Содержание к диссертации
Введение
2. СТЕРОИДОГЕНЕЗ У РЫБ (Обзор литературы).
2.1. Половые стероидные гормоны: биосинтез, динамика, функция 8
2.2. Морфология и функция стероидсекреторных клеток (СК) в гонадах молоди рыб 23
2.3. Ранний гонадо- и гаметогенез лососевых, осетровых и круглоротых - объектов исследования 35
3. МАТЕРИАЛ И МЕТОДИКА 50
4. РАЗВИТИЕ СТЕРОИДСЕКРЕТОРНЫХ КЛЕТОК В ГОНАДАХ У МОЛОДИ ЛОСОСЕВЫХ РЫБ В ПЕРИОД ДИФФЕРЕНЦИРОВКИ ПОЛА 57
4.1. Радужная форель 57
4.1.1. Гистоморфологический анализ состояния гонад 57
4.1.2. Ультраструктурный анализ состояния СК 60
4.2. Горбуша 75
4.2.1. Гистоморфологический анализ состояния гонад 75
4.2.2. Ультраструктурный анализ состояния СК 80
5. СОСТОЯНИЕ ПОЛОВЫХ ЖЕЛЕЗ И СТЕРОИДСЕКРЕТОРНЫХ КЛЕТОК В ГОНАДАХ ТИХООКЕАНСКИХ ЛОСОСЕЙ В ПЕРИОД КАТАДРОМНОЙ МИГРАЦИИ 95
5.1. Сравнительный гистоморфологический анализ состояния гонад у молоди горбуши, кеты и симы 95
5.2. Ультраструктурный анализ состояния СК в яичниках 98
5.3. Ультраструктурный анализ состояния СК в семенниках 103
6. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫЙ АНАЛИЗ РОЛИ СТЕРОИДСЕКРЕТОРНЫХ
КЛЕТОК В РЕГУЛЯЦИИ ГАМЕТОГЕНЕЗА У ЛОСОСЕВЫХ РЫБ 109
6.1. Влияние тестостерона на гаметогенез горбуши в период протогинической феминизации гонад у зародышей 109
6.2. Влияние эстрадиола на гаметогенез горбуши в период естественной инверсии пола
6.3. Влияние эстрадиола на гаметогенез горбуши после завершения периода естественной инверсии пола
6.4. Влияние эстрадиола на гаметогенез кижуча в период дифференцировки пола
6.5. Влияние эстрадиола на гаметогенез симы в период формирования у самок старшей генерации ооцитов
6.5.1. Исследование молоди в возрасте СН-
6.5.2, Исследование молоди в возрасте 1+
7. СОСТОЯНИЕ ГОНАД И СТЕРОИДСЕКРЕТОРНЫХ КЛЕТОК ГОНАДАХ ЛИЧИНОК РЕЧНОЙ МИНОГИ
7.1. Гистоморфологический анализ состояния гонад
7.2. Ультраструктурный анализ состояния СК
8. СОСТОЯНИЕ ГОНАД, СТЕРОИДСЕКРЕТОРНЫХ КЛЕТОК В ГОНАДАХ И СОДЕРЖАНИЕ ПОЛОВЫХ СТЕРОИДНЫХ ГОРМОНОВ В ПЛАЗМЕ КРОВИ У МОЛОДИ ОСЕТРОВЫХ
8.1. Ленский осетр
8.1.1. Гистоморфологический и ультраструктурный анализ состояния гонад
8.1.2. Содержание половых стероидных гормонов в крови
8.2. Стерлядь
8.2.1. Гистоморфологический и ультраструктурный анализ состояния гонад
8.2.2. Содержание половых стероидных гормонов в крови
9. ЗАКЛЮЧЕНИЕ
10. ВЫВОДЫ
11. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
- Половые стероидные гормоны: биосинтез, динамика, функция
- МАТЕРИАЛ И МЕТОДИКА
- Радужная форель
- Сравнительный гистоморфологический анализ состояния гонад у молоди горбуши, кеты и симы
- Влияние тестостерона на гаметогенез горбуши в период протогинической феминизации гонад у зародышей
Введение к работе
Актуальность проблемы. Стероидогенная система гонад, являясь важным звеном в регуляции репродуктивной функции животных, давно привлекает к себе внимание исследователей. Изучается динамика половых стероидных гормонов в периферической крови рыб, локализация стероидного синтеза в гонадах, ультраструктура стероидсекреторных клеток - СК (Дюбин, 1986; Семенов 1989, 1996; Баранникова и др., 2000,2003; Fostier et al, 1983; Devlin, Nagahama, 2002; Nakamura et al., 1998, 2005). Следует особо подчеркнуть, что большинство работ выполнено на взрослых половозрелых рыбах в связи с исследованием механизмов регуляции их созревания и нереста.
Работ, посвященных изучению СК гонад у молоди рыб, несоизмеримо меньше, и абсолютное большинство из них связано с проблемой регуляции дифференцировки пола (Федоров и др., 1990; Ахундов 1991, 1997; Hurk et al., 1982; Nakamura et aL, 1998; Devlin, Nagahama, 2002). Узкая направленность данных не позволяет составить целостного представления о развитии и функции СК в раннем онтогенезе рыб. В раннем индивидуальном развитии происходит становление и ряда других функциональных показателей половых желез, определяющих, в конечном счете, репродуктивный потенциал и динамику численности вида, таких как моно- и полицикличность, темп превителлогенеза, от которого зависит возраст полового созревания самок, объем и структура фонда половых клеток, а следовательно, величина индивидуальной и потенциальной плодовитости и другие. Роль СК и половых стероидных гормонов в регуляции этих процессов практически не известна. Во многом это связано с методическими сложностями. Небольшие размеры личинок и молоди и связанные с этим трудности получения достаточных для биохимического анализа образцов крови, слабая дифференцированность органов и тканей, в частности гонад и гипофиза, низкие концентрации гормонов - все это не позволяет осуществить исследования обычными гистофизиологическими методами. Именно поэтому преимущество в изучении морфо-функционального становления СК приобретает метод их сравнительного электронно-микроскопического анализа. Полученные таким образом данные необходимы для решения актуальной проблемы биологии развития - роли стероидогенной системы гонад в регуляции процессов раннего оогенеза.
Цель и задачи исследования. Цель работы - исследовать развитие стероидсекреторных клеток в гонадах у молоди круглоротих и рыб разных систематических групп с разным темпом гаметогенеза и цикличностью воспроизводства. В связи с этим были поставлены следующие задачи: 1)исследовать развитие СК в яичниках самок моноцикличной горбуши и полицикличной радужной форели до, в_. период* и после дифференцировки пола; 2)сравнить особенности развития СК на ранних стадиях развитня гонад у самцов с прямым определением пола на примере форели и у самцов с естественной инверсией пола на примере горбуши; 3)сравнить состояние СК в гонадах у самок и самцов нескольких видов тихоокеанских лососей с разным темпом развития гонад; 4)сравнить особенности морфологии СК у видов, далеких друг от друга в систематическом отношении (круглоротые, осетровые н лососевые); 5)исследовать морфо-функциональные изменения СК при гормональных воздействиях на молодь лососевых рыб; 6)выявить связь функционального состояния СК с содержанием половых стероидных гормонов в крови у молоди осетровых рыб.
Научная новизна полученных результатов. Впервые описано развитие СК в ходе раннего гонадогенеза у молоди миноги и семи видов рыб. Получены данные об изменении морфо-функционалького состояния и мест локализации СК в ходе непрямой дифференцировки пола. Показано, что степень функциональной активности СК у близкородственных видов на сходном этапе развития яичников зависит от темпа гаметогенеза. В результате сравнительного анализа состояния СК в гонадах у рыб, принадлежащих к разным систематическим группам, определены видовые особенности морфологии СК. Получены оригинальные данные об изменении состояния СК у личинок и
молоди горбуши, кижуча и симы при различных гормональных воздействиях на разных этапах развития гонад. В ходе комплексного исследования содержания стероидных гормонов в крови молоди сибирского осетра и стерляди с одновременным гистологическим и электронно-микроскопическим анализом половых желез на ранних этапах гаметогенеза выявлены основные закономерности функционирования СК.
Теоретическая и практическая значимость работы. Получены основополагающие данные о становлении и функции СК гонад в раннем онтогенезе круглоротых и рыб, позволяющие выявить связь морфо-функционального состояния СК с реализацией таких процессов как дифференцировка и естественная инверсия пола, формирование фонда превителлогенных ооцитов, а также темпа гаметогенеза. Разнообразие объектов исследования дало возможность рассмотреть полученные результаты в экологическом и сравнительно-эволюционном аспектах. Данные работы могут быть использованы при планировании и проведении последующих исследований роли стероидогенной функции гонад в регуляции процессов гонадо- и гаметогенеза; при совершенствовании уже использующихся способов гормональной регуляции пола для исключения подавляющих и парадоксальных эффектов применения половых стероидных гормонов; для разработки принципиально новых методов управления цикличностью и темпом полового созревания самок рыб. Материалы работы используются при чтении лекционных курсов и проведении практических занятий по эндокринологии и марикультуре рыб для студентов-ихтиологов.
Апробация работы. Материалы диссертации были представлены на Всероссийском совещании «Экологические проблемы севера европейской территории России» (Апатиты, 1996), Всероссийском симпозиуме «Возрастная и экологическая физиология рыб» (Борок, 1998), 5-ой Всероссийской конференции «Нейроэндокринология» (Санкт-Петербург, 2000), симпозиуме «Экологические и функциональные основы адаптации гидробионтов», посвященном 100-летию со дня рождения профессора Н.Л. Гербильского (Санкт-Петербург, 2000), Всероссийской конференции «Ранние этапы развития гидробионтов как основа формирования биопродуктивности и запасов промысловых видов в мировом океане» (Москва, 2001), 21-оЙ европейской конференции по сравнительной эндокринологии (Бонн, 2002), международной конференции «Современные проблемы физиологии и биохимии водных организмов» (Петрозаводск, 2004), научных семинарах кафедры ихтиологии и гидробиологии СПбГУ.
Публикации. По теме диссертации опубликовано 11 статей и 11 тезисных сообщений.
Структура и объем работы. Диссертация изложена на 230 страницах, включая 13 таблиц и 30 рисунков, и состоит из следующих разделов: введение, литературный обзор, материалы и методы исследования, 5 глав результатов и обсуждения, заключение, выводы и список литературы, включающий 411 источников (из них 253 иностранных авторов).
Половые стероидные гормоны: биосинтез, динамика, функция
К настоящему времени в литературе накоплены многочисленные данные о роли половых стероидных гормонов в регуляции репродуктивной функции у рыб. Они стимулируют развитие и созревание половых клеток, контролируют появление первичных и вторичных половых признаков, проявление репродуктивного поведения (Гербильский, 1965; Баранникова, 1975а; Баранникова и др., 1991; de Vlaming, 1974; Fostier et al., 1983; Nagahama, 1989,1999; Stacey, 2003 и др.).
Комплекс регуляторних механизмов воспроизводительной системы у рыб, как и у всех позвоночных, организован по принципу «нейроэндокринного каскада» и центральное место в нем занимает ось: гипоталамус - гипофиз -гонады (Баранникова, 1975а, 1984; Поленов 1975; Idler, 1969; Donaldson, 1973; de Vlaming, 1974; Nagahama, 1990; Pottinger, 1995; Jalabert et al., 2000; Devlin, Nagahama, 2002). Изменения параметров внешней и внутренней среды воспринимаются органами чувств, информация от которых поступает в гипоталамические центры головного мозга (Гербильский, 1941, 1965; Баранникова, 1949, 1975а; Поленов, 1975; Баранникова, Буковская, 1990; Баранникова, Дюбин, 1992; Peter et al., 1986; Pierantoni et al., 2002). Нейрогормоны, выделяемые нейросекреторными клетками преоптического ядра гипоталамуса, воздействуют на гонадотропные клетки гипофиза, которые, в свою очередь, синтезируют гонадотропные гормоны, регулирующие функцию гонад (Моисеева, 1969, 1970, 1975; Фалеева, 1975; Полуэктова, 1983; Федоров, 1985; Яковлева, 2000; Pickford, Atz, 1957; Schreibman et al., 1973; Ekengren et al., 1978; Gielen et al., 1982; Devlin, Nagahama, 2002), Впервые в ряду позвоночных все элементы гипоталамо-гипофизарной нейросекреторной системы формируются уже у круглоротых (Поленов, 1968; Яковлева, 2000).
Помимо этой оси в регуляции репродуктивной системы участвует еще целый ряд эндокринных желез: эпифиз (de Vlaming, 1974; Kavaliers, 1980; Shedpure, Pati, 1996; Srivastava, 1999; Migaud et al., 2004), щитовидная железа (Комачкова, 1972; Баранникова и др., 19756; Лагунова, 1977; Яковлева, 200Q; Youngson, Webb, 1993), интерреналовая железа (Дюбин, 1979; Васильева, 1980; Баранникова и др., 1983; Платик и др., 1999; Young, 1993; Pottinger et al,, 1995; Nuner, Trant, 1999) и хромаффинная ткань головной почки (Межнин, 1972; Смиттен, Шаляпина, 1993; Bahr et al., 1974; Bonga, 1997), урофиз (Саенко, 1972; 1993; Berlind, 1973; Gopesh, Srivastava, 2003), а также печень (Kime, 1978; Lembke et al., 1989; Pierantoni et al., 2002). Таким образом, в регуляции репродуктивной функции у рыб принимают участие различные гормоны, находящиеся в сложных взаимодействиях. При этом, наиболее важную роль играют гонадотропные гормоны гипофиза и половые стероидные гормоны гонад.
Вопрос о числе гонадотропных гормонов гипофиза у рыб обсуждается на протяжении ряда лет. Первоначально было распространено мнение о наличии у рыб одного типа гонадотропина, обладающего определенной биохимической гетерогенностью, с широким спектром действия (Апекин, 1975; Гончаров и др., 1980; Зенкевич и др., 1985; Burzawa-Ggerard, Fontain, 1972; Fontain, 1980; Chang et al., 1990). С другой стороны существует концепция о наличие у рыб, так же как и у представителей других классов позвоночных, двух гонадотропинов (Бурлаков, 1997; Христофоров, Мурза, 1998; Kawauchi et al., 1988; Swanson, 1991). Они отличаются химическим строением, иммунологическими свойствами и направленностью гонадотропного действия (Idler et al., 1975; Idler, Ng, 1979; Idler, Campbel, 1980; Ng, Idler, 1980; Wiegand, Idler, 1983), К настоящему времени у многих видов рыб из гипофизов выделено два гонадотропных гормона, гомологичных лютеинизирующему (ЛГ) и фолликулостимулирующему (ФСГ) гормонам млекопитающих (Бурлаков, 1997; Miwa et al., 1994; Planas, Swanson, 1995; Swanson et al., 2003).
Материал и методика
Стероидсекреторные клетки исследовали в гонадах личинок и молоди восьми видов рыб и круглоротых: радужной форели (Parasalmo mykiss), горбуши (Oncorhynchus gorbuscha), кеты (О. keta), симы (О. masou), кижуча (О. kisutch), сибирского осетра (Acipenser baeri), стерляди (Acipenser ruthenus), , речной миноги (Lampetra fluviatilis).
Личинок радужной форели до начала дифференцировки пола в возрасте 11-12 сут от вылупления доставили из Федерального Селекционно-Генетического Центра Рыбоводства (ФСГЦР) «Ропша» в лабораторию ихтиологии Биологического института СПбГУ, где при температуре воды 9-11 С содержали до завершения дифференцировки пола и формирования у самок генерации ооцитов периода превителлогенеза. В ходе выращивания рыб фиксировали в возрасте 30, 45, 75 и 116 сут. Сроки фиксаций были выбраны в соответствии с имеющимися данными о темпе гонадо- и гаметогенеза у радужной форели в лабораторных условиях (Захарова, 1984; Зеленников, 1999).
Для исследования горбуши икру на стадии пигментации глазных бокалов у зародышей доставляли с Березняковского (2000 г.) и Анивского (2002 г.) лососевых рыбоводных заводов (ЛРЗ; Сахалинская обл.) в лабораторию ихтиологии БиНИИ СПбГУ, где содержали при оборотном водоснабжении и температуре воды 9-11С до начала экзогенного питания молоди и далее при температуре 17-18 С. В 2000 г. фиксации личинок и молоди горбуши проводили в возрасте 1 сутки после вылупления (стадия феминизации гонад) и 34 сут (после завершения естественной инверсии пола у самцов), а в 2002 г. фиксации гонад были проведены в возрасте 30 (до завершения инверсии в гонадах самцов) и 90 сут (после завершения формирования единой генерации превителлогенных ооцитов в яичниках самок).
Кроме этого исследовали также гонады у молоди тихоокеанских лососей, зафиксированных непосредственно перед выпуском с Соколовского (горбуша), с Ясноморского (кета) и Анивского (сима) ЛРЗ (все Сахалинская обл.).
Молодь сибирского осетра и стерляди, доставленную в возрасте 4,5 мес из Конаковского рыбного хозяйства (Тверская обл.), выращивали в лаборатории ихтиологии БиНИИ СПбГУ при температуре воды 19-20С до возраста 8,5 и 9,5 мес соответственно.
Личинок миноги отлавливали в реке Черная (Ленинградская обл., Ломоносовский р-он) в июле 2003 г. Всех личинок разделили на три размерные группы: условно мелких, средних и крупных особей, которые по имеющимся данным (Кузнецов, 1971; Hardisty, 1951, 1961), соответствовали разным возрастным группам. Длина личинок миноги, а также длина и масса личинок и молоди всех, исследованных в работе рыб, приведены в таблице 1. В ходе экспериментальной работы было поставлено 6 опытов, в ходе которых молодь горбуши, кижуча и симы обрабатывали гормональными препаратами в разном возрасте и при разном исходном состоянии половых желез. Для проведения опытов икру лососей на стадии пигментации глазных бокалов доставляли в лабораторию ихтиологии: горбуши с Выгского ЛРЗ (Республика Карелия) и Анивского ЛРЗ (Сахалинская обл.), кижуча с Буюкловского ЛРЗ (Сахалинская обл.), В лаборатории икру и личинок содержали при температуре воды 9-11 С, а молодь после начала кормления -при температуре 15-18 С. Эксперименты на молоди симы проводили непосредственно на Курильском ЛРЗ (о. Итуруп, Сахалинская обл.). В первом и втором опытах оказывали однократное воздействие инъекцией гормона непосредственно в желточный мешок эмбрионов и личинок. Во всех последующих опытах оказывали хроническое воздействие, задавая гормон с кормом.
Радужная форель
Первый этап работы предусматривал исследование развития стероидсекреторных клеток в раннем онтогенезе двух видов лососевых рыб: радужной форели - вида-гонохориста (с прямым определением пола) и горбуши - протогинического гермафродита.
Исследование гонад у молоди форели проводили до, в период и после дифференцировки пола у рыб в возрасте 30,45, 75 и 116 сут от вылупления.
В возрасте 30 сут половые железы у всех исследованных рыб были полностью сформированы, обособлены и находились в индифферентном состоянии; фонд половых клеток у всех особей был представлен исключительно гониями (рис. ЗА,Б) до 9 клеток на срез. Однако, несмотря на то, что цитологическая дифференцировка пола у молоди форели в возрасте 30 сут еще не началась, мы могли отличить гонады будущих самок и самцов по форме гонады, числу и расположению гониев на поперечных срезах. Так, будущие яичники были уплощены в дорзо-вентральном направлении (рис. ЗА), а гонии на срезах располагались компактно, образуя так называемую генеративную зону, обособленную от соматической части гонады. Будущие семенники можно было отличить по треугольной форме и крупному кровеносному сосуду в основании мезорхия (рис. ЗБ). При этом гонии на поперечных срезах были расположены поодиночке или группами (по 2-3) между клетками стромы.
В возрасте 45 сут у молоди форели уже осуществлялся процесс цитологической дифференцировки пола, и мы могли исследовать гонады самцов и самок раздельно. У самок в яичниках наряду с гониями были отмечены ооциты периода ранней профазы мейоза преимущественно в состоянии зиготены и пахитены (рис. ЗВ). У самцов в семенниках, по-прежнему, присутствовали только немногочисленные гонии, поодиночке располагавшиеся среди стромальных клеток.
К возрасту 75 сут в яичниках можно было видеть начальную стадию формирования яйценосных пластинок. Фонд половых клеток был представлен гониями, ооцитами периода ранней профазы мейоза в состоянии лептотены, зиготены и пахитены, а также ооцитами периода превителлогенеза (рис. ЗГ), диаметр которых составлял 40-50 мкм. Таким образом, помимо увеличения числа половых клеток, к возрасту 75 сут в яичниках осуществлялся процесс структуризации их фонда с формированием старшей генерации ооцитов. В семенниках у рыб этого возраста по-прежнему присутствовали исключительно гонии (рис. ЗД).
В возрасте 116 сут состояние половых желез у всех исследованных особей по сравнению с состоянием гонад у рыб предыдущего срока исследования качественно не изменилось. В яичниках присутствовали гонии и ооциты периодов ранней профазы мейоза и превителлогенеза. Наблюдали дальнейшее обособление ооцитов старшей генерации, диаметр которых увеличился до 100-120 мкм. В семенниках фонд половых клеток был представлен гониями, число которых прогрессивно увеличилось.
Сравнительный гистоморфологический анализ состояния гонад у молоди горбуши, кеты и симы
Сравнительный гистоморфологический анализ состояния гонад у молоди горбуши, кеты и СИМЫ. Второй этап работы предусматривал сравнительный анализ СК у нескольких близкородственных видов с разным темпом гонадо- и гаметогенеза. Для этой работы мы выбрали молодь трех видов тихоокеанских лососей: горбуши, кеты и симы на сходном этапе онтогенеза - в период формирования у самок единственной генерации превителлогенных ооцитов. В ходе работы гонады рыб фиксировали непосредственно перед выпуском с Соколовского (горбуша), Ясноморского (кета) и Анивского (сима) лососевых „рыбоводных заводов (Южный Сахалин). У самок всех исследованных видов фонд половых клеток был представлен гониями, ооцитами периода ранней профазы мейоза и ооцитами периода превителлогенеза. Для того чтобы оценить степень дифференцированности яичников на момент фиксации, мы провели количественный анализ фонда половых клеток.
Масса и длина горбуши - в среднем соответственно 224,0 мг и 35,2 мм, были обычными для покатной молоди этого вида естественного и заводского происхождения. В яичниках площадь поперечных срезов которых была в среднем 38,1 мм 10 , присутствовали преимущественно ооциты периода превителлогенеза (рис. 14 А), средний диаметр которых составлял 67,7 мкм. Половые клетки более ранних этапов развития - гонии и мейоциты - были немногочисленными, и их доля в среднем на поперечных срезах гонад не превышала 1,9% (табл. 4). Масса и длина самок кеты - в среднем 1394,5 мг и 54,5 мм - были существенно больше, чем у самок горбуши, но также обычными для покатной молоди данного вида, Соответственно массе тела были крупнее и гонады, судя по площади их поперечных срезов (табл. 4). Вместе с тем степень развития яичников была явно ниже, чем у горбуши: диаметр ооцитов старшей генерации был достоверно меньше, а доля гониев и мейоцитов - напротив существенно больше (рис. 14Б).
У самок симы масса и длина в среднем 1032,9 мг и 46,7 мм были несколько меньше, чем у кеты, а половые железы, напротив, - несоизмеримо крупнее (рис. 14В). Так, площадь поперечных срезов в среднем была в 3,1 раза больше, чем у кеты и в 4,3 раза больше, чем у горбуши. Кроме того, у симы были наиболее крупными ооциты старшей генерации, а доля гониев и мейоцитов - такой же незначительной, как у горбуши (табл. 4). Таким образом, несмотря на то, что в гонадах всех рыб присутствовали половые клетки одних и тех же периодов развития, степень дифференцированности яичников у самок горбуши, кеты, симы к моменту фиксации существенно различалась. Повышение уровня развития гонад у самок этих видов можно выразить схемой: кета горбуша-»сима.
Семенники у молоди горбуши, кеты и симы перед выпуском с рыбоводных заводов имели сходный и характерный для самцов-сеголеток лососевых рыб вид мало дифференцированных половых желез, на поперечных срезах которых присутствовали гонии: у горбуши и кеты в среднем по 5-15 на срез (рис. 14Г), а у симы -15-30 клеток.
class4 ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫЙ АНАЛИЗ РОЛИ СТЕРОИДСЕКРЕТОРНЫХ
КЛЕТОК В РЕГУЛЯЦИИ ГАМЕТОГЕНЕЗА У ЛОСОСЕВЫХ РЫБ class4
Влияние тестостерона на гаметогенез горбуши в период протогинической феминизации гонад у зародышей
Влияние тестостерона на гаметогенез горбуши в период протогинической феминизации гонад у зародышей. Гистоморфологический анализ состояния половых желез. Воздействие тестостероном-пропионатом на зародышей горбуши проводилось с целью предотвратить или вмешаться в ход феминизации гонад, как генотипических самцов, так и генотипических самок. В возрасте 26 сут от оплодотворения зародышам горбуши с индифферентным состоянием гонад была сделана инъекция 1%-ого масляного раствора тестостерона-пропионата в дозе 4 мкг/икринку или 24 мкг/г. Гормональное воздействие не предотвратило феминизацию гонад у зародышей: как будущих самок, так и будущих самцов, а также не оказало заметного влияния на последующую естественную инверсию пола у генотипических самцов. Вместе с тем у генотипических самок последствия однократного гормонального воздействия проявились значительно позже, уже в процессе формирования в яичниках фонда превителлогенных ооцитов, в уменьшении их числа и снижении темпа роста (Федоров и др., 2000). Для анализа возможного отсроченного действия экзогенного тестостерона на развитие гонад исследовали состояние СК в яичниках и семенниках горбуши спустя значительное время после гормонального воздействия. Для этого фиксация гонад была сделана через 108 сут (в возрасте 134 сут от оплодотворения) после инъекции гормона. В момент фиксации длина и масса контрольных и подопытных рыб варьировали от 35 до 47 мм и
по от 220 до 420 мг соответственно. Для анализа мы сознательно взяли тех рыб: контрольных и подопытных самок, а также контрольных и подопытных самцов, которые между собой по состоянию фонда половых клеток практически не различались. Это было сделано для того, чтобы исключить отмеченную ранее корреляцию расположения и состояния СК с уровнем развития яичника. В яичниках взятых для анализа, как у контрольных, так и у подопытных рыб, в момент фиксации присутствовали преимущественно ооциты периода превителлогенеза (7-12 на поперечный срез) диаметром до 120-150 мкм, а также единичные гонии и мейоциты. В семенниках всех рыб присутствовали только гонии.
В яичниках контрольных самок СК обнаружены только в, теке фолликулов превителлогенных ооцитов. Такое расположение стероидсекреторных клеток было характерно для описанных ранее яичников лабораторной молоди горбуши в возрасте 90 сут от вылупления спустя значительное время после завершения естественной инверсии пола (табл. 3, рис. 13А). При этом размеры СК, их ядер, митохондрий и канальцев эндоплазматической сети у тех и других рыб достоверно не различались (табл. 3,6).
В семенниках контрольных самцов СК располагались в эпителии. Такая локализация стероидсекреторных клеток была характерна для семенников молоди горбуши, зафиксированной сразу после завершения естественной инверсии пола в возрасте 34 сут от вылупления (табл. З, рис. 12Г) и заводской молоди горбуши перед выпуском (табл. 5, рис. 17А). По ультраструктурной организации все СК, локализованные в эпителии семенников горбуши были сходными (табл. 3, 5,6).
