Введение к работе
Актуальность проблемы. Высокая контагиозность чумы, опасность заноса и быстрого распространения при наличии природных очагов этой инфекции в нашей стране и за рубежом обусловливают .необходимость разработки эффективных профилактических мер, отвечающих современным требованиям (Козлов М. П. с соавт., 1979; Васенин А. С. с соавт., 1989; Кологоров А. И. с соавт., 1989; Топорков В. П. с соавт., 1989). В комплексе противоэпидемических мероприятий, предусмотренных при профилактике чумы в природных очагах, важное место отводится противочумной вакцинации. Поэтому внимание многих исследователей, разрабатывающих проблему чумы, сосредоточено на изучении механизмов иммунитета к ней.
В экспериментах на животных и в наблюдениях на людях, вакцинированных против чумы, показано, что в основз формирования противочумного иммунитета лежат клеточные процессы (Коробкова Е. И., 1956; Бунин К. В. с соавт., 1970; Анисимова Т. И. с соавт., 1980, '1982, 1984; Самойлова Л. В. с соавт., 1980, 1987; Горькова А. В. с соавт., 1981, 1987, 1990; Шанина Л. Н. с соавт., 1985, 1989; Мохин К. М. с соавт., 1987; Исупов И. В. с соавт., 1990; Ледванов М. Ю. с соавт., 1991).
Однако специфические клеточные процессы, определяющие иммунологическую эффективность противочумной вакцинации, и их соотношение с 'неспецифическими реакциями остаются практически неисследованными. Не разработана применительно к противочумному иммунитету реакция бласт-трансформации лимфоцитов (РБТЛ), широко используемая в современных иммунологических исследованиях в качестве критерия оценки опецифических и неспецифических клеточных процессов. Неизвестна способность отдельных антигенов и штаммов (с экспрессией различных детерминант иммуногенности и вирулентности) чумного микроба инициировать Р'БТЛ. Не показано также влияние иммунизации чумной вакциной на выраженность РБТЛ в ответ на антигены возбудителя чумы.
Существенной особенностью современного этапа развития иммунологии является анализ иммунологических и иммунопатологических процессов в аспекте закономерностей функционирования медиаторов иммунной системы (Чередеев А.Н., Ковальчук Л. В., 1990; Медуницин Н. В., 1990).
Ключевыми иммуномедиаторами, обеспечивающими инициацию иммунного ответа по клеточному типу, в том числе РБТЛ, являются интерлейкин-1 (ИЛ-1) и интерлейкин-2 (ИЛ-2).
Несмотря іна исключительное значение йнтерлейкинов в регуляции иммунного ответа, их роль в формировании иммунитета к чуме, влияние конкретных детерминант вирулентности и иммуногенности чуміного микроба на продукцию данных иммуномедиаторов не изучались.
Цель работы: Изучить влияние вакцинного штамма чумного микроба, его изогенных .производных с различной экспрессией факторов иммуногенности и вирулентности, а также антигенов возбудителя чумы на продукцию ИЛ-1 и ИЛ-2 и установить взаимосвязь между изменениями в системе ин-терлейкинов, РБТЛ н протективной активностью противочумного иммунитета.
Задачи исследования.
-
Изучить РБТЛ у экспериментальных животных в процессе формирования противочумного иммунитета и при воздействии изогенными штаммами с различной экспрессией факторов иммуногенности и вирулентности.
-
Изучить активность ИЛ-1 и ИЛ-2 у экспериментальных животных в процессе формирования противочумного
иммунитета и при воздействии изогенными штаммами с различной экспрессией факторов иммуногенности и вирулентности.
-
Определить значение антигенов чумного микроба (капсульного белка, мышиного токсина, основного соматического антигена, липополпсахарнда и :пестина) в инициация РБТЛ у иптакиных и иммунных животных, а также в модуляции активности ИЛ-1 и ИЛ-2 и in vitro.
-
Установить взаимосвязь между характером изменений в системе ИЛ-1 — ИЛ-2, РБТЛ и протективной активностью противочумного иммунитета в тесте защиты мышей при заражении их вирулентным штаммом чумного микроба.
-
Определить возможность практического использования изученных показателей для оценки специфической иммунологической 'реактивности вакцинированного организма, а также в плане характеристики биологических свойств возбудителя чумы.
Научная новизна. Впервые изучена и охарактеризована способность штаммов чумного микроба, различных по плаз-мидному составу, а также отдельных антигенов инициировать реакцию бласттрансформации лимфоцитов. Показано, что степень развития РБТЛ зависит от генетически детерминированной экспрессии чумным микробом факторов иммуногенности и вирулентности, характера используемых антигенов и, как правило, более выражена у вакцинированных против чумы животных, чем у неиммунных. Новыми являются данные об обратной корреляционной зависимости между количественными показателями специфической и неспецифической РБТЛ, развивающимися при воздействии ультразвуковых дезинтегратов (УЗД) штаммов чумного микроба с различным плазмидным профилем.
Установлены новые закономерности изменения активности ИЛ-1 и ИЛ-2 у тгеиммутных и вакцинированных против чумы мышей под влиянием антигенов и УЗД штаммов с различным набором факторов иммуногенности и вирулентности. Наиболее выраженной шшципрующей пнтерлейкины активностью обладают капсульный антиген и пестнн, а также штаммы, имеющие в своем составе продукты экспрессии плазмиды pPst и pFra. В отличие от большинства штаммов и антигенов возбудителя чумы, УЗД штамма, содержащего плазмиду pCad, вызывает более выраженную РБТЛ и большее повышение активности ИЛ-2 у невакцилированных животных, по сравнению с иммунными. Впервые обнаружена
2 Заказ 1304 3
прямая корреляционная зависимость между активностьіо лЛ-2 и уровнем РБТЛ ікак в опытах со штаммами, различающимися по плазмидному составу, так и с аінтигенами чумного микроба. Уровень специфической РБТЛ коррелирует со степенью резистентности к чуме в тесте защиты мышей при заражении их вирулентным штаммом возбудителя чумы. Практическая значимость работы. Определены количественные критерии РБТЛ и активности интерлейкинов 1 и 2 при воздействии основными антигенами и штаммами чумного микроба, имеющими различный набор факторов иммуно-генности и вирулентности. Показана эффективность использования данных тестов для характеристики биологических свойств возбудителя чумы и его антигенов. Установлена возможность практического 'применения РіБТЛ в качестве критерия оценки специфической иммунологической перестройки вакцинированного против чумы организма. РБТЛ рекомендована для использования :на этапе доклинических испытаний новых или усовершенствованных противочумных вакцинных препаратов, при составлении рациональных схем иммунизации, а также при экспериментальной разработке патогенетически обоснованных схем совместного применения вакцин и иммуномодуляторов.
Внедрение. По материалам экспериментальных исследований составлены методические рекомендации: «Использование реакции бласттрансформации лимфоцитов экспериментальных животных и людей для изучения клеточного звена противочумного иммунитета», которые были обсуждены и одобрены Ученым Советом РНИПЧИ «Микроб» (протокол № 15 от 16 февраля 1992 г.), утверждены директором института 16 февраля 1992 іг. Метод применяется в лабораторной работе медицинских и противочумных учреждений, о чем свидетельствуют соответствующие акты о внедрении.
Материалы диссертационного исследования используются при чтении лекций ,на курсах первичной специализации врачей по особо опасным инфекциям и курсах усовершенствования врачей-бактериологов противочумных учреждений России и-СНГ (при институте «Микроб»).
Апробация работы. Материалы диссертации доложены и обсуждены:
'на итоговых научных конференциях в РНИПЧИ «Микроб», Саратов, 1990; 1991;
на X научной .конференции «Факторы клеточного и 4
гуморалыного иммунитета при различных физиологических и патологических состояниях», Челябинск, 1990;
на Всесоюзной конференции «Молекулярные механизмы развития инфекционных заболеваний», Звенигород, 1990;
.на Всесоюзной .научной конференции «Лабораторные животные для медико-биологических и биотехнологических исследовании», Москва, 1990;
>на 11 .Международном симпозиуме «Реабилитация иммунной системы», Цхалтубо, 1990;
«а Всесоюзной научно-практической конференции «Поствакцннальные осложнения: патогенез, профилактика, лечение, «Ленинград, 19—21 ноября '1991;
іна VI Всероссийском съезде микробиологов, эпидемио-логоз к паразитологов, Новгород, 1991;
на I съезде иммунологов России, Новосибирск, 1992.
Диссертация обсуждена и одобрена на расширенной научной конференции лаборатории клеточной иммунологии Р.НИПЧИ «Микроб».
Публикации. По материалам диссертации опубликовано
10 работ. \
Объем и структура работы. Диссертация изложена на 136 страницах машинописного текста к содержит: введение, пять глав, заключение, выводы и библиографический, указатель, который включает 139 отечественных и 70 иностранных источников. Работа иллюстрирована 23 рисунками и 6 таблицами.
![Изучение влияния [Г]-D-глутаминил-L-триптофана (Бестима) на дифференцировку и функциональную активность лимфоцитов](/i/i/4503/301534.png "Изучение влияния [Г]-D-глутаминил-L-триптофана (Бестима) на дифференцировку и функциональную активность лимфоцитов Петров Александр Владимирович")
