБО заключается в том, что на территории:Российской Федерации с Запада на Восток уменьшается: частота группы А (II), ас Востока на Запад - частота группы В (III) и с Севера на Юг увеличивается частота группы О (I) [25]. В популяции россиян резус-положительный фенотип системы Rhesus встречается в, среднем у 85% людей, при этом отмечается снижение его частоты:в направлении на юг и восток страны [26]. Фенотип ММ системы MN распространен у 25%-36%, MN - у 47%-55%, NN - у 16-20% людей. Частота фенотипов Р+, Р- системы Рр составляет 74% и 26%, соответственно. Фенотип к системы Kell-kellano определяется в 91 %-92%, КК - 1,5%-9% и Кк - в 8%-9% случаев.
Согласно данным В.Н. Шабалина, наиболее часто встречающимся эритроцитарным антигеном является антиген е (97,7%), второе место по частоте встречаемости занимает антиген Kellano - к (96,9%), затем С (79,9%) и D (78,8%) - системы Rhesus. Наиболее редко встречающимся антигеном эритроцитов является Kell (К) - 3,9% [85].
Сравнение частоты распределения эритроцитарных антигенов у мужчин и женщин не показало значимых различий для большинства антигенов. Исключением является повышенная частота встречаемости D-отрицательных и С-отрицательных лиц среди женщин. Неравномерное распределение D и С антигенов является одним из факторов, способствующих более частой резус-сенсибилизации женщин при беременности [24].
Проблема взаимосвязи тканевых антигенов с различными заболеваниями давно привлекает внимание исследователей. Установлена зависимость частоты сердечно-сосудистых заболеваний от групп крови. Так, исследования, проведенные в Карачаево-Черкессии, показали, что у русских фактором риска артериальной гипертензии служит группа крови О (І), а у черкесов - В (III) [85]. Больные с митральным пороком сердца достоверно чаще имеют группы А (II) и В (III), реже - О (I). Большинством авторов признается повышение частоты развития ишемической болезни сердца у русских носителей А (И) группы крови [31, 122, 172]. Имеются также сведения о преобладании у этой категории больных группы крови АВ (IV) [144]. У доноров с фенотипом А (II) и АВ (IV) отмечается снижение антикоагулянтной активности и, возможно, поэтому более частое формирование осложнений сердечно-сосудистых заболеваний [31]. Существуют также указания на увеличение частоты группы крови А (II) при облитерирующем атеросклерозе конечностей, церебральном атеросклерозе, посттромбофлебитической болезни [31, 85]. Наибольший интерес, представляет взаимосвязь заболеваний с несколькими генетическими факторами одновременно. В таких случаях компонент генотипической предрасположенности выявляется наиболее полно [31]. Выявлена повышенная предрасположенность к развитию сердечно-сосудистой патологии, особенно коронарного и церебрального атеросклероза, у лиц с группами крови А и ММ. Исследования, проведенные рядом авторов, показали увеличение представительства фенотипов А, ММ, с/с, С/С у больных ишемической болезнью сердца в русской популяции [4, 85]. Вместе с тем, по данным В.М. Нерсисян [53] в армянской популяции не выявляется значимых ассоциаций между группами крови ABO, MN, Kell-Kellano и ишемической болезнью сердца в сравнении со здоровыми людьми. Результаты исследований, проведенные В.В. Колесник, свидетельствуют об увеличении частоты сочетания резус-фактора, фенотипа MN, Р+ при ишемической болезни сердца, осложненной сердечной недостаточностью. При этом частота каждого отдельно взятого фактора не отличается от таковой в общей популяции [42].
HLA-типирование антигенов I класса локусов -А, -В, -С
Идентификация серологически определяемых HLA-антигенов I класса локусов -А, -В, -С осуществлялась микролимфоцитотоксическим методом, предложенным Terasaki с соавт. В работе были использованы панели гистиотипирующих иммунных сывороток HLA против антигенов I класса и комплемент кроличий лиофилизированный («Гисанс», Санкт-Петербург).
HLA-антисыворотки, представленные в микропробирках,
предварительно раскапывали по 1 мкл в лунки микропланшетов Terasaki под минеральное масло, заранее внесенное в каждую лунку (5 мкл), чтобы последующие реакции проходили в отсутствие воздуха, и замораживали (-70С) до момента использования. Перед использованием микропланшеты размораживали в течение 10-15 минут. Комплемент кроличий непосредственно перед употреблением растворяли в 1,0 мл дистиллированной воды.
В микролимфоцитотоксическом тесте для типирования HLA-A, -В, -С антигенов использовались лимфоциты периферической крови, выделенные по методу А. Воушп. Гепаринизированную кровь, взятую из локтевой вены в количестве 5 мл, разводили физиологическим раствором хлористого натрия в соотношении 1:2. Разведенную кровь наслаивали на градиент верографинфиколла (плотность смеси 1,077 г/см3) в объеме 2,5 мл и центрифугировали 10 минут при 1000 об/мин. Пастеровской пипеткой осторожно собирали резко очерченный слой лимфоцитов (кольцо лимфоцитов) из интерфазы жидкостей и переносили в мерную центрифужную пробирку. Дважды отмывали в двойном объеме физиологического раствора хлористого натрия в режиме: 5 мин., при 1000 об/мин., удаляли надосадочную жидкость и второй раз - 5 мин. при 1000 об/мин., также отбрасывали надосадочную фракцию. В камере Горяева оценивали плотность популяции лимфоцитов (не менее 1-2 млн в 1 мкл) и количество жизнеспособных лимфоцитов (не менее 80%). Полученную взвесь раскапывали микрошприцем Terasaki в микропланшеты под минеральное масло по 1 мкл в каждую лунку и инкубировали при комнатной температуре (20С) в течение 30 минут. Затем добавляли в каждую лунку по 5 мкл кроличьего комплемента и вновь инкубировали при комнатной температуре (20С) в течение 60 минут. По окончании времени инкубации закапывали в каждую лунку по 3 мкл метиленого синего. Через 30 минут резко встряхивали микропланшеты для удаления избытка краски, и минерального масла и производили учет результатов под микроскопом при 8 кратном увеличении. Жизнеспособные лимфоциты при инкубации " с цитотоксическими антителами в присутствии комплемента подвергались лизису, если они содержали соответствующий HLA-антиген. В этом случае мембрана клеток становилась проницаема для красителя, и клетки, «убитые» цитотоксическими антителами, окрашивались в голубой цвет.
Результат лимфоцитотоксического теста оценивали в баллах, соответственно количеству погибших клеток (таблица 3.1).
При оценке реакции учитывали только положительные (6 баллов) и сильно-положительные (8 баллов) реакции.
В контрольных лунках ставили отрицательный контроль с неиммунной сывороткой АВ (IV) (не выше 10% мертвых клеток) и положительный контроль с высокореактивной полиспецифической HLA-сывороткой.
Тестировались следующие 46 антигенов I класса: 14 - в локусе A (Al, А2, A3, А10, А11, А23, А24, А25, А26, А28, А29, А30, A31, А32), 27 - в локусе В (В7, В8, ВІЗ, В14, В15, В17, В18, В22, В27, В35, В37, В38, В39, В40, В41, В44, В45, В48, В49, В50, В51, В52, В53, В55, В56, В60, В62) и 5 - в локусе С (Cwl, Cw2, Cw3, Cw4, Cw5).
Молекулярное типирование HLA-аллелей генов DQA1, DQB1, DRB1 II класса проводили методом полимеразной цепной реакции с набором сиквенс-специфических праймеров («ДНК-Технология», Москва) в соответствии с прилагаемой инструкцией. В основе метода лежит идентификация определенного участка молекулы ДНК с последующей многократной амплификацией этого фрагмента с целью получения достаточного количества копий, которые могут быть выявлены. Этапы проведения ПЦР анализа
1. Выделение ДНК из биоматериала
В качестве биоматериала использовали цельную кровь, взятую из локтевой вены, натощак в количестве 0,5 мл. Антикоагулянтом служил раствор ЭДТА в соотношении 1:19. В пробирку типа "Eppendorff с 0,5 мл замороженной крови добавляли 0,5 мл лизирующего буфера и осаждали в центрифуге в течение 1 мин. при 14 000 об/мин. Надосадочную жидкость удаляли при помощи пипетки. К осадку вновь добавляли 0,5 мл лизирующего буфера. Указанные стадии повторяли до тех пор, пока осадок не станет светлым (обычно 2-4 раза). Затем в пробирку вносили 50-100 мкл буфера для протеиназы К, 1 мкл протеиназы К, перемешивали и помещали пробирку на 30-60 минут в термостат при t 55 С, а затем - на 10 минут в термостат при t 95 С. После остывания конденсат со стенок пробирки осаждали центрифугированием при 14 000 об/мин. в течении 5-Ю секунд.
Распределение аллельных вариантов генов DQA1, DQB1, DRB1 HLA II класса при недифференцированной дисплазии соединительной ткани
HLA специфичности II класса генов DQA1 (0101, 0102, 0103, 0201, 0301, 0401, 0501, 0601), DQB1 (0201, 0301, 0302, 0303, 0304, 0305, 0401, 0501, 0502, 0503, 0601, 0602) и DRB1 (01, 02, 03, 04, 05, 06, 07, 08, 09, 10, 11, 13, 14, 15, 16, 17) типировали у 60 пациентов (34 мужчин, 26 женщин, средний возраст 19,4±0,2 лет) с недифференцированной ДСТ, постоянных жителей Ставропольского края, русской национальности. Контрольную группу составили 90 практически здоровых людей (48 мужчин, 42 женщины, средний возраст 19,5±1,1 года) без внешних и эхокардиографических признаков ДСТ, сопоставимых по этнотерриториальной принадлежности.
Данные о характере распределения аллелей генов HLA II класса у пациентов с недифференцированной ДСТ и в контрольной группе представлены в таблице 4.2.1. Оказалось, что в здоровой популяции Ставропольского края самым частым аллельным вариантом гена DQA1 оказался DQA1 050Г, его частота составила 24,8%. С высокой частотой были также представлены DQA1 0301 (21,6%), 0101 (17,3%), 0201 (17,3%)). Самым редким аллельным вариантом был DQA1 0601 (1,3%). Среди аллелей гена DQB1 самой высокой оказалась частота аллеля DQB1 0 301.(20,0%), вторым по частоте отмечен DQB1 0201 (14,7%). Относительно редко выявлялся DQB1 0305 (1,3%). Высокая частота зарегистрирована для аллелей DRB1 07 (17,3%), 16 (20,0%), низкая - для DRB1 11 (4,0%) и 15 (2,7%).
Среди аллелей гена DQA1 у больных недифференцированной ДСТ достоверно чаще встречались 0102, 0103, гена DQB1 - аллели 0302, 0502, 0602, гена DRB1 - аллели 13, 14, 15. Минимальные генные частоты при ДСТ установлены для аллельных вариантов DQA1 0201, DQB1 0301HDRB1 07,- 16, 17.
Была проанализирована частота встречаемости возможных HLA фенотиповП класса у пациентов с недифференцированной ДСТ и здоровых людей: 31 комбинация аллельных вариантов гена DQA1, 50 комбинаций аллелей гена DQB1 и 41 комбинация аллелей гена DRB1. Распределение статистически значимых HLA-фенотипов представлено в таблице 4.2.2. Диагностически значимыми позитивными HLA-фенотипами оказались: DQA1 0102/0103, DQB1 0302/0502, 0502/0602, DRB1 13/14, 13/15 и негативными - DQA1 0201/0501, DRB1 01/07, 04/16. Среди позитивных фенотипов наиболее высокие значения RR и этиологической фракции отмечены для комбинации аллельных вариантов 13/14 гена DRB1. Значимых различий в распределении изучаемых генов и комбинаций аллельных вариантов у пациентов с недифференцированной ДСТ в зависимости от пола, типа конституции установлено не было.
Сравнительный анализ позитивных и негативных специфичностей HLA II класса был проведен у пациентов с различными локомоторными диспластикозависимыми изменениями (табл. 4.2.2).
«Суммарный эффект» ассоциированных с недифференцированной ДСТ маркерных вариантов HLA I и II классов, эритроцитарных систем крови, генов, контролирующих тип ушной серы, цвет волос, радужной оболочки и экспрессивность внешних и кардиальных диспластических проявлений
При рассмотрении недифференцированной ДСТ как типичного заболевания мультифакториальной природы, представляло интерес изучение сочетания маркеров различных генетических систем и оценки возможности использования их в качестве ранних и дифференциальных диагностических критериев диспластикозависимых изменений.
В клинической генетике большое диагностическое значение придается, не только количеству маркеров заболевания, но и их сочетанию; Комплексная информация о положительно ассоциированных с недифференцированной ДСТ комбинациях в различных генетических системах отражена в таблице 4.5.1.
Для подробной оценки «фенотипического портрета» пациентов с недифференцированной ДСТ изучали сопряженность количества указанных комбинаций гено-фенотипических маркеров со степенью выраженности клинических проявлений дисплазии опорно-двигательного аппарата и сердца у 60 больных (34 мужчины, 26 женщин, средний возраст 19,9±0,3 лет). Были сформированы две группы: 1-я (18 пациентов) - с одновременным выявлением, по меньшей мере, одной позитивной комбинации в каждой из представленных генетических систем крови, а также сочетания голубой радужной оболочки с влажным типом ушной серы, 2-я (42 пациента) - с отсутствием позитивной комбинации хотя бы в одной из систем.
Особенности клинических проявлений ДСТ с учетом комплексной оценки позитивных генетических маркеров представлены в таблице 4.5.2.
Как следует из таблицы, у больных ДСТ с наличием большего количества позитивных комбинаций в генетических системах достоверно чаще встречались ВДГК, сколиоз, выраженный синдром гипермобильности суставов, пролабирование митрального клапана II степени, множественные внутрисердечные микроаномалии, признаки миксоматозного перерождения ПМК, а также хроническая инфекционная патология верхних дыхательных путей. В фенотипе пациентов 2-й группы преобладали менее выраженные диспластические признаки: легкая суставная гипермобильность, тенденция к увеличению частоты изолированных АРХ, ПМК I степени и их сочетания.
Проиллюстрировать полученные данные можно следующими клиническими наблюдениями.
Пациент С, 22 лет, консультирована в связи с жалобами на колющую боль в области сердца, длительностью до 15 минут, вне связи с нагрузками, купирующуюся самостоятельно; головную боль в затылочной области, связанную с метеоусловиями..
Вышеуказанные жалобы беспокоят с подросткового возраста. Наследственный анамнез отягощен - мать страдает гипертонической болезнью.
При объективном исследовании пациент нормостенического типа конституции, антропометрические данные: рост 185 см, вес 74 кг, индекс Кетле 21,6 кг/м2, индекс Варги 1,8, площадь поверхности тела 2,1 м2, окружность запястья/длина II пальца - 2,1, размах рук/рост - 1,05. Отмечено 7 внешних стигм: «тонкие, узкие» губы, неровные ряды зубов, «ямка» на подбородке, воронкообразная деформация грудной клетки I степени, сколиоз грудного отдела позвоночника I степени, II палец на стопе длиннее I.
Пальпация, перкуссия, аускультация со стороны органов и систем отклонений от нормы не выявили за исключением короткого систолического шума в I точке аускультации в положениях лежа и стоя. ЧСС 86 в минуту. АД 125/80 мм рт. ст. ЭхоКГ. Заключение. Пролапс передней створки митрального клапана I степени (до 5,8 мм), митральная регургитация I-II степени. Дисфункция трикуспидального клапана и клапана легочной артерии. АРХ в полости левого желудочка.
Совокупность внешних и эхокардиографических признаков, не соответствующие в полной мере ни одному из известных наследственных синдромов, позволила верифицировать недифференцированную форму ДСТ.
Дополнительное гено-фенотипическое исследование: отоскопически тип ушной серы - влажный, цвет волос — каштановый, цвет радужной оболочки — светлый (голубой), фенотипы системы крови - А (II), MN, k, DCcEe, Р-, результаты микролимфоцитотоксического теста - HLA-A1, А26, В8, В27, Cw3, Cw4, ДНК-типирования-DQAl 0102, 0103, DQB1 0602,DRB1 13, 15.
![Клинико-диагностическое значение некоторых цитокинов и аутоантител к коллагенам при недифференцированной дисплазии соединительной ткани [Электронный ресурс]](/i/i/4240/175455.png "Клинико-диагностическое значение некоторых цитокинов и аутоантител к коллагенам при недифференцированной дисплазии соединительной ткани [Электронный ресурс] Семенова Алина Борисовна")
