Содержание к диссертации
Введение
ГЛАВА I. Обзор литературы 9
1.1.1. История открытия лимфом Бёркитта 9
1.1.2. Патоморфологическая характеристика лимфом Бёркитта 14
1.1.3. Клеточные линии лимфом Бёркитта 19
1.2. Апоптоз: процесс естественной гибели клеток 24
1.2.1. История открытия клеточной гибели 25
1.2.2. Морфология клеточной гибели 26
1.2.3. Молекулярные механизмы апоптоза 29
1.2.4. Удаление клеточных остатков 32
1.2.5. Типы клеточной гибели 34
1.2.6. Программируемая клеточная гибель в эволюционном аспекте 37
1.3. Апоптоз и РАК 40
1.3.1. Апоптотический парадокс раковых клеток 40
1.3.2. Устойчивость к апоптозу 42
ГЛАВА II. Материалы и методы 44
2.1. Клеточные линии 44
2.2. Молекулярно-цитогенетические методы 44
2.2.1. Мультиплексная Количественная Флуоресцентная Полимеразная Цепная Реакция 44
2.2.2. Приготовление препаратов митотических хромосом из опухолевых клеток 50
2.2.3. Спектральное Кариотипирование 51
2.2.4. Сравнительная Геномная Гибридизация 51
2.2.5. Флуоресцентная гибридизация in situ 57
2.2.6. Анализ конденсации клеточных ядер 58
2.3. Условия индукции апоптоза опухолевых клеток 58
2.4. Методы проточной цитометрии 59
2.4.1. Анализ содержания ДНК 59
2.4.2. Анализ активации каспазы -3 60
2.4.3. Анализ презентации фосфатидилсерина на поверхности клеток... 60
2.4.4. Анализ фронтального светорассеяния клеток 61
2.5. Методы работы с белками 61
2.5.1. Анализ энзиматической активности каспаз -3 и -7 61
2.5.2. Иммуноблоттинг (Вестерн-блот анализ) 62
2.6. Методы статистической обработки 64
ГЛАВА III. Результаты 65
3.1. Анализ полиморфных маркеров с помощью метода мультиплексной количественной флуоресцентной полимеразной цепной реакции (QF-ПЦР) 65
3.2. Получение полных кариотипов одиннадцати в-клеточных линий 68
3.2.1. Спектральное кариотипирование 68
3.2.2. Сравнительная геномная гибридизация 74
3.2.3. Флуоресцентная гибридизация in situ 79
3.3. Определение степени химиочувствительности одиннадцати в-клеточных линий 81
3.4. Определение характера воздействия на клетки экспериментального противоракового соединения - бетулиновой кислоты (БК) 85
3.4.1. Анализ презентации фосфатидилсерина на поверхности клеток одиннадцати В-клеточных линий 86
3.4.2. Анализ фронтального светорассеяния клеток одиннадцати В-клеточных линий 86
3.4.3. Анализ энзиматической активности каспаз -3 и-7 в клеточных лизатах одиннадцати В-клеточных линий 89
3.4.4. Анализ морфологических изменений клеточных ядер в одиннадцати В-клеточных линиях 96
3.5. Определение уровня экспрессии белков-ингибиторов апоптоза в одиннадцати в-клеточных линий 99
ГЛАВА IV. Обсуждение 102
4.1. Молекулярно-цитогенетические особенности одиннадцати в-клеточных линий 102
4.2. Устойчивость к апоптозу в одиннадцати в-клеточных линий 107
Выводы 111
Список литературы
- История открытия лимфом Бёркитта
- Мультиплексная Количественная Флуоресцентная Полимеразная Цепная Реакция
- Анализ полиморфных маркеров с помощью метода мультиплексной количественной флуоресцентной полимеразной цепной реакции (QF-ПЦР)
- Молекулярно-цитогенетические особенности одиннадцати в-клеточных линий
Введение к работе
Механизмы злокачественной трансформации и способы борьбы с раковыми клетками в течение длительного времени являются предметом активного изучения. В настоящий момент, когда известно, что широко используемые в лечении рака химиотерапевтические препараты действуют на опухолевые клетки через индукцию клеточной гибели (апоптоз), основные усилия исследователей сконцентрированы в области изучения молекулярных основ этого процесса (Herr and Debatin, 2001; Johnstone et al, 2002). Апоптоз является важным механизмом поддержания гомеостаза тканей в организме и нарушения в его реализации играют значительную роль в развитии раковых заболеваний и устойчивости опухолей к химиотерапии (Kroemer, 1997а).
Лимфома Бёркитта - это разновидность одного из распространённых раковых заболеваний, В-лимфомы, которая была описана в 50-е годы прошлого века (Burkitt, 1983). Заболевание очень быстро привлекло к себе интерес исследователей, и на его примере были решены многие проблемы в исследовании рака. Например, осуществлено лабораторное культивирование раковых клеток ге мато поэтического ряда, изучено влияние на развитие раковых заболеваний инфекции вирусом Эпштейна-Барр (EBV), разработан метод Q-окрашивания хромосом, описана одна из первых реципрокных транслокаций, характерных для ракового заболевания, - "Бёркитт транслокация" t(8;14), а также, описаны механизмы раковой трансформации, задействованные при этой транслокации (Epstein et al, 1966; Zech, 197Ї; Manolova et al, 1979). Основным материалом в исследованиях механизмов апоптоза и химиоустойчивости являются клеточные линии опухолей человека, так как их использование позволяет применять в отношении раковых клеток экспериментальные виды терапии. Многие клеточные линии лимфом Бёркитта культивируются с 1960-х годов и о них накоплено много разносторонней информации. Однако очень часто эта информация является устаревшей. Так, например, цитогенетическая характеристика этих клеточных линий была проведена с помощью G-окрашивания, в то время как сейчас исследователям стали доступны несравнимо более точные методы.
Кроме того, за прошедшие годы были обнаружены десятки новых белков, участвующих в апоптозе, информация о продукции которых отсутствует для многих линий, и гораздо более детально описаны сигнальные пути этого процесса (Debatin et al, 2002). Подробное исследование нарушений апоптотического аппарата и молекулярных основ химиоустойчивости клеточных линий опухолей человека позволит создать новые поколения противораковых препаратов, что приведёт к прогрессу в лечении раковых заболеваний. В частности, это предоставит возможность добиваться регрессии опухолей без хирургического вмешательства.
Целью настоящей работы являлось выявление новых хромосомных перестроек в линиях лимфом Бёркитта и изучение молекулярных механизмов развития устойчивости этих клеточных линий к апоптозу.
В исследовании были поставлены следующие задачи:
Повести кариотипирование 11-ти клеточных линий лимфом Бёркитта с помощью современных молекулярно-цитогенетических методов; мультиплексной количественной флуоресцентной ПНР (QF-ПЦР), спектрального кариотипирования (SKY), флуоресцентной гибридизации in situ (FISH) и сравнительной геномной гибридизации (CGH).
Определить степень химиоустойчивости используемых клеточных линий в ответ на стандартный апоптотический агент - этопозид.
Определить эффект от воздействия экспериментального химиотерапевтического агента - бетулиновой кислоты - на клетки лимфом Бёркитта.
Охарактеризовать уровень продукции белков-ингибиторов апоптоза (c-IAPl, C-IAP2, Survivin и XIAP) в используемых клеточных линиях.
История открытия лимфом Бёркитта
Денис Парсонс Бёркитт (рис. 1) родился в 1911 году в Эннискиллене (Enniskillen) в Северной Ирландии. Его отец был орнитологом и интересовался территориальной миграцией птиц, ему приписывают изобретение кольцевания птиц для изучения этого вопроса. Интерес к географическому распределению позднее был разделён и его сыном. После службы в медицинских частях во время Второй Мировой Войны Денис Бёркитт поступил на службу в Королевские Колониальные Части и был распределён в Уганду. В этой стране он провёл двадцать лет (с 1946 по 1966 годы) и именно там он проводил свои эпидемиологические исследования по выявлению географического распределения различных заболеваний в Центральной Африке. Самой Рис.1. Денис Парсонс Бёркитт 1911-1993 г.г. известной и вызвавшей наибольший интерес мировой науки стало исследование эпидемиологии и этиологии лимфосаркомы у детей Центральной Африки, в последствии названной «лимфомой Бёркитта» (Ellis, 1987; Story and Kritchevsky, 1994). Тем не менее, его первая научная статья была посвящена географическому распределению водянки головного мозга, где Бёркитт выделил его характерные особенности, которые в дальнейшем привели к обнаружению возбудителя - небольшого червя, передающегося с укусом комаров (Burkitt, 1983).
После десяти лет лечебной практики, в 1957 году, Денис Бёркитт столкнулся с пациентом, который страдал опухолями симметрично расположенными под его челюстями. Подобные опухоли уже встречались ему раньше, и Бёркитт знал, что их следует немедленно удалить, иначе пациент умрёт в течение нескольких месяцев, однако, такого симметричного расположения новообразований ему раньше видеть не приходилось. Несмотря на операцию, мальчик стремительно умер. Вскоре ему пришлось лечить ещё одного ребёнка со схожим расположением опухолей, но в этом случае по мере прогресса заболевания у пациентки появлялись новые опухоли и в других частях тела. После смерти второго пациента Денис Бёркитт провёл интенсивный анализ всех историй болезни с подобными новообразованиями. Он обнаружил, что такие опухоли были редки у детей до двух лет, пик встречаемости приходился на 6-8 лет, и опухоли практически не встречались у взрослого населения. Заинтересовавшись этим заболеванием, Бёркитт исследовал гистологические характеристики опухолей и, оказалось, что, несмотря на их локализацию в различных частях организма - челюстях, глазницах, брюшной полости - опухоли имеют одинаковую гистологическую структуру и состоят из лимфоидной ткани. После повторного обращения к историям болезней Денис Бёркитт убедился, что заболевание присутствует в регионе многие годы, и наибольшее количество больных с такими опухолями приходит с Севера и Востока Уганды, нежели чем с Юга и Запада страны. Это наблюдение подтолкнуло Бёркитта к дальнейшим эпидемиологическим исследованиям, он подготовил и разослал по всей Африке тысячу памяток о болезни с просьбой прислать ему подтверждение о встречаемости такого заболевания. Работа привела к идентификации «Пояса Лимфомы» («Lymphoma Belt»), представляющего собой зону встречаемости заболевания в пять миллионов квадратных миль, лежащую вдоль Экватора между 10 Северной и 10 Южной Широты (рис. 2а). Эти наблюдения были опубликованы в 1958 году, а уже в 1961 Денис Бёркитт давал лекцию в Миддлсекском Госпитале, на которой присутствовал молодой вирусолог Тони Эпштейн, который предположил, что такой характер географического распределения может быть обусловлен вирусной инфекцией, и учёные договорились о сотрудничестве (Birch, 1974; Burkitt, 1983; Epstein, 1985; Coakley, 1994).
Денис Бёркитт организовал «медицинское сафари» - путешествие длинной в 10 000 миль с целью более точно определить факторы внешней среды, обуславливающие развитие лимфом внутри определённого ранее пояса встречаемости. После тщательного анализа выяснилось, что на встречаемость опухолей оказывают влияние высота относительно уровня моря и климатические условия (рис, 26). Оказалось, что лимфома Бёркитта, например, является самым распространённым детским онкологическим заболеванием в Южной Нигерии, где количество осадков превышает 50 см в год, и этот вид опухолей очень редок в засушливой северной части страны (Burkitt, 1983; Parkin et aU 1985). Обнаружение таких закономерностей подтолкнуло Бёркитта и его коллег к сравнению карты осадков и карты распределения лимфом, что повлекло за собой высказывание предположения о наличии инициирующего агента, передающегося насекомыми (Burkitt, 1985; Parkin et al, 1985; Coakley, 1994).
Мультиплексная Количественная Флуоресцентная Полимеразная Цепная Реакция
По классификации Всемирной Организации Здравоохранения лимфома Бёркитта (БЛ) - это высоко агрессивная зрелая В-клеточная неоплазия, состоящая из эндемической (эБЛ), спорадической (сБЛ) и ассоциированной с вирусом иммунодефицита человека (HIV-БЛ) форм. Все эти варианты лимфомы Бёркитта схожи по многим морфологическим и иммунологическим характеристикам, их различия состоят в клинических и географических проявлениях (Wright, 1999). Так, эндемическая форма превалирует у детей экваториальной Африки и наиболее часто затрагивает челюсти и почки; спорадическая форма составляет 1-2% от всех лимфом в Восточной Европе и Америке и затрагивает в основном брюшную полость. Лимфома Бёркитта, ассоциированная с иммунодефицитом, возникает у больных ВИЧ в тех случаях, когда у них насчитывается достаточное количество ( 200 клеток/мкл) CD4 положительных лимфоцитов и так же затрагивает брюшную полость.
По гистологическим параметрам выделяют классическую и атипическую, или Бёркитт-подобную, формы лимфом Бёркитта. Для классической формы характерна монотонная пролиферация «примитивных» клеток 10-25 мкм в диаметре, которые имеют круглую или овальную форму ядер и от двух до пяти хорошо заметных базофильных нуклеолей. При небольшом увеличении микроскопа опухоли чрезвычайно мономорфны и демонстрируют характерную морфологию «звёздного неба». Такое описание связано с тем, что опухоли отличаются высоким пролиферативным индексом и, как следствие, частым апоптозом (гибелью) клеток, что привлекает множество макрофагов для фагоцитоза отмирающих клеток (рис. 3).
Для Бёркитт-подобных лимфом все цитологические и гистологические характеристики являются более размытыми и менее строгими. Однако, оба типа состоят из В-клеток, что подтверждается наличием соответствующих иммунологических и молекулярных маркеров - IgM, Bcl-6, CD 19, CD20, CD22, CD10, CD79a, Ki-67; а также отсутствием CD5, CD23 и TdT. Наличие Вс1-6 и CD 10 свидетельствует о центре происхождения опухоли, а отсутствие TdT позволяет отличить опухоль от острого лимфобластного лейкоза (Blum et al, 2004).
Одним из безусловных характеристик всех типов лимфом Бёркитта является наличие специфической транслокации между онкогеном с-Мус и различными цепями иммуноглобулинов (Shade at al, 1980; Berheim et al, 1983; Siebert et al, 1998). Различают три вида таких транслокаций: t(8;14)(q24;q32) с вовлечением энхансера гена тяжёлой цепи иммуноглобулина IgH, t(2;8)(pl2;q24) и t(8;22)(q24;ql 1) с вовлечением регуляторных областей генов лёгких цепей иммуноглобулина к и X, соответственно. Первой из этих трёх в клетках лимфом Бёркитта была описана транслокация t(8;14)(q24;q32), и она стала второй в истории транслокацией, ассоциированной со злокачественным заболеванием после описания в 1961 году «филадельфийской хромосомы» (Manolov and Manolova, 1972; Zech et al, 1976; Manolov et al, 1979; Zhang et al, 1982; Debernardi et al, 2004). Именно транслокация t(8;14)(q24;q32) является превалирующей по встречаемости среди лимфом Бёркитта и присутствует в 80% опухолей, остальные 20% несут либо транслокацию t(2;8), либо транслокацию t(8;22) (Bernheim et al, 1981; Rowley, 1983; Berger and Bernheim, 1985; Steel et al, 1985; Bagg et al, 1999; Hecht and Aster, 2000). Существует определенный полиморфизм в распределении точек разрыва этих транслокаций, но он не выходит за рамки цитогенетических бендов и описание остается неизменным (рис. 4). При этом выявляются некоторые нестрогие ассоциации точек разрыва с эпидемиологией лимфом Бёркитта. Так, для эндемической формы разрыв на восьмой хромосоме обычно происходит более чем за 100 т.п.о. вверх по течению от первой кодирующей области в локусе с-Мус, а на 14-ой хромосоме соединение участков происходит так, что промотор онкогена оказывается под влиянием Е[І энхансера. В то время как при спорадической лимфоме Бёркитта и HIV-БЛ точки разрыва происходят между экзонами 1 и 2 гена с-Мус и внутри переключательного элемента S гена IgH (Croce and Klein, 1985; Pearson and Rowley, 1985; Drexler et al, 1995; Siebert et al, 2001; Blum et al, 2004),
Анализ полиморфных маркеров с помощью метода мультиплексной количественной флуоресцентной полимеразной цепной реакции (QF-ПЦР)
В исследовании использовали 11 широко распространённых В-клеточных линий лимфом Бёркитта: Akata, BL-28, BL-41, Daudi, DG-75, Mutu I, Mutu III, Namalwa, Rael, Raji и Ramos. Кариотипирование представляет собой сложный и трудоёмкий процесс и, чтобы избежать включения в исследование контаминированных образцов, перед его началом нами был проведён анализ уникальности происхождения выбранных клеточных линий с помощью мультиплексной количественной флуоресцентной ПЦР (QF-ПЦР). С помощью этого экспресс-метода был проведен анализ пола двенадцати клеточных линий и получены генотипы по 17-ти маркерам (см. табл. 4). Принцип анализа и примеры электрофореграмм приведены на рис. 12. Полученные результаты полностью подтвердили данные оригинальных статей, где исследуемые линии упоминаются впервые (см. табл. 2). Десять клеточных линий: Akata, BL-28, BL-41, Daudi, DG-75, Jurkat, Namalwa, Rael, Raji и Ramos, не показали родственности генотипов, в то время как генотипы линий Mutu I и Mutu III, полученных от одного пациента, были идентичны. Также, в ходе анализа была исключена кросс-контаминация клеточных линий, включенных в исследование. Поскольку метод QF-ПЦР используется для диагностики анеуплоидных генетических аномалий в пренатальной диагностике, полученные результаты позволили нам сделать предположения и о возможных дополнительных копиях генетического материала в ряде образцов (см. табл. 5, рис. 12). Однако, метод QF-ПЦР впервые был нами использован для анализа опухолевых образцов, что требовало проверки данных цитогенетическими методами.
Одной из основополагающих характеристик клеточных линий является кариотип, поэтому, при появлении более точных молекулярно-цитогенетических методов, необходимо постоянно проводить дополнение уже имеющихся сведений. Для того чтобы установить полные кариотипы исследуемых линий, был использован целый ряд современных молекулярно-цитогенетических методов. Сначала клетки подвергли спектральному кариотипированию с целью определения структурных аберраций и численных аномалий. Затем была произведена сравнительная геномная гибридизация с целью установления более точных цитогенетических характеристик тех районов, где произошли изменения в балансе генетического материала. Для разрешения некоторых сложных структурных аберраций была проведена флуоресцентная in situ гибридизация (FISH) со специфичными пробами.
После окончательного отбора образцов клеточных линий было проведено их кариотипирование (SKY). SKY - это метод, который позволяет различать 22 аутосомы и половые хромосомы X и Y. Результаты спектрального кариотипирования позволили нам выявить 41 численную аномалию и 63 структурные аберрации, а также сложную клональную структуру некоторых клеточных линий, В том числе, среди структурных аберраций были выявлены 45 транслокаций, 8 делеций и 9 дупликаций, большинство из которых ранее не были описаны. Результаты проведённого анализа представлены на рисунке 13 и в таблице 6. Также, результаты спектрального кариотипирования репрезентативных клеток всех использованных линий приведены в приложении I (рис.1 - 11). Все клеточные линии несли специфичную для эндемических лимфом Беркитта транслокацию: t(8;14)(q24;q32) и хотя бы ещё одну дополнительную аберрацию. Общее число аберраций на кариотип клеточной линии варьировало от 2-х до 11-ти, при наибольшем их числе в кариотипе линии Namalwa.
Akata Был проведён анализ 31 метафазной пластинки, что позволило выявить следующие аберрации: -X, t(4;ll), +i(5)(pl0), t(8;14)(q24;q32), der(13)t(2;13), +der(13)t(13;20)x2, der(14;15)(ql0;ql0). Кроме этого были выявлены две клональные аберрации: t(3;22)(q29;ql 1) и der(15)t(15;18)(q22?;q23?). Кариотип репрезентативной клетки линии Akata представлен на рис. 1, прил. I.
BL-28 Был проведён анализ 20 метафазных пластинок, что позволило выявить следующие аберрации: t(8;14)(q24;q32) и +13. Кариотип репрезентативной клетки линии BL-28 представлен на рис. 2, прил. I.
BL-41 Был проведён анализ 19 метафазных пластинок, что позволило выявить следующие аберрации: der(2)t(2; 16), der(4)t(4;18), +der(7)t(4;7), der(8)t(8;10), t(8;14)(q24;q32), -10, dup(13), der(15)t(3;15), der(17)t(3;17), -18. Кариотип репрезентативной клетки линии BL-41 представлен на рис. 3, прил. I.
Daudi Был проведён анализ 30 метафазных пластинок, что позволило выявить следующие аберрации: +7 и t(8;l4)(q24;q32). Также была отмечена клональная аберрация: der(2)t(2;15). Кариотип репрезентативной клетки линии Daudi представлен на рис. 4, прил. I.
DG-75 Был проведён анализ 30 метафазных пластинок и выявлены две популяции клеток, несущие одинаковый набор структурных аберраций: der(4)t(4;18) и t(S; 14)(q24;q32), однако сублиния имела удвоенный набор хромосом (92,idemx2). Кариотип репрезентативной клетки линии DG-75 представлен на рис. 5, прил. I. MutuI Был проведён анализ 16 метафазных пластинок, что позволило выявить
Молекулярно-цитогенетические особенности одиннадцати в-клеточных линий
В данной работе мы провели обширную молекулярно-цитогенетическую характеристику 11 широко используемых В-клеточных линий, выделенных из эндемических лимфом Бёркитта. Нами были использованы современные цитогенетические методы - спектральное кариотипирование и сравнительная геномная гибридизация. Перед кариотипированием был так же проведен QF-ПЦР анализ для установления индивидуальности происхождения использованных линий. В целом, полученные результаты свидетельствуют о неожиданной кариотипической сложности и разнородности среди исследованных линий. Впервые был описан целый ряд скрытых аберраций, включая сбалансированные и не сбалансированные транслокации, делеции, дупликации и инсерции. Только использование комбинации современных молекулярно-цитогенетических методов позволило определить происхождение всех компонентов сложных аберраций.
Клеточные линии являются незаменимым инструментом в лабораторных исследованиях. Одним из важнейших условий использования клеточных линий является достаточная степень их соответствия предполагаемому объекту исследования (опухоли или ткани), а также несоизмеримая простота в обращении. Однако, применение клеточных линий сопровождает широко известная проблема кросс-контаминации последних. Используя ДНК-фингерпринтинг Дрекслер с коллегами (Drexler et al 2003) показал, что около 15-20% доступных на сегодня клеточных линий, выделенных из лейкемий и лимфом, являются контаминированными. В нашем исследовании мы использовали экспресс-метод QF-ПЦР, чтобы позволило подтвердить подлинность использованных нами линий и избежать включения контаминированных образцов в трудоёмкий процесс кариотипирования.
Развитие молекулярных методов идентификации хромосом человека началось с работ лаборатории Касперссона в 1970-е годы (Caspersson et al, 1970а; Caspersson et al, 19706). Именно в этой лаборатории был разработан метод Q-окрашивания - первый метод дифференциальной окраски хромосом (Caspersson et al, 1972). Ксаперссон и его коллеги верили в то, что в будущем станет возможным, благодаря уникальным флуоресцентным профилям, безошибочно различать все хромосомы человека. И вот, через 20 лет, в середине 1990-х годов, появился метод спектрального кариотипирования (Schrock et al, 1996). Использование спектрального кариотипирования (SKY) позволяет выявлять скрытые хромосомные аберрации в опухолях гематопоэтического ряда уже на протяжении восьми лет (Veldman et al, 1997). Этот метод широко используется при клинической диагностике острых детских лимфобластных лейкозов, так как способен выявлять прогностически важные аномалии, невыявляемые традиционными цитогенетическими методами, такими как G-окрашивание (Nordgren et al; 2001; Nordgren et al, 2002). Клеточные линии, использованные в данной работе, были выделены до изобретения молекулярно-цитогенетических методов и ранее полученные кариотипы этих линий были основаны на методе G-окрашивания (см. таблицу 2). Это объясняет тот факт, что многие сложные аберрации, такие как der(3;13;17) в линии Ramos или der(4;14;20) в линии Mutu III, не были отмечены в предыдущих исследованиях.
Сложность описанных нами кариотипов поднимает один из спорных вопросов в изучении клеточных линий - вопрос о стабильности их кариотипов. Предыдущие исследования показали, что, несмотря на десятилетия культивирования, клеточные линии могут оставаться стабильными при условии бесстрессовых условий культивирования (Macville et al, 1999). Но при стрессе, или ведении селективного отбора на устойчивость к антибиотикам, кариотип клеточной линии может значительно измениться (Knutsen et al, 2000; By lurid et al, 2004). В нашем исследовании так же имеется подтверждение этого факта. Кариотипы использованных нами линий Mutu I и Mutu HI, выделенных из одного пациента, значительно различаются. При выделении этих линий был применен отбор по признаку программы латентности вируса EBV, что, очевидно, оказало большое влияние на конституцию их кариотипов. Проведённая цитогенетическая характеристика линий Mutu I и Mutu III подтверждает возможность влияния экспрессии генов EBV на формирование кариотипа клетки. Недавно Кисе и коллеги (Kiss et al 2003), проводя эксперименты с линией Akata, доказали, что внедрение EBV генома приводит к активации экспрессии клеточного протоонкогена TCL-J, и высказали мнение о том, что это событие необходимо для развития фенотипа, характерного для лимфом Бёркитта. Совокупность этих наблюдений предполагает, что детальное сравнение линий Mutu I и Mutu III может выявить дополнительные сведения о влиянии EBV на клеточный рост и туморогенез лимфом Бёркитта.
Транслокации с вовлечением онкогена с-Мус являются цитогенетической «визитной карточкой» лимфом Бёркитта (Dalla-Favera et al, 1982; Taub et al, 1982), Одна из трёх таких транслокаций - транслокация t(8;14)(q24;q32) - была одним из первых хромосомных нарушений, найденных в раковых опухолях. После описания этой транслокации в лимфомах Бёркитта было выявлено несколько дополнительных характерных генетических событий, включая делеции 17р и мутации в гене р53 (Farrell et al, 1991; Gaidano et al, 1991), транслокации или мутации гена BCL6, расположенного на длинном плече хромосомы 3 (Baron et al, 1993; Capello et al, 1997). Несмотря на известную прогностическую значимость дупликаций длинного плеча хромосомы 1 (Douglass et al, 1980; Gurtsevitch et al, 1988; Kornblau et al, 1991; Zimonjic et al, 2001), в нашей работе только линия Namalwa несла данную аберрацию хромосомы I (локус Iql2-q25). Однако, нами были отмечены другие часто встречающиеся аберрации, включая трисомии хромосом 7 и 20, транслокации с вовлечением хромосом 3, 13 и 17. Все эти аберрации были ранее описаны в различных типах первичных опухолей и клеточных линий.
