Содержание к диссертации
Введение
2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
2.1. Общие сведения об У-хромосоме человека . 5
2.2. Вариабельность У-хромосомы в норме и при патологаи 7
2.3. Линейная дифференцированность У-хромосомы II
2.4. Молекулярная организация У-хромосомы человека 18
2.5. Механизмы вариабельности длины У-хромосомы 22
3. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ
3.1. Объекты и материал исследования . 28
3.2. Приготовление и анализ мазков буккального эпителия 28
3.3. Культивирование лимфоцитов периферической крови и приготовление препаратов хромосом 30
3.4. Окрашивание хромосом 30
3.5. Фотосъемка и анализ фотоизображений хромосом 34
3.6. Статистическая обработка 41
4. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
4.1. Морфометрические характеристики У-хромосомы 44
4.I.I. Влияние возраста на линейные параметры У-хромосомы 54
4.2. Митотическая опирализация У-хромосомы 57
4.2.1. Индивидуальные особенности спирализации районов, составляющих У-хромосому 57
4.2.2. Зависимость показателей спирализации от стадии митоза 60
4.2.3. Возрастные особенности сокращения У-хромо-мосомы 70
4.2.4. Особенности моюфологии и митотической конденсации У-ХРОМОСОМ СО стоуктурными перестройками 73
4.3. Линейные параметры гетерохроматинового района У-хромосомы при юазных методах окрашивания 81
5. ОБСУЩЕНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ 87
6. БЫВЭДЫ И ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРВДИОШНИН 109
7. ЛИТЕРАТУРА 112
- Общие сведения об У-хромосоме человека .
- Приготовление и анализ мазков буккального эпителия
- Морфометрические характеристики У-хромосомы
- ОБСУЩЕНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ
Общие сведения об У-хромосоме человека
У-хромосома человека относится к группе малых акроцентриче-ских хромосом, в норме ее размеры несколько превышают размеры хромосом группы в , абсолютная длина в среднем составляет 2,8 мкм, относительная - 2,2$ от длины гаплоидного набора, цент-ромерный индекс равен 18% (Прокофьева-Бельговская, 1966) Она легко идентифицируется в наборе благодаря своеобразной морфологии: тесное прилегание сестринских хроматид длинного плеча, отсутствие спутников на коротком плече, нечеткое выявление первичной перетяжки, присутствие в некоторых случаях вторичной перетяжки в длинном плече (Захаров и др., 1982).
Характерной особенностью У-хромосомы человека является ее высокая морфологическая вариабельность. Длина ее может варьировать от менее чем 50$ до 200$ нормального размера. В популяции обнаруживается также широкий спектр перестроек этой хромосомы, причем некоторые из них (делеции, инверсии, транслокации) не оказывают влияния на ее функционирование, связанное с полоопределе-нием {Уіг&иг еі аЛ f 1931, Зіггьогй eLal, 1982).
У-хромосома человека несет полоопределяющие факторы, контролирующие процессы дифференциации гонад в тестикулы, созревание тестикул и сперматогенез. Предполагается наличие на У-хрсмосоме генов, ответственных за предупреждение развития синдрома Тернера, задержку созревания скелета, генов-активаторов соматического роста и роста зубов С ЫмкЯел. , 1980).
Приготовление и анализ мазков буккального эпителия
Соско б эпителия с внутренней стороны щеки производили металлическим шпателем, полученный материал помещали на предметное стекло и высушивали на воздухе или умеренным нагреванием. Окрашивание проводили по модифицированному методу Пирсона (Куликов, Бондарев, 1976) следующим образом: предметные стекла с мазками помещали на I мин в 100$ метанол и затем проводили через этанол понижающейся концентрации 96,70 и 30$ по 30 сек в каждом, после чего промывали в проточной воде и помещали в буфер Мак-йлвейна в (рН 6,8-7,0) на І2 мин и затем в краситель (0,005% растор про пилакрихиниприта) на 8 мин.
Морфометрические характеристики У-хромосомы
В обследованных контингентах были выявлены лица с различными вариантами У-хромосомы (рис.9). Морфометричеокие характеристики У-хромосомы и хромосомы 3 определены у 39 мужчин в возрасте от 18 дней до 5 лет, а также у девочки с синдромом Шерешевского-Тернера, имеющей дицентрическую У-хромосому. В изученную группу вошли 8 пар отец-сын (инд.4 и 5, 6,и 7, 14 и 9, 15 и 16, 25 и 26, 27 и 28, 30 и 31, 36 и 37), остальные в родственных отношениях не состоят.
Возраст, кариотип и диагноз тправления исследованных индивидов указаны в табл.6.
39 индивидов были разделены на 5 групп: 1-е У-хромосомой без флуоресцирующего района, меньшей или равной по размеру хромосомам группы j (5 человек), Н - с У-хромосомой, равной или большей хромосом группы & , но меньше хромосом группы F и с малым - блоком (6 человек); Ш - с У-хромосомой среднего размера, равной или больше хромосом группы F , но меньше хромосом группы Е (17 человек); W - с увеличенной У-хромосомой, примерно равной по величине хромосомам группы Е (6 человек); У - с очень большой У-хромосомой, равной хромосомам группы Ъ (5 человек).
Обсущение полученных результатов
Важной задачей при разработке количественных методов изучения вариабельнооти гетерохроматиновых районов является поиск подходящих реперов, хромосома или ее часть, используемые как индикатор спирализации, должны быть достаточно большими, чтобы уменьшать методические ошибки измерения и хорошо идентифицируемыми (dtdhrrvcLtvtv , 1982), однако, как отмечает этот автор, до настоящего времени "не сделано хороших попыток выбрать лучшие параметры".
При С-окраске в качестве реперов часто используют "эухрома тиновые" (то-есть слабоокрашивавщиеся) части хромосом, несущих
блоки структурного гетерохроматина {haAcei eJc с& , 1977;
btcbtrnxintb t 1982) или их тотальную длину (Леликова, Цветкова,
1976; Ььспхпьеі аЛ , 1980). Для эухроматиновой части длинного
плеча хромосомы I (la,-ft) оценен показатель ошибки сокращения среднее внутрипарных различий между гомологами в одной клетке, 6,2$ (dtcbtnuuirL , 1982). Очевидно, что "эухроматиновые"
районы других хромосом будут иметь еще большие ошибки, так как они имеют меньшие размеры.
Для измерений в узком интервале спирализации рекомендуют применять хромосому 2, поскольку, в отличие от хромосом I и 3, она не содержит вариабельных G- и Q -гетерохроматиновых блоков (Подугольникова, и др., 1979). Очевидно, однако, что для изучения закономерностей митотической конденсации гетерохроматиновых районов эта хромосома не может быть выбрана, так она плохо идентифицируется в слабо- и сильноспирализованных наборах. Кроме того, эта хромосома эволодионно состоит из двух акроцентриков, что не может не отражаться на стабильности ее морфометрических характеристик. Так, Норат с соавторами показали, что при средней отепени спирализации различия между всеми гомологами, как правило, не превышают ошибки измерения, за исключением гомологов хромосом I и 2, между которши часто обнаруживались статистически достоверные различия (Миїлаік eb аЛ 9 1972). Наши данные показывают, что внугрипарные различия гомологов хромосомы 3 в широком интервале спирализации составляют 5,4$ без различения гомологов и 1,9$ -при их различении, а флуоресцирующий блок не вносит существенного вклада в вариабельность ее длины. Поэтому мы считаем, что хромосома 3 отвечает всем требованиям, предъявляемым к реперам, и может быть рекомендована для использования в качестве таковой при различных методах окраски хромосом.
