Содержание к диссертации
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ 4
ВВЕДЕНИЕ 5
ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 9
і ; і , Характеристика циркулирующих предшественников
эндотелиальных клеток 9
Факторы, влияющие на количество циркулирующих
предшественников эндотелиальных клеток 15
Перспективы клинического применения предшественников
эндотелиальных клеток, клинические исследования 22
Заключение 26
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ 28
Характеристика лиц, участвовавших в исследовании 28
Получение образцов крови 33
Анализ мембранной экспозиции CD45, CD34, VEGFR2 в
лейкоцитарной фракции 33
Анализ содержания ростовых факторов, С-реактивного белка и
гомоцистеина в сыворотке крови 36
Статистический анализ 37
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ 38
Циркулирующие клетки-предшественники у больных ОКС без
подъема сегмента ST и больных хронической ИБС 38
Влияние коронарной ангиопластики со стентированием на
количество циркулирующих клеток-предшественников у больных
со стабильной стенокардией 42
Циркулирующие клетки-предшественники и факторы ангиогенеза
у больных ИБС 47
Циркулирующие клетки-предшественники и факторы риска
сердечно-сосудистых осложнений у больных ИБС 52
Циркулирующие клетки-предшественники и медикаментозная
терапия 58
ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ 60
ВЫВОДЫ 68
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ 68
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ 69
СПИСОК СОКРАЩЕНИИ
HGF Hepatocyte Growth Factor, фактор роста гепатоцитов
VEGF Vascular Endothelial Growth Factor, фактор роста сосудистого
эндотелия
VEGFR2 рецептор 2 типа к VEGF
АГ артериальная гипертония
АПФ ангиотензин-превращающий фермент
БСА бычий сывороточный альбумин
ГХС гиперхолестеринемия
ИБС ишемическая болезнь сердца
ИМ инфаркт миокарда
КОЕ колониеобразующая единица
ОКС острый коронарный синдром
ОХС общий холестерин
ПЭК предшественники эндотелиальных клеток
С-РБ С-реактивный белок
ТБКА транслюминальная баллонная коронарная ангиопластика
ТГ триглицериды
ФБ фосфатно-солевой буфер
ЭДТА этилендиаминтетраацетат калия
Введение к работе
В 1997 году впервые было показано, что в периферической крови взрослого человека существует популяция клеток, способная пролиферировать и дифференцироваться в эндотелиальные клетки in vitro [Asahara Т. et al., 1997]. Эти клетки характеризуются наличием на их поверхности таких маркеров, как CD34, VEGFR2 и CD133. CD34 - маркер, характерный для недифференцированных клеток гематопоэтического ряда и капиллярного эндотелия. VEGFR2 — рецептор к фактору роста сосудистого эндотелия, называемый также KDR (kinase-insert domain-containing receptor; рецептор, содержащий киназный домен); он специфичен для эндотелиальных клеток. CD 133 - трансмембранный гликопептид, экспрессирующийся на гематопоэтических стволовых клетках и предшественниках эндотелиальных клеток, а также нейроэпителиальных клетках, клетках почечного эпителия и опухолевых клетках [Asahara Т. et al., 1997; Barber C.L. et al., 2006]. Предшественники эндотелиальных клеток (ПЭК) были выделены также из костного мозга, сосудистой стенки и некоторых других органов и тканей [Doyle В. et al., 2006]. Позднее было продемонстрировано, что фракция CD34+ клеток содержит в малом количестве клетки, способные как in vitro, так и in vivo приобретать не только эндотелиальный фенотип, но и фенотип кардиомиоцита, гладкомышечной клетки [Simper D. et al., 2002; Badorff С. et al., 2003; Yeh E.T.H. et al., 2003]. В экспериментальных работах на животных было показано, что ПЭК привлекаются в места сосудистого повреждения, в частности, после баллонной ангиопластики [Griese D.P. et al., 2003; Kong D. et al., 2004a], и значительно ускоряют реэндотелизацию области повреждения. Базальный уровень этих клеток в кровотоке невелик, но он многократно возрастает при введении цитокинов и ростовых факторов, а также при воспалительной реакции и физической нагрузке [Laufs U. et al., 2004а; Rehman J. et al., 2004]. В экспериментальных и единичных клинических работах показано участие ПЭК в процессах неоваскуляризации [Asahara Т. et al., 1999а; Shintani S. et al., 2001].
Известно, что в основе острого коронарного синдрома (ОКС) лежит эрозия эндотелиального слоя на поверхности атеросклеротической бляшки коронарной артерии или разрыв бляшки с последующим образованием тромба. Так как ПЭК участвуют в репарации эндотелия, с одной стороны, уменьшение их количества в кровотоке и/или нарушение их функциональных свойств могут являться предрасполагающим фактором возникновения эндотелиального повреждения, а с другой стороны, патогенетически может быть обосновано их введение при необходимости ускорения эндотелизации внутрисосудистого повреждения. Поэтому в ведущих лабораториях мира идет активное изучение роли различных популяций циркулирующих недифференцированных клеток в патогенезе различных заболеваний сердца и сосудов. Установлено, что число ПЭК в периферической крови здоровых лиц снижено при наличии факторов риска ишемической болезни сердца (ИБС) [Vasa М. et al., 2001b; Hill J.M. et al., 2003]. В то же время при острой ишемии конечности или миокардиальной ишемии, индуцированной физической нагрузкой, а также при остром инфаркте миокарда с зубцом Q отмечается увеличение количества клеток-предшественников в системном кровотоке [Takahashi Т. et al., 1999; Shintani S. et al., 2001; Adams V. et al., 2004]. Функциональные характеристики этих клеток: их способность пролиферировать, мигрировать, формировать сосудоподобные структуры in vivo и восстанавливать перфузию ишемизированной конечности - снижены у больных ИБС, перенесших трансмуральный инфаркт миокарда [Heeschen С. et al., 2004]. Однако, несмотря на большое количество исследований и интенсивное накопление экспериментальных и клинических данных, до сих пор нет однозначного мнения как об изменениях числа ПЭК у больных с различными формами ИБС, так и об их роли в неоваскуляризации и репарации поврежденного эндотелия.
Целью данной работы явилось исследование количества циркулирующих клеток-предшественников у пациентов с острым коронарным синдромом без подъема сегмента ST и пациентов со стабильной стенокардией
7 напряжения, подвергшихся коронарной ангиопластике; сопоставление числа циркулирующих клеток-предшественников с концентрацией ангиогенных факторов роста в крови, факторами риска сердечно-сосудистых осложнений, выраженностью коронарного атеросклероза и медикаментозной терапией. В работе были поставлены следующие задачи:
Определить количество циркулирующих клеток-предшественников у больных со стенокардией напряжения и больных с острым коронарным синдромом без подъема сегмента ST.
Исследовать влияние коронарной ангиопластики на количество циркулирующих клеток-предшественников у больных со стабильной стенокардией напряжения.
Сопоставить количество циркулирующих клеток-предшественников с концентрацией ангиогенных факторов роста в крови.
Оценить взаимосвязь численности клеток-предшественников в крови с факторами риска сердечно-сосудистых осложнений.
Сопоставить количество циркулирующих клеток-предшественников с выраженностью атеросклеротического поражения коронарных артерий у больных ИБС и объемом эндоваскулярного вмешательства у больных со стенокардией напряжения.
Оценить взаимосвязь числа клеток-предшественников в периферической крови с медикаментозной терапией.
Научная новизна
Впервые установлено снижение количества циркулирующих клеток-предшественников у больных ИБС, как стабильного, так и нестабильного течения, по сравнению с лицами, имеющими лишь факторы риска ишемической болезни сердца. Показано, что коронарная ангиопластика сопровождается снижением количества клеток-предшественников в крови через 1 сутки после вмешательства с последующим восстановлением их числа
8 на 3-5 сутки. Впервые установлено, что количество циркулирующих клеток-предшественников положительно коррелирует с концентрацией фактора роста гепатоцитов в крови и объемом эндоваскулярного вмешательства у больных ИБС стабильного течения.
Практическая значимость
Полученные данные свидетельствуют об участии циркулирующих клеток-предшественников в процессах репарации внутрисосудистого повреждения, что обосновывает перспективность разработки методов терапевтического применения циркулирующих клеток-предшественников для ускорения регенерации эндотелия после эндоваскулярных вмешательств у больных ишемической болезнью сердца.
![Маркеры воспаления и оксидантная активность лейкоцитов у больных с различными формами ишемической болезни сердца [Электронный ресурс]](/i/i/4393/188471.png "Маркеры воспаления и оксидантная активность лейкоцитов у больных с различными формами ишемической болезни сердца [Электронный ресурс] Алексеева Галина Васильевна")
