Содержание к диссертации
Список сокращений 3
ВВЕДЕНИЕ , 4
Глава I. Обзор литературы 9
Глава 2. Объект и методы 32
Характеристика исследуемого материала 32
Методы исследования 32
Глава 3. Прижизненная компьютерная фазово-интерференционная микроскопия
лимфоцитов периферической крови , 40
3.1. Оптимизация метода прижизненной компьютерной лазерной фазовой
морфометрии Т.. 41
3.2.Характеристика прижизненных фазово-интерференционных портретов
лимфоцитов периферической крови практически здоровых людей 47
Глава 4. Анализ морфофункционального статуса лимфоцитов периферической
крови при некоторых иммунодефицитных состояниях 54
4.1 Характеристика прижизненного морфофункционального состояния
лимфоцитов у больных красным плоским лишаем 55
4.2. Характеристика прижизненного морфофункционального состояния
лимфоцитов у женщин при физиологической беременности и при угрозе
самопроизвольного выкидыша в I триместре 64
Глава 5. Прижизненная компьютерная фазометрия лимфоцитов
периферической крови больных ХПН в терминальной стадии после
аллотрансплантации трупной почки 73
Морфофункциональное состояние лимфоцитов периферической крови больных ХПН в терминальной стадии 74
Мониторинг морфофункционального состояния лимфоцитов периферической крови больных ХПН после аллотрансплантации трупной почки 79
Заключение 87
ВЫВОДЫ 99
Список литературы 101
з Список условных обозначений
CD - кластер определения лимфоцитов
Сг - креатинин
D - диаметр
Р - периметр
IILA - антиген лимфоцитов человека
NK - натуральные киллеры
Н - высота
S - площадь
V - объем
АПК - антигенпрезентирующие клетки
БГЛ - большие гранулярные лимфоциты
ГД - гемодиализ
ГЗТ - гиперчувствительность замедленного типа
ГЭР - гладкая эндоплазматическая сеть
ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота
ЕМ-РОК - розеткообразующие клетки (с эритроцитами мыши)
Е-РОК - розеткообразующие клетки (с эритроцитами барана)
ИЛ - интерлейкин
KB А - клетки с высокой адгезивностью к пластику
КНА - клетки с низкой адгезивностью к пластику
КПЛ - красный плоский лишай слизистой оболочки полости рта
КФМ - компьютерный фазовый микроскоп
МАТ - моноклональные антитела
МФС - морфофункциональное состояние
СуА - циклоспорина А
ХПН - хроническая почечная недостаточность
ЦИК - циркулирующие иммунных комплексов
ШЭР - шероховатая эндоплазматическая сеть
Введение к работе
Актуальность проблемы.
Высококвалифицированная медицинская помощь имеет важнейшее государственное значение, поскольку оказывает непосредственное влияние на качество жизни граждан. Это заставляет постоянно повышать требования к диагностике и лечению, искать возможности разработки и внедрения современных методов в лечебный процесс. Опыт развития медицины убедительно свидетельствует, что ее эффективность может быть поднята на качественно новый уровень только при условии интеграции в практику здравоохранения научных достижений, внедрения новых способов диагностики и терапии [Хаитов P.M., 2002; Lawlor GJ. et aL, 2000].
Успехи, достигнутые за последние годы в решении многих научных и практических проблем иммунологии, позволили выявить и охарактеризовать определенные нарушения функционирования иммунной системы при различных патологических состояниях. Показано, что проявления иммунологической недостаточности имеют важное значение при анализе течения и исхода многих заболеваний [Ковальчук Л.В, с соавт,, 2003; Хаитов P.M. с соавт., 2002; ШабалинВ.Н., 2000]. В клиническую практику прочно вошло понятие иммунодефицитов, что связывают со снижением функциональной активности основных компонентов иммунитета [Латышева Т.В., Сетдикова Н.Х., 2002].
Известно, что иммунная система, как одна из гомеостатических структур, участвует во всех адаптационных реакциях организма [Альбрант А.И. с соавт., 2000; Новиков B.C., 1996]. При этом лимфоциты, являясь центральной клеткой иммунной системы, не только осуществляют иммунологическую реактивность, но и выделяют биологически активные вещества, влияющие как на эффекторы иммунитета, так и на другие органы и системы. Принимая сигналы о дестабилизации внутренней среды организма, они модулируют свои функции, направленные на восстановление общего гомеостаза. Данный универсальный
5 принцип лежит в основе всех реакций имму но компетентных клеток, делая их универсальными индикаторами нормы и патологии. В связи с этим остаются актуальными вопросы создания новых и совершенствования существующих способов разносторонней оценки морфофункционального состояния клеточного звена иммунной системы организма.
Анализ современных тенденций показывает, что в подавляющем большинстве случаев на первое место сегодня выходят методы, минимизирующие инвазивность, обеспечивающие оперативность, информативность и объективность исследований. Этим требованиям в полной мере отвечают новейшие оптические компьютерные лазерные системы [Автандилов Г.Г., 1998; Александров М.Т. с соавт., 1996; Chemy V.V. et al., 1995]. В последние годы были разработаны оригинальные подходы к изучению структуры и функции клеток, основанные на использовании достижений когерентной оптики, спектроскопии и компьютерной техники [Тычинский В.П., 2001; Farkas D.L. et al., 1998; Schrader M., Hell S.W., 1998].
Одним из них является компьютерная фазовая микроскопия (КФМ). Используемый в КФМ способ наблюдения и регистрации изображений дает возможность прижизненного измерения традиционного комплекса морфометрических параметров анализируемых клеточных объектов а, а также высокоточного определения локальных значений таких характеристик биологических структур как плотность, количество белка, пространственное распределение концентрации ферментов, лекарственных препаратов и т.п. Все это позволяет считать КФМ эффективным диагностическим инструментом и рассматривать вопросы его практического использования.
Цель настоящего исследования - выявить и охарактеризовать особенности прижизненного морфофункционального статуса лимфоцитов с помощью оптико-геометрических показателей, установить их диагностическую информативность в оценке степени тяжести различных имму ноле фицитных состояний и эффективности проводимой иммунотерапии.
Задачи исследования:
адаптировать и оптимизировать программное обеспечение отечественного компьютерного фазово-интерференционного комплекса Цитоскан для автоматизированной количественной оценки морфофункционального состояния лимфоцитов периферической крови человека;
изучить особенности морфофункционального статуса Т- и В-лимфоцитов периферической крови методом прижизненной компьютерной лазерной фазометри и у больных с различными иммунодефицитными состояниями (красный плоский лишай слизистой оболочки рта; угроза выкидыша при привычном невынашивании беременности; хроническая почечная недостаточность);
провести мониторинг в режиме реального времени изменений структурно-объемных характеристик лимфоцитов периферической крови больных хронической почечной недостаточностью после аллотрансплантации трупной почки;
определить диагностическую и прогностическую значимость данных прижизненной лазерной фазометрии лимфоцитов в сопоставлении с результатами общепринятых клинико-лабораторных иммунологических методов исследования;
предложить комплекс критериев оценки тяжести им му но дефицитных состояний и эффективности проводимой иммунотерапии на основе прижизненного анализа оптико-геометрических параметров фазово-интерференционных портретов лимфоцитов периферической крови.
Научная новизна
Разработан новый подход к изучению клеток иммунной системы человека, позволяющий одновременно давать количественную оценку
7 прижизненных структурных и функциональных параметров, отражающих различную степень активности Т- и В-лимфоцитов.
Проведена оптимизация программного обеспечения отечественного
фазо во-интерференцион ного комплекса Цитоскан, повышающая
эффективность автоматизированной количественной оценки
морфофункционального состояния иммунокомпетентных клеток.
Установлены и охарактеризованы значительные витальные изменения структурно-объемных параметров иммунокомпетентных клеток в процессе реализации иммунных реакций организма.
Предложен комплекс критериев количественной оценки
морфофункционального состояния лимфоцитов для диагностики, определения особенностей течения и эффективности терапии при различных иммунодефицитных состояниях.
Практическая значимость
Полученные сведения о витальных морфофункциональных особенностях иммунокомпетентных клеток представляются важными для теоретической и практической медицины, поскольку дают дополнительную ценную информацию о механизмах перестройки иммунной системы при различных иммунодефицитных состояниях.
Высокая информативность КФМ дает возможность в рамках одного метода оперативно и объективно оценивать особенности популяционного состава клеток, определять уровень их функциональной активности без использования дорогостоящего оборудования и реактивов. С помощью предложенного метода изучают живые клетки крови, не подвергающиеся фиксированию и окрашиванию, что позволяет избежать их возможной экзогенной деформации. Данный метод экономичен, проводится с использованием отечественного компьютерного фазового микроскопа Цитоскан.
Компьютерная фазометрия клеток крови может быть успешно применена в акушерской практике при обследовании женщин для уточняющей диагностики невынашивания беременности.
Посуточное мониторирование витального морфофункционального статуса и мму некомпетентных клеток у больных хронической почечной недостаточностью после АТТП в раннем послетрансплантационном периоде позволяет определить относительную значимость различных клеточных показателей в оценке жизнеспособности аллогенного трансплантата.
Предложены рекомендации по тактике постоперационного ведения больных ХПН в терминальной стадии после аллотрансплантации трупной почки.
![Состояние общей и местной иммунной защиты и оценка эффективности иммунокоррекции при пневмонии и хронической обструктивной болезни легких у мужчин [Электронный ресурс]](/i/i/4264/199737.png "Состояние общей и местной иммунной защиты и оценка эффективности иммунокоррекции при пневмонии и хронической обструктивной болезни легких у мужчин [Электронный ресурс] Дубинина Виктория Васильевна")
