Содержание к диссертации
Введение
Глава I. Состояние прооксидантной и антиоксидантной системы в норме и патологии
1.1.Общие сведения о роли свободных радикалов, активных форм кислорода и их метаболитов в природе перекисного окисления липидов 10
1.2. Состояние компонентов прооксидантной системы организма. Малоновый диальдегид и НСТ-тест 20
1.3. Антиоксидантная система. Церулоплазмин плазмы крови и каталаза эритроцитов 26
Глава II. Материалы и методы исследования
2.1. Клинико-лабораторная характеристика больных 36
2.2. Характеристика препарата Тамерит. Обоснование выбора данного иммуномодулятора в комплексной терапии при лечении больных рожей 43
2.3.Методы исследования 46
2.4.Состояние прооксидантной и антиоксидантной системы крови у здоровых людей 50
Глава III. Состояние прооксидантной системы крови у больных рожей
3.1. Содержание малонового диальдегида в плазме крови у больных рожей 53
3.2. Активность спонтанного НСТ-теста нейтрофильных лейкоцитов 69
Глава IV. Состояние показателей антиоксидантной защиты у больных рожей
4.1. Содержание церулоплазмина в плазме крови у больных рожей 82
4.2. Показатели каталазы эритроцитов у больных рожей 94
Заключение 106
Выводы 120
Практические рекомендации 121
Литература 123
- Состояние компонентов прооксидантной системы организма. Малоновый диальдегид и НСТ-тест
- Антиоксидантная система. Церулоплазмин плазмы крови и каталаза эритроцитов
- Характеристика препарата Тамерит. Обоснование выбора данного иммуномодулятора в комплексной терапии при лечении больных рожей
- Активность спонтанного НСТ-теста нейтрофильных лейкоцитов
Введение к работе
Актуальность проблемы. Проблема рожистого воспаления обусловлена постоянным ростом этого заболевания среди населения, без тенденции к снижению и составляет 14-25 на 10.000 населения [21,40,66]. Среди общего объема больных поступивших в инфекционное отделение г. Нальчика, доля пациентов с рожистым воспалением составляет 2,5-3 %. Основными причинами рожи у исследуемых больных послужили нарушение целостности кожных покровов, в результате расчесов, царапин, микро - и макротравм. Данные нарушения являются входными воротами инфекции, чаще на фоне длительной сопутствующей патологии (сахарный диабет, гипертоническая болезнь, варикозно-расширенные вены нижних конечностей), иммунодефицитных и послеоперационных состояниях; микробных заболеваниях кожи и ногтей; возраст от 50 до 85 лет и более.
При роже происходят значительные изменения в организме, связанные в первую очередь с угнетением нейро - эндокринной и иммунной систем. Иммунологическая недостаточность заключается не только в слабости иммунного ответа. В отдельных случаях наблюдается качественно иной иммунный ответ. Под влиянием Р-гемолитического стрептококка могут возникать различные формы аллергии или после срыва естественной иммунологической толерантности к собственным антигенам развиваются аутоиммунные состояния [94].
Проблема свободнорадикальной патологии, важнейшей
характеристикой которой является накопление токсических продуктов перекисного окисления липидов, имеет исключительно важное научное и практическое значение. Процессы свободнорадикального окисления (СРО), лежащие в основе метаболизма всех клеток и определяющие адаптивную самостоятельность организма к действию повреждающих факторов, являются не только необходимым звеном жизнедеятельности клетки, но и выступают как универсальное неспецифическое звено механизмов развития
многих патологических состояний [61].
Перекисное окисление идет со значительной скоростью, но стационарная концентрация перекисей мала вследствие наличия мощной многокомпонентной антиоксидантнои системы. Срыв физиологической антиоксидантнои защиты организма ведет к чрезмерному увеличению продукции активных форм кислорода, инициирующих лавинообразное разветвление процессов СРО в тканях [33].
В нормальных условиях жизнедеятельности при функционировании живых систем в условиях физиологического оптимума существует про - и антиоксидантное равновесие, которое является важнейшим механизмом окислительного гомеостаза. Нарушение нормального течения окислительных процессов в результате несоответствия прооксидантных и антиоксидантных ресурсов клетки, приводит к формированию оксидантного стресса. Это является основным метаболическим синдромом, который способствует развитию многочисленных морфофункциональных нарушений в организме [106]. Однако антиоксидантные компоненты ограничивают развитие радикальных окислительных процессов, удерживая про - и антиоксидантное равновесие в пределах нормальной реакции. Лишь исчерпание буферной мощности защитных систем при тяжелых и продолжительных напряжениях, когда расход антиоксидантов превышает их биосинтез, приводит к окислительной деструкции мембран, клеток, тканей, что ведет к более или менее выраженной патологии [9]. Исследования состояния и возможных механизмов нарушения регуляции кислородзависимых процессов, по-видимому, предоставляют возможность выяснения общих закономерностей и уточнения причин и патогенеза рожистого воспаления. Недостаточная эффективность применяемых методов лечения, особенно в плане предупреждения рецидивов и повторных заболеваний, требует дальнейшего изучения патогенеза рожи и совершенствования на этой основе способов ее лечения и профилактики.
Одним из важных звеньев неспецифической резистентности организма,
является состояние антиоксидантнои системы при роже, находящей свое
отражение в показателях перекисного окисления липидов (ПОЛ). К
антиоксидантам относятся вещества различного происхождения,
выполняющие роль защиты полиненасыщенных жирных кислот и липидов
клеточных мембран от перекисного окисления липидов и повреждения
свободных радикалов. Они способствуют предотвращению
прогрессированию воспаления, блокируя реакцию макрофагов на уровне кислородного взрыва, снижают концентрацию пероксидов липидов, уменьшают риск развития гипоксических состояний органов и тканей, улучшают реологические показатели крови. ПОЛ и их производные повреждают сосудистые мембраны, повышают их проницаемость, нарушают содержание тканевых ферментов, что усугубляет микроциркуляторные процессы в очаге воспаления благодаря их вазоконстрикторному действию [16]. При нарушении механизмов регуляции перекисного окисления липидов происходит избыточное накопление свободных радикалов, которые вызывают нарушение проницаемости структур и функции биомембран, повреждение липидов, белков, нуклеиновых кислот, изменение биоэнергетики, регуляторных и защитных функций иммунитета [118,120,121,157].
Эти данные свидетельствуют о значительно возросшем интересе к исследованиям перекисного окисления липидов, как механизму, играющему большую роль в патогенезе рожистого воспаления. Однако в доступной литературе недостаточно сведений об этих механизмах при роже, не изучено состояние системы перекисного окисления липидов при различных клинических формах и степенях тяжести при данном заболевании. В связи с этим представляет значительный интерес изучение показателей свободнорадикального окислении, а также антиоксидантной защиты у больных рожей в зависимости от стадии, степени тяжести и глубины патологического процесса.
Цель работы: провести изучение состояния прооксидантной и антиоксидантной системы крови у больных рожей в зависимости от стадии, степени тяжести, варианта течения заболевания и сопутствующей патологии.
Задачи исследования: 1.У больных рожей определить в динамике заболевания состояние процессов перекисного окисления липидов в плазме крови по содержанию малонового диальдегида в зависимости от периода, степени тяжести болезни, клинического варианта течения, наличия сопутствующей патологии. 2.0ценить у больных рожистым воспалением состояние свободнорадикальных процессов путем проведения спонтанного НСТ-теста. 3.Изучить содержание церулоплазмина крови в динамике у больных рожей, как показателя плазменного антиоксиданта крови.
4.Выявить состояние активности внутриклеточного антиоксиданта каталазы эритроцитов в динамике заболевания у больных рожей с различными клиническими формами и степенью тяжести.
5.0ценить состояние свободнорадикального окисления у больных рожей на примере малонового диальдегида, НСТ-теста, церулоплазмина и каталазы эритроцитов на фоне базисной терапии + Тамерит.
Работа выполнена в рамках комплексного плана научных исследований Кабардино-Балкарского государственного университета по программе «Университеты России», «Фундаментальные исследования» по теме «Состояние прооксидантной и антиоксидантной системы организма при инфекционных заболеваниях различной этиологии». Номер государственной регистрации в ВНТИЦентре 0120501781.
Научная новизна. В работе впервые представлена комплексная оценка
состояния процессов перекисного окисления липидов путем изучения
прооксидантных компонентов крови, на примере малонового диальдегида и
показателей НСТ-теста и антиоксидантной защиты, которую устанавливали с
помощью определения антиоксиданта церулоплазмина и внутриклеточного
антиоксиданта — каталазы эритроцитов. Установлена зависимость изменений
процессов перекисного окисления липидов и состояние антиоксидантной защиты в зависимости от стадии, степени тяжести, клинического варианта течения, наличия осложнений и сопутствующей патологии, а также полноты выздоровления. Полученные в результате проведенных исследований новые данные об изменениях в состоянии перекисного окисления липидов и антиоксидантной защиты организма у больных рожей расширяют наши представления о патогенезе данного заболевания, открывают перспективу для разработки более совершенных способов профилактики и лечения, больных с применением антиоксидантов, в частности Тамерита.
Практическая значимость. Практическая значимость
диссертационной работы состоит в том, что выявленная зависимость клинического течения рожи от состояния перекисного окисления липидов, антиоксидантной системы, позволяет расценить показатели интенсивности липидной пероксидации и антиоксидантной защиты у больных в качестве дополнительных критериев оценки тяжести заболевания, сроков выздоровления, что имеет значение для прогнозирования исходов болезни и тактики лечения.
Определены нормальные значения малонового диальдегида, спонтанного НСТ-теста, церулоплазмина и каталазы в эритроцитах у здоровых людей по использованным методикам.
Основные положения, выносимые на защиту:
1.У больных рожей происходит повышение показателей липидной пероксидации - малонового диальдегида в плазме крови, активности спонтанного НСТ-теста лейкоцитов, которые зависят от стадии, степени тяжести болезни, характера клинического течения, наличия сопутствующей патологии, а также полноты выздоровления.
2.Изменение антиоксидантной защиты организма в периоде разгара заболевания, характеризуется дисбалансом в виде угнетения плазменного
антиоксиданта церулоплазмина в плазме крови на фоне повышения
активности каталазы в эритроцитах.
3.Резко выраженные и длительные изменения содержания малонового
диальдегида, показателя НСТ-теста нейтрофилов, церулоплазмина в плазме
крови и активности каталазы в эритроцитах у больных рожей
свидетельствуют о более тяжелом течении болезни, наличие осложнений и
сопутствующих заболеваний.
4.Установленно значение процессов свободнорадикального окисления и
антиоксидантной защиты при рожистом воспалении, а также показано
клинико-диагностическая информативность и практическая значимость
комплексного определения показателей активности про- и антиоксидантной
системы организма.
5.Выявлена терапевтическая эффективность противовоспалительного,
антиоксидантного и иммунотропного препарата Тамерит в лечении рожи.
Внедрение в практику. Результаты диссертационной работы широко опубликованы в открытой печати. Полученные данные используются в клинической практике Центра инфекционных заболеваний по профилактике и борьбе со СПИД и другими инфекционными болезнями МЗ КБР.
Теоретические аспекты диссертационной работы используются на кафедрах инфекционных болезней, детских инфекций Кабардино-Балкарского государственного университета при чтении лекций и на практических занятиях по теме «Рожа».
Публикации. По материалам диссертационной работы опубликовано 20 научных работ, в том числе две статьи в рекомендуемых ВАКом центральных журналах: «Клиническая лабораторная диагностика» и «Вестник новых медицинских технологий».
Апробация диссертационного материала. Основные положения
диссертационной работы доложены и обсуждены на ежегодных научных
конференциях сотрудников медицинского факультета КБГУ (2005-2007), на
научно-практических конференциях Республиканского центра по борьбе со
СПИД и другими инфекционными заболеваниями МЗ КБР (2006-2007), на Международной научной конференции «Современные наукоемкие технологии» (г. Москва, 2005), на IV Российской конференции « Проблемы морфологии: теоретические и клинические аспекты» (г.Астрахань, 2005), на Научно-практической конференции «Достижения медицинской науки -практическому здравоохранению» (г.Нальчик, 2005-2007), на VII Российском съезде инфекционистов «Новые технологии в диагностике и лечении инфекционных болезней» (г. Нижний Новгород, 2006), на Российской юбилейной научной конференции к 175-летию со дня рождения С.П.Боткина (Санкт-Петербург, 2007), на VIII международном конгрессе молодых ученых и специалистов (г.Томск, 2007), на Международной конференции аспирантов и молодых ученых «Перспектива-2007» (г.Нальчик, 2007).
Диссертация апробирована на совместной научной конференции кафедры инфекционных болезней, детских инфекций, микробиологии, вирусологии и иммунологии и Республиканского центра по борьбе со СПИД и другими инфекционными заболеваниями МЗ КБР (февраль, 2008).
Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 146 страницах машинописного текста и содержит введение, 4 главы, заключение, выводы и указатель литературы, включающий 175 отечественных и 83 иностранных авторов. Иллюстрации представлены 25 таблицами, 31 рисунком и 20 выписками из истории болезни.
Состояние компонентов прооксидантной системы организма. Малоновый диальдегид и НСТ-тест
Устойчивыми продуктами развития радикальных процессов являются вторичные (конечные) соединения: спирты, альдегиды, кетоны, лактоны, предельные углеводороды и др. [105,218]. Для обнаружения радикальных окислительных процессов и оценки их активности существует много способов определения содержания в образцах отдельных альдегидов, кетонов или карбонильных групп [77]. В клинических и биологических исследованиях широкое применение получил предложенный в 1944 году Коном и Ливерсейджем колометрический метод определения малонового диальдегида (МДА) в реакции с 2-тиобарбитуровой кислотой (ТБК), или МДА-метод. В данной реакции образуется окрашенный хромоформ (максимум поглощения 532 нм), определяемый спектрофотометрически. При добавлении ТБК к субстрату, в котором протекают радикальные окислительные процессы, возникают окрашенные продукты, динамика образования которых во времени тесно коррелирует с поглощением 02 и отражает накопление МДА [252]. Определение МДА в сыворотке [13,95], моче [218] или гомогенатах тканей [248] часто применяется в качестве интегрального показателя активности процессов ПОЛ.
В основе широкого применения МДА — метода лежит простота его выполнения. Реакция с тиобарбитуровой кислотой в значительной степени зависит от рН, температуры, наличия кислорода, антиоксидантов и ионов металлов переменной валентности, детергентов и других факторов [68,217], поэтому при её постановке необходимы определенные методические приёмы, особенно при изучении легко окисляющихся липидов.
Продукты ПОЛ достаточно легко мигрируют через клеточные мембраны, поэтому измерения содержания МДА и диеновых конъюгатов в плазме и клетках (эритроциты) крови человека дают близкие значения. Полученные показатели являются интегральными и хорошо коррелируют друг с другом (коэффициент корреляции 0,9) [218,224,250,252].
Изучение показателей МДА было отражено в работах при хронической цитомегаловирусной инфекции (ЦМВИ). [138,222]. При хронической ЦМВИ происходит образование активных форм кислорода, пероксидация структур и конкурентное поражение митохондрии с существенным снижением уровня АТФ. Плод, развивающийся в условиях хронической фетоплацентарной недостаточности (ФІШ) [90,130,143] подвержен риску гипоксического повреждения жизненно важных органов и травматизации в родах. В основе развития гипоксии и неразрывно связанной с ней несостоятельности системы антиоксидантной защиты (АОЗ) лежит поражение митохондрий, нарушение проницаемости их мембран или прямое угнетение окислительного фосфорилирования [35,55].
При физиологически протекающей беременности отмечается достоверное надежное функционирование АОС, а при выраженных процессах гипоксии, травматизации плода в родах происходит нарастание малонового диальдегида в несколько раз (контр, гр. 5,6±0,8; основ, гр. 7,0±0,6). Это свидетельствует о повышенной активности процессов ПОЛ у детей с хронической ЦМВИ, и несостоятельности антиоксидантной защиты [55,143].
Состояние АОЗ проводили у детей с хроническим гастродуоденитом (ХГ) [170]. При анализе состояния ПОЛ в зависимости от этиологии заболевания выявило увеличения уровня липопероксидации ЖС у хеликобактер-ассоциированных больных по сравнению с не инфицированными пациентами [49,54,172]. Концентрация продуктов, реагирующих с ТБК, у больных инфекционными ХГ превышало показатель при Н. pylori -отрицательной форме на 38% Коэффициент отношения продуктов ПОЛ к субстратам для этих реакций были значительно выше при хеликобактерной этиологии ХГ [180]. Повышение кислотообразующей функции желудка у детей с гастродуоденитом способствует возрастанию перекисных процессов, а накопление продуктов липопероксидации в ЖС стимулирует его кислотность. Этот вывод подтверждают данные H.Draper [204,257], который установил, что экзогенное введение малонового диальдегида в желудок экспериментальных животных вызывает повреждение слизистой оболочки.
Уровень МДА изучали у недоношенных детей. Целью проведенной работы явилось исследование взаимосвязи активности перекисного окисления липидов, антиоксидантной системы в клетках крови и степени гипоксического поражения ЦНС у недоношенных новорожденных [143]. У детей отмечалось достоверное повышение пероксидации липидов в мемранах эритроцитов в остром и раннем восстановительном периоде. У новорожденных I степени недоношенности с гипоксическим поражением ЦНС в остром периоде выявлено повышение содержания МДА в 1,5 раза по отношению к контролю, у новорожденных II и III степени недоношенности — в 2,5 раза (р 0,001) [27]. В раннем восстановительном периоде отмечалось снижение уровня МДА во всех обследуемых группах. В то же время у детей были выявлены достоверно более высокие показатели МДА в мембранах эритроцитов по сравнению с группой контроля [55,90,148].
Таким образом, повышение уровня МДА в мембранах эритроцитов является неблагоприятным прогностическим фактором в развитии внутрижелудочковых кровоизлияний у недоношенных новорожденных с гипоксическим поражением ЦНС. [96,130].
Результаты исследований комплексной оценки процессов ПОЛ и состояние АОС проводились при острых вирусных гепатитах. Данные показатели свидетельствовали об утяжелении течения и использовались для прогнозирования осложнений заболевания. У больных с тяжелым течением ОВГ в разгаре болезни установлен выраженный рост концентрации МДА в эритроцитах и сыворотке крови [118,121]. При усилении тяжести течения заболевания и появление осложнений происходит интенсификация ПОЛ и усугубление антиокислительной недостаточности [28].
Таким образом, при вирусных гепатитах наблюдается активация ПОЛ, степень выраженности которой коррелирует со степенью тяжести ВГ и может быть использована в оценке прогноза заболевания и присоединения осложнений [17,164].
Состояние перекисного окисления липидов оценивали у больных с кишечными инфекциями на примере МДА. Уровень изменения малонового диальдегида напрямую зависел от степени тяжести и клинического варианта течения у больных с пищевыми токсикоинфекциями и сальмонеллезом.[7,67,69,70,198]. Так, при тяжелой степени тяжести и колитическом варианте течения уровень МДА достигал максимальных значений. Полного восстановления прооксиданта до нормальных цифр не происходило. При легком и среднетяжелом течении заболевания при гастритическом и гастроэнтеритическом вариантах течения уровень МДА в период ранней реконвалесценции возвращался к норме, что свидетельствует о завершенности инфекционного процесса.
Важным показателем естественной неспецифической иммунореактивности организма является функциональное состояние нейтрофильных гранулоцитов, ответственных за процесс фагоцитоза и внутриклеточное переваривание инфекционных агентов. Данный метод исследования отличается своей стандартностью и простотой воспроизводимости. Первые сообщения о поглощении солей тетразолия с последующим их восстановлением в цитоплазме зрелых нейтрофилов до нерастворимого формазана появились в 1953 г. Повторно описали этот феномен в фагоцитирующих нейтрофилах у здоровых людей [29]. Степень активности зависимости метаболизма нейтрофилов отображает тест восстановления нитросинего тетразолия, т.е. функцию глюкозо-монофосфатного шунта и связанную с ним выработку свободных радикалов.
Антиоксидантная система. Церулоплазмин плазмы крови и каталаза эритроцитов
Церулоплазмин плазмы крови- главный медьсодержащий белок, известный с 1948 г., является гликопротеином. Молекула церулоплазмина (ЦП) состоит из 1046 аминокислотных остатков, содержит углеводы, 6 (7) атомов меди. ЦП связывает 95% общего количества меди, содержащейся в сыворотке крови. Молекулярная масса ЦП, по данным разных авторов колеблется от 115 до 200кДа [44,210].
Медь, поступающая в организм с пищей, всасывается в тонкой кишке и вместе с альбумином с кровью доставляется в печень. ЦП участвует в распределении, транспорте и гомеостазе меди, а также в обмене железа, стимулируя кроветворение. Хотя ЦП может переносить медь внутрь клеток для инкопорации в другие медьсодержащие белки, в частности СОД, он выступает в качестве скорее донора, нежели переносчика меди, и эту функцию нельзя отождествить с транспортной функцией по аналогии с трансферрином [29,68,200]. Обладая ферроксидазной активностью, он окисляет двухвалентный Fe до трехвалентного. Окисленные ионы железа в составе трансферрина транспортируются в костный мозг, где используются для синтеза гема. Одной из основных физиологических функций ЦП является его способность окислять разные соединения по оксидазному механизму. Считается, что в сыворотке крови ЦП совместно с трансферрином образует антиоксидантную систему, регулирующую концентрацию восстановленных ионов железа. ЦП взаимодействует с О2" [211], обладая СОД-подобной активностью [180]. Он является главным ингибитором супероксидазного аниона. СОД-подобная активность ЦП имеет важное значение при воспалительных процессах, когда фагоцитирующие клетки выделяют большие количества О2-, причем при патологических состояниях снижение активности СОД может компенсироваться увеличением его содержания в плазме и тканях [36]. Кроме того доказано модулирующее влияние ЦП на адгезивные способности тромбоцитов [29,118].
В экспериментальных исследованиях Т.А. Крайновой и соавт. [87] продемонстрировано антиоксидантное и антигипоксическое действие ЦП, обусловленное активацией эндогенных систем, обеспечивающих защиту организма от гипоксии.
ЦП относится к белкам, содержащим ионы металлов переменной валентности. Антирадикальный эффект ЦП объясняют его способностью связывать ионы металлов. Снижать вероятность протекания ОН-генерирующих реакций, в частности реакций Фентона. Вместе с тем высказывается мнение, что в организме человека ЦП выступает скорее прооксидантом, окисляя липопротеины низкой плотности [75], нежели антиоксидантом. ЦП является белком острой фазы, его концентрация в плазме возрастает в 2-3 раза при воспалении, беременности, травме; это усиливает важность его определения в целях клинической диагностики [36,179]. ЦП активно связывает супероксидные радикалы, высвобождающиеся при фагоцитозе [149]. Наряду с антиоксидантной ЦП обладает оксидазной активностью, причем парафенилендиамиднооксидазная активность сыворотки крови связана именно с ЦП [225], на этом свойстве основаны существующие принципы определения последнего. Регистрацию ЦП осуществляют, главным образом, основываясь на его оксидазной и ферроксидазной активности: окисление ферментов фенил ендиамина сопровождается появлением окрашенных продуктов, регистрируемых фотометрически [29,71,106].
Нарушение ПОЛ и антиоксидантной защиты (АОЗ) лежат в основе патогенеза атеросклероза, ишемической болезни сердца, ионизирующей радиации, остеоартроза, злокачественных новообразований. ПОЛ - один из механизмов, разрушающих клеточную мембрану, содержащую до 30% липидов [242].
ЦП меняется при различных патологических процессах. Так повышенное содержание ЦП является индикатором острофазового ответа и при остром инфаркте миокарда (ОИМ) может в определенной степени отражать интенсивность деструктивного процесса и размеры очага некроза.
У всех больных ИБС независимо от наличия или отсутствия инфаркта миокарда (ИМ) активность ЦП повышалось относительно таковой у здоровых. У больных ИМ активность ЦП определялось клинической формой заболевания, и зависела от обширности очага некроза, активности деструктивности процесса, которое у больных ОИМ и нестабильной стенокардией было повышенным [16,34,39].
Следует отметить, что динамика изменения активности ЦП была сопоставима с уровнем продуктов ПОЛ, в частности конечного его продукта - малонового диальдегида (МДА). Полученные данные свидетельствовали о степени компенсации организма и функциональном напряжении печени, связанном с синтезом ЦП, в ответ на гемодинамические нарушения, как правила развивающиеся при трансмуральной форме ОИМ [83,92,232].
Изучению роли ЦП при заболеваниях почек посвящены единичные исследования. Был проведен сравнительный анализ активности ЦП у больных и практически здоровых людей. У больных артериальной гипертонией (АГ) активность ЦП и уровень МДА были выше по сравнению с таковыми у практически здоровых людей, но ниже, чем у больных хроническим гломерулонефритом (ХГН). Максимальные значения ЦП выявлены при ХГН, средние - при диабетической нефропатии (ДН) в стадии микроальбуминурии и АГ и низкие — при ДН в стадии протеинурии [47]. Максимальный уровень ЦП выявлен также у больных ХГН и ДН в стадии протеинурии, в то время как при ДН в стадии микроальбуминурии и синдроме АГ показатели достоверно не отличались от таковых в группе контроля [29,75].
Высокий уровень МДА у больных ДН в стадии протеинурии отражает интенсивность реакций ПОЛ и несостоятельность системы антиоксидантной защиты. Снижение активности ЦП свидетельствует об истощении сывороточного звена антиоксидантной защиты и неблагоприятном течении болезни [208,210]. Таким образом, активность ЦП может выступать в роли прогностического показателя у больных с патологией почек [47].
Содержание продуктов ПОЛ, в частности ЦП у больных сахарным диабетом зависит от наличия диабетической микро- и макроангиопатий [12,47]. На фоне макроангиопатий зарегистрировано достоверное снижение сывороточной концентрации ЦП по сравнению с группой контроля и больных без сосудистых осложнений. Развитие диабетических микроангиопатий сопровождается относительным ограничением ПОЛ, интенсивность которого при этом остается выше нормы [18,255]. Присоединение макроангиопатий усугубляет дефицит АОЗ за счет дополнительного уменьшения концентрации циркулирующего а-токоферола и параллельно снижение уровня ЦП, который считается основным антиоксидантом плазмы крови [36]. Таким образом, прогрессирование сосудистой патологии при инсулинозависимом сахарном диабете сопряжено с нарастающей недостаточностью АОЗ [165].
Изучение показателей антиоксидантной защиты перекисного окисления липидов, по-видимому, позволяет прогнозировать течение заболевания и своевременно корригировать терапию путем назначения антиоксидантных препаратов.
Каталаза эритроцитов - гемсодержащий фермент с молекулярной массой около 250 кДа, впервые описанный Loew в 1901 году. По структуре каталаза является тетрамером, содержащим по одной прочно связанной гемовой субъединицей. Каталитическая активность каталазы определяется во всех растениях и микроорганизмах, за исключением облигатных анаэробов. В организме человека и животных максимальное содержание фермента обнаружено в эритроцитах, а также в печени и почках; концентрация ее в мозге, щитовидной железе, половых железах и соединительной ткани мала [14,22].
Характеристика препарата Тамерит. Обоснование выбора данного иммуномодулятора в комплексной терапии при лечении больных рожей
У 40 пациентов, помимо базис-терапии, препаратом выбора стал Тамерит, обладающий противовоспалительным, иммунокоррегирующим, антиоксидантным свойствами. Тамерит (аминофталгидрозид) — отечественный препарат широкого спектра действия, утвержденный Госфармкомитетом РФ 03.04.00, который прошел, клинические испытания и в настоящее время широко применяется в регионах РФ. Тамерит известен как иммуномодулирующий, противовоспалительный, антиоксидантный препарат, который не обладает кумулятивными, мутагенными, аллергическими, токсическими и тератогенными свойствами [2,3,4]. Противовоспалительный эффект заключается в способности препарата обратима блокировать избыточную продукцию гиперактивированными макрофагами интерлейкинов, фактора некроза опухоли, перекисных соединений, активных форм кислорода, а также провоспалительных факторов, определяющих степень выраженности воспалительного процесса. Антиоксидантное действие Тамерита реализуется за счет уменьшения потребления кислорода гиперактивированными макрофагами с последующим снижением генерации кислородных радикалов и острофазовых белков, ответственных за развитие токсического и воспалительного синдромов. Влияние Тамерита на окислительно-восстановительные процессы в клетках доказывается двумя положениями.
Первое, связанно с тем, что Тамерит, угнетая макрофагальную активность, уменьшает появление в биологических жидкостях оксидов азота, в результате чего поддерживаются достаточные условия для оптимальной работы клеток [2-4]. Тамерит, ингибируя гиперактивность макрофагов, предотвращает высвобождение активных соединений, разрывая на ранней стадии ингибирование. Второе положение основывается на экспериментально доказанной антигипоксической активности данного препарата. В настоящее время разработан прямой метод оценки антиоксидантной защиты человека, основанный на изучении влияния новых препаратов на тиолдисульфидную систему крови человека. Новый подход к выявлению и оценке антиоксидантной активности в спектре действия препарата Тамерит позволяет получить информацию не только о прямом его влиянии на тиолдисульфидное соотношение, но и о направленности этого влияния -нормализация, активация или ингибирование антиоксидантной защиты (Соколовский В.В., 1984, 1988). Иммуномодулирующие свойства препарата проявляются в восстановлении нормальной антигенпрезентирующеи и секреторной функции клеток моноцитарно-макрофагального ряда, стимуляции микробицидной системы нейтрофильных гранулоцитов и цитотоксической активности естественных киллеров, иммунокоррегирующим действием в отношении клеточного и гуморального иммунитета. Препарат повышает резистентность организма к инфекционным заболеваниям и в отличие от цитостатиков, которые вызывают стойкое подавление иммунной системы, Тамерит ингибирует только гиперактивные макрофаги, оказывая малое влияние на резистентные клетки. Таким образом, в ряду широко применяемых иммуномодуляторов и антиоксидантов Тамерит обладает наиболее выраженным антиоксидантным компонентом, что делает его препаратом выбора при назначении иммунотерапии.
Основными критериями выбора больных для включения в традиционную терапиюТамерита, явились: 1.Затяжное, длительное течение рожи; 2.Частые рецидивы заболевания (каждые три месяца); 3.Наличие сопутствующей патологии, что усугубляло течение рожистого воспаления; 4.Тяжелое течение заболевания с наличием осложнений; Таким образом, оптимизация базис-терапии, включением препарата Тамерит на ранней стадии заболевания, ведет к купированию воспалительного процесса и разрыву каскадного запуска патологических морфофункциональных изменений при данном воспалении, что приводит к быстрой нормализации клинико-лабораторных показателей. Тамерит вводился ежедневно внуримышечно по 100 мг в течение 7-10 дней. 2.3.Методы исследования Определение содержания малонового диальдегида в плазме крови по M.Ushyama (1978) [251] без использования сульфата железа Принцип метода: тиобарбитуровая кислота (ТБК) в кислой среде взаимодействует с низкомолекулярными диальдегидами (главным образом, с малоновым) с образованием окрашенного комплекса, имеющего максимум светопоглощения при длине волны 535 нм (Ushyama М., Michara М. Et al., 1978) [251]. работу с пробами осуществляют в вытяжном шкафу. К пробам добавляют по 3 мл бутанола, тщательно перемешивают активным встряхиванием, центрифугируют при 3000 об / мин в течение 10 мин, добиваются разделение фаз. Из верхней (бутаноловой) фракции отбирают пробы для фотометрии при длинах волн 535 и 580 нм против п-бутанола в кювете с длиной оптического пути 10 мм. Расчет содержания ТБК-активных продуктов проводят по формуле: ТБК (мкмоль/л)=(Е535-Е580)х 53,2, где: В обычные химические пробирки вносят 0,1 мл плазмы крови (без следов гемолизата). В пробирку, служащую контролем (она содержит любую другую плазму), добавляют 2 мл фтористого натрия для ингибирования ферментатаивной активности церулоплазмина. Затем во все пробирки вносят по 8 мл ацетатного буфера и по 1 мл раствора п-фенилендиамина (используется в качестве субстрата).
Пробирки встряхивают и помещают на 1 ч в водяную баню с температурой +37С.После инкубации во все пробирки, за исключением контрольной, добавляют по 2 мл раствора фтористого натрия. Содержимое пробирок перемешивают и пробирки помещают в холодильник на 30 мин при +4С. На фотоэлектроколориметре определяют оптическую плотность в опытных пробах против контроля (слабая розово-сиреневая окраска) в кюветах с шириной слоя 10 мм при зеленом светофильтре (530нм). Расчет концентрации ЦП проводят по формуле: ODx 875 (мг/л), Где OD- измеренная оптическая плотность Для того чтобы выразить содержание ЦП в мкмолях, умножают полученную ранее величину в, миллиграммах на переходный коэффицент, равный 0,0074 (молекулярная масса ЦП -135000). Для определения активности ЦП можно использовать как плазму крови, так и сыворотку, которые могут храниться в холодильнике при +4С в течении 3 дней (при -20С до 4 недель) без изменения активности ЦП.
Активность спонтанного НСТ-теста нейтрофильных лейкоцитов
Цитохимическое определение показателей спонтанного НСТ-теста проводились у 156 больных на фоне базисной терапии в период разгара заболевания, угасания клинических симптомов и периоде ранней реконвалесценции. В периоде разгара выявлено повышение активности НСТ-теста у всех больных рожистым воспалением. Этот показатель варьировал от 35 усл.ед. (на 160% выше нормы) до 58 усл.ед. (на 360% выше нормы). У 46 больных показатель НСТ-теста был на 160-200%, у 78 на 228-315%, у 32 на 330-370% выше нормы. Среднее значение НСТ-теста нейтрофильных гранулоцитов в периоде разгара рожи 46,5±0,7усл.ед (табл.10). В процессе лечения происходило улучшение общего самочувствия, отмечалась нормализация температуры, уменьшение симптомов интоксикации. При исследовании в периодах угасания клинических симптомов и ранней реконвалесценции выявлено снижение способности нейтрофильных лейкоцитов восстанавливать нитросиний тетразолий. Среднее значение активности НСТ-теста в периоде разгара клинических симптомов 46,5±0,7 усл.ед., а в периоде угасания клинических симптомов 35±0,6 усл.ед., что достоверно отличается от нормы (таб.10).
Нормализация активности НСТ-теста лейкоцитов при роже происходит лишь в периоде ранней реконвалесценции, то есть перед выпиской из стационара. В этот период средний показатель активности НСТ-теста 15±0,9 усл.ед, что достоверно не отличается от нормы (таб.10). Статистическая обработка материала показала достоверное повышение активности НСТ-теста у больных рожей в периодах разгара, угасания клинических симптомов и ранней реконвалесценции, с максимальным значением в периоде разгара, ступенеобразным снижением в периоде угасания клинических симптомов и нормализацией в периоде ранней реконвалесценции (рис. 16). метаболической активности нейтрофильных гранулоцитов с максимальным отклонением от нормы в периоде разгара заболевания. Статистическая обработка показала, что в периоде разгара заболевания у больных рожистым воспалением наблюдается достоверное повышение показателей НСТ-теста (таб.10).
В процессе лечения, параллельно положительной динамике заболевания, улучшения самочувствия, снижению симптомов интоксикации и нормализации лабораторных данных, в периодах угасания клинических симптомов и реконвалесценции происходило постепенное снижение показателя НСТ-теста. В качестве примера изменения активности спонтанного НСТ-теста, в зависимости от периода заболевания, приводим следующее наблюдение. Наблюдение 8. Больная Ф., 76 лет (история болезни №657-98) находилась в стационаре с 12 февраля по 1 марта с диагнозом: Рожа правой голени, эритематозно-буллезная форма, среднетяжелое течение. Заболела 10 февраля, температура повысилась до 38С. В прошлом рожей не болела. Объективно: на коже голени эритема с четкими краями, выраженной отечностью, местами выступают пузыри. Анализ крови (12/П):л. 12000, э 1%, п-10%, с-62%, лимф.-18%, мон-4%.СОЭ-19мм/ч. Больная получала антибактериальную, дезинтоксикационную, десенсибилизирующую терапию. Динамика показателей НСТ-теста нейтрофилов соответствовала в периоде разгара 44 ед., при угасании клинических симптомов-23 ед., в периоде ранней реконвалесценции 18 ед. Это наблюдение отражает закономерное изменение показателей НСТ-теста у больных рожей. Сравнение динамики активности нейтрофильных лейкоцитов к восстановлению НСТ-теста, в зависимости от кратности рецидива рожи выявило достоверное различие НСТ-теста в периодах разгара заболевания и угасания клинических симптомов у больных с первичной и рецидивирующей рожей. В периоде ранней реконвалесценции у больных с рецидивирующей рожей отмечено достоверно более высокие значения активности НСТ-теста по сравнению с соответсвующим периодом при первичной роже (табл.11, рис.17), которые в норму не возвращались. Наблюдение 9. Больная В.,57 лет (история болезни №345-876) поступила в стационар с диагнозом: Первичная рожа правой голени, эритематозный вариант течения, средней степени тяжести. Дата поступлении 23 марта, дата выписки 12 апреля 2006 года. Из анамнеза: заболела остро 20 марта с высокой температуры, озноба, общего недомогания. В области правой голени появилось чувство жжения, дискомфорта. Заболела рожей впервые. В области правой голени отек, гиперемия, эритема с четкими «фестончатыми» краями. В общем анализе крови от 23/III: л-12.000; э-2%, п-23%, с-54%, лимф-20%,м-5%. СОЭ-мм/ч. Уровень показателей НСТ-теста нейтрофилов соответствовал в периоде разгара 43 усл.ед., в период угасания клинических симптомов 32 усл. ед., в период ранней реконвалесценции 15 усл. ед. Из данного наблюдения видно, что при первичной роже показатели НСТ-теста нейтрофилов достоверно не отличаются от показателей нормы. Наблюдение 10. Больной Щ., 73 лет поступил в стационар 12 января и выписался 19 февраля с диагнозом: Рецидивирующая рожа левой голени, эритематозный вариант течения, средней степени тяжести. Из анамнеза заболевания: Болеет в течение 7 лет, когда после оперативного вмешательства на голени по поводу варикозно-расишренных вен ниэ/сних конечностей, впервые заболел рожей. В стационаре получал неоднократное лечение. В течение года дважды беспокоят рецидивы рожи. Заболел 8 января, когда почувствовал боль, жжение в области левой голени, повысилась температура. Объективно: область левой голени отечная, гипнремированная.
По передней поверхности голени послеоперационный шов. В общем анализе крови от 13 января выраженный лейкоцитоз, палочкоядерный сдвиг, увеличенное СОЭ. Динамика изменения НСТ-теста нейтрофилов соответствовала в периоде разгара 48 усл.ед., в периоде угасания клинических симптомов 38 усл.ед., в периоде ранней реконвалесценции 26 усл.ед. Показатель НСТ-теста был достоверно выше, чем у здоровых людей, что может свидетельствовать о недостаточной неспецифической резистентности организма. Изучались изменения НСТ-теста при различной степени тяжести рожистого воспаления. При сохранении выше описанных изменений активности НСТ-теста, в зависимости от периода заболевания, при легкой степени тяжести во всех периодах активность НСТ-теста оказывалась достоверно ниоюе по сравнению с соответствующими периодами при среднетяжелом и тяжелом течении рожи. А при тяжелом течении рожи НСТ-тест во всех периодах был достоверно выше по сравнению с соответствующими периодами при среднетяжелом течении рожи (таб. 10., рис 17). Наблюдение 11. Больной Ц.,77 лет, (история болезни №345-98), поступил в стационар 30 июня и выписан 4 июля с диагнозом: Первичная рожа лица, эритематозныи вариант течения, легкой степени тяжести. Из анамнеза: заболел накануне до поступления, когда поднялась температура тела и появилась отечность и краснота в области левой половины лица. Свое заболевание связывает с переохлаждением. При осмотре лица в области преддверия носа имеется ранка, покрытая корочкой. Объективно: температура тела 37С, область лица гиперемированная, отечная. Со стороны органов и систем без особенностей. В общем анализе крови: л-8.500, п-10%, с-45%, лимф-33%, м-1%.СОЭ-12мм/ч. В отделении проводилась комплексная терапия: антибактериальная, дезинтоксикационная, десенсибилизирующая. На фоне проведенного лечения на 3-й сутки состояние больного нормализовалось. На 5-ые сутки больной с нормализацией клинико-лабораторных данных выписан домой. При изучении изменения в динамики НСТ-теста нейтрофилов кровь была взята в период разгара заболевания 37усл.ед., угасании клинических симптомов 28 усл. ед. и в периоде ранней реконвалесценции 13 усл. ед. Из выше изложенных данных видно, что данный показатель к периоду выписки из стационара достоверно не отличается от нормы.
