Введение к работе
Актуальность проблемы, изучение нарушений иммунной системы при сронической интоксикации психотропными препаратами и. создание на )Той основе новых ишунохимическкх методов анализа, используемых в шагностике наркомания, является актуальной задачей иммунохимии. В іервую очередь, это связано с. тем, что в России и за рубежом іродолжает расти уровень употребления наркотических вешеств с іемедицинскнмн целями, что требует своевременного выявления лиц, їлоупотреблящих наркотиками для искоренил этого заболенвания.
В настоящее время за рубежом наиболее широко используются іммунохимические методы определения интоксикации наркотиками. К ям относятся радиоиммуноанализ, гомогенный ишуноферментный и им-унофлуоресцентный анализ. Бее перечисленные способы предполагают римененме специального дорогостояиего оборудования.
В нашей стране для выявления наркотиков- используются, как
равило, физико-химические методы (тонкослойная и газохидкостная
роматография). которые трудоемки и длительны по времени
сполнения, требуют предварительной обработки анализируемых
бразцов. В последние годы разработаны и высокочувствительные
вердофазные иммуноферметные методы определения опиатов,
арбитуратов, каннабмноидов, производных эфедрина. Эта способы
вализа уже опробированы и нашли применение в ряде наркологических
яспансеров. --- ...
Однако, все перечисленные выие иммунояимические методы яализа, используемые для диагностики наркомании я основанные на іределении наркотика или его метаболита, имеют существенный здостаток, поскольку позволяют диагностировать интоксикации злько в течение нескольких суток с момента принятия препарата, гот факт связан с метаболизмом наркотических соединений и быстрым іведением их из организма.
В литературе имеются немногочисленные данные о влиянии психо->опных наркотических веществ на иммунную систему животных и щей, прежде всего на гуморальные факторы иммунитета. Так, при гутривенном введении наркотиков часто отмечают повышение уровня шороточных иммуноглобулинов CIg). Эти факты могно объяснить как оультат хронической антигенної! стимулями:. В эксперименте на вогных показано, что длительное введение им морфина стимулирует крови образование иммуноглобулинов. связывагашх зто соединс-іін&
- г -
.'D. A. Ringie. І972 г./. Сведения о характере изменения гуморального. иммунитета у людей, злоупотребляющих наркотиками и психотропними препаратами весьма разрознены. Так, у людей, злоупотребляющих героином, антитела против морфина были выявлены в работе /М.Е.Weksler et al. , 1973 т./ только у, 1% обследованных больных, а в исследовании /I.I.Ryan et al., 1972 г./ у 40 наркоманов. В последнее время появились данные об изучении механизмов гуморального иммунитета в ответ на введение наркотических веаеств, связанного с образованием специфических антител к этим соединениям. Результаты такого исследования открывает принципиально новугг возможность для диагностики интоксикации психотропными препаратами. В связи с этим, становится актуальной задача разработки новых иммунохиыических методов выявления специфических антител к наркотикам.
Анализ современных литературных данных показывает, что механизм иммунологической защиты организма на введение наркотика изучен недостаточно хорошо. Известно, что нейромедиаторы моноашковои и ошюидной природы являются теми гуморальными факторами, которые способны при повышении их конфенграции и избыточной активации привести к развитию иммунорегуляторного дисбаланса /В.F.Roy, 1985 г., В.О.JankoYic, 1989 г./
'С другоЗ сторона, в настоящее время выполнены исследования," свидетельствующие и наличии в организме здорового человека Ig, связывающих ряд эндогенных биорегуляторов и называемых естественными антителами - е-АТ /W.Mahana et al., 1988 г./. При патологических процессах происходит изменение нормального уровня е-АТ, которое связано, как правило, с нарушением метаболизма того или иного эндогенного соединения, участвующего в патогенезе заболевания. Вот почему, большой интерес представляет обнаружение и изучение роли е-АТ к ряду нейромедиагоров. изменение метаболизма которых имеет место при наркомании у людей. К ним относятся, в первую очередь,' соединения моноаминовой и ошюидной природы. Исследования по выявлению и изучению свойств е-АТ к данным нейромедиаторам позволяют создать новые иммунохимические методы анализа, как для изучения механизма иммунопатологии на наркотики, так а для диагностики наркомании.
Цель и задачи исследования. Цель данного исследования заключается в , разработке эффективных 'вариантов твердофазного иммуноферментного анализа специфических ціяптат к наркотическим
веществам и нейромедиаторам моноаминовой и опжждной природы для диагностики хронической интоксикации психотропными препаратами.
В соответствии с поставленной целью определены следующие задачи исследования:
- осуществить синтез иммунохимических реагентов - новых кокьс-
гированных антител, содержащих в своем составе производные опиа
тов, каннаОиноидов и эфедрина, а также эндогенные нейромедиаторы
(биогенные амины и опиоидные пептиды), используя при этом в
качестве макромолекул лрн ого носителя белковую и полимерную
матрицу;
разработать иммуноферменгные методы определения антител к наркотикам Сопиатам, каннабияоидам и эфедрину); оценить возможность их использования в диагностике наркомания;
провести исследование по выявлению антител к эндогенным биорегуляторам (опиоилным пептидам и биогенным ашшам) .-участвупиїм в патогенезе заболевания наркоманией и разработать твердофазный иммуноферментный метод определения данных иммуноглобулинов в сыворотке крови человека;
- выделить с помощью аффинной хроматографии антитела к ошгоидным пептидам (р-эндорфину, дерморфину) из сыворотки крови больных опийной наркоманией и доноров и исследовать их иммунохимические свойства;
.. .- провести .сравнительный анализ содержания специфических антител к психотропным препаратам и эндогенным биорегуляторам в сыворотке крови доноров и больных наркоманией твердофазным иммуноферментным методом; оценить диагностическую значимость разработанных вариантов иммунофермеягного анализа определения антител х наркотикам и нейромедиаторам для выявления интоксикации психотропными препаратами.
Научная новизна работы, Разработаны методы получения новых «шьюгатов психотропных веаеств с белковым и полимерным носителем. Синтезированы искусственные антигены . на полимерной, матрице, годерхавше в качестве галтена опиаты, опиоидные пептида, биогенные шины.
Разработан твердофазный метод иммуноферментного анализа «явления антител к опиатам, препаратам .эфедрина и хаинабшюидам; яіреяелена диагностическая значимость предложенных способов для ірименения в медицинской практике.
В сыворотке крова доноров й больная наркоманией установлено наличие антител к эндогенным нейромедиаторам Сбиогенным аминам и опиоиднш пептидам). У сольных наркоманией, по сравнению с донорами, обнаружено изменение уровня антител к перечисленный выше эндогенным биорегуляторам, участвующим в патогенезе заболевания. На основе проведенных исследований разработаны твердофазные иммуноферментные методы определения антител к биогенным аминам и опиоидным пептидам в сыворотке крови людей. Показана возможность их использования в диагностике заболевания. С помощью данных методов установлена тесная взаимосвязь между уровнем образования антител к моноашшам, опиоидным пептидам и длительностью употребления психотропного соединения.
Разработан новый метод получения ишуносорбентов для аффинной хроматографии; впервые из сыворотки крови доноров и больных наркоманией выделены антитела к нейромедиаторам Ср-эндорфину, дер-морфину) и исследованы их иммунохимичесхие свойства.
Практическая ценность работы. Полученные в работе результаты по создание новых методов иммунодерментного анализа психотропных препаратов икают важное значение для практического использования в диагностике наркомании. Так, иммуноферыеятные тест-система для определения антител к опиатам, препаратам эфедрина и каннабиноидам используются в наркологических клиниках" страны. На способ диагностики опийной нарж .сідии получен патент Сприоритетная справка N 4947040).
Определена диагностическая значимость иммуноферменгного анализа выявления антител к опиатам, препаратам . эфедрина и каннабиноидам в крови наркоманов, возводящая объективно подтвердить ^акт хронического употребления наркотических веществ спустя 2-4 месяца с момента их последнего попадания в организм.
На базе Иаститута. физиологически активных вецеста РАН постоянно проводится методическая школа по обучению врачей из наркологичесхЕх центров" России новым методам диагностики наркомании.
Результаты по разработке синтеза иммуносорбента для выделения антител к опиоидным пептидам являются перспективными для .использования в практическом здравоохранении при создании технологии получения селективных сорбентов в экстракорпоральных методах лечения наркомании.
і . _ _ с _
Основные положения, выносимые на зашиту.
і. Разраоотаиь: принштиальк-' поьиь иегсль: диагностики наркомати!, связанные с определением специфических антг.тел к наркотическим и психотропным веществам, которые можно попользовать в качестве объективного теста на злоупотребление наркотиками.
-
Обнаружено наличие в сыворотке крови человека антител к нейромедиаторам ыоноаминовой и опиоидной природы. Выявлено увеличение уровня антител к данным биорегуляторам при формировании зависимости к наркотикам. Разработаны методы анализа определения антител к эндогенным нэйромедиаторам, участвующим в патогенезе заболевания.
-
Установлена тесная взаимосвязь между уровнем образования антител к моноалшнам, опиоидным пептидам и длительностью употребления наркотика. Совместное использование разработанных им-муноферментньп методов анализа определения антител к наркотическим веществам и эндогенвьм нейрюмедиаторам является дополнительным подтверждавшим тестом для диагностики интоксикации психотропными препаратами.
Апробация работы. Основные материалы и положения диссертационной работы доложены и утверждены на межлабораторной конференции Института физиологически активных венеств РАН Спротокол НІ от 24 линя 1994 г.). Основные результаты исследования были также доложены на И Всесоюзном, симпозиуме.. "Иммунобмотехнология-91", Проблемы технологии производства иммунофермектных диагностикумов и их применение в здравоохранении САдлер, 1991 г.). I Российском съезде, иммунологов СНовосибирск, 1992 г.).
Публикации, По теме диссертации опубликовано 4 статьи, получен 1 патент.
Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введе
ния, обзора литературы, материалов и методов исследований, резуль
татов работы и их обсуждения С 7 глав), выводов и списка
литературы (102 источника). Работа содержит таблиц и
рисунков. Материалы измложены на страницах машинописного
текста.
