Содержание к диссертации
Введение
Глава I. Литературный обзор (пробиотики в комбинированных кормах для рыб)
1.1. Проблема качества комбинированных кормов в связи с их хранением
1.2. Патологии рыб, вызванные несбалансированными по составу питательных веществ кормами
1.3. Пробиотики в кормах для животных и рыб 21
Глава II. Материал и методы исследований 34
Глава III. Общая санитарно-микробиологическая характеристика комбикормов, используемых при выращивании молоди осетровых рыб
Глава IV. Лечебные свойства пробиотика «Субтилис» при репарации кожных покровов осетровых рыб 50
Глава V. Биологическая и физиологическая оценка использования пробиотика «Субтилис»в составе стартовых комбикормов для осетровых рыб
Глава VI. Оценка возможности применения пробиотика «Субтилис» в продукционных кормах для осетровых рыб 71
Глава VII. Влияние пробиотика «Субтилис» на микробный фон воды и выращиваемой рыбы 80
Заключение 84
Выводы 87
Практические рекомендации 89
Список использованной литературы 90
Приложения 117
- Патологии рыб, вызванные несбалансированными по составу питательных веществ кормами
- Общая санитарно-микробиологическая характеристика комбикормов, используемых при выращивании молоди осетровых рыб
- Лечебные свойства пробиотика «Субтилис» при репарации кожных покровов осетровых рыб
- Биологическая и физиологическая оценка использования пробиотика «Субтилис»в составе стартовых комбикормов для осетровых рыб
Введение к работе
Актуальность темы В условиях катастрофического снижения численности осетровых рыб развивающееся в последние годы товарное осетроводство является единственным способом производства ценной деликатесной продукции. Разработаны и эффективно реализуются различные интенсивные технологии товарного выращивания осетровых рыб, которые предусматривают получение продукции только за счет использования искусственных комбикормов.
При выращивании осетровых рыб наблюдается увеличение уровня органического загрязнения и число условно-патогенных бактерий в водной среде. При определенной концентрации микроорганизмов в воде рыбоводных емкостей происходит их резкое увеличение в органах и тканях рыб (Юхименко, Викторова, 1979; Каховский, Михайловская, 1990; Каховский, Тромбицкий, 1991; Казарникова, Шестаковская, 2005). При этом отмечаются случаи ослабления общего состояния рыб и возникновения различных заболеваний, что ведет к необходимости проведения исследований, направленных на разработку лечебно-профилактических кормов.
В настоящее время в качестве средства, направленного на поддержание и восстановление нормального физиологического состояния человека и животных используют различные пробиотические препараты (Harbarth, Samore, 2005; Шендеров, 2007).
Это связано с современным состоянием антибиотикорезистентности рыб, которая делает необходимым поиск альтернативных более физиологичных и безопасных средств для профилактики и лечения инфекций (Noga, 1995; Мирзоева, 2000; Головин и др., 2005)
В связи с этим, основной проблемой интенсивного осетроводства является разработка новых биотехнологий выращивания, с использованием активных и безопасных комбикормов, содержащих в своем составе современные препараты пробиотиков.
4 Типичным представителем пробиотиков является отечественный
препарат «Субтилис», действующим началом которого являются Bacillus
subtilis и Bacillus licheniformis, они активно выделяют в кишечнике
биологически активные вещества, продуцируют различные пищеварительные
ферменты и энзимы (Кулаков, 2003).
Таким образом, особую актуальность представляет изучение возможности использования пробиотика «Субтилис» в составе комбикормов для осетровых рыб.
Цель и задачи исследований. Целью данной работы явилась научная оценка эффективности применения пробиотика «Субтилис» в составе сухих комбинированных кормов для осетровых рыб:
Поставленная цель определила следующие задачи:
определить влияние пробиотика «Субтилис» на микробиологический фон комбикормов для осетровых рыб;
изучить лечебные свойства пробиотического препарата «Субтилис» при раневых поражениях кожных покровов осетровых рыб;
изучить биологическую эффективность использования пробиотического препарата «Субтилис» в составе стартовых комбикормов для осетровых рыб;
установить целесообразность использования пробиотического препарата «Субтилис в продукционных кормах для осетровых рыб;
- проанализировать влияние пробиотического препарата «Субтилис» на
микробный фон воды и выращиваемой рыбы.
Научная новизна. Впервые комплексно, на основании оценки рыбоводно-биологических и физиолого-биохимических показателей, научно обоснована целесообразность и эффективность применения пробиотического препарата «Субтилис» - биологически активной добавки в отечественные комбикорма для осетровых рыб серии ОСТ и ОТ, рекомендуемые и утвержденные в 2005-2006 гг. к использованию в рыбном хозяйстве России. Установлено, что введение этого пробиотика в рацион осетровых рыб позволяет повысить основные рыбоводно-биологические показатели
5 выращивания, снижает кормовые затраты, улучшает физиолого-биохимическое
состояние выращенной молоди.
Выявлено, что препарат «Субтилис» снижает микробную контаминацию воды в бассейнах, поверхности тела выращиваемых рыб, кормов. Установлена перспектива применения пробиотика для профилактики и лечения раневых повреждений осетровых рыб.
Практическая значимость. Полученные результаты могут служить основой для совершенствования технологий интенсивного выращивания осетровых рыб. Предложены методы снижения контаминации комбикормов с использованием пробиотика «Субтилис» в жидкой активной форме. Использование комбикормов с пробиотическим препаратом позволяет снизить потери рыбоводной продукции, сократить затраты кормов.
Основные положения выносимые на защиту.
Совокупность новых научных результатов, обосновывающих использование пробиотического препарата «Субтилис» в составе комбикормов при промышленном выращивании осетровых рыб, что способствует увеличению выхода рыбоводной продукции, улучшению ее физиологического состояния.
Апробация работы. Основные материалы диссертационной работы докладывались на конференциях: Межрегиональной научно-практической конференции «Научные подходы к решению проблем производства продуктов питания (г. Ростов-на-Дону, 2003); Международной научно-практической конференции «Аквакультура и интегрированные технологии: проблемы и возможности» (г. Москва, 2005); международной научной конференции «Состояние и перспективы развития фермерского рыбоводства аридной зоны» (Ростов-на-Дону, 2006); на научных конференциях профессорско-преподавательского состава Астраханского государственного технического университета в 2004-2008 гг.; I и II научных конференциях студентов и аспирантов базовых кафедр Южного научного центра РАН (г. Ростов-на-Дону, 2005-2006 гг.); на Международной научно-практической конференции
«Фундаментальные аспекты биологии в решении актуальных экологических проблем» (Астрахань, 2008).
Публикации. По теме диссертации опубликовано 10 работ.
Структура и объем диссертации. Диссертационная работа изложена на 120 страницах машинописного текста. Состоит из введения, семи глав, заключения, выводов, предложений производству, приложений. Список литературы содержит 246 источников, из них 52 иностранных авторов. Работа иллюстрирована 8 рисунками и 26 таблицами.
Выражаю благодарность всем коллегам кафедры «Аквакулыпура и водные биоресурсы» внесшим вклад в настоящую диссертационную работу, в том числе к.б.н. Грозеску Ю.Н., к.б.н. Бахаревой А.А., к.б.н. Сорокиной М.Н. Особую признательность выражаю своему научному руководителю - доктору биологических наук профессору Пономареву СВ., а также доктору биологических наук профессору Пономаревой Е.Н. — заведующей лабораторией «Аквакулътура и биологические ресурсы» ЮНЦ РАН.
Патологии рыб, вызванные несбалансированными по составу питательных веществ кормами
Эффективность выращивания рыб в искусственных условиях зависит от качества и сбалансированности применяемых комбикормов. Потребность рыб в структурных элементах питания не постоянна и зависит от размера, возраста и половой зрелости выращиваемых объектов. Недостаток поступающих в организм с кормом белков, жиров, углеводов, минеральных веществ и витаминов приводит к возникновению соответствующих патологий (Абросимова, 1985, 1997; Скляров и др., 1992; Гамыгин, 1996; Матишев и др., 2006).
Потребность рыб в незаменимых аминокислотах высока (Коун, Сарджент, 1983; Остроумова, 2001). Дефицит в корме таких незаменимых аминокислот как метионин, триптофан, треонин, приводит к анорексии, угнетению роста карпа, канального сома. Избыток аминокислот у многих видов рыб чаще всего сопровождается образованием жира, накапливающегося в печени, что представляет большую опасность. Нарушение энергопротеинового отношения в ту или иную сторону, как правило, угнетает рост рыб, а высокое содержание протеина при низком уровне непротеиновой энергии, может быть даже токсичным (Абросимова, 1985; Мирзоева, 1990; 1996; 1997; Абросимова, 1997; Раденко, 1997; Пономарев, 1999, Панасенко и др., 2001; Юхименко и др., 2001, 2007; Юхименко, Бычкова, 2005; Абросимова и др., 2005; Богров, Гамыгин, 2007).
Рыбы обладают более ограниченной способностью к метаболизму углеводов, чем птицы и млекопитающие. В связи с этим, у некоторых видов, например лососевых, избыток углеводов вызывает дегенерацию печени и высокую концентрацию в ней гликогена (Остроумова, 1996, 1997; 2001). В то же время, у канального сома, способного использовать большее количество углеводов, при их избытке регистрировали лишь чрезмерное отложение жира в мышцах и на внутренних органах (Мирзоева, 1990; Юхименко и др., 2001, 2007; Юхименко, Бычкова, 2005; Абросимова и др., 2005; Богров, Гамыгин, 2007).
В условиях аквакультуры, рыбы очень чувствительны не только к качеству, но и количеству скармливаемых жиров. Избыток жиров у многих видов рыб, вызывает ожирение печени (липоидную дегенерацию), отложение жира в висцеральной полости и тканях, повышенную жирность мышц. Недостаток незаменимых жирных кислот клинически проявляется в депигментации, эрозии плавников, сердечной миопатии и ожирении печени (Мирзоева, 1990; Голодец, 1994; Васильева, 2000; Гамыгин и др., 2004; Казарникова, Шестаковская, 2005, 2006; Казарникова, 2007; Богров, Гамыгин, 2007).
По данным Н.А. Головиной с соавторами (1994) кормление карпа низкоэнергетическими кормами во время зимовки на теплых сбросных водах приводит к развитию синдрома дефицита энергии (СДЭ), сопровождающегося вертежом рыбы. Болезнь впервые описана немецкими специалистами в середине 80-х годов XX столетия при комбинированной технологии выращивания рыбы: посадочный материал выращивали в прудах, зимовку и выращивание товарной рыбы проводилось в садках и бассейнах на теплых водах. Возникновению СДЭ способствуют переуплотненные посадки, зарыбление разноразмерным или разнокачественным посадочным материалом, нарушения в кормлении, длительно действующие стресс-факторы, особенно перепады температуры воды, изменения гидрологического и гидрохимического режимов и др. У ослабленных СДЭ рыб снижается резистентность и, как следствие, возникает аэромоноз, первые признаки которого чаще всего появляются в конце зимовки (при подъеме температуры с 13,0 до 17,0С. В целях профилактики этого заболевания рекомендуют осуществлять систематический контроль за физиологическим состоянием рыбы, соблюдать технологические требования и не допускать кормления низкоэнергетическими кормами, а при необходимости использовать обогащенный рыбий жир или растительное масло: кукурузное, рапсовое и др., и витаминно-минеральные добавки (Scheperclaus, 1954, 1979; Головина, Головин, 1993; Головина и др., 1994; Катичева, 2000; Скляров, Студенцова, 2001; Головина и др., 2003; Абросимова и др., 2005; Енгашев и др., 2005; Скляров, 2007).
Для формирования тканей тела и нормального течения обменных процессов рыбы нуждаются в тех же микроэлементах и минеральных веществах, что и другие животные (Коун, Сарджент, 1983; Латреш, 1998). Существенно необходимыми для метаболизма рыб считаются кальций, фосфор, магний, калий, сера, хлор, железо, медь, йод, марганец, кобальт, цинк, молибден, селен, хром, олово. В тканях рыб обнаружены и другие минеральные вещества (Скляров и др., 1992; Скляров, 1999, 2007; Коршунов и др., 2000).
Многие из потребляемых минеральных веществ рыбы могут адсорбировать непосредственно через жабры, слизистые покровы ротовой полости и кожу. Микроэлементы оказывают большое влияние на рост рыб, дыхание, переваримость пищи, выживаемость. Недостаточное или чрезмерное поступление их с кормами является причиной серьезных заболеваний рыб. Так, недостаток фосфора приводит к деформации позвоночника, железа — анемии, отсутствие цинка - к эрозии плавников и кожи, катаракте, деформации позвоночника. У карпа дефицит магния вызывает анорексию, угнетение роста, вялость, конвульсии и высокую смертность. У канального сома признаки дефицита магния, помимо аналогичных тем, что отмечаются у карпа, проявляются в мышечной дряблости, пониженном содержании магния в костях, сыворотке и теле рыбы (Ларченко, Златкина, 19977; 1987; Скляров и др., 1984; Мирзоева, 1990; 1996; Наумова, 2000; Остроумова, 2001).
У молоди карпа в тепловодных хозяйствах недостаточность кальция и фосфора может привести к снижению темпа роста и перфорации жаберных крышек (Гамыгин и др., 2004).
Рыбам для нормальной жизнедеятельности необходимы также витамины (Скляров и др., 1984; Мирзоева, 1990; 1997; Остроумова, 1997). Потребность в них зависит от многих факторов: возраста, вида, темпа роста, репродуктивного состояния рыб, солености и рН воды, плотности посадки, стрессов и т.д. Отсутствие или недостаток витаминов вызывают развитие болезненных признаков, гиповитаминоз или авитаминоз. Симптомы авитаминоза могут иметь общий характер: анорексию, угнетение роста, смертность и быть специфическими, характерными только для дефицита определенного витамина (Труфанов, 1972; Щербина, 1983; Остроумова, 1983, 1988, 1996, 2001; Абросимова и др., 2005; Богров, Гамыгин, 2007).
Общая санитарно-микробиологическая характеристика комбикормов, используемых при выращивании молоди осетровых рыб
В настоящее время при товарном выращивании осетровых рыб достаточно остро стоит вопрос обеспечения безопасности комбикормов. Нарушение обработки сырья, хранение готовой продукции часто приводит к снижению качества кормов, что вызывает заболевания и гибель рыб. Поэтому, наряду с традиционным контролем биологического качества комбикормов, весьма важное значение придается их санитарно-биологической характеристике (Дорофейчук, 1980; Иванов, Данилова, 1984; Бурлаченко и др., 2001, 2006; Бурлаченко, 2007). Комбикорма для осетровых рыб содержат значительное количество продуктов животного происхождения, что является благоприятной основой для массового развития бактерий, токсины которых оказывают супрессивное действие на иммунную систему, провоцируя патологические изменения внутренних органов (Байрамова, Абросимова, 2006). Одним из возможных способов предотвращения такого негативного воздействия на организм рыб, является использование пробиотиков в составе комбикормов.
В соответствии с проектом Ветеринарных правил и норм безопасности кормов и кормового сырья (ВетПиН 13.7.1.-00.2000) для оценки рыбных комбикормов используются нормы присутствия ряда микроорганизмов. Комбикорма для осетровых рыб включают большое количество продуктов животного происхождения, что является благоприятной основой для массового развития бактерий (Тец, 1994; Борисов, 2005).
Токсины этих бактерий оказывают супрессивное действие на иммунную систему, провоцируют воспаление слизистой желудочно-кишечного тракта, изменения в структуре печени и почек (Бурлаченко, 2004; Байрамова, Абросимова, 2006).
Предотвратить негативное воздействие этих микроорганизмов на ослабленную иммунную систему рыб, содержащихся в индустриальных условиях, можно путем введения в состав комбикормов пробиотиков. В настоящее время в медицине и животноводстве применяется большое количество различных пробиотиков. Среди них наиболее эффективными считаются Пробиотики серии «Субтилис», основной особенностью которых является сочетание аэробной Bacillus subtilis и анаэробной Bacillus licheniformis. Первые — являются источником пищеварительных ферментов: липаз, протеаз и т.д.; вторые - проявляют выраженное антагонистическое действие в отношении широкого спектра грамположительных и грамотрицательных бактерий, в том числе Е. Coli и В. Clostridium. Кроме, того, продукты метаболизма одной бактерии являются субстратами для другой и наоборот (Verweyen et al. 1999; Кулаков, 2003; Кулаков, Панасенко, 2004; Ларцева, Обухова, 2006). Спорообразующие пробиотики «Субтилис» производятся в виде двух форм: сухой и жидкой. Сухая форма является наиболее технологичной, так как споровая культура легко выдерживает процесс гранулирования, экспандирования и экструдирования комбикормов, что дает возможность получении лечебно-профилактических кормов в промышленных масштабах и значительно упрощает использование этого препарата в рыбоводстве (Колганова и др., 2001; Пани, Вершинина, 2002).
Согласно существующим нормам общее микробное число для рыбных комбикормов не должно превышать 5x105 КОЕ/г (ВенПиН 13.7.1.-00.2000). На первом этапе провели определение оптимальной нормы введения пробиотического препарата «Субтилис», воздействующей на микробный фон комбикорма с повышенным уровнем контаминации. Жидкую форму пробиотика вводили методом поверхностного напыления на комбикорм в количестве 0,1 мл/кг, 0,3 мл/кг, 0,5 мл/кг, 0,7 мл/кг, при начальной обсемененности 5,3 х 10 КОЕ/кг (табл. 3). Результаты проведенных бактериологических анализов показали, что во всех опытных вариантах наблюдалось постепенное снижение обсемененности. Причем в первые 15 суток микробный фон комбикормов практически не изменялся. На 30-е и последующие 50-е сутки общее количество микроорганизмов в комбикорме резко снизилось. Общая бактериальная обсемененность кормов в этот период составила 230-280 тыс. микробных клеток в 1 г.
Лечебные свойства пробиотика «Субтилис» при репарации кожных покровов осетровых рыб
В последние годы, в экосистемах водоемов произошли существенные изменения, оказавшие влияние на численность и физиологическое состояние осетровых рыб. В связи с этим значительно сузились возможности отбора качественных рыб для целей искусственного воспроизводства. Поэтому вопрос максимально эффективного использования и сохранения имеющихся производителей приобретает особую остроту (Кириллов, Солохина, 2000).
В условиях снижения численности популяции осетровых рыбоводные предприятия вынуждены вовлекать в рыбоводный процесс производителей без соответствующей отбраковки (Романов и др., 2005). Кроме того, заготовка и транспортировка рыб на рыбоводные заводы оказывает серьезное стрессовое воздействие, вызывая повышение уровня глюкокортикоидных гормонов, глюкозы, приводя к изменению гематологических показателей, водно-солевому дисбалансу, снижению иммунитет (Полунина, 2000; Телль и др., 2007). Неизбежна также и травматизация во время заготовки на тонях и перевозки производителей. Известно, что при выращивании рыб, обеспечение полноценным белковым кормом и витаминами имеет особое значение при восстановлении поврежденной ткани (Домушин, 1978; Яковлева1978; Кормейн, 1983; Абросимова и др., 1996, 1999, 2006).
В связи с этим, особый интерес представляло определение лечебных свойств пробиотического препарата «Субтилис» при репарации поврежденных кожных покровов у молоди русского осетра (начальной массой 14-16 г). Первые несколько суток после нанесения рыбам надрезов, у 100% особей как опытной, так и контрольной группы отмечали стрессовую реакцию, которая сопровождалась следующими признаками: потеря рыбами активности, аппетита, осветление кожных покровов.
Через трое суток рыба начала вновь потреблять комбикорм. Результаты оценки лечебных свойств показали, что полное заживление ран по первичному натяжению (при отсутствии некротизированных тканевых элементов) у рыб в опытном варианте произошло на 5 суток раньше, чем в контроле (рис. 3). При этом у рыб потреблявших комбикорм с пробиотиком процессы клеточного и молекулярного взаимодействия не были нарушены. В результате чего, первая и вторая фаза, характеризующиеся сворачиваемостью крови и воспалением, протекали достаточно быстро - в течение одних суток. Уже через 48 часов наблюдали начало пролиферативной фазы (Яковлева, 1978; Гецадзе, 1984), при которой отмечались первые признаки стягивания ран. В контрольном варианте начальные фазы репарации проходили медленнее, а стягивание повреждений началось лишь через 6 суток.
В контрольном варианте в воде и рыбе доминировали нежелательные в гигиеническом аспекте микроорганизмы, которые отсутствовали на поверхности рыб опытного варианта.
Раны служат входными воротами для микроорганизмов - возбудителей инфекционных осложнений. Рана загрязняется микробами уже в момент ранения - первичное загрязнение раны (Кузов, Яглинский, 1991). Так у 20% интактных рыб наблюдали инфицирование ран. По-видимому, у рыб контрольной группы загрязнение поврежденных покровов продолжалось, что привело к вторичному микробному загрязнению раны и увеличению ее общей микробной обсемененности.
Формирование раневой инфекции является следствием нарушения общей защитной реакции организма (Балаханов, 1979; Бандемир, 1985; Гаибов, Султанов, 1988; Чернуха, Флорова, 2006). В связи с тем, что пробиотик обладает иммуномодулирующим действием, благодаря активации макрофагов, индукции эндогенного интерферона и синтеза иммуноглобулинов, очевидно резистентность рыб опытного варианта к инфицированию была значительно выше.
Анализ рыбоводно-биологических показателей, полученных в ходе эксперимента, позволяет утверждать, что введение в корма для осетровых рыб пробиотического препарата «Субтилис», оказывает позитивный эффект на рост и выживаемость рыб с механическими повреждениями кожных покровов. Среднесуточная скорость роста рыб контрольного варианта была на 1,57 % ниже, чем у рыб из опытного варианта, а абсолютный прирост - на 32%. При этом выживаемость рыб в контрольном варианте была ниже на 10% (табл. 6).
Формирование ремонтно-маточного стада стерляди на Волгоградском осетровом рыбоводном заводе проводят из числа ремонтной группы рыб, выращенных от икры в искусственных условиях, а также при доместикации рыб, отловленных из естественной среды обитания. У 40% доставленных на предприятие особей «дикой» стерляди при ихтиологическом осмотре отмечали следующие симптомы начала воспалительного процесса: покраснение кожных покровов, потертости, очаговый некроз покровных и подлежащих тканей. Все повреждения были связаны с транспортировкой рыбы на расстояние. В связи с этим важно было оценить эффективность действия пробиотического препарата «Субтилис» на репарацию кожных покровов. Для экспериментальных исследований были отобраны особи с одинаковой степенью поражения кожных покровов. Все особи имели следующие внешние признаки: слабую подвижность, множественные поражения кожи, рострума, плавников, воспалительное поражение ануса.
Использование продукционного комбикорма ОТ-7 в течение 14 суток, содержащего пробиотический препарат «Субтилис», способствовало лучшему заживлению пораженных кожных покровов. В контрольном варианте раны стали покрываться сапролегнией, состояние рыб ухудшилось. Через 2 недели эксперимента отход среди интактных рыб составил 8%, тогда как в опытном варианте - 2%.
Биологическая и физиологическая оценка использования пробиотика «Субтилис»в составе стартовых комбикормов для осетровых рыб
Одним из важных технологических этапов искусственного выращивания осетровых рыб является подращивание личинок с момента перехода на активное питание (Иванов и др., 2006). Основной отход при этом отмечается при переходе на активное питание и по данным разных авторов потери могут составлять от 20 до 50% (Пономарев и др., 2002; 2006).
На осетровых рыбоводных заводах для кормления молоди применяются стартовые комбикорма, в состав которых входят рыбные гидролизаты. Привлекательность этих компонентов состоит в том, что в своем составе они содержат большое количество белка с низкой молекулярной массой, необходимого для личинок при переходе на активное питание. По данным Е.Н. Пономаревой и А.А. Бахаревой.(2002) при переходе на активное питание личинок осетровых рыб активность щелочных и кислых протеиназ еще недостаточно высокая. Поэтому оптимальным для использования является комбикорм, содержащий значительное количество низкомолекулярных белковых веществ, способных усваиваться в процессах мембранного и внутриклеточного пищеварения. Ранее на ОРЗ для кормления личинок осетровых рыб применялся комбинированный метод: сочетание в рационе сухого комбикорма и живых кормовых организмов олигохет. Использование комбикормов с гидролизатами позволяет исключить использование живых кормов при выращивании ранней молоди осетровых рыб (Пономарева, Бахарева, 2002).
В современных экологических условиях для кормления осетровых рыб целесообразно применять комбикорма, которые отличались бы не только сбалансированностью состава по основным питательным и биологически активным веществам, но и высоким продуктивным и иммуномодулирующим действием, а также низкой стоимостью (Лукьяненко, 1989). Кроме того, на современном этапе развития промышленной аквакультуры осетровых при использовании интенсивных методов выращивания рыбы испытывают постоянное воздействие стрессовых факторов: сортировки, взвешивания, уплотненные посадки и др., которые приводят к ослаблению общей резистентности организма.
В связи с этим был проведен ряд исследований по оценке эффективности использования бактериального препарата «Субтилис», основанного на штаммах почвенных бактерий В. subtilis и В. licheniformis, которые обладают повышенной способностью к образованию ферментов и синтезу в кишечнике достаточного количества амилаз, липаз, протеаз. Применение препарата при выращивании других видов рыб показало, что он способствует лучшей усваиваемости пищи (Кулаков, 2003; Кулаков, Панасенко, 2004; Панасенко, 2006).
Для оценки продуктивного действия комбикормов с пробиотиком «Субтилис» первая серия экспериментов была проведена в экспериментальных условиях на ранней молоди русского осетра и стерляди.
При выращивании двух видов осетровых рыб в течение 30 суток ростовой эффект в опытном варианте находился на уровне контроля. При выращивании личинок стерляди абсолютный прирост был выше на 6% при использовании комбикорма с пробиотическим препаратом, тогда как в опыте с личинками русского осетра отмечали преимущество контрольного варианта над опытным по ростостимулирующему эффекту на 4%. При этом следует отметить, что введение в состав комбикорма пробиотического препарата «Субтилис» оказало положительное влияние на выживаемость личинок, как русского осетра, так и стерляди (табл. 7, 8).
Продолжительность эксперимента, сут 30 30 Полученное положительное действие при введении в состав комбикорма пробиотического препарата «Субтилис», можно объяснить его возможностью вырабатывать разнообразные пищеварительные ферменты и витамины непосредственно в кишечнике, и, тем самым, оказывать на рыб, выраженный ростостимулирующий эффект.
Физиологическое состояние ранней молоди стерляди оценивали по общему химическому составу тела (табл. 9). Молодь стерляди, выращенная на комбикорме с добавлением пробиотика «Субтилис», отличалась главным образом более высоким содержанием белка и жира в теле, что свидетельствует об удовлетворительном физиологическом состоянии рыб (Яржомбек и др., 1986; Полунина, 2000; Телль и др., 2007).
Анализируя данные общего химического состава тела выращенной молоди отмечено, что пробиотик «Субтилис» в составе стартового комбикорма ОСТ-4 приводит к накоплению протеина и липидов в исследуемых образцах тела выращенной молоди стерляди.
При интенсивном выращивании рыб качество корма является основным лимитирующим биотическим фактором и зачастую определяет физиологическое состояние рыбы. Наиболее чувствительной к изменениям состояния организма тканью является кровь. Поэтому физиологическое состояние молоди осетровых рыб, выращенной в лабораторных условиях на комбикормах с добавлением пробиотика, оценивали также и по основным показателям состава крови (табл. 10). Лучшие показатели крови были отмечены у стерляди, которая потребляла комбикорм ОСТ-4 с содержанием пробиотического препарата «Субтилис». Уровень гемоглобина и количество эритроцитов в составе красной крови рыб этом варианте были выше по сравнению с показателями рыб в контрольной группы. Однако в контроле эти показатели были также в пределах принятых физиологических норм (Тимофеева, 1960; Полунина, 2000; Телль и др., 2007).
Примечание: различия достоверны при Р 0,05; Р 0,001 Исследование общего биохимического состава тела молоди русского осетра, выращенного на комбикорме ОСТ-4 с пробиотиком, показало, что весьма благоприятным следует считать более высокое количество белка в теле рыб по сравнению с контролем. Рыба, выращенная на комбикорме ОСТ-6 (с гидролизатом), по количеству основных веществ также была в пределах физиологической нормы.
Накопление питательных веществ в теле молоди русского осетра При изучении красной крови выращенной молоди русского осетра на комбикорме ОСТ-4 с пробиотиком отмечали, что во всех вариантах опытов показатели здоровья были в пределах принятых физиологических норм (Полунина, 2000; Телль и др., 2007). При этом было выявлено увеличение уровня гемоглобина на 4%, гематокрита на 8% и количества эритроцитов на 4% (табл. 12). Таблица 12 Показатели красной крови у молоди русского осетра
Таким образом, в условиях лабораторных экспериментов, проведенных в условиях аквариального комплекса, лучшие результаты при оценке физиологического состояния были отмечены в варианте с использованием пробиотика «Субтилис».
Проанализированные результаты комплексно показывают эффективность применения пробиотического препарата «Субтилис» в составе стартовых комбикормов для осетровых рыб. Однако, в связи с тем, что на осетровых рыбоводных заводах молодь осетровых часто подвергается большому воздействию стрессовых факторов, необходимо было провести дополнительные исследования по оценке эффективности использования комбикормов пробиотиком «Субтилис» в условиях промышленного выращивания. Наряду с этим было важно оценить оптимальную продолжительность кормления ранней молоди комбикормом с пробиотическим препаратом.
На осетровых рыбоводных заводах стартовые комбикорма используются на протяжении всего периода выращивания молоди осетровых до массы 3 г, поэтому в опытах личинки севрюги, перешедшие на активное питание и имевшие среднюю массу 0,03 г при коэффициенте вариации 12,4%, были разделены на 6 групп (5 опытных и 1 контрольную).
