Содержание к диссертации
Введение
Глава I. Морские организмы и объекты морской флоры — источники биологически активных углеводсодержащих и пептидных соединений 17
Глава II. Влияние полисахаридов и пептидов природного происхождения на иммунную систему 33
Собственные исследования
Глава III. Материалы и методы 72
Глава IV. Действие биополимеров морских гидробионтов на гуморальный и клеточный иммунитет 104
4.1 Влияние биополимеров морских гидробионтов на гуморальный иммунный ответ 104
4.2. Действие биополимеров морских гидробионтов на клеточный иммунный ответ 110
4.2.1. Влияние биополимеров морских гидробионтов на спонтанную и индуцированную митогеном пролиферацию лимфоцитов 111
4.2.2. Влияние биополимеров морских гидробионтов на интенсивность реакции гиперчувствительности замедленного типа... 116
Глава V. Влияние биополимеров морских гидробионтов на функциональную активность нейтрофилов, макрофагов и нормальных киллеров ... 119
5.1. Влияние биополимеров морских гидробионтов на функциональную активность нейтрофилов 119
5.2. Влияние биополимеров морских гидробионтов на функциональную активность макрофагов 151
5.3. Влияние биополимеров морских гидробионтов на функциональную активность нормальных киллеров 164
Глава VI. Молекулярные механизмы активации лимфоцитов био полимерами морских гидробионтов 170
6.1. Влияние биополимеров морских гидробионтов на внутрикле- з точную концентрацию ионов кальция в цитоплазме лимфоцитов крови
человека и уровень цАМФ и цГМФ в спленоцитах мышей 171
6.2. Модуляция экспрессии мембраноассоциированных структур лимфоцитов периферической крови биополимерами морских гидро-бионтов ... 180
Глава VII. Действие биополимеров морских гидробионтов на про дукцию цитокинов .. 188
7.1. Влияние биополимеров морских гидробионтов на спонтанную и стимулированную митогеном продукцию цитокинов, выраба-ваемых преимущественно мононуклеарными фагоцитами (TNFa, IL-lct,IL-8) 188
7.2. Влияние биополимеров морских гидробионтов на спонтанную и стимулированную продукцию цитокинов, вырабатываемых преимущественно Th2 (IL-4) 197
7.3. Влияние биополимеров морских гидробионтов на спонтанную и стимулированную продукцию цитокинов, вырабатываемых преимущественно Thl (IL-2, FNy) 200
Глава VIII. Апоптозрегулирующая активность биополимеров морских гидробионтов 207
8.1. Действие биополимеров морских гидробионтов на апоптоз клеток перевиваемых клеточных линий различного происхождния 208
8.2. Влияние биополимеров морских гидробионтов на апоптоз
лимфоцитов периферической крови человека 213
Глава IX. Клиническая эффективность применения тинростима в комплексном лечении онкогинекологических больных 225
Заключние 253
Выводы 291
Рекомендации для внедрения в практику и науку 294
Список литературы
- Действие биополимеров морских гидробионтов на клеточный иммунный ответ
- Влияние биополимеров морских гидробионтов на функциональную активность макрофагов
- Модуляция экспрессии мембраноассоциированных структур лимфоцитов периферической крови биополимерами морских гидро-бионтов
- Влияние биополимеров морских гидробионтов на спонтанную и стимулированную продукцию цитокинов, вырабатываемых преимущественно Thl (IL-2, FNy)
Действие биополимеров морских гидробионтов на клеточный иммунный ответ
Среди различных источников получения новых лекарств, композиции природного происхождения имеют особенное значение [411]. В настоящее время в мире приблизительно третья часть лучше всего продающихся лекарств являются или природными продуктами, или имеют в своей основе структуры аналогичные натуральным [411]. Традиционно, как наиболее богатые источники лекарств природного происхождения, использовались высшие растения, и до сих пор почти все используемые в лечебных целях природные продукты или их производные были получены из наземных организмов [446, 447]. Исследования последних лет показали, что многие из морских естественных соединений являются структурно уникальными, отсутствуют у наземных организмов [329] и часто превосходят аналоги наземного происхождения по биологической или фармакологической активности [411, 446]. Анализ этих работ показывает, что наиболее интересными источниками фармакологически активных соединений являются морские беспозвоночные (губки, моллюски, асцидии) и водоросли [234, 329, 371].
Среди структурных компонентов, метаболитов и других биохимических соединений морских гидробионтов особый интерес представляют группы биополимеров, составляющие структурную основу живых организмов и обеспечивающие многочисленные процессы жизнедеятельности - белки, пептиды, нуклеиновые кислоты, полисахариды, гликопротеины, протеогли-каны, гликолипиды [71, 107, 139, 247, 325, 508].
Поскольку публикации по иммуномодулирующей активности углево-дсодержащих соединений, полисахаридов и пептидов из морских гидробионтов в литературе немногочисленны, в настоящий обзор мы включили работы, касающиеся биологической активности полисахаридов и пептидов животного и растительного происхождения. Учитывая, что изучение этих соединений было начато в 1970-1980-х годах, мы сочли необходимым проанализировать эволюцию накопления данных по этой проблеме.
Полисахариды представляют собой класс самых распространенных на Земле биополимеров, разнообразных по составу и химическим свойствам [34, 70, 198, 210]. Функции полисахаридов варьируют от чисто структурных (целлюлоза, гликаны клеточных стенок) до функций запасных веществ (амилоза, парамилон, ламинараны), водосохранения (глюкозаминог-ликаны и полисахариды водорослей), химического узнавания гликопротеи-нов различных клеток [34, 71].
Одним из наиболее эффективных и доступных источников полисахаридов являются водоросли, продуцирующие около половины органических веществ в мире [198]. Полисахариды водорослей представляют собой гликаны с различными типами гликозидных связей типа 1,3;1,6-{3-глюканов и 1,3-а-глюканов, истинные гетерогликаны и углевод-белковые комплексы, суль-фатированные полисахариды (фукоиданы), аминосахара и состоящие из них полисахариды, гликопротеины, гликолипиды, пектины. Наиболее многообещающим фармакологическим действием этих биополимеров является их иммуномодулирующая и противоопухолевая активности [85, 247]. Использование водорослей и морских трав как сырья в нашей стране имеет значительные перспективы в связи с длительной протяженностью береговой линии, а также экономически выгодной возможностью возделывать их повсеместно в марикультуре в водных биотопах любого типа [31,107]. Себестоимость производства полисахаридов из водорослей ниже, а технология проще и экологически безопаснее производства бактериальных и синтетических полисахаридов [70, 93, 107, 189]. Кроме того, биологические эффекты некоторых полисахаридов из морских водорослей и трав имеют большую выраженность по сравнению с бактериальными, дрожжевыми полисахаридами и полисахаридами из высших растений [31]. При этом полисахаридный состав водорослей также значительно отличается от высших растений и микроорганизмов наличием уникальных Сахаров, что связано с различными условиями обитания [31, 34, 196]. Каждому отделу и классу водорослей свойственно наличие особых полисахаридов. В красных водорослях главными углеводами являются флоридный крахмал и сульфатированные галактаны, встречаются и другие полисахариды - ксиланы, маннаны [34]. Бурые водоросли являются богатым и легко возобновляемым источником интересных по структуре и биологической активности водорастворимых полисахаридов: ламинаранов, фукоиданов, которым, наряду с широко известной альгиновой кислотой, принадлежит основная роль в биологическом действии водорослей [71, 138, 211, 251]. Альгиновые кислоты - низкомолекулярные полиуро-ниды - составляют 30-40% от их сухой биомассы. Они различаются по мономерному составу, содержат остатки двух гексуроновых кислот в различных соотношениях и образуют линейную цепь с 1—»4 связями между моносахаридами [176, 198].
Структурные водорастворимые полисахариды - фукоиданы - представляют собой семейство высокосульфатированных, обычно разветвленных гетерополисахаридов, впервые изолированных в 1913 году [236, 375]. Много лет сульфатированные фукоиданы расценивались только как потенциальный источник L-фукозы, хотя были известны их противосвертывающие свойства. В последнее время проблема поиска новых лекарств вновь привлекла внимание исследователей к сульфатированным фукоиданам. В течение нескольких последних лет была установлена структура фукоиданов, изолированных из водорослей и беспозвоночных и объяснены многие аспекты их биологической активности [236]. У фукоиданов обнаружены антиопухолевая [219, 514,530], антивирусная [280,494], антилипидемическая [7], иммуномодулирующая, антикоагулянтная [7,218,406] активности. Фукоиданы специфичны, и в других водорослях, кроме бурых, не встречаются [18]. Биологические свойства фукоиданов определяются не только плотностью заряда, но и детальными структурными особенностями полисахарида [236]. Фукоиданы отличаются друг от друга по типу связи а-фукозы, структурным сахарам, содержанию сульфатных групп - от полисахаридов с высоким содержанием уроновых кислот и низким содержанием фукозы и сульфата до практически чистых a-D-фуканов, где основным моносахаридным остатком является фукоза [189, 198, 366]. Кроме фукозы и уроновых кислот в их составе обнаружены галактоза, манноза, ксилоза [434, 436]. Типичные фукоиданы выделены из Chorda filum [244], Ecklonia kurome [485], Eisenia bicyclis [514], Laminaria saccharina [138]. Гетерогенные фукозосодержащие полисахариды получены из бурых водорослей Ascoseiria mirabilis [251], Ascophyl-lum nodosum [486], Desmarestia aculeata [435], Desmarestia ligulata, Desmaresiafirma [252], Fucus vesiculosus [382].
Несмотря на то, что свойства сульфатированных полисахаридов известны давно, существует проблема их терапевтического применения, с одной стороны, по причине сравнительно высокого остаточного содержания протеинов, что чревато риском аллергических явлений, с другой стороны, из-за высокой молекулярной массы (100-800 кДа), результатом чего является плохая растворимость, в значительной мере ограничивающая применение фукоиданов в высоких концентрациях [406]. Величина оптимальной молекулярной массы фукоиданов для проявления терапевтической активности лежит в диапазоне 10-50 кДа. Для получения фракций с оптимальной молекулярной массой используют кислотный или радикальный гидролиз в присутствии соли меди, требующий дополнительных затрат и усложняющий процесс получения фукоиданов [406]. В связи с этим, поиск в бурых водорослях низкомолекулярных фукоиданов, обладающих антикоа-гулянтным и имму-нотропным действием, остается до настоящего времени актуальной задачей.
Влияние биополимеров морских гидробионтов на функциональную активность макрофагов
Начиная с 70-х годов прошлого века, как в фундаментальной иммунологии, так и в области практической медицины назрела необходимость решения двух основных прикладных задач: наряду с препаратами и средствами иммуносупрессирующего типа (применяемых для подавления реакций трансплантационного иммунитета, лечения аутоиммунных и других заболеваний) в арсенале лечебных средств важно иметь широкий спектр препаратов, стимулирующих реакции иммунитета (для лечения различного рода им-мунодефицитов, развивающихся при инфекциях, травмах, хирургических вмешательствах, при действии на организм различных неблагоприятных факторов химической и физической природы, и др.) [109]. Основная стратегия, лежащая в основе иммуномодуляции, состоит в том, чтобы идентифицировать компоненты ведущего ответа, который может быть усилен или подавлен таким образом, чтобы усилить или подавить иммунную реакцию. В настоящее время к иммуномодуляторам относят лекарственные средства, которые обладают иммунотропной активностью, и в терапевтических дозах восстанавливают функции иммунной системы (эффективную иммунную защиту) [171].
В связи с тем, что сведения об иммуномодулирующем действии биополимеров из морских гидробионтов в литературе весьма немногочисленны, мы сочли необходимым включить в настоящую главу работы, посвященные изучению иммуномодуляторов полисахаридной, углевод-белковой и пептидной природы из объектов наземной флоры и фауны.
К их числу относятся дрожжевые полисахариды. Свойства p-D-глюка-нов, полученные из дрожжей, представлены в работах Н.П.Елинова [63], М.А. Кашкиной [91], Г.Е. Аркадьевой [12]. Школе Н.П.Елинова принадлежат приоритетные исследования иммуномодулирующих, противоопухолевых и радиозащитных свойств р-глюкана из дрожжей. Большое число работ посвящено изучению зимозана - сложного полимера полисахаридной природы, выделенного из оболочки дрожжей Saccharomyces cerevisiae, действующим началом которого является I— 3; I— б-Р-Б-глюкан [21, 68]. В работах американских авторов приводятся результаты изучения подобных иммуно-модуляторов, например, так называемого "часточкового" дрожжевого глю-кана Р, являющегося активным компонентом зимозана [424], и растворимой фракции глюкана Р [211]. Дрожжевые полисахариды повышают резистентность организма к бактериальным, вирусным, грибковым, паразитарным инфекциям, эффективны как адьюванты при вакцинации, стимулируют кроветворение [12, 58, 65, 91]. В 1970-1990 годах были выделены p-D-глюканы из съедобных грибов, обладающие выраженной противоопухолевой активностью - крестин (из гриба Coriolus versicolor) [416], шизофиллан (из гриба Shizophillum commune) [388], лентинан (из гриба Lentinus edodes) [462]. Структуру, подобную лентинану, имеют и другие полисахариды, выделенные из съедобных базидиальных грибов - грифолан из плодовых тел Crifola frondosa [210, 261], пахиман из гриба Poria cocos [521], а также микробный полисахарид склероглюкан [417]. Все они представляют собой l,3;l,6-(3-D-глюканы и обладают противоопухолевой и иммуномодулирующей активностью.
Другую структурную группу полисахаридов, содержащих Р-1,3-связанные остатки глюкозы и обладающих высокой иммуностимулирующей активностью, представляют линейные 1,3;1,4-Р-0-глюканы, выделяемые из исландского мха Certaria islandica [215] и зерновых - овса [516], ячменя [525].
Еще одну группу полисахаридов, проявляющих высокую биологическую активность, составляют а-гликаны. К ним относятся линейный (1- 3)-a-D-глюкан, изолированный из гриба Ganoderma lucidum [263], a -1,6- и a -1,4-глюкан из Agaricus blazei [442], а -1,4-связанный глюкан из корневища Cnidium officinale [259].
К углевод-белковым соединениям природного происхождения относятся гликопептиды - мурамилпептиды, являющиеся компонентами клеточных стенок грамположительных бактерий [17]. Синтетический аналог гли-копептидов бактериальной стенки ликопид - К-ацетил-глюкозаминил-Ы-ацетил-мурамил-дипептид - обладает высокой иммуностимулирующей активностью и слабой пирогенностью [104].
Иммуномодулирующий эффект пептидов был впервые описан для ти-малина [120]. В последующие два десятилетия получили признание иммуно-тропные лекарственные средства первого поколения, полученные на основе экстрактов тимуса - тактивин, тималин, тимоптин, тимактид, эпифиза (эпи-таламин), простаты (простатилен) [120]. В дальнейшем было установлено, что большинство пептидов обладает не только иммуномодулирующим действием, но и изменяет реакции сосудисто-тромбоцитарного гемостаза, свёртывания крови, фибринолиза [52, 120], перекисного окисления липидов, влияет на содержание реактантов острой фазы воспаления, а также репарацию тканей и другие процессы [52]. Рекомендуются для изучения пептидные комплексы, выделенные из тканей сердца, головного мозга, почек, печени, сетчатки глаза крупного рогатого скота и свиней [120]. Эти пептиды проявляют иммуномодулирующее, гемостимулирующее, противоопухолевое действие, координируют функционирование популяций клеток [120]. Разработаны и применяются в практической медицине тималин, миелопид, тактивин и другие пептидные препараты, устраняющие нарушения отдельных звеньев иммунной системы при вторичных иммунодефицитных состояниях, сопровождающих практически все болезни [181, 188]. Трудность стандартизации тимических препаратов первого поколения привела к созданию препаратов второго и третьего поколения, представляющих собой синтетические аналоги естественных гормонов тимуса - агтимозина и тимопоэтина или фрагментов этих гормонов, обладающих биологической активностью [163]. На основе одного из активных фрагментов, включающего аминокислотные остатки тимопоэтина, были созданы препараты тимопентин и синтетические гексапептиды иммунофан и тимогексин [120].
К настоящему времени пептиды, липополисахариды, полисахариды, гликопротеиды характеризуются как молекулы, оказывающие выраженное влияние на иммунную систему [120, 312, 315, 527]. Следует отметить, что в то время как о биологической активности некоторых из этих полимеров было известно более чем 50 лет, недостаток информации о химическом составе и структуре ограничивал возможности изучения их потенциала для клинического использования. Недавние исследования привели к более детальному пониманию структурных аспектов полисахаридов и пептидов, обеспечивающих развитие иммунных реакций [247, 315]. Установление связи между структурой и функцией этих соединений, обнаружение специфических рецепторов для них на клетках иммунной системы обеспечили основу для создания имунологически активных составов. Обзор не охватывает всего перечня иммуномодуляторов этой природы, а скорее иллюстрирует их потенциал для клинического использования.
Модуляция экспрессии мембраноассоциированных структур лимфоцитов периферической крови биополимерами морских гидро-бионтов
К настоящему времени накоплен значительный материал о важной роли 5 -нуклеотидазы (5 -НТД-5-рибонуклеотидфосфогидразы) - одного из основных эктоферментов пуринового обмена, локализующегося в плазмати ческой мембране, в регуляции вне- и внутриклеточного уровня аденозиново го обмена. Снижение активности этого фермента, сопровождающее стиму ляцию Мф, рассматривается как проявление биохимических процессов, приводящих к понижению уровня аденозина - мощного ингибитора функ циональной активности клетки [195]. Исследования иммуномодуляторов природного происхождения свидетельствуют о длительном и стойком СНИ-Ч жении 5 -нуклеотидазы после введения их мышам, при этом степень сниже ния коррелирует с иммуностимулирующей активностью препаратов [4]. ї";
Изучение динамики активности 5 -нуклеотидазы в Мф перитонеально-го экссудата мышей линии (CBAxC57Bl)Fi при внутрибрюшинном введении „ исследуемых биополимеров показало выраженное снижение уровня фермента при введении препаратов в дозах, оказывающих максимальное иммуно-адьювантное действие. На рис.27 приведены результаты изменения 5 -нуклеотидазной активности макрофагов при внутрибрюшинном введении мышам тинростима и митилана.
При введении тинростима и митилана резкое снижение активности фермента, наблюдаемое уже через 24 часа после введения, сохранялось до 3 суток исследования, на 14 сутки не отличалось от активности фермента у животных контрольной группы. Следует отметить, что при введении 0,85% NaCl уменьшение активности 5 -нуклеотидазы было незначительным и непродолжительным (в течение трех суток). По мнению М.А.Туманян с соавт. [166], в последнем случае снижение активности 5 -нуклеотидазы является
Динамика изменения активности 5 -нуклеотидазы при внутрибрю-шинном введении мышам (CBAxC57Bl)Fi тинростима и митилана. По оси ординат: активности 5 -нуклеотидазы в макрофагах перитонеальной полости (в % к контролю); По оси абсцисс: время наблюдения (сутки); п=9. неспецифической реакцией и связано с влиянием вводимого вещества на резидентные Мф. Длительное воздействие исследуемых биополимеров на ферментативную активность клеток перитонеальной полости может быть связано с перераспределением Мф в организме и накоплением в перитоне-альном экссудате клеток с высокой функциональной активностью [165].
Поскольку 5 -нуклеотидаза осуществляет гидролиз цАМФ с образованием аденозина [41], физиологическое значение ферментативных изменений, наблюдаемых в Мф при введении исследуемых препаратов, может быть связано со снижением уровня цАМФ в клетках (что показано нами для митилана и транслама (6.1), изменением соотношения цГМФ/цАМФ, обусловливающим запуск процессов пролиферации и дифференцировки иммуноком-петентных клеток.
Известно, что активация макрофагов сопряжена с метаболическим (окислительным) взрывом, сопровождающимся мобилизацией глюкозомо-нофосфатного шунта, продукцией и секрецией высокоактивных нестабильных продуктов восстановления кислорода — супероксиданионов Ог , перекиси водорода (Н202), радикалов ОН- и синглетного кислорода (02) [111].
В настоящем разделе представлены экспериментальные доказательства способности биополимеров морских гидробионтов оказывать влияние на кислородзависимые механизмы цитотоксичности Мф. Для этого митилан, транслам, зостерин, фукоидан (100 мкг/мл) и тинростим (0,01 мкг/мл) добавляли к взвеси перитонеальных Мф мышей и инкубировали 30 минут при 37С. Было установлено, что исследуемые биополимеры усиливали способность Мф к спонтанной продукции свободных радикалов. Интенсивность продукции АФК зависела от используемого препарата, наибольшей активностью в этом случае обладали фукоидан (194,3±21,5, /?=0,001) и зостерин (165±18,0, р=0,001). Высокий уровень значимости различий был выявлен при внесении в среду культивирования митилана (111±14,0,/?=0,01) и тинро-стима (102±8,9, ;?=0,01) (табл. 12).
При исследовании экспрессии мембранных рецепторов (FcyR, CR1), макрофаги, полученные через 72 часа из экссудата брюшной полости мышей (CBAxC57BL)Fi, инъецированных 1% пептоном (1x10 ) , инкубировали при 37С в течение 1 часа с биополимерами морских гидробионтов в конечной концентрации 100 мкг/мл (митилан, транслам, фукоидан, зостерин) и 0,01 мкг/мл (тинростим). Было установлено, что Мф через 60 минут инкубации в присутствии исследуемых препаратов экспрессируют большее, по сравнению с контролем, количество FcyR и CR1. Значимые различия были выявлены при дисперсионном анализе значений FcyR и CR1 во всех опытных группах. Изменение экспрессии CR1 под действием биополимеров было более выраженным по сравнению с экспрессией FcyR (табл. 13).
Через 24 часа культивирования Мф в присутствии биополимеров уровень FcyR и CR1 снижался ниже контрольных значений, хотя в контроле их значения значимо не отличались от таковых при часовой инкубации (FcyR через 60 минут 31±2,2, через 24 часа 33±3,5, р=0,7; CR1 через 60 минут 16±1,6, через 24 часа 18±2,0, р=0,7). Следует отметить, что снижение экспрессии мембранных рецепторов при воздействии стимулирующих факторов описано в литературе. Так, в работе G.A. Limb et al. [402] показано снижение FcyR и CRl при культивировании перитонеальных макрофагов морской свинки в течение 24 часов в присутствии лимфокинов. Авторы считают, что потеря и синтез FcyR и CR1 может модифицироваться функционально активированными макрофагами. Данные о снижении плотности рецепторов к Fc фрагменту IgG и СЗЬ-компоненту комплемента в процессе активации макрофагов приведены и в работе [111]: при активации макрофагов экспрессия FcyR и CR1 определяется на высоком уровне, однако, в полностью активированных клетках количество рецепторов на их поверхности снижается. Поскольку исследуемые нами биополимеры активируют макрофаги, не исключен подобный механизм регуляции уровня экспрессии рецепторов в нашем случае. Учитывая данные литературы, мы полагаем, что ослабление экспрессии FcyR и CR1, наблюдаемое через 24 часа инкубации с биополимерами, не является следствием общего подавления реактивных потенций клеток, а отражает функциональную пластичность рецепторов в условиях неспецифических лигандрецепторных взаимодействий с биополимерами.
В следующей серии экспериментов изучено изменение уровня FcyR и CR1 Мф селезенки мышей, получивших парентеральные инъекции биополимеров в дозах 5мг/кг (митилан, транслам, фукоидан, зостерин) , 0,05мг/кг -тинростим. На рис.28 в качестве примера приведены данные по изменению
Влияние биополимеров морских гидробионтов на спонтанную и стимулированную продукцию цитокинов, вырабатываемых преимущественно Thl (IL-2, FNy)
Включение тинростима в комплекс лечения больных с осложнениями сопровождалось умеренным увеличением концентрации TNFa в сыворотке крови в динамике послеоперационного периода, достигая значимых различий с показателями значений цитокина в контрольной группе к 14 суткам (20,9+8,2 pg/ml (р 0,05, п=14) при развитии серомы, гематомы, гиперемии послеоперационных швов, культита (группа2оА). Содержание TNFa в сыворотке крови больных с тяжелыми осложнениями послеоперационного периода (группа2оБ) значимо не отличалось от такового в сыворотках крови больных контрольной группы (4,6+1,8pg/ml (р 0,05, п=14) с гнойными осложнениями (группа 2кБ) (рис.41).
В развитии послеоперационных осложнений имеет значение и подавление функции Th2 (IL-4) в предоперационном периоде [504]. Так, например, в работе [472] показано, что у хирургических больных с последующим развитием послеоперационных осложнений содержание IL-4 в сыворотке крови в предоперационном периоде было снижено по сравнению с больными, у которых эти осложнения не развивались. Практическое отсутствие сывороточного IL-4 у больных со злокачественными опухолями связывают с истощением резервных возможностей клеток-продуцентов или переходом на качественно новый уровень с другими механизмами саморегуляции с продукцией других цитокинов [93, 106]. Следует подчеркнуть, что низкие уровни сывороточных цитокинов могут не отражать истинных концентраций этих медиаторов в крови и быть следствием как гипо и/или ареактивности онкологических больных, так и результатом специфического связывания их растворимыми рецепторами, находящимися, возможно, в крови в высоких концентрациях. Так, например, в работе [165] показана возможность существования недетектируемых форм цитокинов и их элиминации при проведении гемо-фильтрации у онкологических больных.
В наших исследованиях до операции содержание IL-4 у 75% больных онкогинекологическими заболеваниями не превышало нижних пределов чувствительности метода, средний уровень IL-4 среди всех обследуемых составил 3,2±1,7 pg/ml (здоровые доноры - 5,6±1,9 pg/ml). Согласно полученным данным, значимых различий в содержании IL-4 в обследованных группах больных с осложнениями и без таковых не выявлено.
На 7 сутки после операции у больных с благоприятным течением послеоперационного периода в 65% случаев в контрольной группе и в 65% случаев в опытной группе IL-4 в сыворотке крови не обнаруживался, средний уровень цитокина составил в контрольной группе 6,7±4,4pg/ml, в опытной группе - 6,4±3,3 pg/ml.
У больных контрольной группы с негнойными осложнениями послеоперационного периода (серома, гематома, гиперемия послеоперационных швов, культиты) отмечено увеличение концентрации цитокина, средний уровень IL-4 составлял 14,8 ±9,2 pg/ml, значимо не изменяясь в динамике (на 14 сутки - 11,0±3,5, р 0,05, п=12). Однако, при тяжелых послеоперационных осложнениях (разлитой перитонит, абсцесс, флегмона, осумкованный гнойник) IL-4 в крови не определялся (уровень цитокина ниже порога чувствительности метода). В одном случае, при нагноении послеоперационной раны, содержание IL-4 было высоким - 183 pg/ml, оставаясь повышенным в динамике послеоперационнного периода— 190 pg/ml.
У больных опытной группы с негнойными осложнениями с неблагоприятным течением послеоперационного периода, получавших в комплексе лечения тинростим, содержание IL-4 в динамике послеоперационного периода повышалось с 9,0±4,5 pg/ml на 7 сутки до 22,0±7,3 на 14 сутки (р 0,05, п=8), значимо отличаясь от показателей уровня цитокина в контрольной группе (р 0,05, п=16). При гнойных осложнениях увеличения концентрации цитокина в сыворотке крови не выявлено.
IFNy перед операцией не выявлялся у 65% больных с благоприятным течением послеоперационного периода и у 75% больных с осложнениями (содержание цитокина не превышало нижних пределов чувствительности метода). Средний уровень IFNy среди всех обследуемых составил 1,2±0,8 pg/ml (здоровые доноры - 21,8±2,1 pg/ml). На 7 сутки после операции у больных с благоприятным течением послеоперационного периода в контрольной группе в 62,5% случаев IFNy в сыворотке крови не определялся, средний уровень составил в контрольной группе 2,2+0,9 pg/ml, в опытной группе - после профилактического курса тинростима - 5,9±1,5 pg/ml, значимо отличаясь как в динамике послеоперационного периода (р 0,05, п=20), так и в сравнении с контрольной (1к) группой (р 0,05, п=40). У больных контрольной группы с негнойными осложнениями послеоперационного периода (серома, гематома, гиперемия послеоперационных швов, культиты) на 7 сутки после операции отмечено некоторое увеличение концентрации цитокина, средний уровень IFNy составлял 6,5 ±1,7 pg/ml (р 0,05, п=12), значимо не изменяясь в динамике (на 14 сутки - 3,0±1,2,/7 0,05, п=12). При тяжелых послеоперационных осложнениях (абсцесс, флегмона, осумкованный гнойник) IFNy в крови на 7 и 14 сутки не определялся (уровень цитокина ниже порога чувствительности метода), лишь в одном случае - при развитии перитонита - концентрация цитокина в сыворотке крови достигала 900 пкг/мл.
У больных с неблагоприятным течением послеоперационного периода (серома, гематома, гиперемия послеоперационных швов, культиты), получавших в комплексе лечения тинростим, содержание IFNy в динамике послеоперационного периода повышалось с 1,3±0,5 pg/ml на 7 сутки до 7,2±2,8 на 14 сутки (р 0,05, п=14), при гнойных осложнениях изменений содержания цитокина в сыворотке крови не выявлено.
Таким образом, проведенные исследования позволили нам выявить следующие закономерности продукции цитокинов у больных онкогинеколо-гическими заболеваниями: в предоперационном периоде содержание TNFa в сыворотке крови больных не превышало значений показателя у здоровых доноров, IL-4 и IFNy не выявлялись у 60-80% больных. При этом не было выявлено значимых различий в содержании провоспалительных цитокинов у онкологических больных с осложнениями и без таковых. В динамике послеоперационного периода у больных с негнойными осложнениями способность к продукции цитокинов сохранялась, однако, при тяжелых гнойных осложнениях - резко снижалась: TNFa , IL-4 и IFNy в крови не определялись. Назначение профилактического курса тинростима на этапе предоперационной подготовки приводило к умеренному увеличению содержания TNFa, IFNy и IL-4 в сыворотке крови в послеоперационном периоде. Включение тинростима в комплекс лечения больным с негнойными осложнениями (серома, гематома, гиперемия послеоперационных швов, культиты) также сопровождалось повышением продукции цитокинов. При тяжелых послеоперационных осложнениях (разлитой перитонит, абсцесс, флегмона, осумкованный гнойник) включение тинростима в комплекс лечебных мероприятий не обеспечивало стимуляции продукции цитокинов. Представляется, что в этих случаях необходима заместительная цитокинотерапия, либо стимуляция большей интенсивности, которая может достигаться использованием лекарственных форм иммуномодуляторов, вводимых парентерально.
Следует подчеркнуть, что определенное прогностическое значение имеет IL-4 и IFNy, которые не определяются в динамике послеоперационного периода у больных с гнойными осложнениями послеоперационной раны. Подобную закономерность отмечают, например, Е.Г. Громова с соавт. [94], изучавшие кинетику цитокинов в периоперационном периоде у больных раком почки.
![Структурно-функциональная организация, механизм действия и иммунобиологические свойства [Г]-D-глутамил-L-триптоана (Бестима)](/i/i/4288/290144.png "Структурно-функциональная организация, механизм действия и иммунобиологические свойства [Г]-D-глутамил-L-триптоана (Бестима) Колобов Александр Александрович")
![Исследование клинической эффективности и механизмов действия имунофана при хронических обструктивных заболеваниях легких [Электронный ресурс]](/i/i/4458/187831.png "Исследование клинической эффективности и механизмов действия имунофана при хронических обструктивных заболеваниях легких [Электронный ресурс] Бондаренко Наталья Леонидовна")
