Содержание к диссертации
Введение
ГЛАВА 1. Обзор литературы 10
1.1. Дисфункция эндотелия 10
1.2. Предшественники эндотелиальных клеток (ПЭК) 14
1.3. ПЭК и факторы риска ИБС 22
1.4. ПЭК и дисфункция эндотелия 29
1.5. Перспективы терапевтического применения ПЭК: возможности и ограничения 32
Заключение 39
ГЛАВА 2. Материалы и методы исследования 41
2.1. Структура исследования 41
2.2. Клиническая характеристика участников исследования 43
2.3. Методы исследования 47
2.3.1. Стандартные методы исследования 48
2.3.2. Специальные методы исследования 52
2.4. Статистическая обработка результатов 59
ГЛАВА 3. Результаты исследования 60
3.1. Циркулирующие предшественники эндотелиальных клеток у больных с различными формами ИБС 60
3.2. Сердечно-сосудистые факторы риска у больных с различными формами ИБС. Сопоставление с количеством циркулирующих предшественников эндотелиальных клеток 66
3.3. Ультразвуковые показатели эндотелиальной функции и состояния сосудистой стенки у больных различными формами ИБС. Сопоставление с количеством циркулирующих предшественников эндотелиальных клеток 79
3.4. Биохимические маркёры эндотелиальной дисфункции у больных с различными формами ИБС. Сопоставление с количеством циркулирующих предшественников эндотелиальных клеток 83
3.5. Циркулирующие предшественники эндотелиальных клеток и медикаментозная терапия 87
ГЛАВА 4. Обсуждение полученных результатов 89
Выводы
Практические рекомендации 113
Список литературы 114
- Предшественники эндотелиальных клеток (ПЭК)
- Клиническая характеристика участников исследования
- Циркулирующие предшественники эндотелиальных клеток у больных с различными формами ИБС
- Циркулирующие предшественники эндотелиальных клеток и медикаментозная терапия
Введение к работе
Актуальность проблемы
Многими исследованиями показано, что в основе атеросклероза и его осложнений лежит нарушение целостности и функционирования эндотелия сосудов. В работах последних лет обсуждается роль циркулирующих предшественников эндотелиальных клеток (ПЭК) в процессе восстановления эндотелиального слоя и поддержании его нормальной функции, а также в неоваскуляризации ишемизированных тканей. Впервые в 1997г. популяция этих клеток была изолирована японскими учёными из мононуклеарной фракции периферической крови [30]. Эти клетки характеризуются экспрессией ряда специфичных для клеток-предшественников и эндотелия поверхностных клеточных маркёров (CD34, CD133, VEGF-R2 (рецептора 2 типа к фактору роста эндотелия сосудов) и др.). Помимо периферической крови [146, 180], они могут быть получены из костного мозга [186] и пуповинной крови [164].
Существует гипотеза, что циркулирующие предшественники эндотелия представляют собой пул клеток, которые могут формировать клеточную «заплатку» в месте повреждения эндотелия [109] и, таким образом, участвуют в поддержании баланса между повреждением эндотелия и его регенерацией [234]. Снижение количества этих клеток в крови может приводить к нарушению функции эндотелия, что было показано при оценке эндотелиальной функции по реактивности плечевой артерии [109]. Роль этих клеток в патогенезе ишемической болезни сердца (ИБС) обусловлена и тем, что помимо поддержания функции эндотелия они участвуют в постнатальном ангиогенезе. Недавно было показано, что процесс неоваскуляризации ишемизированных тканей во взрослом организме обусловлен не только разрастанием и вовлечением в кровообращение предсуществующих сосудов, но и образованием их de novo, что происходит при участии клеток-предшественников [29, 30, 203]. Количество этих клеток в циркулирующей крови и их функциональные характеристики могут представлять собой новый
фактор риска и/или маркер неблагоприятного прогноза течения ИБС и ее осложнений.
Для определения роли этих клеток в поддержании функции эндотелия при ИБС и ее осложнениях представляется целесообразным сопоставление количества циркулирующих предшественников эндотелиальных клеток с выраженностью эндотелиальной дисфункции по данным УЗИ сосудов и концентрацией таких биохимических маркеров функции эндотелия, как метаболиты (NO ", NO ") оксида азота (N0), эндотелии-1, sP- и sE-селектины, фактор фон Виллебранда (vWF). К моменту начала данного исследования в литературе мы обнаружили единичные данные о связи ПЭК с поток-зависимой вазодилатацией плечевой артерии при пробе с реактивной гиперемией [109] и не нашли работ об их взаимоотношениях с другими УЗ-показателями состояния сосудистой стенки, а также с перечисленными выше биохимическими маркёрами эндотелиальной дисфункции.
Сердечно-сосудистые факторы риска вносят значительный вклад в атерогенез, индуцируя повреждение эндотелиальных клеток и их дисфункцию [109]. Сахарный диабет (СД) 2 типа относится к одним из основных факторов риска и часто встречается при ИБС. Гиперинсулинемия, зачастую сопровождающая СД 2 типа, и лежащая в его основе инсулинорезистентность, отрицательно влияют на поток-зависимую вазодилятацию [28]. Есть данные об усилении продукции VEGF (фактора роста эндотелия сосудов - эндогенного стимулятора выброса клеток-предшественников из костного мозга и их дифференцировки) при гиперинсулинемии (гипогликемии), что, в свою очередь, запускает процесс ангиогенеза [88].
Влияние на количество и функциональные характеристики ПЭК или их трансплантация представляются перспективными способами терапевтического воздействия при сердечно-сосудистых заболеваниях. Однако предполагаемое использование этих клеток в терапевтических целях диктует необходимость
исследования количественных и качественных характеристик различных популяций циркулирующих клеток-предшественников.
Всё вышесказанное убедило нас в необходимости исследования связи количества циркулирующих предшественников эндотелиальных клеток у больных ИБС с тяжестью течения заболевания, сердечно-сосудистыми факторами риска и выраженностью дисфункции эндотелия.
Цель исследования
Изучить связь количества циркулирующих предшественников эндотелиальных клеток с тяжестью течения заболевания и оценить их роль в определении функционального состояния эндотелия у больных с различными формами ИБС.
Задачи исследования
Изучить количество циркулирующих предшественников эндотелиальных клеток в периферической крови больных со стабильной стенокардией и острым коронарным синдромом без подъёма сегмента ST и сопоставить с этим показателем у группы практически здоровых лиц соответствующего пола и возраста.
Изучить динамику числа циркулирующих предшественников эндотелиальных клеток у больных с ОКС без подъёма сегмента ST за период госпитализации.
Исследовать количество циркулирующих предшественников эндотелиальных клеток у больных ИБС при сопутствующих нарушениях углеводного обмена.
Оценить влияние пола, возраста, курения, артериальной гипертонии, гиперлипидемии и ряда других факторов риска ИБС на количество циркулирующих предшественников эндотелиальных клеток.
Сопоставить количество циркулирующих предшественников эндотелиальных клеток с функциональным состоянием эндотелия, оцененным по ультразвуковым показателям у больных с различными формами ИБС.
Сопоставить количество циркулирующих предшественников эндотелия с рядом биохимических маркеров эндотелиальной функции у указанных выше групп больных.
Научная новизна
Впервые в рамках одного исследования изучены количество ПЭК в периферической крови больных с различными формами ИБС (стабильная стенокардия, нестабильная стенокардия и инфаркт миокарда без подъёма сегмента ST), динамика числа ПЭК за период госпитализации у больных с острым коронарным синдромом без подъёма сегмента ST (OKC6nST); связь с рядом факторов риска ИБС, особенно нарушений углеводного обмена (НУО), а также взаимоотношения количества циркулирующих ПЭК с функциональными и биохимическими маркёрами эндотелиальной дисфункции. Установлено, что количество циркулирующих CD34+ клеток снижено у больных ИБС по сравнению с лицами без ИБС, причём у больных OKC6nST в большей степени, чем у больных СС, а максимальное их снижение отмечается в подгруппе ИМбпБТ. Показано, что при СС наиболее выраженное снижение числа циркулирующих CD34+ клеток-предшественников наблюдается у больных с сопутствующими нарушениями углеводного обмена. Выявлена связь между количеством циркулирующих ПЭК и дисфункцией эндотелия по данным ультразвукового исследования.
Практическая значимость
Результаты работы могут быть использованы при разработке новых методов выявления и коррекции эндотелиальной дисфункции.
Предшественники эндотелиальных клеток (ПЭК)
По современным представлениям ключевую роль в регенеративных процессах в организме играют стволовые клетки, способные к самовоспроизведению и дифференцировке в специализированные клетки различных типов, то есть к трансформации через этапы клеток-предшественников в высокодифференцированные органо-специфичные клетки, например, в клетки эндотелия сосудов, кардиомиоциты, клетки крови, гепатоциты и другие клетки [20, 125, 171, 209]. Особая роль в процессе восстановления эндотелиального слоя и в поддержании его нормальной функции отводится циркулирующим предшественникам эндотелиальных клеток [135, 154, 233, 237]. Впервые популяция ПЭК была изолирована из циркулирующей мононуклеарной фракции в 1997г. Asahara с сотр. [30]. Эти клетки были охарактеризованы авторами, как клетки с низкой экспрессией или полным отсутствием на своей поверхности общего лейкоцитарного антигена CD45 и наличием специфичных для предшественников (CD34) и зрелого эндотелия (рецепторы 2 типа к VEGF (VEGF-R2)) клеточных маркёров. В последующем было продемонстрировано, что и CD 133+ клетки в определённых условиях также способны дифференцироваться в клетки с эндотелиальным фенотипом [180, 247]. Кроме того, в ряде публикаций отмечено, что различные типы ПЭК могут также коэкспрессировать такие характерные для эндотелия маркёры, как vWF, эндотелиальная NO-синтаза (eNOS) и др. [19, 226].
Важно обратить внимание на то, что понятие «предшественники эндотелиальных клеток» является собирательным. Многие авторы к ПЭК относят разные субпопуляции клеток-предшественников, в основном коэкспрессирующих в различных сочетаниях указанные выше три маркёра: CD133+/CD34+, CD133+/CD34+/VEGF-R2+, CD133+/VEGF-R2+, CD34+/VEGF-R2+. Такое разнообразие фенотипов предшественников, входящих в понятие «ПЭК», по-видимому, обусловлено тем, что точный и/или единственный фенотип клеток-предшественников, способных дифференцироваться именно в эндотелиальные клетки, до сих пор не определён. С другой стороны, вполне вероятно, что единственного и нет. Тем не менее, чаще всего к предшественникам именно эндотелиальных клеток относят CD34+/VEGF-R2+ клетки. Кроме того, возможно, что какой-то процент клеток каждого из перечисленных выше пулов способен дифференцироваться в клетки с эндотелиальным фенотипом, или, что наиболее вероятно, указанные фенотипы клеток-предшественников отражают различные стадии дифференцировки ПЭК [236]. Так, в эндотелиальные клетки могут дифференцироваться как менее зрелые предшественники (несущие на своей поверхности CD 133 и/или CD34 и не несущие VEGF-R2), так и более зрелые ПЭК. Подтверждением этому являются данные ряда экспериментальных и клинических работ, свидетельствующие о способности, например, общей популяции CD34+ клеток в определённых условиях in vitro дифференцироваться в эндотелиоциты и о роли этих клеток в репарации повреждённых эндотелия и миокарда [110, 248].
Возможно, более подходящим объединяющим названием был бы термин «циркулирующие клетки-предшественники», который реже, но, в целом, достаточно регулярно встречается в литературе (например, [84, 103, 194] и др.). Ниже мы не всегда будем уточнять конкретный фенотип клеток-предшественников, объединив все указанные субпопуляции в общепринятое понятие «предшественники эндотелиальных клеток».
Помимо периферической крови [146, 180, 186] ПЭК могут быть получены из костного мозга [164] и пуповинной крови [234, 247]. В основном ПЭК происходят из популяции гематопоэтических (CD34+) стволовых клеток, однако они были обнаружены и при дифференцировке мезенхимальных (CD34-) клеток костного мозга [226].
По-видимому, костный мозг - основная структура, способная высвобождать клетки-предшественники, которые в последующем могут дифференцироваться в ПЭК. Однако в ряде работ было отмечено, что значительная доля ПЭК в циркулирующей крови представляет собой предшественники не костномозгового происхождения. Так, например, селезёнка является органом, содержащим большой пул ПЭК. Изолированные из неё предшественники in vitro демонстрируют характеристики эндотелиальных клеток и способны формировать трубочки [248]. Есть данные, что печень [18] и жировая ткань [158, 201] содержат некоторое количество стволовых клеток, способных in vitro дифференцироваться в эндотелиальные.
Клиническая характеристика участников исследования
Вполне понятной является разница по частоте артериальной гипертонии и гиперлипидемии между группами больных и группой контроля, в которую входили практически здоровые лица.
Если анализировать продолжительность анамнеза ИБС в группе ОКС в целом, то две группы больных отличались между собой по этому показателю (СС, 74,3±15,8; ОКС, 20,8±8,3 мес, р 0,001). Но важно учитывать, что 52% больных с ОКС были госпитализированы по поводу впервые возникшей стенокардии. Длительность анамнеза ИБС у остальных 48% больных составила 45,7=Ы4,8 мес. и не отличалась от группы СС (р=0,56). По-видимому, различия между двумя группами больных ИБС по наличию ИМ и частоте проведения различных коронарных вмешательств в анамнезе, также, в основном, обусловлены тем, что в группе ОКС, более половины больных были госпитализированы в связи с впервые возникшей стенокардии.
Различия между группой контроля и группами больных ИБС по количеству выполненных инвазивных исследований обусловлены отсутствием показаний для проведения КАГ (клинической картины ИБС, ишемии по данным нагрузочной пробы), и являются естественными при принятых нами критериях включения. Тенденция к меньшему количеству инвазивных исследований в группе ОКС (68%) по сравнению с группой СС (88%, р=0,056) связана с тем, что семи больным из группы ОКС КАГ не была проведена по техническим причинам, ещё у двух больных - в связи с их отказом. Вполне естественно, что в контрольной группе ФВ ЛЖ была достоверно выше, чем в двух других группах. При этом следует учитывать, что в связи с особенностями протокола ЭХО-КГ максимальное значение ФВ ЛЖ ( 60%) приравнено 60%, что привносит некоторые ограничения при подсчётах и их анализе.
Показатели клинических и биохимических анализов крови в целом были в пределах нормы, за исключением показателей липидного спектра, уровня глюкозы крови, С-пептида и вч-СРБ. Подробнее эти данные будут рассматриваться в Главе 3 «Результаты».
Всем пациентам была подобрана адекватная гипотензивная, антиангинальная, гиполипидемическая, антиагрегантная, при необходимости -антикоагулянтная терапия. Для наиболее корректной оценки ультразвуковых показателей и уровня метаболитов оксида азота в сыворотке крови, а также количества циркулирующих ПЭК в периферической крови, больным со СС, принимающим нитраты, их отменяли за сутки. Больным с ОКС, находившимся на инфузии нитратов, их введение прекращали за 30-60 минут до момента взятия крови, проведения ультразвукового исследования сосудов и возобновляли сразу после окончания обследования. При возникновении ангинозного приступа у больных из группы СС рекомендовали приём нитратов короткого действия. При учащении приступов стенокардии в группе СС, возникновении приступа стенокардии в группе ОКС возобновляли исходную терапию; больного в исследование не включали. Все виды обследования, изменения терапии проводили с согласия лечащего врача и пациента, полностью информированных о целях и ходе исследования.
Из приведенных в таблице 2 данных по медикаментозному лечению обследованных лиц видно, что наиболее часто назначаемыми препаратами были р-адреноблокаторы (контроль - 41%, СС - 97% и ОКС - 89%), аспирин (41%, 88% и 93% соответственно) и ингибиторы АПФ (23%, 67% и 61% соответственно), а также, что две группы больных ИБС по частоте приёма этих препаратов не отличались.
Они отличались по частоте назначения нефракционированного и низкомолекулярных гепаринов (р 030001) и клопидогреля (р 0,0001), что вполне объяснимо в связи с клиническими особенностями группы ОКС и соответствует общепринятым стандартам лечения.
Кроме того, эти две группы отличались по частоте приёма антагонистов кальция (р 0,0001), и статинов (р=0,02), что, по-видимому, также можно объяснить клиническими особенностями групп. Вероятно, что кроме того, важную роль в указанных различиях, играют минимальные сроки от момента поступления до момента включения в- исследование больных из группы ОКС, а также тот факт, что более половины больных из этой группы были госпитализированы по поводу впервые возникшей стенокардии и часть из них ранее никогда ко врачам не обращались.
По вполне понятным причинам группа, контроля по частоте приёма большинства лекарственных препаратов отличается от больных ИБС. То, что -часть лиц без ИБС получали антиагреганты (аспирин 41%, клопидогрел 12% обследованных из указанной группы), можно объяснить наличием у них болевого синдрома в грудной клетке, ставшим причиной госпитализации. В последующем, ишемический генез указанных болей был исключён при помощи теста с физической нагрузкой и КАГ.
Циркулирующие предшественники эндотелиальных клеток у больных с различными формами ИБС
10 мл крови набирали самотёком в пробирку с активатором свертывания для получения сыворотки, столько же - в пробирку с ЭДТА для получения плазмы. Образцы крови центрифугировали при 1500g (-2900 об/мин) в течение 20 минут при комнатной температуре (+22С) (для сыворотки) и при +4С (для плазмы). Затем сыворотку или плазму отбирали. Аликвоты хранили при -70С.
Определение концентрации метаболитов NO (нитритов - N02 и нитратов - NO3""") в сыворотке крови проводили методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) на приборе LC-10AD (Shimadzu, Япония). Перед проведением анализа сыворотку размораживали, разводили эквивалентным количеством элюирующего буфера (5 тМ К2НР045 25 тМ КН2РО4, рН 3,5), после чего белки удаляли путём фильтрования через фильтр ULTRAFREE-MC 10,000 NMWL Filter Units (Millipore, США) при центрифугировании с 2000g в течение 20 минут. 20 мкл ультрафильтрата вносили в хроматографическую колонку Supelcosil SAX 1 (5 мкм) 250x4,6 мм (Supelco, США) и элюировали указанным выше буфером. Количественный анализ проводили при сравнении с внешним стандартом при длине волны 214 нм, с последующим учётом разведения. В качестве стандартов использовали КЖ 2 и KN03. Результаты выражали в мкМ/л. За норму принимались референсные значения 14-45 мкМУл (29,9±2,8 мкМ/л) [5]. Определение содержания эндотелина-1, Р- и Е-селектинов, а также фактора фон Виллебранда в плазме крови осуществлялся методом иммуноферментного анализа (ИФА).
Концентрация эндотелина-1 определялась с помощью набора фирмы «Biomedica Gruppe», США; концентрация Р- и Е-селектинов -соответствующими наборами human sE-selectin ELISA и human sP-selectin ELISA фирмы «Bender MedSystems» (Австрия) на приборе Tecan Sanrise (Австрия) (лаборатория иммунологии РКНПК, рук. проф. В.П. Масенко).
Концентрацию фактора фон Виллебранда (vWF) определяли в лаборатории клеточной адгезии ИЭК РКНПК (рук. проф. А.В. Мазуров) на приборе Multiskan EFLABoy (Финляндия) по методике, описанной Е.В. Янушевскойи соавт. [15].
Данные представлены в виде среднее ± стандартная ошибка среднего (М±т). Учитывая небольшие объёмы выборок, для более корректной оценки полученных результатов весь анализ проводили, используя непараметрические методы: для попарного сравнения применяли. U тест Манна-Уитни, для множественного - тест Краскела-Уоллиса. Взаимосвязь между показателями оценивали с помощью корреляционного анализа методом Спирмана. Для сравнения групп по номинативным признакам использовали точный критерий Фишера (двухсторонний) и критерий %2. Для выявления многофакторных взаимосвязей проводили регрессионный и дискриминантами анализы. Статистически значимым считали различие при р 0,05. Статистическую обработку данных производили при помощи программного пакета "STATISTICA 6".
В представленной работе была проведена оценка двух субпопуляций циркулирующих предшественников: общего количества CD34+ клеток (суммарная фракция: CD34+/VEGF-R2- и CD34+/VEGF-R2+) и числа CD34+/VEGF-R2+ клеток.
Количество циркулирующих клеток-предшественников суммарной фракции CD34+ клеток из расчета на 1 миллион лейкоцитов оказалось снижено в обеих группах ИБС: у больных со СС на 23% (224±18 и 291±29 соответственно, р=0,046), а у больных с ОКС на 43% (166±12 и 291±29 соответственно, р 0,001) по сравнению с их числом в контрольной группе. Более того, у больных с ОКС этот показатель был на 26% ниже по сравнению с больными стабильной стенокардией (166±12 и 224±18 соответственно, р=0,035) (Рис. 7).
Циркулирующие предшественники эндотелиальных клеток и медикаментозная терапия
Поскольку ССЗ остаются главной причиной смертности взрослого населения развитых стран [218] и России [11], разработка новых эффективных методов профилактики и лечения сердечно-сосудистой патологии остаётся одной из главных задач здравоохранения. Относительно недавно возникшее направление - так называемая регенеративная медицина - может стать важным дополнением к общепринятым медикаментозному и хирургическому методам лечения и представляется принципиально новым подходом к решению этих задач.
Наша работа начиналась в 2004 году, до выхода большинства не только клинических, но и экспериментальных работ, посвященных проблеме циркулирующих клеток-предшественников. Несмотря на определённый прогресс в этой области, по-прежнему нерешёнными остаются много вопросов. Так, нет единого представления об уровне CD34+ и CD34+/VEGF-R2+ клеток в крови больных различными формами ИБС, роли различных внешних и-внутренних факторов в изменении этого показателя, а также полного понимания механизмов, влияющих на их количество. Подавляющее большинство исследований были проведены на небольших выборках. Кроме того, мы не нашли ни одной оригинальной работы, посвященной этой теме, сделанной в России.
Целью нашей работы было изучить количество циркулирующих ПЭК у больных с ИБС и выяснить, связано ли оно с тяжестью течения заболевания, рядом факторов риска ИБС и показателей эндотелиальной функции.
В исследование было включено 78 человек, среди них 33 пациента со стабильной стенокардией, 28 - с OKC6nST и 17 лиц без ИБС - группа контроля. Всего в исследовании участвовало 58 мужчин и 20 женщин. Средний возраст обследованных составил 55,5±0,9 лет. Одним из основных результатов представленной работы стало выявленное снижение количества клеток суммарной фракции CD34+ у больных с ИБС по сравнению с группой контроля. Причём, чем тяжелее была клиническая форма ИБС, тем ниже был уровень этих клеток в крови. Так, число CD34+ клеток у больньгх со СС оказалось на 23%, а у больных с OKC6nST — на 43% меньше этого показателя в группе контроля. Количество этих клеток в крови больных с ОКС было снижено не только в сравнении с лицами без ИБС, но и в сравнении с группой СС (на 26%).
Не менее интересным наблюдением оказалось и то, что при подразделении группы ОКС на больных с НС и HM6nST тенденция «чем тяжелее форма заболевания, тем ниже уровень CD34+ клеток» сохраняется и наименьшее среди всех обследованных групп число CD34+ клеток отмечается в подгруппе ИМ, которое отличается не только от этого показателя у лиц без ИБС (на 54%) и у больных СС (на 40%), но и у больных с НС (на 28%). У последних, в свою очередь, количество CD34+ клеток снижено на 36% относительно группы контроля, подобная тенденция отмечается и относительно группы СС (на 16,5%).
В то же время популяция CD34+/VEGF-R2+ клеток оказалась настолько малочисленной (среднее количество этих клеток составило 8±1 клеток на 1 млн. лейкоцитов), а разброс показателя достаточно велик (SD±7, доверительный интервал 2-17 клеток на 1 млн. лейкоцитов), что выявить достоверные различия между группами нам не удалось. Отмечалась лишь тенденция к снижению количества клеток в указанной популяции предшественников у группы ОКС по сравнению с группой СС, а при подразделении группы ОКС на подгруппы НС и HM6nST - тенденция к уменьшению количества CD34+/VEGF-R2+ клеток у больных с ИМбпЭТ по сравнению с контролем и подгруппой НС.
Наши результаты, свидетельствующие о сниженном уровне CD34+ и CD34+/VEGF-R2+ клеток у больных с ИБС, согласуются с данными большинства зарубежных работ [199, 227, 238]. Так, например, снижение числа ПЭК при ИБС одними из первых продемонстрировали Vasa с соавт., по наблюдению которых количество циркулирующих CD34+/VEGF-R2+ клеток у этих больных на -48% снижено по сравнению с тем же показателем у лиц из группы контроля. Следует отметить, что в этом исследовании число ПЭК оценивалось суммарно у всей группы ИБС, в которую входили как больные со СС, так и с ОКС (в том числе с ИМ) [227].
В ряде работ отдельно рассматривались больные со стабильной стенокардией, и проводилось сравнение с контролем. Так, Eizawa с соавт. с помощью поточной цитофлюориметрии анализировали количество CD34+ клеток только у больных со стабильной стенокардией и обнаружили его снижение на 30% по сравнению с сопоставимыми по возрасту лицами без ИБС [80], что практически полностью совпадает с нашими данными. В работе Schmidt-Liicke с соавт. количество CD34+/VEGF-R2+ клеток в группе СС оказалось почти в 2 раза ниже, чем в группе контроля [199]. А по данным Powell с соавт. уровни CD34+/CD133+ и CD133+/VEGF-R2+ клеток в 5 раз ниже у больных с тяжёлой стабильной стенокардией, чемх у здоровых добровольцев, которые, впрочем, были значительно моложе [182]. Вместе с тем, по данным некоторых авторов [92] количество циркулирующих ПЭК у больных СС увеличено, но таких работ значительно меньше.
В исследованиях, посвященных оценке числа клеток-предшественников при ОКС, чаще всего речь идёт об ИМ. К настоящему времени уже имеется сложившееся мнение о том, что количество CD34+ предшественников в крови больных ИМ увеличивается в несколько раз [151, 168, 176, 204]. По некоторым данным оно возрастает до уровня, в 5,5 [176] - 5,8 [151] раз превышающего их уровень у здоровых людей того же возраста, по другим [168] - в 3,3 раза, достигая максимума через 3 часа [151] - на 2е [176] - 7е [204] сутки от начала ангинозного приступа, начинает снижаться через 6-7 [151, 176] - 14 [204] дней и лишь через 2 месяца возвращается к уровню, определяемому у здоровых добровольцев [151].
Обращает внимание то, что в подавляющем большинстве работ описывается крупноочаговый ИМ [144, 151, 168, 204, 243, 244] или сочетание HMnST и HM6nST [92, 199]. В некоторых - не уточняется, речь идёт об HMnST или HM6nST, или об их сочетании [176]. В небольшом количестве исследований отдельно рассматривается НС [55, 95, 199].
Хотелось бы подчеркнуть, что нами не было найдено ни одной работы, в которой бы определяли число CD34+ или CD34+/VEGF-R2+ клеток отдельно у больных с OKC6nST, к тому же, - в подгруппе HM6nST и проводилось сравнение с контролем, СС и НС. Таким образом, анализ количества циркулирующих CD34+ и CD34+/VEGF-R2+ предшественников в группе OKC6nST и подгруппе HM6nST, насколько нам известно, в представленном исследовании проведён впервые.
При обсуждении числа ПЭК при OKC6nST чаще всего цитируется работа George с соавт., опубликованная в 2004 году, в которой авторы изучали in vitro число колониеобразующих единиц (КОЕ) клеток, исходно выделенных из мононуклеарных клеток периферической крови. Этот показатель оказался увеличенным у больных с НС по сравнению с больными со стабильным течением ИБС [95]. Противоречие с нашими данными, скорее всего, может быть объяснено тем, что фенотип клеток и, особенно, метод оценки их числа (подсчёт КОЕ) значительно отличаются от представленных в нашей работе (фактически, это другой показатель).
