Содержание к диссертации
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ 6
ВВЕДЕНИЕ 9
ГЛАВА I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 13
1.1.ИММУНОТРОПНЫЕ СВОЙСТВА СИНТЕТИЧЕСКИХ ФАРМАКОЛОГИЧЕСКИХ ПРЕПАРАТОВ 13
1.1.1. Определение иммунотропных препаратов. 13
1.1.2. Классификация иммуноактивных препаратов 14
1.1.3. Характеристика и принцип фармакологического действия синтетических иммуномодуляторов. 16
1.1.3.1. Индукторы синтеза интерфероное. 17
1.1.3.2. Иммуномодуляторы. влияющие на функции макрофагов и нейтрофильных гранулоцитов. 19
1.1.3.3. Модифицированные аналоги гормонов тимуса и другие биорегуляторы. 21
1.1.3.4. Модификаторы биологического ответа. 23
1.1.4.Синтетические препараты других фармакологических групп, обладающие 24
иммунотропной активностью
1.2. ИССЛЕДОВАНИЕ ИММУНОТРОПНЫХ СВОЙСТВ НОВЫХ ФАРМАКОЛОГИЧЕСКИХ ПРЕПАРАТОВ. 25
1.2.1. Алгоритм изучения иммунотропной активности нового фармакологического средства. 25
1.2.2. Доклинические испытания иммунотропных свойств новых лекарственных препаратов in vitro 26
1.2.2.1.Исследование влияния нового лекарственного препарата на цитотоксическую активность естественных киллерных клеток 28
1.2.2.1.1.Роль естественной цитотоксичности в иммунной защите организма. Характеристика ЕК-клеток 28
1.2.2.1.2. Методы исследования цитотоксической активности ЕК-клеток 31
1.2.2.2. Определение токсичности препарата 33
1.2.2.3. Оценка влияния препарата на способность стимулировать секрецию цитокинов. 34
1.2.2.3.1. Общие свойства цитокинов 34
1.2.2.3.2. Классификация цитокинов 36
1.2.2.3.3.Характеристика и описание биологического эффекта некоторых Ъ1 цитокинов.
1.2.2.3.4.Методы исследования цитокин стимулирующей активности 39
препаратов.
1.3. ИССЛЕДОВАНИЕ АНТИБАКТЕРИАЛЬНЫХ СВОЙСТВ НОВЫХ ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИХ ПРЕПАРАТОВ
1.4. ЗАКЛЮЧЕНИЕ 42
ГЛАВА II. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ. И. 1. ИСПОЛЬЗОВАННЫЕ МАТЕРИАЛЫ 44
II. 1.1.Список использованных растворов, сред, тестовых систем.
II. 1.2. Характеристика клеточных и бактериальных культур
П. 1.3. Лабораторные животные 46
II.2. ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ МЕТОДЫ 46
II.2.1. Методы выделения клеток •і И.2.2. МТТ-колориметрический цитотоксический тест 48
II.2.3. Иммуноферментный анализ 48
П.2.4.Изучение противоопухолевых свойств тестируемых веществ in vivo
И.2.5. Исследование воздействия тестируемых веществ на фагоцитарную активность нейтрофилов крови
II.2.6. Луночно-диффузионный метод 51
П.2.7. Метод серийных разведений 53
ІІ.З.СТАТИСТИЧЕСКАЯ ОБРАБОТКА РЕЗУЛЬТАТОВ 53
Глава Ш. ИЗУЧЕНИЕ ИММУНОТРОШЮЙ АКТИВНОСТИ СОЕДИНЕНИЙ МАК-15, МАК-17, МАК-25 и МАК-30.
III. 1. Оценка влияния исследуемых соединений ряда МАК на цитотоксическую активность естественных киллерных клеток крови.
Ш.2. Изучение токсичности исследуемых веществ группы МАК.
Ш.З. Влияние исследуемых веществ группы МАК на выброс цитокинов клетками при совместной инкубации МНКиК-562.
Глава IV. ИССЛЕДОВАНИЕ ИММУНОМОДУЛИ РУЮЩЕГО ДЕЙСТВИЯ ВЕЩЕСТВА МАК-30. 80
IV. 1. Цитотоксическая активность ЕК-клеток крови человека, индуцированная МАК-30 в диапазоне концентраций Ю МО М.
IV.2. Изменение уровня цитокинов в среде о культивирования, индуцированное растворами МАК-30 (10" - 84 Ю М).
IV.3. Изучение влияния вещества МАК-30 в диапазоне концентраций 10 -10"4 М на изолированные мононуклеарные 89 и опухолевые клетки.
Глава V. ИЗУЧЕНИЕ ВЛИЯНИЯ ВЕЩЕСТВА МАК-30 НА ТОРМОЖЕНИЕ РОСТА ОПУХОЛЕЙ РАЗЛИЧНОГО ГЕНЕЗА IN VIVO.
Глава VI. ИЗУЧЕНИЕ ВЛИЯНИЕ ВЕЩЕСТВА МАК-30 НА ФАГОЦИТАРНУЮ АКТИВНОСТЬ НЕЙТРОФИ ЛОВ КРОВИ ЧЕЛОВЕКА. 101
Глава VII. ИССЛЕДОВАНИЕ АНТИМИКРОБНЫХ СВОЙСТВ ВЕЩЕСТВ ГРУППЫ МАК. 103
VII. 1. Исследование ингибирующего влияния веществ ряда МАК на рост колоний патогенных штаммов клинических изолятов S. aureus, Е. faecalis, S. epidermidis, Е. coli, P. aeraginosa, выделенных из организма стационарных больных.,
VII.2. Исследование ингибирующего влияния веществ яда МАК на рост колоний условно-патогенных штаммов клинических изолятов S. aureus, Е. faecalis, A. geminis, E.coli. ПО
VII.3. Определение минимальных концентраций веществ группы МАК, ингибирующих рост на ППС типовых штаммов S. epidermidis АТСС 12228, S.aureus АТСС 25923, Е. coli АТСС 29212, Е. faecalis АТСС 35218. 112
Глава VIII. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ 120
Выводы. 132
Список литературы. 1
Введение к работе
В современных условиях отмечается снижение иммунологической реактивности населения в целом (по некоторым данным до 70 % людей имеют отклонения в деятельности иммунной системы) и, соответственно, повышение заболеваемости острыми и хроническими болезнями, обусловленными оппортунистическими микроорганизмами [9]. Кроме того, возрастает частота аллергических [60], онкологических [46], аутоиммунных [86], а в нашей стране также острых и хронических инфекционных заболеваний, вызываемых облигатными патогенами, например дифтерия и туберкулез [41]. Поэтому, возникает необходимость в расширении арсенала лекарственных средств, позволяющих корректировать нарушения иммунного статуса организма, и не оказывающих побочных эффектов. Спектр иммунотропных средств и препаратов постоянно расширяется. Потребность в этом продиктована с одной стороны конкретной клинической ситуацией, когда вмешательство в патологический процесс требует комплексного воздействия : сочетания противовирусного и иммуностимулирующего влияния (подобное воздействие оказывают например интерфероногены, препараты интерферона); противобактериального и иммуностимулирующего (рулид, диуцифон); противовоспалительного и иммуностимулирующего (галавит), а с другой стороны - необходимость получения выраженного клинического эффекта при минимальном негативном токсическом влиянии на организм [74]. Все, сказанное выше, обосновывает важность и необходимость работ, направленных на создание отечественных лекарственных средств, обладающих иммунотропной активностью при минимальной токсичности, конкурентноспособных на мировом фармацевтическом рынке. Это позволит обеспечить население и учреждения здравоохранения России эффективными и недорогими лекарственными препаратами и создаст условия для независимости от импорта иммуномодулирующих лекарственных средств.
Объектами исследования данной работы являются четыре соединения новой группы синтетических веществ МАК, представленных хиральными кватернатами 3-оксихинуклидина: МАК-15, МАК-17, МАК-25 и МАК-30. Вещества МАК-17, МАК-25 и МАК-30 являются структурными аналогами: МАК-17 8(+)-изомером; МАК-30 Я(-)-стереоизомером, а МАК-25 рацематом. От МАК-17, МАК-25 и МАК-30 вещество МАК-15 отличается наличием в положении 3 гетроцикла атома хлора, а не гидроксильной группы. Технология синтеза веществ группы МАК была разработана в Государственном научно-исследовательском институте органической химии и технологии (ФГУП «ГосНИИОХТ», г. Москва) к.х.н. И. Л. Михалевой и д.х.н. Д. И. Панковым. Эти соединения характеризуются низкой токсичностью, высокой стабильностью в водных растворах и относительно простой технологией химического синтеза. Основанием для исследования иммунотропных свойств этой группы веществ послужили предварительные данные, полученные в ФГУП «ГосНИИОХТ», о разносторонней биологической активности некоторых представителей хиральных кватернатов 3-оксихинуклидина [42].
Исследования иммунотропной активности проводились в соответствии с методическими указаниями Фармакологического комитета Российской Федерации по изучению соответствующих свойств лекарственных препаратов [20,31].
Цель представленной работы: обосновать возможность использования соединения из группы хиральных кватернатов 3-оксихинуклидина в качестве основы для создания нового иммуномодулирующего препарата с противоопухолевой активностью.
Задачи, решению которых посвящена эта работа, сводятся к следующему:
1. Провести сравнительное исследование четырех производных хиральных кватернатов 3-оксихинуклидина in vitro с целью выбора вещества, обладающего иммунотропной активностью.
2. Изучить влияние соединения, выбранного из ряда МАК, на противоопухолевую цитотоксическую активность МНК периферической крови здоровых доноров 3. Оценить на животных с привитыми опухолями противоопухолевую активность соединения ряда МАК, обладающего иммунотропными свойствами.
4. Исследовать воздействие хиральных кватернатов 3-оксихинуклидина на фагоцитарные свойства полиморфноядерных нейтрофильных лейкоцитов периферической крови здоровых доноров
5. Определить бактериостатические свойства соединений ряда МАК
Положения, выносимые на защиту:
1. Из четырех исследованных производных 3-оксихинуклидина (МАК-15, МАК-17, МАК-25 , МАК-30) иммунотропной активностью обладает только цетилбромид 11(-)-3-оксихинуклидина (МАК-30). Это соединение за счет стимуляции врожденного звена иммунитета проявляет выраженную противоопухолевую активность.
2. Соединения, относящиеся к хиральным кватернатам 3-оксихинуклидина, проявляют антимикробную активность, подавляя рост патогенных и условно-патогенных штаммов различных видов микроорганизмов на плотных питательных средах.
Научная новизна представленной работы:
1. Проведено исследование иммунотропной активности нового ряда химических соединений - хиральных кватернатов 3-оксихинуклидина.
2. Установлено, что вещество МАК-30 - представитель группы хиральных кватернатов, наряду с иммунотропной, обладает противоопухолевой и антимикробной активностью.
3. Выявлено, что стимуляция клеточного иммунитета под воздействием МАК-30 проявляется только в условиях совместной инкубации лимфоцитов и опухолевых клеток.
4. Показано, что вещество МАК-30 стимулирует фагоцитарную активность нейтрофильных лейкоцитов.
Научно-практическая значимость: полученные в работе данные расширяют представления о механизме стимуляции противоопухолевого иммунитета при действии иммунотропных препаратов.
Бромид 1-гексадецил-Я(-) - З-окси-1-азониабицикло [2.2.2] октана (МАК-30) может рассматриваться как наиболее перспективное соединение ряда хиральных кватернатов 3-оксихинуклидина для создания на его основе иммуномодулирующего препарата, обладающего противоопухолевой активностью.
Диссертационная работа состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, пяти глав экспериментальных исследований, обсуждения результатов, выводов, списка литературы, включающего 102 ссылки, и двух приложений; иллюстрирована 28 таблицами и 7 рисунками. Объем диссертации - 144 страницы машинописного текста.
Похожие диссертации на Изучение иммунотропных свойств хиральных кватернатов 3-оксихинуклидина
