Содержание к диссертации
Список сокращений 1
Оглавление 2
Глава 1. Введение 4
Глава 2. Обзор литературы 10
2.1 Молекулярные основы этиологии и патогенеза атопии и бронхиальной астмы 11
2.2 SNP и известные методы их детекции 15
2.3 Гены при астме и атопии 16
2.3.1 Генетический контроль базального уровня общего IgE 19
2.3.2 Интерлейкин-13 24
2.3.3 Интерлейкин-5 26
2.3.4. Рецептор ИЛ-4 28
2.4 Интерлейкин 4 30
2.4.1. Синтез 31
2.4.2 Функции 32
2.4.3. Роль в развитии астмы 33
2.4.4. Полиморфизм ИЛ-4 33
Глава 3. Материалы и методы 36
3.1 Материалы и оборудование 36
3.1.1. Исследуемый материал 36
3.1.2. Реагенты 37
3.1.3. Оборудование 38
3.2. Методы исследования 39
3.2.1. Выделение ДНК 39
3.2.2. Полимеразная цепная реакция (ПЦР) 39
3.2.3. Электрофорез фрагментов ДНК 40
3.2.4. Гидролиз ДНК рестриктазами 41
3.2.5. Твердофазный иммуноферментный анализ (ELISA) 42
3.2.6. Методы статистической обработки результатов 43
Глава 4. Собственные исследования 44
4.1. Характеристика групп больных бронхиальной астмой на основании клинико-иммунологического исследования 44
4.2. Исследование полиморфизма С-ЗЗТ у больных бронхиальной астмой 47
4.2.1. Частота выявления мутантного аллеля 47
4.2.2. Определение IgE и ИЛ-4 49
4.2.2.1. Влияние полиморфизма С-ЗЗТ на уровень общего IgE 50
4.2.2.2. Влияние полиморфизма С-ЗЗТ на уровень сывороточного ИЛ-4 51
4.2.2.3. Влияние полиморфизма С-ЗЗТ на тяжесть течения заболевания 54
4.3. Исследование полиморфизма С-590Т у больных бронхиальной астмой 55
4.3.1. Частота выявления мутантного аллеля 55
4.3.2. Определение IgE и ИЛ-4 56
4.3.2.1. Влияние полиморфизма С-590Т на уровень общего IgE 57
4.3.2.2. Влияние полиморфизма С-590Т на уровень сывороточного ИЛ-4 59
4.3.2.3. Полиморфизм С-590Т и тяжесть течения заболевания 61
4.4. Исследование полиморфизма G-1098T у больных бронхиальной астмой .62
4.4.1.Частота выявления мутантного аллеля з
4.4.2.0пределение IgE и ИЛ-4 64
Глава 5. Обсуждение результатов 67
Выводы 79
Литература
Введение к работе
ИЛ-4 является важнейшим цитокином воспаления, в том числе обусловленного развитием аллергического IgE ответа. Прежде всего, ИЛ-4 регулирует пролиферативный ответ В-лимфоцитов и переключение изотипов иммуноглобулинов в них, индуцируя экспрессию IgG4 и IgE [139]. Наряду с ИЛ-2 он выступает, так же как фактор роста Т-лимфоцитов и тучных клеток и является ключевым сигналом дифференцировки CD4+ Т-клеток в хелперы 2 типа.
Вследствие центральной роли ИЛ-4 в развитии воспаления, анализ генетической регуляции активности этого цитокина, имеет очень большое значение для понимания механизмов развития атопии и астмы. На сегодняшний день известно множество работ, посвященных регуляции синтеза этого цитокина [124, 125, 148]. Довольно хорошо изучен промотор гена этого цитокина, выявлены сайты узнавания большого количества ядерных факторов, регулирующих его транскрипцию[137, 158]. Также выявлены и описаны несколько ключевых мутаций в промоторе гена ИЛ-4, играющих важнейшую роль в развитии атопии и БА.
Впервые в 1995 году была обнаружена замена С-590Т в гене ИЛ-4 в популяции американцев [127]. Были проведены исследования на культурах клеток in vitro, в которых [137, 33] выявлена связь этой замены с увеличением продукции ИЛ-4, однако работ, подтвердивших влияние этого полиморфизма на продукцию ИЛ-4 в сыворотках больных БА, не проводилось.
В 1999 году в ходе скрининга гена ИЛ-4 были выявлены мутации, частота которых в популяции превышала 1%. Прежде всего это полиморфизм С-ЗЗТ, который был описан японскими учеными у больных БА. В ряде работ была подтверждена ассоциация полиморфизмов С-590Т и С-ЗЗТ [74, 107, 128] с БА, однако, есть и негативные результаты [105, 154]. Возможно, отсутствие однозначного ответа на вопрос о влиянии этих полиморфизмов на развитие БА обусловлено популяционными различиями.
Среди внешнесредовых факторов, влияющих на формирование БА, особое внимание уделяется вирусным инфекциям, среди которых представляет интерес РСВ, вызывающий у маленьких детей бронхиолиты. В этой связи исследование полиморфизма G-1098T, изначально идентифицированного у больных, перенесших РСВ заболевание, может прояснить роль вирусной компоненты в патогенезе заболевания БА.
Вместе с тем, в развитии такого сложного заболевания как БА большую роль играют не столько отдельные аллели генов, сколько их сочетания или «генетические ансамбли». Они могут быть неодинаковы в популяциях, обусловливая различия в подверженности к астме у разных народов. Поэтому, перспективным направлением исследований генетических основ БА является исследование вклада конкретных сочетаний аллелей в подверженность к болезни.
Молекулярно-генетические работы, посвященные БА, в России немногочисленны и затрагивают в основном спектр генов метаболизма ксенобиотиков [1, 6, 11]. Поскольку ИЛ-4 контролирует основные этапы развития БА, определенный интерес представляет изучение гена этого цитокина и механизмов регуляции его транскрипции в русской популяции.
![Клинико-иммунологическая характеристика больных ревматоидным артритом при различных аллельных вариантах генов ФНО-[А] (-308) и ИЛ-1[В] (+3953)](/i/i/4321/312305.png "Клинико-иммунологическая характеристика больных ревматоидным артритом при различных аллельных вариантах генов ФНО-[А] (-308) и ИЛ-1[В] (+3953) Герцог Оксана Александровна")
