Введение к работе
Актуальность проблемы. Белки занимают самое большое место среди всех составных частей сухого остатка плазмы : 60-80 г/л. Их физиологическая роль весьма разнообразна: поддержание вязкости крови и коллоидно-осмотического давления, уровней катионов и постоянного рН, осуществление транспорта ионов, жиров, гормонов, витаминов, лекарств и др., участие в свёртывании крови и, наконец, в защитных реакциях организма (Й.Тодоров.1968. Buffone, 1978, В.К. Кухта,1986). Центральные позиции среди этих реакций занимают иммунные, протекающие с участием Igg (Р.В.Петров, 1982, К.П.Каш-кин. 3.0. Караев, 1983, Р.М.Хаитов.Б.В.Пинегин, Х.И.Истамов. 1995, Л.В.Ковальчук. А.Н.Чередеев, 1995). Именно свойства их фрагментов -СЛЦ - легли в основу диагностики одного из вариантов опухолей Ж - болезни Бенс-Джонса, описанной 150 лет назад. Функциональные свойства Igg весьма разнообразны: по данным М. Kazatchkine (1996), препараты плазмы крови, приготовленные на основе Igg. обладая иммунокорригирующим действием, блокируют Fc рецепторы и ослабляют С-зависимое повреждение ткани, укрепляют структуру и растворимость ИК, индуцируют противовоспалительное действие цито-кинов. нейтрализуют микробные токсины и патологические аутоанти-тела путем антиидиотипического взаимодействия, контролируют спектр AT. модулируют продукцию цитокинов моноцитами и Т-лф, активируют или подавляют клоны В-лф. Это обуславливает важность адекватной клинической оценки иммуноглобулинсинтетической функции. Известно изменение этой функции в онтогенезе, между тем. в клинической практике почти не учитываются возрастные нормы Igg: используют либо усредненные их значения, либо нормы селективных возрастных категорий (Tletz.1990). Актуальность выбора препарата у-глобулина объясняется тем. что фирмы-производители, в первую очередь, обращают внимание на титры AT той или иной специфичности. Однако хорошо известно, что резистентность организма определяется и субклассовой принадлежностью присутствующих в циркуляции AT: принадлежащие IgG2, уровень которых свидетельствует о степени зрелости антителосинтетической функции организма, не могут быть заменены AT той же специфичности, но принадлежащие к другим c-IgG (Hamilton.1989).
Актуальна для клиницистов и оценка динамики отдельных фраг-
ментов Igg, появляющихся либо вследствие естественного катаболизма последних, либо формирующегося патологического процесса, прежде всего, онкологического. Природа МкАТ к настоящему времени хорошо изучена, существенный вклад в их типирование и диагностику опухолей ИС сделали Л.И.Яворковский. Е.В.Чернохвостова, Н.Е.Андреева и их сотрудники. Однако, с появлением автоматизированных и, прежде всего, нефелометрических методов исследования, вновь возникли проблемы с идентификацией некоторых миеломных белков. Установить природу естественных антиглобулиновых факторов - агглюти-наторов, Р-белков - на уровне c-IgG представляется актуальным, в связи с доказанностью их участия в ряде патологических процессов (А.Я.Кульберг, 1978,1996). Важным с практической точки зрения остаётся изучение циркуляции СЛЦ Igg: обнаружение их в моче в виде белков Бенс-Джонса давно используется для диагностики миеломы, но их поведение в крови плохо изучено из-за отсутствия достаточно чувствительных и простых методов их идентификации. Внедрение в практику РИА и альтернативных ему методов позволило наряду с детекцией многих клинически важных гормонов и белков разработать методы определения другого родственного Igg белка - Р2М, однако, создание подобной тест-системы для идентификации СЛЦ оставалось открытым из-за насыщенности сыворотки крови белками, дающими перекрёстные реакции с СЛЦ (Г. И. Абелев. Э.Р.Карамова, 1982).
Несмотря на то, что большинство белков сыворотки являются филогенетически более древними образованиями, чем Igg, их детальный клинический анализ развернулся лишь в последние годы, благодаря возможности иммунохимической идентификации этих белков в массе глобулиновых фракций (В. А.Алёшкин, А.Г. Лютов, 1986. Л.И.Новикова. 1990, Л.В.Козлов,1992). Установлено, что аіКГ принимает участие в процессах воспаления, ИП активно вмешиваются в функционирование ИС, способствуют развитию опухолевых и деструктивных процессов в организме. В результате активации С - главного эффекторного звена гуморального иммунитета - могут произойти события, схожие с IgE-опосредованными реакциями. Интерес к транспортным белкам обусловлен способностью их усиливать резистентность организма, в частности, к бактериальным агентам. Именно поэтому весьма перспективен комплексный клинический контроль за белками крови.
Широкий клинический анализ вышеперечисленных белков с учетом их нормального возрастного распределения в крови стал возможным
благодаря сужению спектра и унификации используемых в клинике иммунохимических методов. Более четкое выделение зон безусловно патологических значений актуально для принятия конкретных решений по лечению больного. Актуальность тщательного анализа белковых препаратов обусловлена потенциальной опасностью инфицирования реципиента трансмиссивными вирусными инфекциями.
Целесообразность выбора клинических моделей для оценки информативности ключевых белков крови основывалась на ожидаемых наиболее существенных сдвигах в белковом обмене: при нормальной и осложнённой беременности, иммунодефицитах гуморального звена иммунитета, патологии почек, иммунотропных вирусных инфекциях, некоторых видах опухолей, включая и опухоли иммунной системы.
Эти положения легли в основу разработки и внедрения в практику специальной программы "Иммунологический профиль", предназначенной для унификации сопоставления анализируемых белков с динамикой основных иммунологических показателей, и определения частоты встречаемости диспрогеинемий.
Целью настоящего исследования является разработка, апробация и внедрение в практику унифицированного комплекса иммунохимических тестов, незаменимых для достоверного определения возрастной динамики и оценки информационной значимости при патологии, ассоциированной с нарушением синтеза или обмена ключевых белков крови.
Задачи исследования:
-
Провести анализ информативности и выбор оптимального спектра иммунохимических методов тестирования белков сыворотки крови в норме и патологии.
-
Оценить возрастную динамику ключевых белков сыворотки крови и определить частоту регистрации безусловно пагологических концентраций среди контингента многопрофильного медицинского центра.
-
Изучить динамику сывороточных белков при диспротеинемиях и парапротеинемиях с целью выявления прогностически информативных значений.
-
Разработать иммунорадиометрический метод определения свободных легких цепей (СЛЦ) иммуноглобулинов (Igg) в сыворотке кро-
ви и моче.
-
Провести иммунохимический анализ (ИХА) и оценить качественный состав коммерческих белковых препаратов плазмы для обоснования дифференцированного выбора при заместительной и иммунокор-ригирующей терапии.
-
Разработать и внедрить в практику компьютерную программу "Иммунологический профиль" для диагностики и длительного монито-рирования пациентов с нарушением обмена белков крови.
-
Представить рекомендации для практического здравоохранения и медицинской промышленности по внедрению наиболее перспективных методов ИХА в клиническую практику.
Научная новизна. Впервые в России и СНГ разработана и внедрена комплексная программа ИХА для оценки белков крови с учетом возрастных изменений.
Разработаны возрастные нормограммы уровней 20 белков крови, включающих Igg. С. ИП, транспортные и другие.
Разработана и внедрена в практику компьютерная программа "Иммунологический профиль" для диагностики и мониторинга больных с патологией белкового обмена. С помощью программы установлена частота встречаемости гиперпродукции и дефицитов основных сывороточных белков среди контингента крупного многопрофильного медицинского объединения. Оценка корреляционных связей между динамикой сывороточных белков позволила идентифицировать конституционный тип белково-синтетической функции организма. Среди исследуемых белков выделены маркёры прогноза течения беременности. Т-лимфот-ропных вирусных инфекций, опухолей, в том числе и иммунной системы. Изучение соотношения онкомаркёров неиммуноглобулиновой природы позволило установить их степень информативности при поиске первичного очага опухоли.
Разработан оригинальный иммунорадиометрический метод определения СП11,-\. обладающий высокой специфичностью и чувствительностью, что позволило оценивать концентрацию этих фрагментов Igg в крови, начиная с физиологического уровня.
Показано, что при ряде патологических состояний (нефриты, аллергия и аллергозы. инфаркт миокарда) возможно повышение содержания низкомолекулярных продуктов активации системы комплемента (АФ), способных вызывать клиническую картину высвобождения внут-
риклеточных биологически активных веществ. Впервые предложен тест оценки спонтанного высвобождения С4а. СЗа, С5а в исследуемой плазме для оценки стабильности этих белков в организме. Показано, что ИХА сывороточных белковых компонентов требует особо тщательного подбора лабораторных тестов в связи с возможным проявлением хук-эффекта, невосприимчивости качественных изменений состава Igg, а также недостаточной чувствительности ряда методов для оценки физиологического распределения некоторых белков в крови.
Практическая ценность. Представленные материалы по изучению 20 основных сывороточных белков в возрастном аспекте, анализу главных методических приемов по их изучению, а также компьютерная программа "Иммунологический профиль" позволяют рекомендовать конкретную программу оценки сывороточных белков для любого медицинского учреждения, исходя из его профиля, количества обследуемых и материальных возможностей.
Расчет частоты встречаемости аллергенспецифичных IgE среди обследуемого контингента позволил смоделировать "Русскую аллерго-логическую панель" для in vitro диагностики атопии.
Качественная и количественная оценка состава белковых препаратов крови необходима для подбора наиболее ценных из них для коррекции имеющегося дефекта белкового синтеза.
Результаты ИХА коммерческих препаратов плазмы крови, приведенные в работе, могут быть использованы для научно-обоснованного выбора лечебных и коррегирующих мероприятий.
Внедрение в практику. Результаты исследования используются в работе лаборатории клинической иммунологии Центральной клинической больницы и клинических подразделений Медцентра Управления делами Президента Российской Федерации, лабораториях и клинических отделениях гематологии, иммунологии и онкологии НИИ детской гематологии на базе Республиканской детской больницы Минздрава Российской Федерации, в методике преподавания ординаторам и врачам последипломного обучения Учебно-научного Центра МЦ УД Президента РФ, студентам факультета фундаментальной медицины МГУ.
Результаты исследования доложены на: II Всесоюзном съезде врачей-лаборантов (Москва. 1979), Всесоюзной конференции "Актуальные вопросы иммунологии" (Алма-Ата. 1981), II Всесоюзном симпозиуме "Регуляция иммунного гомеостаза" (Ленинград, 1982). I Всесоюзной конференции "Теоретическая и прикладная инфекционная
иммунология" (Москва, 1982), IV Всесоюзном съезде геронтологов и гериатров (Кишинёв. Киев. 1982), VI Северо-Кавказской конференции по иммунологии, аллергологии и молекулярной биологии (Краснодар. 1983), III Всесоюзном съезде врачей-лаборантов (Москва, 1985), Международном симпозиуме "Микроаналитическая диагностика-86" (Тбилиси, 1986), Всесоюзной конференции "Методология, организация и итоги массовых иммунологических обследований" (Москва, Ангарск, 1987), Дальневосточной конференции "Актуальные проблемы иммунологии. Иммунодефицита и иммунокоррекция" (Владивосток, 1987). XIX Всесоюзном съезде терапевтов (Москва, 1987), VI Всесоюзном съезде дерматологов и венерологов (Челябинск. 1989), I Всесоюзном иммунологическом съезде (Сочи. 1989), Проблемной комиссии Минздрава "Стандартизация медицинских биологических препаратов для профилактики и диагностики инфекционных болезней человека" (Горький, 1990), Конгрессе Европейской Академии Аллергологов и Клинических иммунологов (Цюрих, 1991), I Республиканском съезде иммунологов и аллергологов (Душанбе, 1991), XXII съезде Международного общества по биологии опухолевого роста и медицине (Гронинген. 1995), V Российском съезде специалистов по лабораторной диагностике (Москва, 1995), Международном съезде по иммунореабилитации (Сочи. 1995), III съезде Белорусского научного общества иммунологов и аллергологов (Гродно, 1995), IX Европейской конференции "Прогрессивная технология и биотехнология для клинической лаборатории" (Милан, 1995), XVI Международном Конгрессе по Клинической Химии (Лондон, 1996), III Международном Конгрессе по иммунореабилитации в медицине (Эйлат, Израиль, 1997).
Апробация диссертации проведена 23 июня 1997 г. на совместном заседании НИИ детской гематологии МЗ Российской Федерации, кафедры нефрологии и иммунологии УНЦ и лабораторного центра ЦКБ Медицинского Центра Управления делами Президента Российской Федерации.
Публикации. По материалам диссертации опубликовано 58 работ, получено 1 авторское свидетельство.
Структура работы. Диссертация состоит из введения, 5 глав литературного обзора и собственных исследований, заключения, выводов, практических рекомендаций. Работа изложена на 345 страницах машинописи. Текст иллюстрирован 59 таблицами, 28 рисунками, 21 выпиской из историй болезни. Библиографический указатель включает 315 литературных источников.
