Введение к работе
Актуальность проблемы: В связи с возросшей за последние годы частотой заболеваемости, вызываемые вирусами герпеса инфекции, в частности, инфекционный мононуклеоз (ИМ), привлекают повышенное внимание отечественных и зарубежных исследователей [Любезная Е.В., 1991; Исаков В.А., 1999].
ИМ представляет собой доброкачественное лимфопролиферативное заболевание, возбудителем которого в 90% случаев является онкогенный вирус Эпштейна-Барр (ВЭБ). Кроме того, синдром мононуклеоза могут вызывать вирус простого герпеса (ВПГ), цитомегаловирус (ЦМВ), Toxoplasma gondii и др. [Lewin N. et al., 1990; Derkay C.S., Bramhall T.C., 1995; Kanegane H. et al., 1995; Cozad D., 1996]. Мононуклеарная реакция крови может сопровождать течение ВИЧ-инфекции [Любезная Е.В., 1991; Баринский И.Ф. и соавт., 1994; Исаков В.А., 1999].
Установлено, что герпесвирусы могут оказывать выраженное цитоцидное воздействие на различные типы клеток системы крови, длительно персистировать в дифференцированных иммуноцитах, вызывая изменения их морфофункциональных свойств [Дранкин Д.И., Заяц Н.А., 1982; Moss D.J. et al., 1992; Anognostopoulos I. et. al., 1995; Жибурт Е.Б. и соавт., 1996; Учайкин В.Ф., 1999]. Несмотря на различия механизмов цитопатического действия отдельных вирусов, в общем оно сходно. Подавление синтеза клеточных макромолекул, истощение энергетических ресурсов инфицированных клеток, как правило, заканчивается их гибелью [Букринская А.Г., Жданов В.М., 1991; Новиков B.C., 1996; Уманский СР., 1996].
Чрезвычайно важную роль в патогенезе вирусных инфекций играет апоптоз - запрограммированная «физиологическая» форма клеточной гибели. Установлено, что практически все вирусы могут индуцировать нарушения в хромосомном аппарате клеток-мишеней. Апоптоз - стандартная клеточная реакция на повреждение ДНК, направленная на элиминацию из организма генетически неполноценных клеток [Погорелов В.М., Козинец Г.И., 1995; Thompson СВ., 1995; Уманский СР., 1996; Ярилин А.А., 1996; 1998; Larochelle В. et al., 1998]. ВЭБ в этом отношении является уникальным вирусом, обладающим способностью инфицировать лимфоидные клетки, не разрушая их, а провоцируя к размножению на фоне угнетения процессов апоптотической гибели [Новиков B.C., 1996; Уманский СР., 1996; Серебряная Н.Б. и соавт., 1998; Белушкина Н.Н., 2000]. Наряду с этим, высокий уровень цитогенетических нарушений в клетках крови, их гибель при действии вирусов, в том числе ВЭБ, могут быть обусловлены отклонениями в функционировании ДНК-репаративных клеточных механизмов. Весьма важную роль играет также возраст инфицированного - определяющий фактор инфекционного мутагенеза.
Не вызывает сомнения тот факт, что наблюдающееся при ИМ подавление функциональной активности систем поддержания цитогенетической нормы, обусловленное воздействием возбудителя инфекции и наличием физиологических периодов повышенной чувствительности организма к мутагенным факторам, а также вирус-стимулированная пролиферация
лимфоцитов могут обусловливать высокий риск возникновения хромосомных аберрации и неопластической трансформации клеток [Schlossberg D., 1989; Букринская А.Г., Жданов В.М., 1991; Uehara Т. et al., 1992; Akbar A.N. et al., 1993]. Однако несмотря на имеющиеся в литературе данные о мутагенном действии герпесвирусов, в том числе ВЭБ, сведения о частоте и характере цитогенетических нарушений при ИМ в зависимости от состояния процессов апоптоза и репарации ДНК у детей различного возраста практически отсутствуют.
Установление же механизмов нарушений цитогенетического равновесия при различных этиологических и возрастных вариантах ИМ несомненно, расширит представление о патогенезе герпесвирусных заболеваний и, вероятно, послужит основой для разработки более эффективных методов диагностики и корригирующей патогенетической терапии ИМ.
Цель исследования: Установить общие закономерности и возрастные особенности цитогенетических нарушений в лимфоцитах периферической крови (ЛПК) у детей, больных инфекционным мононуклеозом, вызванным вирусом Эпштейна-Барр, и инфекционным мононуклеозом другой этиологии.
Задачи исследования:
-
Охарактеризовать количественные показатели периферической крови у детей в возрасте 3-6 и 7-14 лет, больных инфекционным мононуклеозом, вызванным вирусом Эпштейна-Барр, и инфекционным мононуклеозом другой этиологии в различные фазы течения и в отдаленном периоде после заболевания;
-
Установить общие закономерности и особенности хромосомных нарушений у детей в возрасте 3-6 и 7-14 лет, больных инфекционным мононуклеозом, вьізванЕіьім вирусом Эпштейна-Барр, и инфекционным мононуклеозом другой этиологии в различные периоды и в отдаленные сроки после заболевания;
-
Выявить особенности апоптоза лимфоцитов у детей в возрасте 3-6 и 7-14 лет, больных инфекционным мононуклеозом, вызванным вирусом Эпштейна-Барр, и инфекционным мононуклеозом другой этиологии в различные фазы течения и в отдаленном периоде после заболевания;
-
Оценить особенности репаративного синтеза ДНК в лимфоцитах периферической крови у детей в возрасте 3-6 и 7-14 лет, больных инфекционным мононуклеозом, вызванным вирусом Эпштейна-Барр, и инфекционным мононуклеозом другой этиологии в различные периоды и в отдаленные сроки после заболевания;
-
Провести сравнительную оценку цитогенетических нарушений при инфекционном мононуклеозе различной этиологии у детей в зависимости от возраста и сроков обследования.
Научная новизна работы. Впервые было проведено комплексное изучение особенностей цитогенетического статуса лимфоцитов при инфекционном мононуклеозе, вызванном вирусом Эпштейна-Барр, и инфекционном мононуклеозе другой этиологии с привлечением современных культуральных, гематологических и генетических методов исследования. Было
показано, что при инфекционном мононуклеозе, вызванным вирусом Эпштейна-Барр, и инфекционном мононуклеозе другой этиологии существенно увеличен уровень лимфоцитов с цитогенетическими нарушениями, в основном за счет повышения количества лимфоцитов с нарушениями структуры хромосом. Кроме того, обнаруживаются лимфоциты с изменением числа хромосом, в основном гиперплоидные клетки. Установлено, что у детей с инфекционным мононуклеозом, вызванным вирусом Эпштейна-Барр, и инфекционным мононуклеозом другой этиологии значительно повышено содержание ФГА- и ЛПС-стимулированных микроядросодержащих лимфоцитов. Показано, что у детей с инфекционным мононуклеозом, вызванным вирусом Эпштейна-Барр, и инфекционным мононуклеозом другой этиологии наблюдается угнетение апоптоза лимфоцитов, выражающееся в снижении содержания фрагментированной ДНК и числа клеток с признаками апоптоза. Вместе с этим установлено, что у больных инфекционным мононуклеозом, вызванным вирусом Эпштейна-Барр, в возрасте 3-6 лет повышена активность эксцизионной ДНК-репарации в лимфоцитах. Полученные данные позволяют утверждать, что нарушения цитогенетического статуса, выявленные при инфекционном мононуклеозе, вызванном вирусом Эпштейна-Барр, и инфекционном мононуклеозе другой этиологии, носят однонаправленный характер, а степень их выраженности не зависит от этиологического варианта инфекции и возрастных особенностей организма. Основные положения, выносимые на защиту.
-
У детей, больных инфекционным мононуклеозом, вызванным вирусом Эпштейна-Барр, и инфекционным мононуклеозом другой этиологии в период развернутой клинико-гематологической картины заболевания структурно-организационные изменения хромосомного аппарата лимфоцитов носят однонаправленный, равно-выраженный характер и определяются увеличением общего количества клеток с хромосомными нарушениями, числа хромосомных нарушений на клетку, повышением содержания лимфоцитов с нарушениями структуры и числа хромосом, ФГА-и ЛПС-стимулированных клеток с микроядрами. Данные изменения сохраняются в период реконвалесценции и в отдаленные сроки после заболевания, однако у больных инфекционным мононуклеозом, вызванным вирусом Эпштейна-Барр, исчезновение из популяции лимфоцитов с измененным числом хромосом и восстановление до уровня нормы количества ФГА-активированных микроядросодержащих клеток фиксируется на более позднем этапе наблюдения, чем при инфекционном мононуклеозе другой этиологии.
-
При индукции апоптоза лимфоцитов in vitro у детей, больных инфекционным мононуклеозом, вызванным вирусом Эпштейна-Барр, и инфекционным мононуклеозом другой этиологии, в острый период болезни содержание фрагментированной ДНК в ядрах клеток снижается по сравнению с нормой и не восстанавливается в период реконвалесценции. В фазу клинического выздоровления у 7-14-летних детей с инфекционным мононуклеозом, вызванным вирусом Эпштейна-Барр, и инфекционным
мононуклеозом другой этиологии количество лимфоцитов с морфологическими признаками аиоптоза остается ниже нормы. Через 16-18 месяцев после перенесенного заболевания способность лимфоцитов к апоптозу нормализуется; 3. У детей 3-6-летнего возраста, больных инфекционным мононуклеозом, вызванным вирусом Эпштейна-Барр, регистрируется увеличение активности ДНК-репарационной системы лимфоидных клеток;
Апробация работы. Основные положения диссертации докладывались и обсуждались на Втором конгрессе молодых ученых и специалистов "Науки о человеке" (Томск, 2000 г.); на Всероссийской и Всеармейской научной конференции «Санкт-Петербург - Гастро-2000» (Санкт-Петербург, 2000 г.); на Международном конгрессе молодых ученых и специалистов «Научная молодежь на пороге XXI века» (Томск, 2000 г.); на I Всероссийской научной конференции с участием зарубежных специалистов «Актуальные проблемы эволюционной и популяционной физиологии человека» (Тюмень, 2001 г.); на научных семинарах кафедр микробиологии и патофизиологии Сибирского Государственного медицинского университета (1999-2002 гг.).
Публикации: по результатам диссертации опубликовано 6 работ, в том числе 3 статьи - в центральной печати.
Структура: Диссертация состоит из введения, обзора литературы, результатов, обсуждения собственных результатов, выводов и списка литературы из 359 наименований, в том числе на иностранном языке - 203, а также включает в себя 17 рисунков и 9 таблиц.
![Феноменология структурного и функционального статуса лимфоцитов при хронических инфекциях, вызванных РНК-содержащими вирусами [Электронный ресурс]](/i/i/4425/179582.png "Феноменология структурного и функционального статуса лимфоцитов при хронических инфекциях, вызванных РНК-содержащими вирусами [Электронный ресурс] Антошина Мария Алексеевна")
