Содержание к диссертации
ВВЕДЕНИЕ 3
ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
Глава I. ОСОБЕННОСТИ СТРУКТУРЫ И НЕКОТОРЫЕ ФУНКЦИИ
ИММУНОГЛОБУЛИНОВ 7
Глава 2. РЕЦЕПТОРЫ Т ЛИМФОЦИТОВ 24
Собственные экспериментальные исследования .... 35
Глава 3. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ 37
Глава 4. ВЛИдНИЕ ФОТООКИСЛЕНИЯ НА ИММУНОЛОГИЧЕСКИЕ
СВОЙСТВА ИММУНОГЛОБУЛИНОВ 46
4.1. Влияние фотоокисления на антигенсвязывающие
свойства антител 46
4.2... Вли.яеиє фотоокисления на антигенные свой
ства иммуноглобулинов 51
4.3.-Влияние фотоокисления на комплементсвязы-
вающие свойства иммуноглобулинов 53
4.4. Спектрофотометрическое изучение фотоокис-
ленных иммуноглобулинов ... 55
Глава 5. ВЗАИМОДЕЙСТВИЕ ИММУНОГЛОБУЛИНОВ G- с ФРАГМЕН
ТАМИ ПЛАЗМАТИЧЕСКИХ МЕМБРАН Т ЛИМФОЦИТОВ 59
ЗАКЛЮЧЕНИЕ 104
ВЫВОДЫ 114
УКАЗАТЕЛЬ ЛИТЕРАТУРЫ 115
Введение к работе
Актуальность проблемы. Иммуноглобулины играют многогранную роль в иммунном ответе. Помимо антигенсвязывающих свойств они обладают также эффекторными и регуляторними свойствами.
Установлено, что специфическое связывание антигенов осуществляется активными центрами антител, сформированными JV-концевыми участками полипептидных цепей /тяжелой и легкой/, относящимися к JQ& фрагментам молекулы иммуноглобулина.
Активация системы комплемента, фиксация на плазматических мембранах клеток, пронршновение через различные физиологические барьеры осуществляется определенными участками Фс фрагмента иммуноглобулинов, сформированными только тяжелыми полипептидными цепями.
Считают, что связывание иммуноглобулинов с В и некоторыми Т лимфоцитами, макрофагами и моноцитами мелет играть существенную роль в регуляции иммунитета.
Иммуноглобулины могут присоединяться к лимфоцитам, несущим на своей поверхности специальный рецептор /9сК/ и активировать их. В частности, агрегированные нагреванием Эч» определенных субклассов способны стимулировать пролиферацию лимфоцитов селезенки А9/.
Отделимые рецепторные факторы лимфоцитов, например иммуногло-булинсвязывающий фактор и некоторые супрессорные факторы, отделяемые активированными лимфоцитами, способны связываться с JqG- , и по мнению некоторых авторов, представляют собой растворимую форму рецептора к J с фрагменту иммуноглобулинов /57, 68, 69/.
Рецепторы к 7с фрагменту иммуноглобулинов обнаружены на поверхности как В, так и Т лимфоцитов /25/. Наряду с рецепторами к Jc фрагменту, на поверхности Т лимфоцитов обнаружены рецепторы
фрагментам иммуноглобулинов /8і/. Таким образом, способность иммуноглобулинов присоединяться к Т лимфоцитам может быть обусловлена особенностями строения как fai » так и Ус фрагментами JQ . Остается, однако, неясным: связана ли она со специфическими функциями этих фрагментов иммуноглобулинов, имеет ли значение антительная или комплементсвязывающая активность JQ для присоединения их к Т лимфоцитам.
Цель работы заключалась в том, чтобы выяснить, имеет ли значение антительная и комплементсвязывающая активность JQlr для взаимодействия их с плазматической мембраной тимоцитов.
Для изучения этого вопроса необходимо модифицировать молекулу «7Qw таким образом, чтобы при устранении антительной активности и способности связывать комплемент все пептидные связи сохранились.
В качестве способа модификации JQvr может быть использован метод фотоокисления. Этот метод имеет то преимущество, что под влиянием фотоокисления в присутствии фотосенсибилизатора разрушаются боковые радикалы определенных ароматических аминокислот /тирозина, триптофана, фенилаланина/, в то время как пепетидные связи остаются неповрежденными. В зависимости от продолжительности фотоокисления может быть разрушено лишь ограниченное количество упомянутых боковых радикалов. Поскольку пространственная конфигурация белков в водных растворах поддерживается нековалентными взаимодействиями боковых радикалов аминокислот, в том числе гидрофобными, и это в равной мере относится к иммуноглобулинам, фотоокисление может быть использовано для лишения иммуноглобулинов их ан-тигенсвязывающих свойств в мягких условиях, исключающих повреждение пептидных связей, если гидрофобные взаимодействия действительно играют существенную роль в формировании активного центра антител.
Представляет также существенный интерес значение боковых ради-
_ 5 -калов аминокислот для антигенных свойств JQlr , а также для изучения их роли в связывании комплемента.
В настоящей работе изучено взаимодействие модифицированного фотоокислением в присутствии фотосенсибилизатора ^Q \г кролика с компонентами плазматических мембран тимоцитов крысы, обладающих сродством к JqIt' кролика, а также к аутологичньш эритроцитам и эритроцитам барана.
Научная новизна и практическая ценность работы. В работе по-\ казано, что адсорбцией на иммобилизированном J flu0 могут быть отделены фрагменты плазматической мембраны тимоцитов, обладающие сродством как к эритроцитам, так и к 9с и jq фрагментам Jglr . В состав этих фрагментов входит гликопротеин с молекулярным весом 12 тысяч, обладающий свойствами J~c рецептора. Этот гликопротеин характеризуется тем, что обнаруживает сродство к аутологичным и гетерологичным эритроцитам.
Показано, что способность связывать антиген и комплемент не существенная для взаимодействия J $ (г с плазматической мембраной тимоцитов, так как иммуноглобулины, лишенные обеих этих функций путем фотоокисления, связываются с фрагментами мембран тимоцитов, обладающими свойствами 7с рецептора.
Выяснено, что с помощью весьма несложной обработки фотосенсибилизатором, JQ & может быть модифицирован таким образом, что его антигенсвязывающие свойства сохранятся при значительном снижении комплементсвязывающей способности и частичной потере антигенных свойств. Это обстоятельство может существенно расширить сферу применения антител в медицинской практике, так как позволяет применять более высокие концентрации иммуноглобулинов, чем это было допустимо ранее.
- о -
Принятые сокращения:
За - иммуноглобулины УФ - ультрафиолетовые КМ - карбоксиметил ЭБ - эритроциты барана
7с К- рецептор к 7с фрагменту иммуноглобулинов АОК - антителообразующие клетки
