Содержание к диссертации
Стр.
Список сокращений 4
Введение 6
Глава 1. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОЬЗОР
Основные теории усиления инвазивности эндометриальнои гкани при эндометриозе 11
Значение экспериментальных моделей эндометриош в изучении мехами шов развития эктопического эндоме грия 27
Факгоры регуляции инвазивных свойств эндометриальнои ткани при
эндометриозе 31
Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Организация работы и объем исследований 37
Экспериментальная модель .лиометршш 37
Иммунологические методы исследования .* 38
Глава 3. ИЗМЕНЕНИЕ ИНВАЗИВНЫХ СВОЙСТВ ЭНДОМЕТРИАЛЬНОИ ТКАНИ В ДИНАМИКЕ РАЗВИТИЯ ОЧАГА ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОГО ЭНДОМЕТРИОЗА У КРЫС
3.1. Характеристика экспрессии адгезионных молекул и внутриклеточного синтеза IL-6 эндометриальными лимфоцитами и макрофаіами, ин-филырирующими очага экспериментального эндометриоза у
крыс 46
Глава 4. ИЗМЕНЕНИЕ ИНВАЗИВНЫХ СВОЙСТВ ЭНДОМЕТРИАЛЬНОИ ТКАНИ ПРИ НАРУЖНОМ ГЕНИТАЛЬНОМ ЭНДОМЕТРИОЗЕ У ЧЕЛОВЕКА
4.1. Характеристика экспрессии адгезионных молекул и внутриклеточно
го синтеза IL-6 лимфоцитами, макрофагами и стромальными клеіками
эутопического и эктопического эндометрия женщин с наружным гени-
тальным эндометриозом -*'
4.2. Характеристика экспрессии мРНК ММР-2, ТІМР-2 и TGF[3 в ткани
эутопического и эктопического эндометрия женщин с наружным іени-
тальными эндометриозом 58
Глава 5. ЦИТОКИНОВАЯ РЕГУЛЯЦИЯ ИНВАЗИВНЫХ СВОЙСТВ ЭНДОМЕТРИАЛЬНЫХ КЛЕТОК В ЭКСПЕРИМЕНТЕ IN VITRO
Цитокиновая регуляция экспрессии адгезионных молекул и внутриклеточного синтеза IL-6 лимфоциіами и макрофагами эуюпического эндометрия здоровых женщин и женщин с эндометриозом 62
Цитокиновая регуляция экспрессии мРНК ММР-2, ТІМР-2 и TGFp1 в эутопическом эндометрия здоровых женщин и женщин с наружным ге-
нитальным эндометриозом 68
ОБСУЖДЕНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ 72
ВЫВОДЫ 95
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ 97
СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМОЙ ЛИ ГЕРАТУРЫ П
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота
МНК - мононуклеарные клетки
мРНК - матричная рибонуклеиновая кислот
ПІ {Р - полимера шая цепная реакция
СН - супернатант
ФГА - фитогемагглютинин
CD - кластер дифферецировки
CSF - колониестимулирующий факюр
ELISA - иммуноферменгный анали *
FGF - фактор роста фибробластов
FITC - флюоресцеинизотиоцианат
GM-CSF - гранулоцитарно-макрофагальный колониестимулирующий фактор
роста
HGF - фактор роста гепатоцитов
HSP - белок теплового шока
IL - интерлейкин
МСР - макрофагальный хемотаксический протеин
MIF - миграцию ингибирующий фактор
МК. - мидкин
ММР - матриксная мегаллопротеиназа
МТ-ММР - энзим мембранного типа
PAI - ингибитор активаюра плазминоіена
PBS - фосфатный солевой буфер
PCR - полимеразная цепная реакция
РЕ - фикоэритрин
PPAR - рецепторы, активированные пролифератором периксисом
PTN - плейотрофин
PUP - прогестерон-индуцированный маточный протеин
RQ - коэффициент относительного количества
RT - обратная транскрипция
suPA - растворимые рецеиюр >рокиназного акіиваїора плазминоіена
1GF - трансформирующий фактор pocia
TIMP - тканевой ингибитор мегаллопрогеиназ
TNF - фактор некроза опухоли
tPA - іканевой активаюр плазминоіена
uPA - урокиназный активатор плазминогена
VEGF - васкулярно-зндоіелиальньїй факіор рос і а
Введение к работе
Актуальность темы исследования
Определение роли иммунных механизмов в развитии эктопической гкани является одной из самых актуальных задач клинической иммунолоіии. Расшифровка этих механизмов поможет уточнить многие аспекты трансплантологии и новообразований. К патологиям, связанным с ростом эктопической ткани, относится эндометриоз, характеризующийся ростом эндометриальнои ткани за пределами обычной локализации эндометрия, преимущественно в перитоне-альной полости (135, 152).
Несмотря на многолетние исследования, патогенез зндомеїриоза осіаеіся до конца не установленным (1,2, 10, 152). Важную роль в развитии эндомет-риоидных гетеротопий в последние годы отводят иммунным механизмам, действующим на уровне эндометрия (151). К настоящему времени получены данные, свидетельавующие о том, что существуюі особые механизмы, позволяющие эндометриальным клеткам женщин с эндометриоюм избегать иммунный надзор. К этим механизмам относят изменение антигенных свойств железистых и стромальных клеток эндометрия (151), изменение экспрессии разных классов белков теплового шока (110, 97). Большую роль в развитии ждомеї-риоза отводят повышенной способности эндометриальных клеток больных эн-дометриозом к пролиферации и инвазии (28, 40, 159). Для уючнения механизмов повышенной инвазивности эндометриальных клеток особый интерес имеет определение характера экспрессии интегриновых молекул и матриксных ме-таллопротеиназ в эндометрии при эндометриозе. Имеющиеся на сегодняшний день данные носят зачастую противоречивый характер (115, 151, 39, 43, 164) и не позволяют сделать однозначный вывод о роли этих факторов в патогенетических механизмах формирования эндометриоидных очагов.
Важную роль в изучении развития эктопического эндомсчрия играют экспериментальные модели эндометриоза. К настоящему времени разработан ряд моделей с использованием разных животных (мыши, кролики, крысы), ко-
торые позволили уточнить многие патофизиологические процессы, происходящие при формировании эндометриоидного очага (98, 147), что делаеі это модели перспективными в плане изучения иммунных основ развития эндометриоза. Использование экспериментальных моделей раскрьіваеі широкие возможное і и выявления динамики изменения факторов, определяющих высокую инвазив-ность клеток эндометрия, на разных стадиях развиїия жтопического эндометрия.
Известно, что в эктопическом эндометрии значительно меняется продукция целого ряда цитокинов и факторов рос га (151, 16, 50, 146). Однако динамика изменения продукции цитокинов на разных стадиях формирования эктопического эндометрия остается пока еще не изученной, нет данных о роли отдельных клеточных популяции в изменении цитокинового фона эктопического эндометрия и значении цигокинов в реіуляции инвазивных свойсів зндомеїри-альных клеток.
Таким образом, выявление иммунных механизмов, определяющих повышенную инвазивность эндометриальных клеток у человека и в экснеримен-іальной модели эндометриоза, существенно расшириї наши предсіавления о развитии эктопий в организме. Выявление факторов, регулирующих инвазив-ные свойства эндометрия, може і послужить основой для разработки новых подходов к лечению эндометриоза у человека. Цель работы:
С использованием экспериментальной модели усыновить новые имм>н-ные механизмы, определяющие усиление инвазивности эндометриальных клеток при формировании эктопического эндометрия, и выявить роль цитокинов в ее регуляции.
Задачи:
1. Определить характер экспрессии интегриновых молекул и внутриклеточного синтеза IL-6 эндометриальными лимфоцитами и макрофліами на разных стадиях развития очага экспериментального эндометриоза.
Оценить экспрессию интегриновых молекул, внутриклеточный синтез IL-6 и экспрессию генов ММР-2, TIMP-2 и TGFp в эу топическом и эктопическом эндометрии при эндометриозе у человека.
Установить роль цитокинов, продуцируемых инфильтрирующими очаг зндомеїриоза MI IK, в рефляции инваши зндомеїрил іьньїч к іеюк
Обосновать новые подходы к коррекции повышенной инвазивносги эн-дометриальных клеток при эндометриозе с использованием цигокинсо-держащих препаратов.
Научная новизна исследования
Впервые установлено, что в рост эктопического эндометрия у женщин с эндометриозом ассоциирован с усилением экспрессии CD49e на поверхности стромальных клеток эндометриоидного очага и с угнеіением экспрессии CD49e молекул лимфоцитами и макрофагами, инфильтрирующими ткань эутопиче-скоіо и эктопического зндомеїрия.
Впервые показано, что на ранних стадиях развития очага экспериментальною эндометриоза усиливается продукция IL-6 эндометриальными макрофагами, тогда как в сформировавшемся очаге зндомеїриоза усиление продукции IL-6 обусловлено активностью эндометриальных лимфоциюв.
Выявлено, что в основе повышенной инвазивности эндометрия при эндометриозе лежит нарушение баланса активности факторов, регулирующих процессы протеолиза в ткани, что проявляется доминированием дейсівия TIMP-2 на уровне эутопического эндометрия при зндомеїриозе и усилением активности ММР-2 в эндометриоидном очаге.
Показано, что развитие эктопического эндометрия сопровождается усилением продукции и рецепции TGFP в ткани эндометриоидного очаїа.
Установлено, что цитокины, продуцируемые мононуклеарными клетками, инфильтрирующими очаг эндометриоза, приводят к нарушению функционального состояния эндометриальных лимфоцитов здоровых женщин и усили-
вают экспрессию мРНК TGF(3 в эндометрии, тогда как естес і венный комплекс цитокинов, содержащихся в препарате «Суперлимф», нормализует экспрессию CD49e молекул и синтез IL-6 эндометриальными лимфоцитами и макрофаіами у пациенток с эндометриозом.
Практическая значимость работы.
Установлена роль цитокинов в регуляции инвазивных свойств ждомеї-рия у женщин с эндометриозом, что может послужить основой для разработки новых методов лечения зндомеїриоза с использованием цигокинсодержащих препаратов.
Основные положения, выносимые на защиту
Развитие и рост эктопического эндометрия связаны с нарушением экспрессии интегриновых молекул на поверхности стромальных и мононуклеар-ных клеток эндометрия и дисбалансом в продукции тканевых металлопрогеи-наз и их ингибиторов, что приводні к усилению инвазивных своисів зндомеї-рия.
Изменение инвазивных свойств эндометриальных клеток ассоциировано с изменением продукции и рецепции цитокинов в эутопическом и эктопическом эндометрии; восстановление естественного цитокинового фона приводит к нормализации параметров, определяющих инвазивный потенциал эндометрия. Реализация результатов работы.
Результаты диссертационной работы внедрены в практику гинекологической клиники ФГУ «Ивановский научно-исследоваїельский инсіигуі маїерин-ства и детства имени В.Н.Городкова Федеральною аіенісіва по зіравоочране-нию и социальному развитию».
Апробация работы.
Материалы диссертации доложены и обсуждены на Республиканской конференции «Иммунология репродукции» (Иваново, 2005), на научной конферен-
ции «Молодая наука - развиїию Ивановской области» (Иваново, 2005), на IX Всероссийском научном Форуме с международным участием имени академика В.И. Иоффе «Дни иммунологии в Санкт-Петербурге» (Санкт-Петербург, 2005), на VII Российском форуме «Мать и дитя» (Москва, 2005), на научно-практической конференции студентов и молодых ученых ИвГМА «Неделя науки - 2006» в рамках областного фестиваля «Молодая наука - развитию Ивановской области» (Иваново, 2006), на Российской научно-практической конференции «Современные технологии в иммунологии: иммунодиаі поетика и иммунотерапия» (Курск, 2006). Личное участие автора.
Самостоятельно проводилась работа с экспериментальными животными, выполнялись иммунологические исследования. Была проведена сисіематизация полученных результатов, их статисгическая обработка, описание полученных результатов. Публикации.
По теме диссертации опубликовано 8 печатных работ. Структура и объем работы.
Диссертация изложена на 116 сіраницах машинописною тексіа, содержит введение, обзор литературы, 3 главы собственных исследований, обсуждение полученных результатов, выводи и практические рекомендации. Библиографический указатель включает 11 отечественных и 153 иностранных источника. Работа иллюстрирована 17 таблицами и 6 рисунками.
