Восстановление воспроизводительной функции у коров с персистентным желтым телом на фоне хламидиоза генитальной формы бионормализатором из плаценты Хохлов Андрей Викторович

Содержание к диссертации

Введение

1. Обзор литературы 10

1.1 Механизм нейрогуморальной регуляции половой цикличности 10

1.2 Факторы нарушения половой цикличности 18

1.3 Метаболические изменения в организме животных при функциональных нарушениях яичников 20

1.4 Биологические механизмы защиты организма при хламидиозе 22

1.5 Методы и средства восстановления половой цикличности 35

1.5.1 При персистентном желтом теле яичника 35

1.5.2 При хламидиозе генитальной формы 3 7

1.5.3 Биокорректоры 39

2. Материал и методы исследований 42

3. Результаты исследований 51

3.1 Эффективность применения ПДС при восстановлении половой цикличности у коров с персистентным желтым телом яичника на фоне хламидиоза генитальной формы 51

3.2 Динамика стероидных гормонов у коров с персистентным желтым телом при хламидиозе генитальной формы, после обработки ПДС и тилозином 200 56

3.3 Иммунотропные свойства ПДС при экспериментальном заражении крыс Chlamydia psittaci 58

3.4 Иммунобиологическая реактивность организма коров с персистентным желтым телом яичника при хламидиозе генитальной формы, после обработки ПДС и тилозином 200 69

3.5 Изменение белковых показателей сыворотки крови коров с персистентным желтым телом при хламидиозе генитальной формы, после обработки ПДС и тилозином 200 72

3.6 Гистоструктурные изменения в половых и иммунокомпетентных органах коров с персистентным желтым телом при хламидиозе генитальной формы, после обработки ПДС 74

3.7 Экономическая эффективность от применения ПДС при восстановлении половой цикличности у коров с персистентным желтым телом и генитальной формой хламидиоза 88

4. Заключение 89

5. Выводы 102

6. Практические предложения 105

Список литературы 106

• Механизм нейрогуморальной регуляции половой цикличности
• Биологические механизмы защиты организма при хламидиозе
• Иммунотропные свойства ПДС при экспериментальном заражении крыс Chlamydia psittaci
• Изменение белковых показателей сыворотки крови коров с персистентным желтым телом при хламидиозе генитальной формы, после обработки ПДС и тилозином 200

Введение к работе

воспроизводительной функции, снижение иммунологической реактивности животных (вторичный иммунодефицит) и различные метаболические изме-нения во всем организме. Наиболее сложно характер этих изменений проявляется при наличии у коров специфической инфекции половых органов -хламидиоза. Хламидийная инфекция, вызванная Chlamydia psittaci, в основном протекает в латентной форме и способствует нарушению половой цикличности, бесплодию, возникновению абортов, рождению слабого и нежизнеспособного приплода, эндометрита, вагинита, задержанию последа и возникновению другой акушерско-гинекологической патологии на фоне хлами-дийной инфекции.

Зараженные хламидиозом животные представляют реальную опасность для человека. Заражение, возможно, практически любым путем и у человека в последнее время установлена новая форма хламидийной инфекции - генерализованный хламидиоз зоонозной природы.

В настоящее время предложено немало методов и средств лечения больных животных с функциональными нарушениями яичников в виде персистентного желтого тела. Но все они, в основном базируются на использовании препаратов из группы простагландинов Фг-альфа, обладающих только

5 лютеолитическим эффектом и не затрагивают механизмов активизации им-мунореактивного ответа организма на изменение внутреннего гомеостаза. Вместе с тем, активизация эндокринно-иммунных связей, при возникновении дисфункции яичников на фоне хламидийной инфекции урогенитальной формы, является основным фактором способствующим восстановлению нейро-эндокринной регуляции половой цикличности и подавлению развития возбудителя хламидиоза.

В этом плане применение нового бионормализатора из плаценты - ПДС (плацента денатурированная суспендированная), относящегося к группе им-муномодуляторов, может в значительной мере повысить эффективность лечебно-профилактических мероприятий по снижению бесплодия и ликвидации яловости в молочном скотоводстве.

_, Цель и задачи исследования Целью работы является изучение эффективности и механизма действия бионормализатора из плаценты человека -ПДС, при коррекции эндокринно-иммунных связей у коров с персистентным желтым телом яичника на фоне хламидиоза генитальной формы.

Для реализации цели на разрешение были поставлены следующие задачи:

Определить динамику стероидных гормонов в крови подопытных животных после применения ПДС;

Исследовать биохимические изменения в крови, характеризующие уровень метаболизма в организме коров после обработки ПДС;

Изучить показатели естественной резистентности организма коров и
. иммунологическую реактивность на воздействие ПДС;

Определить гистоструктурные изменения в иммунокомпетентных и половых органах, отражающих их функциональное состояние после применения ПДС;

Изучить эффективность влияния ПДС на восстановление воспроизводительной функции коров и подавление развития хламидийного возбудителя;

Определить экономическую эффективность применения ПДС;

Научная новизна Впервые изучены эндокринно-иммунные механизмы влияния бионормализатора из плаценты человека - ПДС на коров с перси-стентным желтым телом яичника, имеющих генитальную форму хламидиоза.

Полученные результаты исследований существенно расширяют представления об эндокринно-иммунных реакциях организма самок при становлении половой цикличности и эффективности применения иммуномодуля-торов из плаценты для подавления развития возбудителя хламидиоза.

Теоретическая и практическая значимость На основании результатов исследований дано научное и практическое обоснование к применению ПДС в ветеринарной практике для восстановления воспроизводительной функции при функциональных нарушениях яичников и наличии хламидийной инфекции у бесплодных коров.

Предложенные производству способы ликвидации бесплодия, по причине персистентного желтого тела яичников на фоне хламидийной инфекции у коров, могут быть использованы в молочном скотоводстве в рамках проведения основных акушерско-гинекологических мероприятий.

Апробация работы Основные положения диссертационной работы доложены и обсуждены на ежегодных международных научно-производственных конференциях Белгородской ГСХА «Проблемы сельскохозяйственного производства на современном этапе и пути их решения» N6, 2002 и N7, 2003; международной научно- производственной конференции, посвященной 25-летию образования Белгородской государственной сельскохозяйственной академии, 2003; II международной научно-практической конференции «Научно-технический процесс в животноводстве России - ресурсосберегающие технологии производства безопасной продукции животноводства», п. Дубровицы, ВГНИИ животноводства, 2003; международной научно-практической конференции «Проблемы акушерско-гинекологической патологии и воспроизводства сельскохозяйственных животных» посвящен-

7 ной 100-летию А.П. Студенцова, Казань, 2003; международной научно-практической конференции «Роль и значение метода искусственного осеменения сельскохозяйственных животных в прогрессе животноводства XX и XXI веков», п. Дубровицы, ВГНИИ животноводства, 2004; XVI международной межвузовской научно-практической конференции «Новые фармакологические средства в ветеринарии», Санкт-Петербург, 2004 г.

Положения, выносимые на защиту

1. Характеристика уровня стероидных гормонов, активизирующих нейро-эндокринные реакции и формирующих иммунный ответ в организме бесплодных коров с хламидиозом генитальной формы.

2. Результаты исследований метаболических процессов, ответственных за функциональное состояние органов репродуктивной системы и показателей клеточного и гуморального иммунитетов, формирующих защитную реакцию организма при вторичном иммунодефиците.

3. Результаты гистоструктурных исследований органов репродуктивной и иммунной систем бесплодных коров, характеризующих уровень обменных процессов и отражающих степень подавления развития хламидийного возбудителя.

4. Новый способ индукции воспроизводительной функции коров при перси-стентном желтом теле яичника и лечения коров с хламидиозом путем использования бионормализатора ПДС.

Публикация

5. Хохлов А.В., Безбородое Н.В., Шитов Г.Г. Применение ПДС при инфекционных заболеваниях половых органов у коров/ Мат. VI междунар. науч.- произ. конф.: «Проблемы сельскохозяйственного производства на современном этапе и пути их решения». - Белгород, 2002. - Ч.І. — С. 123-124.

6. Хохлов А.В., Безбородов Н.В., Шитов Г.Г. Влияние ПДС на функцию пер-систентного желтого тела и стероидогенез у коров с хламидиозом и ИРТ/ Мат. VII междунар. науч.- произ. конф.: «Проблемы сельскохозяйствен-

8 ного производства на современном этапе и пути их решения». - Белгород, 2002.-Ч.І.-С. 154-155.

3. Хохлов А.В., Безбородов Н.В., Шитов Г.Г. Динамика стероидных гормонов у глубокостельных коров после обработки ПДС/ - Там же. - С. 155-156.

4. Хохлов А.В., Безбородов Н.В., Шитов Г.Г. Бионормализующее действие ПДС на коров с нарушенной половой цикличностью при хламидиозе / Научно-технический прогресс в животноводстве России - ресурсосберегающие технологии производства экологически безопасной продукции животноводства: Матер. II междунар. науч.-практ. конф. Ч.2.-Дубровицы, 29 сентября - 3 октября 2003 г.// ВНИИ животноводства, РУЭЦ. - Дуброви-цы, 2003.-С. 26-30.

5. Хохлов А.В., Безбородов Н.В., Шитов Г.Г. Влияние ПДС и тилозина 200 на уровень стероидных гормонов бесплодных коров с хламидиозом/ Мат. междунар. науч.-практ. конф. «Проблемы сельскохозяйственного производства на современном этапе и пути их решения», посвященной 25-летию образования Белгородской государственной сельскохозяйственной академии. - Белгород, 2003. -С. 56.

6. Хохлов А.В., Мусиенко Н.А., Безбородов Н.В. Гистоморфологические изменения в эндометрии и преддверии влагалища коров с хламидиозом и ИРТ после применения иммунномодулятора из плаценты/ Мат. междунар. науч.-практ. конф.: «Проблемы акушерско-гинекологической патологии и воспроизводства сельскохозяйственных животных», посвященной 100-летию АЛ. Студенцова. - Казань, 2003. - Ч. 2. - С. 186-190.

7. Хохлов А.В., Безбородов Н.В., Позднякова В.Н. Активизация иммунного ответа после применения ПДС на коровах с хламидиозом/ Мат. междунар. науч. - практ. конф.: «Роль и значение метода искусственного осеменения сельскохозяйственных животных в прогрессе животноводства XX и XXI веков». - Дубровицы: ВНИИ животноводства, 2004. - С. 241-243

8. Хохлов А.В., Безбородов Н.В., Позднякова В.Н. Формирование эндок-ринно-иммунного ответа при хламидиозе у коров после обработки ПДС/ Мат. междунар. межвузов, науч.-практ. конф.: «Новые фармакологические средства в ветеринарии». - Санкт-Петербург, 2004. - С. 92-93.

9. Хохлов А.В., Безбородов Н.В. Иммунологическая активность ПДС при хламидийной инфекции у крыс/ Мат. Всероссийской науч.-практ. конф. Посвященной 100-летию со дня рождения бывшего ректора, зав. кафедрой физиологии, академика, профессора Е.Н. Павловского, Казань, 1-2 окт.,2004. -Казань: КГАВМ им. Н.Э. Баумана,2004.

10. Хохлов А.В., Безбородов Н.В., Мусиенко Н.А. Гистоморфологические изменения в органах бесплодных коров при хламидиозе после обработки ПДС/ Мат. межд. науч.-практ. конф.: «Актуальные проблемы эпизоотологии на современном этапе», Санкт-Петербург, 16-19 ноября, 2004. -СПб.: СПбГАВМ, 2004. - С. 140-141.

10 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Механизм нейрогуморальной регуляции половой цикличности

Половой цикл - сложный нейрогуморальний рефлекторный процесс, сопровождающийся комплексом физиологических и морфологических изменений в половых органах и во всем организме самки от одной стадии возбуждения до другой [22,149]. В норме периодичность полового цикла коров в среднем составляет 21 сутки, но может колебаться от 18 до 23 суток [119]. У коров с удоем свыше 15 кг в сутки продолжительность полового цикла равняется 26-28 суткам [9].

Различают последовательно сменяющиеся три стадии полового цикла: возбуждения, торможения и уравновешивания.

Стадия возбуждения включает в себя следующие четыре физиологических процесса-феномена: течка, половое возбуждение, половая охота, овуляция [66].

Течка - характеризуется ярко выраженными пролиферативными процессами в половых органах, сопровождающимися разрастанием и увеличением секреторной функции желез слизистых оболочек яйцепроводов, матки, преддверия влагалища с выделением слизи из половых путей и раскрытием канала шейки матки.

Половое возбуждение - проявляется беспокойством, уменьшением аппетита, снижением молочной продуктивности самки, вспрыгиванием на нее других самок, но при этом самка самца не допускает. Данное поведение связывается с увеличением уровня эстрогенов в крови, что в дальнейшем ведет к возникновению половой охоты [22].

Половая охота - сексуальная реакция самки на самца, проявляющаяся в готовности самки к спариванию. Самка стремится приблизиться к самцу, принимает позу для спаривания. В среднем половая охота длится 12-18ч.

Овуляция - процесс разрыва созревшего фолликула и выхода его содержимого вместе с яйцеклеткой. Происходит через 10-15 ч после завершения половой охоты, чаще рано утром [119].

Центром регуляции половой цикличности служит гипоталамо-гипофизарная система, которая, в свою очередь, находится под постоянным влиянием факторов внешней среды, из которых наибольшее значение имеют количество и качество кормов, условия содержания и др. [106].

Гипоталамус расположен в передней части промежуточного мозга под зрительным бугром и состоит из ряда клеточных ассоциаций (гипоталамиче-ских ядер). Он воплотил в себе центр многих регуляторных процессов - от простых автономных рефлексов до сложных поведенческих актов.

Гипофиз находится в турецком седле задней клиновидной кости черепа. Представляет объединение трех долей - передняя (аденогипофиз), средняя и задняя (нейрогипофиз), являющиеся отдельными эндокринными образованиями.

Гипоталамус с задней долей имеет нервную связь, а с аденогипофизом -сосудистую (портальная система гипофиза) [6]. В перикариотах нейросекре-торных нейронов преоптической области гипоталамуса синтезируется ней-ропептид люлиберин (гонадолиберин) или так называемый гонадотропин-рилизинг-гормон [30]. Данный нейропептид по аксонам нейросекреторных клеток гипоталамуса попадает в первичную капиллярную сеть срединного возвышения гипоталамуса. Затем вместе с кровью капиллярной сети поступает в портальную венную систему, идущую по гипофизарной ножке в аденогипофиз, где, переходя во вторичную капиллярную сеть, стимулирует его эндокринные клетки (гонадотрофы) к синтезу и секреции гонадотропинов (фолликулостимулирующий гормон - ФСГ и лютеинизирующий гормон -ЛГ) [30, 106, 156].

Исследованиями установлено, что существует два типа гонадотропинов: циклические и тонические, находящиеся под контролем гипоталамуса [119]. Центр тонической секреции гонадолиберина (аркуатная область) включен в

12 систему регуляции постоянно, функция которого заключается в обеспечении достаточного синтеза гонадотропинов, необходимых для контроля роста фолликулов и оптимальной секреции эстрогенов. Центр циклической регуляции (преоптическая область) включается на стадии созревания фолликулов, когда уровень продукции эстрогенных гормонов приближается к максимуму [108].

ФСГ - активирует и стимулирует рост фолликулов, овуляцию, развитие желтого тела, синтез прогестерона и андрогенов [21, 119]. При этом ФСГ действует специфически только в присутствии определенного количества ЛГ и, наоборот, ЛГ - в присутствии ФСГ [106].

Под действием пролактолиберина, образующемся в гипоталамусе, в аденогипофизе синтезируется и пролактин, основная роль которого состоит в поддержании функции желтого тела, ускорении роста и развития молочной железы, усилении ее функции после родов [30].

Отмечено, что нейрогипофиз не является эндокринной железой, так как нонапептидные гормоны вазопресин и окситоцин синтезируются в супраоп-тических и паравентрикулярных ядрах гипоталамуса. По аксонам гипотала-мо-гипофизарного пучка, берущих начало в выше указанных ядрах, они поступают в нейрогипофиз, где депонируются и через аксоно-вазальные синапсы секретируются в кровь.

Биологическое действие вазопрессина связано с антидиуретическим и сосудосуживающим эффектами; окситоцина - со стимуляцией сокращений миометрия и миоэпителия молочных желез [21, 156].

Нонапептидные гормоны на уровне ЦНС изменяют характер обмена моноаминов, тормозят секрецию люлиберина; на уровне аденогипофиза увеличивают чувствительность гонадотрофоцитов к люлиберину, стимулируют секрецию адренокортикотропного гормона и пролактина; на уровне половых желез - активизируют метаболические, эндокринные и генеративные функции фолликулов яичников [139].

Функция гипоталамуса, в свою очередь, находится под контролем моно-аминоэргических нейронов, вырабатывающих нейромедиаторы: катехолами-ны (норадреналин, дофамин) и индоламины (серотонин). Их роль заключается, соответственно, в возбуждении или торможении функциональной активности пептидэргических нейронов, продуцирующих гонадотропин-релизинг-гормон [106]. Следовательно, нервные импульсы, возникающие в ответ на внешние раздражители и поступающие через зрительный, слуховой, обонятельный и тактильный анализаторы в подкорковые центры и кору головного мозга через адренергические системы, контролируют гипоталамо-гипофизарно-гонадальный гормонопоэз [108, 192, 9]. Исследованиями установлено, что вызванные изменения норадреналином в гипоталамусе связаны с образованием цАМФ в преоптической области, усиливающей синтез либе-ринов [194].

Определенное место в регуляции механизмов гипоталамо-гипофизарной системы со стороны ЦНС отводится опиоидным пептидам: энкефалинам, эн-дорфинам и динорфинам, которые, локализуясь в нервных окончаниях, участвуют в передаче нервных импульсов в качестве нейромедиаторов.

Установлена 3-х ступенчатая периодичность роста фолликулов яичников в течение полового цикла, продолжительностью 7 дней [106]. Однако Saumande J. утверждает, что не существует особых периодов для образования фолликулов, их рост наблюдается как в начале цикла, так и за 10 дней до эст-руса [234]. Начальные стадии роста фолликулов, в отличие от стадии формирования полости, протекают очень медленно [197]. В этот период рецепторы фолликулярных клеток наиболее чувствительны к ФСГ, чем к ЛГ [170].

Примордиальные фолликулы яичников, заложенные еще при внутриутробном развитии, под действием ФСГ начинают интенсивный рост и превращаются во вторичные [119]. Согласно же точки зрения Черемисинова А.Г., первичные фолликулы образуются на протяжении всей жизни самки [169]. В этот период появляется доминантный фолликул - один из фолликулов, опережающий в росте другие. В составе его оболочки различают внут-

14 реннюю часть - theca interna, которая образована синтезирующими андрогены интерстициальными клетками, и наружную часть - theca externa, образованную соединительной тканью. ЛГ стимулирует синтез ароматазы в грану-лезе [30]. Андрогены из theca через базальную мембрану диффундируют вглубь фолликула в клетки гранулезы, где конвертируются при помощи ароматазы в эстрогены [119, 198, 237]. Активная инициация синтеза эстра-диола начинается в фолликулах диаметром 3,5 мм [80]. Как известно, эстрогены обеспечивают развитие и проявление у самок вторичных половых признаков, оптимальные условия для оплодотворения, подготовку матки для имплантации [83]. Эстроген доминирующего фолликула тормозит развитие других крупных и появление мелких фолликулов [36]. По мере созревания фолликулов происходит увеличение синтеза эстрогенов и снижение уровня андрогенов. Соотношение этих двух половых стероидов определяет дальнейшую судьбу фолликула: преобладание андрогенов приводит к атрезии, а эстрогенов - к дальнейшему росту [170].

Увеличение эстрадиола в крови усиливает секрецию ЛГ в аденогипофизе и подавляет секрецию ФСГ. Считают, что при низком содержании эстрогенов гонадолиберин стимулирует клетки, синтезирующие ФСГ, а при высоком - клетки, синтезирующие ЛГ [30].

По мере роста, вторичный фолликул превращается в третичный (преову-ляторный, граафов пузырек, который начинает быстро расти за счет нахождения жидкости в его полости [22]. Параллельно в связи с увеличением диаметра фолликула возрастает уровень эстрадиола-17 р в фолликулярной жидкости [240]. Транспорт жидкости в полость фолликула стимулирует ФСГ [30], а его синергизм с эстрогенами повышает чувствительность рецепторов фолликулярных клеток к ЛГ [30, 170]. Резкое увеличение эстрогенов в фолликулярной жидкости и эстрадиола -17 J3 в сыворотке крови является физиологическим механизмом запуска преовуляторного выброса ЛГ [191, 193].

Установлено, что максимальная концентрация эстрогенов достигается за 24-48 часов до овуляции. Преовуляторный пик эстрадиола, влияя на преоп-

15 тическую область гипоталамуса, активизирует синтез и циклический выброс гонадолиберина. Эта реакция проявляется в течение 12-24 ч. Одновременно эстрогенные гормоны, по принципу обратной связи, повышают чувствительность аденогипофиза к люлиберину. Ответная его реакция проявляется резким увеличением секреции ЛГ [106]. Максимальное его содержание в крови наблюдается через 3-6 часов после начала охоты [149]. Предовуляторный выброс ЛГ стимулирует лютеинизацию фолликулярных клеток и синтез прогестерона [30]; обеспечивает дозревание фолликула и овуляцию через активизацию пролиферативных процессов в их соединительно-тканной оболочке, синтез андрогенов и простагландинов; снимает блок мейоза с половой клетки, обеспечивая ее созревание [108]. Отмечено, что синтез и секреция прогестерона зависит от гормональных и клеточных изменений на фолликулярном уровне и периода образования желтого тела.

В овулировавшем фолликуле клетки зернистого слоя и внутренней оболочки под воздействием ЛГ усиленно размножаются и превращаются в лю-теиновые, образуя желтое тело. Резко увеличивается их кровоснабжение и интенсивность биосинтеза стероидов (прогестерона из холестерина половых желез) [179,237].

Желтое тело полового цикла формируется в яичнике на 3-5 сутки после овуляции и достигает своего максимального расцвета к 10-12 суткам.

Регуляция синтеза прогестерона в желтом теле осуществляется системой Са²⁺-полифосфоинозитолпротеинкиназа С и системой ЛГ - цАМФ. Синтез прогестерона в мелких лютеоцитах, развивающихся из теки, регулируется преимущественно системой цАМФ [204].

Стимулированный лютропином стероидогенез регулируется и кортико-стероидами на уровне рецепторов лютропина, образования цАМФ и расщепления боковой цепи холестерина [240]. Спонтанная же секреция прогестерона, по данным Rossmanith Winfrid, не зависит от гонадотропинов, но усиливается ими [179]

На 4-6 день после овуляции концентрация прогестерона в сыворотке крови повышается до 2,25-6,73 пг/мл. Максимальная его выработка происходит с 8-го по 14-й день полового цикла [149]. Уровень эстрадиола —17(3 снижается до 7,67 пг/мл [58].

Прогестерон - гормон желтого тела, подготавливает матку к имплантации зиготы и поддерживает беременность; являясь антагонистом эстрогенов, препятствует пролиферации эндометрия, образованию простагландинов и окситоцина [170]; стимулирует секрецию маточных желез для питания зародыша; является противотоксикозным гормоном в сохранении беременности [33]. Воздействуя на переднюю долю гипофиза, прогестерон тормозит выработку ФСГ, а значит и созревание новых фолликулов [149]. Наличие прогес-тероновых рецепторов в клетках фолликулов свидетельствует о внутрифол-ликулярной роли прогестерона, а рецепторы, расположенные в поверхностных клетках стромы, говорят о его влиянии на примордиальные фолликулы [33].

Прогестерон угнетает продукцию простагландинов эндометрием, стимулируя синтез 15-окси-ПГ-дегидрогеназы - фермента, катаболизирующего продукцию простагландинов. При наступлении беременности уровень данного фермента сохраняется высоким на всем ее протяжении [211], вызывает снижение рецепторов эстрадиола в матке [187], уменьшает время жизни мРНК лютропина, что приводит к подавлению овуляции [187].

Кратковременное снижение продукции прогестерона на 13 день после эструса рассматривается, как один из физиологических механизмов гипота-ламо-гипофизарной регуляции функции яичников [120]. Прогестерон стимулирует освобождение гонадотропинов через общий механизм, вовлекающий освобождение гонадотропин-рилизинг-гормона [184]. Высокий его уровень по принципу обратной связи подавляет выделение ЛГ, а по типу положительной связи стимулирует секрецию ФСГ, что активизирует процесс роста фолликулов, повышение уровня эстрадиола и продукцию простагландинов маткой. Это приводит к снижению гормональной активности и лизису желто-

17 го тела [106, 170]. Резкое снижение концентрации прогестерона наблюдается за 3-4 дня до наступления половой охоты [202], при этом главным действующим фактором рассасывания желтого тела является простагландин F2_a -биологически активное соединение, продуцируемое клетками (железами) слизистой эндометрия матки [170].

Гормональные взаимодействия, контролирующие начало и развитие лю-теолиза желтого тела, включают эндокринные и паракринные сигналы, связывающие желтое тело, матку и заднюю долю гипофиза. Три гормона - прогестерон, эстрадиол и окситоцин взаимодействуют для регуляции секреции маткой простагландина F_2a [238]. После 12-го дня полового цикла увеличивается чувствительность эндометрия к прогестерону и эстрадиолу, что вызывает появление первых повышений концентрации простагландина F2_a [221]. Сильным стимулом его выделения маткой является окситоцин [196].

Выделение простагландина F2_a осуществляется пульсообразно в течение 2-3 суток, а рассасывание желтого тела происходит за 1-2 суток от начала его выделения [149]. В конце лютеальной стадии появляется 5-6 пульсирующих выделений простагландина F2_a, приводящих к уменьшению продукции прогестерона и регрессии желтого тела. Данная секреция управляется выбросом окситоцина крупными клетками желтого тела, который воспринимается рецепторами эпителиальных клеток эндометрия. Количество рецепторов окситоцина регулируется взаимодействием эстрадиола-17 |3 и прогестерона. Простагландин F2«, вступая в обратную положительную связь с окситоцином, вызывает его пульсообразную секрецию, что приводит к лютеолизу желтого тела [228].

Определенное влияние на синтез простагландина F_2a оказывают адрено-реактивные структуры. На крысах установлено, что стимуляция бета - или блокада альфа-адренорецепторов угнетает биосинтез и высвобождение простагландина F2a, а активация альфа или блокада бета-адренорецепторов усиливают эти процессы [131].

18 Регрессия желтого тела и созревание фолликулов сопровождается увеличением концентрации эстрадиола-17р до 83,65 пг/мл и снижением уровня прогестерона до 0,22 пг/мл [58]. Лютеолиз характеризуется накоплением макрофагов в желтом теле, что представляет реакцию, присущую воспалительному процессу [182]. Отмечено, что циторецепторная чувствительность яичников к препаратам простагландина отмечается в промежутке между 6-16 днями после овуляции, то есть при наличии функционально- активного желтого тела. Применение их в течение 4 дней после овуляции не вызывает лизиса желтого тела [118]. Впоследствии при оплодотворении чувствительность эндометрия к нервным импульсам снижается и в нем не происходит выработки простагландина F_2a. Желтое тело не рассасывается, продолжая выделять в кровь большое количество прогестерона [149]. Это связано с белком, синтезируемым трофобластом в начале беременности, который либо уменьшает количество секретируемого маткой простагландина, либо нарушает профиль его выброса [228].

1.2. Факторы нарушения половой цикличности

В настоящее время бесплодие высокопродуктивных молочных коров наносит племенным хозяйствам значительный экономический ущерб и не дает возможности увеличения поголовья коров для расширения воспроизводства [121].

Нарушения технологий, ведущие к бесплодию, чрезвычайно разнообразны. Высокие концентрации животных на ограниченных площадях; нарушения условий содержания и кормления; несбалансированность рационов; недостаток активного моциона, воздухообмена и солнечной инсоляции; продолжительная лактация и стрессовые состояния в результате неблагоприятных факторов внешней среды приводят к изменению обмена веществ, что обуславливает нарушение функций нервной и эндокринной систем, понижение естественной резистентности организма и функциональной активности яичников. В итоге у коров в течение длительного времени не проявляются

19
клинически выраженные признаки эструса, увеличивается количество жи
вотных с патологией репродуктивных органов [24, 125, 155, 235]. Наблюда
ется рост специфических половых инфекций [64, 98]. По данным исследова
ний, нарушение функции яичников высокопродуктивных коров составляет
79,07% от гинекологически больных [121, 62]. '

Одной из наиболее распространенных дисфункций яичников является персистентное желтое тело. Частота его распространения составляет 0,73% [213], 4,34% [121], 19,6 - 32,2% [167] и даже 58,4% [41].

В 4,4 - 19,3% случаев персистентное желтое тело яичников сочетается с атонией матки, в 5,3 - 19,3% - с субинволюцией матки и в 5,2 - 13,7% - с эндометритами [167].

Персистентное желтое тело - функциональное нарушение лютеолитиче-ского механизма нейро-эндокринной системы, вызванного клинической и субклинической патологией гениталий, приводящего к удлинению времени функционирования желтого тела в яичнике [137]. Доказано, что персестиро-вать может только желтое тело беременности [44]. У беременных животных желтое тело рассасывается за 2-3 недели до родов, а те, которые не регрессируют в конце беременности, подвергаются длительной персистенции в яичнике [39, 43].

Устанавливают персистентное желтое тело в яичниках коров после ро- . дов на 25-30 сутки или в течение такого же промежутка времени после неплодотворного осеменения, а также в более отдаленные сроки [20]. Встречается только у бесплодных коров, так как оно не претерпевает инволюции и продолжает функционировать за пределами физиологической нормы. Значительно чаще регистрируется в зимнестойловый период содержания, в сравнении с летним [121].

Главной причиной возникновения персистентного желтого тела являются патологические процессы, протекающие в матке [20, 35, 161, 218]. Наиболее распространенными из них считаются метриты: в 46,7% случаев острые и в 33,3% - хронические [161], а также субинволюция матки [17].

20 По данным Грига Э.Н. задержанию желтого тела беременности способствует: стойловое содержание маточного поголовья, отсутствие активного

0 мациона, однообразное неполноценное кормление, особенно несбалансированность рационов по каротину. А основной причиной патологических родов и послеродовых осложнений (задержание последа, эндометриты, субинволюция матки) является наличие персистентного желтого тела в яичнике [40, 42]. Проявляется персистентное желтое тело длительной анафродизией или неполноценными половыми циклами [20]. Один из яичников приобретает неправильную форму: треугольную, грушевидную или гантелеобразную, где желтое тело занимает 2/3 яичника [119] и имеет мягкую тестовидную консистенцию [171].

1.3. Метаболические изменения в организме животных при функциональных нарушениях яичников

Все без исключения патологические состояния в организме животных и человека являются следствием нарушения метаболизма между окружающей средой и клеткой [175].

Различают гипер- и гипофункциональные типы персистентных желтых тел в яичниках. Диагностируемые пальпаторно персистентные желтые тела у 44% коров гормонально неактивны, но в то же время они препятствуют росту фолликулов и его овуляции [141]. При гормональной активности их уровень прогестерона в плазме крови составляет более 2 нг /мл [36].

При субинволюции и послеродовом воспалении матки в эндометрии нарушается выработка лютеолитического фактора - простагландина-Р_2ог, вследствие чего регрессия желтого тела не наступает. Иногда выделение его недостаточно и тогда желтое тело частично продолжает функционировать [149].

В функциональном отношении между персистентным и циклическим желтым телом нет различий в физиологическом влиянии их на организм животных. В яичниках, при наличии персистентного желтого тела, одновремен-

21 но содержатся и развиваются фолликулы, вплоть до зрелых граафовых пузырьков, однако овуляции при этом не происходит [44]. Выделяемый задержавшимся желтым телом прогестерон тормозит функцию гипоталамуса, а значит и гипофиза, в отношении выработки фолликулостимулирующего и, главным образом, лютеинизирующего гормонов, от которого зависит наступление овуляции [45].

При неполном прекращении функции желтого тела запаздывает пик выделения эстрогенов созревающим фолликулом. В результате происходит снижение или запаздывание выброса в кровь гонадотропин-рилизинг-гормона. Вследствие этого нарушается выброс лютеинизирующего гормона, что приводит к отсутствию овуляции или ее запаздыванию [149].

Отмечено, что увеличение срока существования персистентного желтого тела от 45 до 120 дней после отела ведет к повышению в крови уровня эстра-диола в 4,1 раза и снижению тестостерона и метаболита простагландина F2_Q, соответственно, в 2,4 и 1,6 раза [61]. В моче также обнаруживают значительное количество эстрадиола и эстриола [142].

При гистологическом исследовании различают два типа персистентных желтых тел. У одних они состоят в основном из крупных лютеиновых клеток с темной эозинофильной цитоплазмой, которая вакуолизирована. Клетки располагаются неравномерно в центре желтого тела и встречаются группы клеток с пикнотизированными ядрами и темной эозинофильной цитоплазмой. Тека-лютеиновых клеток в этих участках относительно много. У других лютеиновые клетки сморщены и вокруг них образуются полости. Тека-лютеиновые клетки содержат капли жира. Более активным считается перси-стентное желтое тело с малоизмененными лютеиновыми клетками или хорошо сохранившимися тека-лютеиновыми клетками, чем со сморщенными лютеиновыми клетками [140].

Задержка лютеальной функции яичников у коров после родов отрицательно сказывается на процессах инволюции половых органов [97]. При функционирующих персистентных желтых телах яичников гистологически в

22 матке выявляют гиперплазию слизистой оболочки, гиперемию и отек стро-мы, лимфоцитарную, гистиоцитарную и частично гранулоцитарную инфильтрацию, большое количество желез с резко выраженными признаками секреции [107]. Повышенный уровень прогестерона способствует появлению в эндометрии зон так называемого эктопического эпителия, клетки которого наиболее чувствительны к хламидийному возбудителю [93].

1.4. Биологические механизмы защиты организма при хламидиозе

В последние годы особую опасность приобрели такие малоизученные генитальные инфекции, как хламидиоз, микоплазмоз и реккетсиозы, которые имеют тенденцию к распространению. Хламидиозы являются типичными половыми инфекциями [98]. Значительно распространены почти во всех странах мира, занимающихся животноводством [64, 84], в особенности скотоводством и овцеводством [77].

Хламидиоз относится к контагиозным заболеваниям животных и человека, вызываемых хламидиями, сопровождающихся разнообразными по клиническому и патологическому проявлению признаками - от сепсиса до аборта, от энтерита, пневмонии до энцефалита и менингита, от конъюнктивита до артрита [59, 204, 205].

В настоящее время известно четыре вида хламидий: Chlamydia psittaci, Chi. trachomatis, Chi. pneumoniae, Chi. pecorum. У животных выделяют два вида хламидий: СЫ. psittaci и Chi. pecorum [93, 109].

Хламидий являются облигатными внутриклеточными грамотрицатель-ными паразитами. По структуре и химическому составу близки к бактериям, однако, они не обладают многими метаболическими механизмами необходимыми для самостоятельного существования. К бактериальным характеристикам хламидийной клетки относятся: морфологические признаки, присущий феномен деления вегетативных форм, наличие клеточной стенки, содержание в клетке ДНК и РНК, характер энзиматической активности, чувствитель-

23 ность к ряду антибиотиков широкого спектра действия, наличие общего ро-доспецифического антигена [53].

Хламидийная инфекция обладает тропизмом к клеткам цилиндрического эпителия слизистых оболочек. Chi. psittaci, в отличии от других видов, не обладает хозяиноспецифичностью [59]. Адаптируется к различным органам и тканям [101]. Некоторые штаммы хламидий обладают селективным тропизмом к определенным клеткам ЦНС [185].

Особенностями хламидий является энергозависимый от хозяина паразитизм и уникальный внутриклеточный цикл развития [126].

В клетках хозяина хламидий образуют цитоплазматические включения, представляющие собой популяцию микроорганизма, состоящую из трех форм микробных клеток: элементарные тельца (ЭТ) - инфекционные формы, ретикулярные тельца, (РТ) - вегетативные формы, цитоплазматические включения (ЦВ). ЭТ адаптированы к внеклеточному существованию, являются высокой инфекционной формой возбудителя, метаболически малоактивны. Аналоги клеточной стенки и цитоплазматической мембраны стабильны у ЭТ, лабильны у РТ и цитоплазматических включений. В цитоплазме ЭТ имеется нуклеотид, содержащий ДНК и рибосомы. РТ имеют овальную или неправильную форму, содержат как РЕК, так и ДНК, а цитоплазматические включения - преимущественно ДНК. РТ быстро разрушаются во внешней среде, чувствительны к антибиотикам, но в клетках хозяина проявляют высокую метаболическую активность. Фагоцитированные клеткой ЭТ преобразуются через переходные формы в РТ. Размножающиеся путем бинормального деления, РТ превращаются через переходные формы и цитоплазматические включения в ЭТ нового поколения. Этот цикл длится 48-72ч и завершается разрывом мембраны включения и ограничением мембран клетки-хозяина. Содержимое включение поступает во внеклеточную среду и ЭТ инфицируют новые клетки. Характерными особенностями ЭТ являются: способность стимулировать свой эндоцитоз чувствительной клеткой; инги-бировать слияние лизосом с фагосомами, содержащими цитоплазматические

24 включения; быть устойчивыми к действию антибиотиков [53, 164]. Вакуоль клетки, с располагающимися в ней ЭТ, окружает дериватная мембрана, которая защищает последних от действия лизоцима [109]. Одновременно одна эпителиальная клетка может подвергнуться адсорбции несколькими элементарными тельцами [126].

Так как хламидий являются энергетическими паразитами, то они нуждаются в лейцине, фенилаланине и глутамине. Chi. psittaci, в отличии от СЫ. trachomatis, может размножаться при отсутствии гистидина [93].

При неблагоприятных для развития условиях нарушается регуляция внутриклеточного развития хламидийной клетки, что способствует L-подобной трансформации и дальнейшей персистенции хламидий. Перси-стенция подразумевает долговременную ассоциацию хламидий с клеткой-хозяином, когда они находятся в жизнеспособном состоянии. При этом уменьшается метаболическая активность хламидий, останавливается их рост и деление, задерживается дифференциация в ЭТ, что приводит к скрытому (латентному) состоянию. Персистенции хламидий способствует присутствие антибиотиков, недостаток питательных веществ, иммунные факторы. Хламидий способны проникать и в дефицитную клетку, оставаясь там, в неинфекционном состоянии. При благоприятных условиях персистирующие формы хламидий реверсируют в исходные формы и в последующем преобразовываются в инфекционные ЭТ [53]. Персистирует возбудитель в стенке кровеносных сосудов [153] и эпителии кишечника [230].

Источником инфекции являются больные животные. Возбудитель выделяется с истечениями из половых органов и абортированным плодом [59], околоплодными водами [109], с фекалиями [248] и мочой животных [164]. Обнаруживаются хламидий в отделяемом пораженного влагалища [245], в молоке и молозиве коров в течение 60 дней после экспериментального заражения [88]. Выделяется возбудитель во внешнюю среду в течение месяца до аборта и 30-45 дней после него [52].

Рост заболеваемости наблюдается после завоза в хозяйство латентно больных животных или хламидионосителей. Особую опасность представляют племпредприятия и племенные хозяйства, неблагополучные по хламидио-зу [98], так как в распространении хламидиоза важную роль имеет инфицированная сперма быков-производителей [12]. Резервуаром инфекции являются птицы [164]. Хламидий выделяют из клещей и насекомых, обитающих в местах размещения животных [230].

Заражение взрослых животных происходит через слизистые оболочки при случке или искусственном осеменении, а также через пищеварительный тракт с кормом и водой [59, 164].

Интенсивность течения болезни зависит от вирулентности возбудителя, возраста и пола животного [64]. В летний период наблюдается снижение распространяемости возбудителя [227].

У коров хламидийная инфекция, вызванная СЫ. psittaci, протекает в латентной форме, что играет важную роль в патологии абортов и заболевании телят [25, 163, 245]. Регистрируется в период массовых отелов так, как проявляется абортами [69], преждевременными родами, рождением слабого, нежизнеспособного или мертвого приплода [246], а также эндометритами, вагинитами, задержанием последа, бесплодием [128].

При первичных случаях заболевания в хозяйствах абортируют коровы всех возрастов, а в последующем только первотелки [2]. В неблагополучных хозяйствах возникают только спорадические аборты [176].

Аборты происходят на 7-8 месяце беременности. По некоторым данным уровень абортов хламидийной этиологии может достигать 68,8% от общего их числа [244].

Хламидий у. стельных коров обнаруживают в соскобах шейки матки, ка-рункулах, котиледонах, между околоплодными оболочками, в околоплодных водах, что вызывает развитие плацентита. При этом нарушается транспортная, метаболическая, трофическая, эндокринная и другие функции плаценты.

26 Нарушается гуморальный иммунитет в системе мать-плацента-плод, что приводит к внутриутробному инфицированию плода [150].

Объектом цитоцидного действия клеточного иммунитета становятся клетки ткани хозяина, в которые проникает возбудитель, что вызывает отторжение, пораженной хламидийной инфекцией, плаценты и плода [91].

Перед абортом у коров выявляют высокий уровень прогестерона и низкий эстрадиола-17Р [209].

У абортировавших коров наблюдаются задержание плода, особенно у первотелок; гнойно-катаральные эндометриты, сопровождающиеся геммора-гиями на слизистой оболочке шейки матки и влагалища; некроз котиледонов плодной плаценты; серозно-катаральный мастит [2, 3, 88].

Клиническое проявление хламидийного аборта у овец такое же, как и у коров, но только в более острой форме [91,216, 232]. У абортировавших овец при экспериментальном заражении наблюдается снижение эстрона, прогестерона и плацентарного лактогена [195].

У свиноматок больных хламидиозом Кузьминым А.В. установлена кис-тозная гиперплазия эндометрия, что свидетельствовало о серьезных нарушениях функционального состояния яичников [87].

В абортированном плоде и плодных оболочках обнаруживают застой крови и петехиальные кровоизлияния в плаценте и тканях плодов; очаговый отек хориоаллантоисной оболочки и отек подкожной клетчатки; скопление кровянистого экссудата в полостях; некроз котиледонов; дегенеративно-некротические изменения в гепатоцитах, эпителии почек; гиперплазию лим-форетикулярной ткани в печени, легких и сычуге, менингит [200]. Аналогичные изменения устанавливают и у абортированных плодов овец [212, 229].

Животные после выздоровления остаются хламидионосителями в течение 2^3 лет [91]. '

Зараженные хламидийные животные представляют реальную опасность для человека. К заболеваниям людей хламидийной этиологии, возникшим в

27 результате контакта с больными животными, относят: орнитоз, кератоконъ-юктивит, полиартрит и др. Установлена новая форма хламидийной инфекции у людей - генерализованный хламидиоз зоонозной природы (ГХЗП). Возбудителем являются хламидии вида СЫ. psittaci, которые циркулируют среди крупного и мелкого рогатого скота и вызывают у них аборты и кишечные инфекции. Заражение людей происходит контактным путем, алиментарным, при употреблении мясных и молочных продуктов, не подвергшихся качественной термической обработке, а также через контаминированную хлами-диями пыль [157]. По данным Appleyard W.T., овечьи штаммы СЫ. psittaci могут вызывать у людей тяжелые аборты, и даже гибель беременных женщин [178].

Наиболее подвержены заболеванию лица, профессионально связанные с инфицированными животными. Поэтому хламидиоз, вызванный СЫ. psittaci, можно считать профессиональным заболеванием людей [188].

Врожденной биологической особенностью живого организма является наличие естественных (неспецифических) факторов защиты, которые действуют против всех чужеродных агентов микробной и немикробной природы [71, 199]. Важнейшим индикатором в оценке естественной защиты организма животных служит опсонофагоцитарная реакция. Чем она выше, тем животный организм более устойчив. Ответственными фагоцитирующими клетками являются микрофаги - нейтрофильные лейкоциты (полиморфно-ядерные клетки), главные фагоцитирующие клетки крови и макрофаги - оседлые и долгоживущие тканевые фагоциты [7]. Предшественниками последних служат моноциты, которые образуются в костном мозге и, поступая через кроваток в ткани, созревают в макрофаги. Они являются основными клетками системы мононуклеарных фагоцитов. Макрофаги находятся в свободном состоянии в тканях или закрепляются на стенках кровеносных синусов, где отслеживают чужеродные частицы, ослабленные эритроциты и т.д. В печени фиксированные фагоциты называют клетками Купфера. Макрофаги широко

28 распространены в селезенке и лимфатических узлах, легких, серозных полостях, соединительной ткани, нервной системе, почках, костях [15].

Ведущее значение клетки макрофагальной системы имеют в защите организма от возбудителей при хронически протекающих инфекциях [76]. По-лиморфноядерные лейкоциты, моноциты и тканевые макрофаги являются основными клетками в противоинфекционной защите [158].

Главными функциями мононуклеарных фагоцитов являются распознавание и удаление воспалительного агента, представление агентов Т-лимфоцитам, синтез и секреция биологически активных медиаторов [71, 114].

Механизм антимикробной активности фагоцитов опосредуется двумя путями. Первый, кислородно-независимый механизм обусловлен действием на клетку лизосомальных ферментов: лизоцима, катионовых белков, лакто-ферина и др. Основой другого механизма является способность фагоцитов к респираторному взрыву. Увеличение оксидантного статуса приводит к повышению бактерицидных свойств фагоцитирующих клеток. Однако повышенный внеклеточный выброс оксидантов неэффективен в отношении поглощенных микроорганизмов, что связано с выраженным дисбалансом между внеклеточной и внутриклеточной фракциями радикалов при инфекционном процессе [158].

Основным бактерицидным ферментом, секретируемым макрофагами и полиморфно-ядерными лейкоцитами, является лизоцим. Этот фермент способен разрушать мукопротеидные вещества, обнаруженные в клеточных стенках большинства бактерий, тем самым, вызывая их гибель [27]. Депонируется лизоцим в секреторных гранулах и лизосомах фагоцитов. Действие лизоцима при лизисе грамотрицательных бактерий осуществляется совместно с системой комплемента [71]. Определение концентрации лизоцима в крови дает возможность оценить уровень фагоцитарной активности. Макрофаги секретируют и такие естественные гуморальные факторы, как интерферон, некоторые компоненты комплемента, цитотоксические факторы [115]. Так

29 действие интерферона заключается в нарушении транскрипции информационной РНК [27].

Функция фагоцитов возрастает при взаимодействии их с компонентами комплемента, белками фазы воспаления и антибиотиками [71].

Функциональная активность половых желез коров находится в определенной зависимости от уровня неспецифической реактивности и, прежде всего, от фагоцитарной активности нейтрофилов и индекса фагоцитоза [48]. Фагоцитарная активность лейкоцитов периферической крови усиливается эст-рогенными гормонами. Так, введение 3 мг эстрадиол дипропионата увеличивает фагоцитарную активность в лютеальную фазу до 28,93 % и эструс до 69,60 % [250].

Фагоцитарные клетки от аутоокислительного поражения защищают ка-ратиноиды [202].

Макрофаги не способные вызвать гибель захваченных микробов становятся источником персистенции и размножения в них инфекции. Нагруженные жизнеспособными и размножающимися микроорганизмами фагоциты являются разносчиками возбудителей в организме [76].

Макрофаги принимают активное участие и в специфическом адаптивном иммунитете, выполняя роль антигенпрезентирующих клеток [174, 26] и составляют сущность клеточного иммунитета [73].

На моноциты, предшественников макрофагов, существенное влияние оказывают глкжокортикоиды. Они стимулируют в них секрецию липокорти-на, полипептида предотвращающих избыточную воспалительную реакцию. Моноциты, помимо лизосомальных ферментов, способны вырабатывать про-стагландины, тканевой фактор, стимулирующие фиброобласты, интерлей-кин-1 и факторы, изменяющие активность лимфоцитов. К основным глюкор-тикоидам относится кортизол, обладающий сильным противовоспалительным действием и влиянием на углеводный обмен [132].

В настоящее время к факторам естественной резистентности относят систему естественной цитотоксичности. Доминирующую роль в ней играют

естественные киллеры - NK-клетки. Распознавание и уничтожение ими клеток-мишеней не требует предварительной сенсибилизации и не сопровождается образованием клеток памяти. NK-клетки вызывают лизис клеток-мишеней независимо от антител и комплемента и в то же время, не обладают способностью к фагоцитозу. После лизиса NK-клетки остаются жизнеспособны и могут вступать во взаимодействие с новой клеткой-мишенью. Однако естественные киллеры нуждаются в предварительной активизации, выделяемыми макрофагами, а- и Р-интерфероном и особенно интерлейкином-12 [71].

Фагоцитоз является одним из факторов местного иммунитета. Важным защитным механизмом слизистой оболочки матки служит присутствие ней-трофильных лейкоцитов в тканях эндометрия, его эпителии и в составе секрета. Именно на поверхности эндометрия происходит активный фагоцитоз микроорганизмов. В процессе защиты активное участие принимают и лимфоциты, которые вырабатывают трефоны, имеющие большое значение в процессе регенерации эндометрия [10].

Составной частью местного иммунитета слизистых оболочек является секреторный иммуноглобулин класса A (Ig А), который содержится в их выделениях в виде димеров [208]. Он ингибирует связывание микроорганизмов с поверхностью клеток слизистых оболочек, предотвращая их проникновение в ткани. Комплекс «Ig А - антиген» активизирует комплемент только в присутствии лизоцима и проявляет антибактериальную и нейтролизующую активность. Избирательное накопление Ig А в определенных секретах говорит о его защитной функции к инфекции слизистых оболочек [53].

Ig А является основным типом иммуноглобулинов, обнаруженных в молозиве большинства животных, а в стенках кишечника новорожденных имеется специальный транспортный механизм, с помощью которого Ig А попадает в кровеносную систему животных [27].

В сыворотке крови содержится около 13 % Ig А от общего количества иммуноглобулинов. Ig А, участвуя в фагоцитозе микробов макрофагами, об-

31 ладая широким спектром антивирусной, антибактериальной, антитоксической и антигрибковой активности, обеспечивает первую линию защиты. При прорыве этого барьера и проникновении инфекции в подслизистый слой важная роль в защите принадлежит иммуноглобулинам G и М[71, 113, 130].

У животных в период стельности происходит перестройка иммунной системы. В период нормально протекающей беременности возникают иммунные реакции, приводящие к угнетению материнского организма. Развивается иммунологическая толерантность и адаптивный иммунитет, вызванные гестационным процессом. Иммунологическая толерантность представляет собой нарушение иммунологического гомеостаза. Наиболее ярко проявляется в критические периоды - сухостойный и послеродовой [46]. В это время показатели неспецифической иммунобиологической реактивности организма (бактерицидность крови, фагоцитарная активность лейкоцитов крови и др.) находятся на минимальном уровне, особенно в зимне-ранневесенний период. Снижение общей резистентности сопровождается угнетением иммунитета матки [210].

В послеродовой период периодическая секреция гипофиза, в большей степени, направлена на обеспечение образования молока, чем на восстановление функции яичников, которая может длиться несколько месяцев [34]. Нарушение возобновления функции яичников ведет к появлению большого количества воспаленных клеток в матке [210], а гормональный дисбаланс вызывает активизацию микрофлоры матки [11].

У коров с функциональными нарушениями яичников происходит снижение уровня иммуноглобулинов G, М и А в сыворотке крови. Титр секреторного иммуноглобулина А, выполняющего основную роль в защите слизистой оболочки матки, значительно снижен [155] и при этом уменьшено количество эритроцитов и лимфоцитов, а концентрация нейтрофилов увеличена [214].

Низкая концентрация секреторного иммуноглобулина A (s Ig А) в секрете слизистой оболочки матки не препятствует адгезии хламидий к клеткам

32 эпителия, что приводит к свободному внедрению возбудителя в клетку и может способствовать развитию восходящей инфекции. Уровень s Ig А в церви-кальной слизи имеет обратно пропорциональную зависимость к количеству хламидийных телец в половых путях [102].

Хламидийная инфекция развивается на фоне угнетения главной жизнеобеспечивающей реактивности организма - гемопоэза [56]. У больных развивается выраженное иммуно дефицитное состояние [100, 220], что наиболее свойственно хронической хламидийной инфекции [102].

При хронической форме урогенитального хламидиоза отмечается умеренная лейкопения, стабильное снижение бактерицидной и метаболической функций нейтрофилов, цитокиновая недостаточность, дисбаланс регулятор-ных популяций Т-лимфоцитов - клеток СДд и СДв [16], снижение функциональной активности системы моноцитарных фагоцитов [99]. Уровень иммуноглобулинов G, М и А находится у нижних границ нормы. В-лимфоциты, оставаясь на нижних границах нормы, почти не реагируют или слабо отвечают на присутствующую инфекцию синтезом иммуноглобулинов [56]. Происходит ослабление местного клеточного иммунитета и местных иммунных реакций [126].

Острое течение урогенитального хламидиоза характеризуется дисглобу-линемией, В-лимфоцитозом, лабилизацией мембран медиаторосодержащих клеток (макрофаги, нейтрофилы, тканевые базофилы), высвобождением биогенных аминов, снижением фагоцитарной активности [16].

Важное звено клеточного иммунитета, такое как фагоцитоз, при хламидийной инфекции часто не срабатывает. Это происходит за счет антилизосо-мальных ферментов, которые вырабатываются хламидийной клеткой, препятствующих перевариванию содержимого фагосомы клетки - хозяина. Взаимодействие хламидий с лимфоцитами и макрофагами способствует пер-систенции возбудителя и его циркуляции по лимфо- и кровотоку. Хламидий обнаруживают в лейкоцитах венозной крови и биоптате лимфоузлов [53]. Хламидийная клетка устойчива и к таким защитным механизмам макрофа-

33 гов, как «респираторный взрыв» [93]. Способность хламидий паразитировать в макрофагах [99] делает последних основными продуцентами и переносчиками хламидийной инфекции по организму [12].

В таких органах иммуногенеза, как лимфатические узлы и селезенка при хроническом хламидиозе обнаруживают плазматизацию и пролиферацию лимфоидной ткани с расширением светлых центров, а также латентную форму Chi. psittaci в лимфоидной ткани [207].

В основе иммунитета при хламидиозе лежат клеточные реакции. Имму-нодепрессия организма дает возможность возбудителю размножаться в клетках, не приводя к расстройству функции органов. Циркулируя и находя соответствующие условия в организме для размножения в клетках тканей плаценты и плодных оболочек, возбудитель хламидийного аборта накапливается в них. К этому моменту активируется клеточная система иммунитета, что проявляется реакцией гиперчувствительности замедленного типа. Накопление хламидий в плаценте и плодных оболочках и их элиминация из лимфоидной ткани восстанавливает антителообразование [49].

Антитела при хламидийной инфекции крупного рогатого скота представлены двумя классами иммуноглобулинов - G и М. Их образование носит двухвалентный характер. Первый непосредственно после инфицирования организма, второй у инфицированных хламидиями стельных животных после аборта или рождения нежизнеспособного приплода. Комплементсвязываю-щие тела после аборта обнаруживаются в течение 25 дней [91]. Однако, наличие высокого титра антител не свидетельствует об иммунной защите [189], что связано с внутриклеточной локализацией хламидий [53].

Персестирующая (хроническая) хламидийная инфекция обусловлена иммунопатологическими механизмами [5]. Фагоцитоз при хламидийной инфекции - непродуктивный, благодаря способности хламидий ингибировать слияние фагосом с лизосомами. В результате этого рост хламидий в моноцитах и макрофагах приостанавливается в промежуточном состоянии на стадии между элементарными и ретикулярными тельцами. На этом этапе в цито-

34 плазме этих лейкоцитов обнаруживается липополисахарид клеточной степени и отсутствует основной блок наружной мембраны хламидий [13,14].

В таких условиях цикл развития может замедляться до нескольких месяцев и более. В результате образуются так называемые «аберрантные» ретикулярные тельца. Они продуцируют минимальное количество хламидийных структурных антигенов, но синтезируют и освобождают БТШ-60 - мембранный блок стрессового клеточного ответа [93].

В бактериальных клетках БТШ-60 служит потенциальным иммуногеном, вызывая выработку антител и индукцию воспалительной реакции. Присутствует как в ретикулярных, так и элементарных тельцах, но в большей степени его синтез активируется при латентной инфекции. В последние годы считают, что именно БТШ-60 индуцирует хроническую хламидийную инфекцию [8,31].

Иммунный ответ при хроническом хламидиозе носит преимущественно Ti-хелперный характер и ему принадлежит решающая роль в этиологическом выздоровлении от хламидийной инфекции [93].

Под влиянием БТШ-60 усиливается продукция Т-лимфоцитами и макрофагами различных цитокинов. Продуктами Ті-хелперного звена являются:

интерлейкин -2 - стимулятор пролиферации клонов Т-клеток;

фактор некроза опухоли бета - стимулятор роста диплоидных фибробластов.

Активированные макрофаги начинают активно вырабатывать интерлейкин-1, усиливающий пролиферацию фибробластов. Вместе с активацией продукции цитокинов в макрофагах усиливается «респираторный взрыв», продуктами которого являются активные атомарные формы кислорода и свободные радикалы. Однако они не способны окончательно повредить клеточную стенку элементарных и ретикулярных телец, так как их прочность обеспечивается «антиоксидантными» дисульфидными связями между белками наружной мембраны [37, 116, 177].

В результате таких защитных механизмов ретикулярные тельца оказываются устойчивыми к продуктам «респираторного взрыва» макрофагов, а их основной повреждающий удар наносится по наружной мембране собствен-- ных клеток (эпителиоцитов, эндотелиоцитов и др.). Активные формы кислорода активируют перекисное окисление липидов и повреждают двойной фосфолипидный слой мембран клеток организма-хозяина [93].

Немаловажная роль в поддержании хронической хламидийной инфекции принадлежит интерферонам, особенно у-интерферону, который продуцируется Трхелперами и естественными клетками-киллерами. Установлено, что у-интерферон активирует макрофаги, индуцируя образование метаболитов кислорода. Сам же он способен подавлять рост Chi. psittaci в эпителилальных клетках путем индукции индоламин-2,3 -диоксигеназы, фермента, катализирующего разрушение триптодина, что вызывает хламидийную стресс-реакцию и приводит к формированию патологических форм ретикулярных телец [53].

Иммунный ответ на инфицирование внтуренних органов хламидиями включает выброс интерферона и фактора некроза опухоли, что приводит к подавлению цикла развития хламидий и формированию «аберрантных» ретикулярных телец. Это приводит к гиперпродукции хламидиями БТШ-60. Благодаря этому механизму иммунного ответа элементарные тельца подвергаются уничтожению иммунной системой. После этого продукция у-интерферона и фактора некроза опухоли прекращается, а «аберрантные» ретикулярные тельца продолжают цикл развития хламидий. Повторные циклы активации инфекции постепенно разрушают целостность эпителиоцитов, вызывая рубцовые склеротические изменения [93].

1.5 Методы и средства восстановления половой цикличности 1.5.1. При персистентном желтом теле яичника

Ритмичное планомерное воспроизводство достигается не только хорошим содержанием и кормлением, но и применением гормональных методов

36 регулирования и нормализации воспроизводительной функции сельскохозяйственных животных [36].

Важную роль в регуляции половоц функции самок животных играют препараты простагландина F₂a , биологическое действие которых связано с лютеолитическим воздействием на яичники [57]. Их используют для рассасывания персистентных и остаточных желтых тел, синхронизации охоты, овуляции и др. Существует более 20 синтетических аналогов простагланди-нов [171]. Применение препаратов данного ряда эффективно только при наличии функционально активных желтых тел [36, 118,154].

Одним из распространенных синтетических аналогов F2« является эст-рофан. В дозе 500 мкг вызывает развитие лютеолитических процессов в клетках функционирующих желтых тел, создавая возможность роста и ову-лии фолликулов [167, 231]. Однократное применение эстрофана коровам с патологией яичников в виде персистентного желтого тела ведет к оплодотворению 60 - 70 [127], 88 % [15] животных. Некоторые ученые рекомендуют для синхронизации эструса и лечения персистентного желтого тела яичников двукратное применение эстрофана с интервалом 11 дней [4, 51, 96].

Высокий положительный эффект имеет сочетанное применение эстрофана с СЖК или экзогенным прогестероном, что позволяет резко снизить концентрацию эндогенного прогестерона в крови анэстральных коров и стимулировать активизацию гонадотропной функции гипоталамо-гипофизарного центра [1]. Совместное применение простагландина F_2a с эс-традиол дипропионатом позволяет восстановить половую цикличность в течение 10 дней [61].

Жерносенко А.А. и Епанчинцевой О.С. доказано более эффективное применение при персистентном желтом теле яичников клатрапростина, в сравнении с эстрофаном [60].

Очень высоким лютеолизирующим действием обладают и такие препараты простагландина, как клопростенол [182], лютализ [183], люпростинол

37 [222], энзапрост [179], суперфан [78], анипрост [23], суимат, пламат, ремо-фан, прозольвен, тиапрост, эструмат, эквимейт, флупростален и др. [94, 95].

Широкое применение из отечественных аналогов простагландина F_2a получил магэстрофан. Он обладает высокой лютеолитической активностью при однократной инъекции в дозе 3 мл [75, 169,170].

Отмечено негативное влияние аналогов простагландина, проявляющееся отсутствием восстановления половой цикличности у бесплодных коров и нарушением фолликулогенеза в яичниках [168, 183].

Сайко А.А. и др. для восстановления нарушенной функции яичников рекомендуют проводить стимулирование холинергических процессов. Так, прозерин вызывает снижение концентрации прогестерона при сохранении персистентного желтого тела яичника с одновременным повышением содержания лютеинизирующего гормона [134]. Достаточно эффективным при данной патологии является и применение гестагенных препаратов - прогестерона [18].

Наиболее эффективным методом лечения персистентного желтого тела, по мнению Грига Э.Н. и др., является! его энуклеация [43]. Оплодотворяе-мость при этом составляет свыше 91 %. Однако Середин В.А. утверждает, что энуклеация приводит к полостным кровотечениям, оофоритам, перио-офоритам с образованием фиброзных разращений и спаек в брюшной полости и поэтому наиболее приемлемым следует считать применение лютеолиза-тов [122].

1.5.2. При хламидиозе генитальной формы

Рациональное применение антибактериальных средств является одним из главных условий в составе комплексной терапии больных хламидиозом. Общепризнано, что хронически протекающая урогенитальная хламидийная инфекция нуждается в антибиотикотерапии. Однако, отмечаются значительные трудности лечения данной патологии. При этиотропной терапии необходимо учитывать вид возбудителя, чувствительность его к антибиотикам, а также фазу цикла его развития. Максимально чувствительными к антибакте-

38 риальным веществам являются только ретикулярные тельца возбудителя в период активной жизни. На элементарные тельца известные химиопрепараты в нетоксичных дозах для организма-хозяина, практически не действуют [93].

В настоящее время для лечения хламидиоза рекомендуют следующие антибиотики: тетрациклины, ансамицины, макролиды, а также фторхиноло-ны [104, 117, 129, 133, 143]. Однако, выбор осуществляют в пользу макроли-дов, так как они, по сравнению с остальными препаратами, вызывают в меньшей степени дисбиотические нарушения в желудочно-кишечном и мочеполовом трактах, а также и формирование персистирующей формы хлами-дийной инфекции [166, 138].

Антибиотики тетрациклинового ряда дают положительный эффект, уменьшая число абортов [29], но не устраняют хламидионосительство, что представляет угрозу для окружающих животных [28, 189, 236]. Применение тетрациклина гидрохлорида и хлортетрациклина позволяет восстановить оп-лодотворяемость у 80 % коров инфицированных хламидиями [122].

Использование такого макролидового препарата, как тилозин, выделенного в 1955 г. [181], позволяет достаточно полностью ликвидировать хлами-дийную инфекцию [233]. Механизм его действия основан на подавлении бактериального синтеза протеинов с помощью связывания активного вещества с рибосомами. Тилозин обладает не только антимикробной, но и противовес-палительной активностью [111]j

В последнее время синтезирован новый макролидовый антибиотик -тиамулин (аналог тилана). По своим антимикробным свойствам, по отношению к хламидиям, он в полтора раза превосходит тетрациклин и цефалоспо-рин. Создавая внутри клетки микроорганизма высокую концентрацию, он ингибирует бактериальный биосинтез протеинов [85].

Сульфаниламиды, будучи ингибиторами метаболизма фолиевой кислоты, также способны подавлять внутриклеточное размножение многих штаммов хламидий. Однако, установлено, что сульфаниламиды, ампициллин, пенициллин, хлортетрациклин и другие антибиотики, ингибируя дифференциа-

39 цию хламидий, стимулируют возникновение L-подобных форм. Они подавляют реорганизацию внутреннего слоя оболочки и тем самым вызывают оставаться микроорганизм в интрацеллюлярном латентном состоянии [53, 93].

Высокие дозы антибиотиков тетрациклинового и макролидного рядов значительно снижают интенсивность окислительно-восстановительных процессов в организме, которые сохраняются в течение 80 - 90 суток с момента их применения [148].

Применение антибактериальных препаратов сопровождается неблагоприятным действием на иммунологическую реактивность организма, что проявляется угнетением функциональной активности фагоцитарных клеток; уменьшением спонтанной миграции нейтрофилов; снижением лизоцимной активности сыворотки крови. Все это связано с уплотнением клеточных мембран органелл лейкоцитов и макрофагов, а также угасанием бактерицидной активности сыворотки крови [76].

1.5.3. Биокорректоры

Одной из наиболее важных проблем профилактики и лечения большинства заболеваний является восстановление естественного метаболизма путем ферментативного включения и увеличения скорости замедленных биохимических реакций. Это достижимо при применении лекарственных средств нового поколения - бионормализаторов [82].

В настоящее время активное применение в качестве биогенных стимуляторов получили препараты выделенные из плаценты. Среди них известны такие, как взвесь гомогената плаценты, экстракт плаценты, амниоцен, поли-биолин, римолан. Они успешно используются в комплексной терапии гинекологических, желудочно-кишечных, глазных и других заболеваний [67].

В ветеринарной практике используется плацентарный препарат - ПДЭ (плацента денатурированная эмульгированная), обладающий противовоспалительным, репаративным, иммуномодулирующим и лактогенным действиями, с терапевтической эффективностью 80 - 85 %. Его используют при послеродовых заболеваниях [32],и нарушениях функции яичников [24, 160].

Сологуб Г.Л. и др. установили высокую эффективность применения взвеси женской плаценты коровам с персистентными желтыми телами яичников, где оплодотворяемость составила 85,5 - 100% [124].

Для стимулирования воспроизводительной функции используют и такие препараты, как рибав - спиртовой экстракт из массы низших микоризных грибов, выделенных из корней женьшеня и олетим - препарат из тимуса животных [152]. Использование достима позволяет стимулировать клеточный иммунитет за счет активации ферментов и внутриклеточного обмена, тем самым восстанавливая циторецепторную связь в системе гипоталамус-гипофиз-яичники [153].

Доказано высокое иммуностимулирующее действие биологически активных веществ эмбриональных тканей птиц, проявляющееся увеличением естественной резистентности организма лабораторных животных [147].

Большинство неинфекционных и инфекционных заболеваний сопровождается развитием вторичных иммунодефицитов [68]. Формирование иммунологических расстройств является фактором усугубления течения различных заболеваний [151]. Поэтому использование средств иммуноориентированной терапии для устранения патологических процессов является отличительной особенностью современной ветеринарии.

В соответствии с происхождением иммунокорректоры подразделяются на препараты, приготовленные на основе природных компонентов: препараты из организма человека и высших позвоночных; препараты микробного, вирусного, растительного происхождений и полученные синтетическим путем: производные азолов, пурина, пирамидина; полиэлектролиты; синтетические аналоги природных иммуномодуляторов [136].

Среди средств, используемых для активизации неспецифического иммунитета, большое внимание уделяют биологически активным веществам. К ним относят нуклеиновые кислоты, витамины, микроэлементы, иммуномо-дуляторы, продуцируемые микроорганизмами [146] и препараты серии Ви-

РОССИЙСКАЯ
ГОСУДАРСТВЕННАЯ
41 БИБЛИОТЕКА

тулин [159]. Действие иммуностимуляторов основано на повышении иммунобиологической реактивности организма [224].

Наиболее известными иммуномодуляторами животного происхождения являются: тимостимулин, тималин, тактивин, получаемые из тимуса крупного рогатого скота, и растительного происхождения: иммунал, эхинацея, эс-тифан [54,55].

Большое значение имеют иммуностимуляторы в коррегирующей терапии при лечении хламидийных заболеваний. Их использование является необходимым условием полноценной терапии пациентов с персистирующей хламидийной урогенитальной инфекцией [126].

Иммунотерапия направлена на улучшение общего состояния организма, повышение его неспецифической резистентности (активирование созревания макрофагов, повышение фагоцитоза), улучшение работы самой иммунной системы [53], заключающейся в изменении показателей клеточного и гуморального иммунитетов [16].

Распространенными иммуномодуляторами при хламидийной инфекции являются тимоген, тималин, тактивин [56], пирогенал, Т-активин [53]. Однако их применение приводит к развитию трудноконтролируемых аутоимму-ных процессов, к перегрузке макрофагов и затрудненному выходу из организма циркулирующих иммунных комплексов. Тулеев Ю.В. и Тулеев М.Ю. советуют использовать иммунотропный препарат апитулим, не обладающий побочным действием и имеющий терапевтическую эффективность 100 % [153].

Особую актуальность в лечении хронической хламидийной инфекции имеет комбинированное применение бионормализатора из плаценты биоглобина с антибиотиками или местной лазеротерапией. Высокая эффективность обусловлена противовоспалительным, рассасывающим, антиоксидантным и иммунокоррегирующим его свойствами [19, 81].

Положительные результаты при хламидиозе имеет моноиммунотерапия. Так, применение иммунного препарата - полиоксиданий, который является

42 производным полиэтиленпиперазина, позволяет достичь лечебного эффекта в 81 % случаев [74]. При рецидивирующей хламидийной инфекции используют препарат дезоксирибонуклеиновой кислоты, вытяжку из молок осетровых рыб - деринат. Эффективность его применения достигает 84 % [54].

Перспективной при лечении хронических воспалительных заболеваний является системная энзимотерапия, основанная на кооперативном воздействии целенаправленно составляемых смесей протеолитических ферментов (энзимов) на весь организм в целом. Препараты энзимотерапии обладают противовоспалительным, противоотечным, фибринолитическим, иммуномо-дулирующим действиями. В настоящее время их активно используют при лечении хронических хламидийных инфекций. Одним из успешно применяемых препаратов энзимотерапии является вобэнзим [93].

2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Работа выполнялась в 2001-2004 г.г. на кафедре акушерства и хирургии Белгородской государственной сельскохозяйственной академии. Экспериментальная часть проведена на базе ЗАО «Племзавод Разуменский» Белгородского района и Центра независимой иммуноэпидемиологической экспертизы (ЦНИЭ) г. Санкт-Петербург. Лабораторные исследования выполняли в Белгородской областной ветеринарной лаборатории, вирусологической лаборатории Центра Госсанэпиднадзора Белгородской области, испытательной лаборатории Белгородской ГСХА, гистологической лаборатории Белгородского областного онкологического диспансера, лаборатории ЦНИЭ г. Санкт-Петербург.

Исследования проводили в зимне-стойловый период на коровах красно-пестрой голштино-фризской породы, со средней молочной продуктивностью 5005 кг, по следующей схеме (Рис. 1).

Применяемый нами препарат-ПДС (плацента денатурированная суспендированная) - получают из плаценты человека путем специфической хими-

43 ческой обработки кислородными соединениями хлора (Патент РФ, № 2036651, 1995). Относится к средствам, обеспечивающим коррекцию и стимуляцию метаболических процессов .организма за счет наличия в его составе полипептидов, аминокислот, нуклеиновых и оксикислот в определенном соотношении (Утвержден МЗ РФ ФСП 42-0245-0987-01 от 06.02.2002). .

Действие плаценты денатурированной суспендированной основано на ее противовоспалительном, иммунотропном, репаративном и рассасывающем свойствах. Препарат улучшает обмен веществ, стимулирует половую функцию, повышает иммунологическое состояние организма. Согласно результатов исследований на токсичность и безвредность (ВНИИХТЛС от 06.05.1987) и ТУ 10.07.1363.19467999-93 Главветупра, 1993 г. препарат нетоксичен и обладает высокой биодоступностью. Отсутствие у ПДС сенсибилизирующих свойств на повторное введение, простая технология изготовления и дешевизна исходного сырья служат основой для его применения в животноводстве.

Всего в опыте было задействовано 135 коров и 40 крыс. . 1.Иммунологическую реактивность организма после обработки ПДС при хламидийной инфекции изучали на шестимесячных белых крысах-самцах, линии «Vistar», массой тела 210-240 гр. Животные после доставки их из питомника проходили двухнедельный карантин, во время которого они чувствовали себя удовлетворительно: аппетит хороший, поведение активное, отклонений в поведенческих реакциях не наблюдалось, шерсть блестящая и гладкая.

В ходе проведения исследований, все животные были разделены на четыре группы (по 10 животных в группе), с раздельным содержанием.

Бионормализующее влияние ПДС

Выявление механизма действия бионормализатора из плаценты при разрабатке способов восстановления половой цикличности у бесплодных коров

Плацента денатурированная суспендированная (ПДС)

Применение ПДС на

крысах зараженных

Chlamydia psittaci

Применение ПДС на бесплодных коровах с персистентным

желтым телом яичника и генитальной форме хламидиоза

(Chlamydia psittaci)

Обработка ПДС в дозе 6 мл/гол/сут - 5 сут

Опытные группы

Обработка ПДС в дозе 20 мл/гол/сут- 10 сут

Обработка ПДС в дозе 20

мл/гол/сут -10 сут + тило-

зин200, в дозе 10

мл/гол/сут - 5 сут

Контрольные группы

Крысы зараженные Chlamydia psittaci

Обработка тилозином 200 в дозе 10 мл/гол/сут — 5 сут

Крысы здоровые (интактные)

Обработка эстрофаном в дозе 2 мл/гол (500 мкг)

Крысы здоровые (обработанные ПДС)

Коровы с персистентным желтым телом яичника и генитальной формой хламидиоза (интактные)

Изучаемые показатели

Динамика стероидных гормонов в крови

Биохимические показатели сыворотки крови

Клеточный иммунитет

Гистоструктурные изменения в репродуктивных и им-мунокомпетентных органах

Гуморальный иммунитет

Естественная резистентность

Воспроизводительная функция коров

Рис. 1 Схема опыта

Экономическая эффективность

45 Животных в экспериментальные опытные группы подбирали по одинаковым физиологическим параметрам показателей крови, как у интактных крыс, так и крыс перед обработкой ПДС.

1. группу составили лабораторные животные (п=10) подвергнутые заражению 10% суспензией, содержащей Chlamydia psittaci. Суспензию получали путем центрифугирования гомогенизатов селезенки белых мышей, также экспериментально инфицированных этим возбудителем. Вводили ее интра-перитониально, в дозе 0,6 мл/гол.

2. группа включала животных (п=10), инфицированных по той же схеме, которым на пятые сутки после заражения подкожно инъецировали ПДС в дозе 6 мл/гол, 1 раз в сутки, на протяжении 5 суток.

В 3 группе находились здоровые животные (п=10), над которыми никаких манипуляций не проводилось.

4 группу составляли также здоровые животные (п=10), получающие препарат ПДС в дозе и кратности аналогичной 2-ой группе.

Для исследования у животных брали: кровь из центральных сосудов, костный мозг, тимус, селезенку.

Количество эритроцитов, уровень гемоглобина ретикулоцитов, содержание тромбоцитов, число лейкоцитов, лейкоцитарную формулу определяли с использованием гематологического анализатора А^С'Т diff фирмы BECK-MAN COULTER.

Определение содержания Т-лимфоцитов с фенотипами CD3, CD4, CD8; В-лимфоциты с фенотипами CD20; NK-клеток производили с помощью специфических моноклональных антител на основании инструкции предложенной фирмой ORTO (США). Фенотипы лейкоцитов, связавшиеся с соответствующими моноклональными антителами в реакции иммунофлуоресценции, начинают светиться, что позволяет определять их количество при люминесцентной микроскопии. Регистрацию результатов производили с помощью люминисцентного микроскопа ЛЮМАМ Р-8.

Определение функциональной активности Т-лимфоцитов осуществляли в реакции торможения миграции лейкоцитов (РТМЛ) в присутствии КонА (конканавалин А). РТМЛ основана на способности сенсибилизированных Т-лимфоцитов в специфической реакции с антителами in vitro выделять биологически активные вещества ингибирующие миграцию лейкоцитов [72].

Содержание основных классов иммуноглобулинов (Ig М, Ig G, Ig А) в сыворотке крови исследовали методом радиальной иммунодиффузии по Манчини с использованием моноспецифических антисывороток. Сущность метода заключается в способности иммуноглобулинов в агаровом геле, содержащем моноспецифическую сыворотку, образовывать кольцо преципитации, по результатам которого определяют их уровень, используя калибровочный график [72].

Уровень циркулирующих иммунных комплексов определяли в 4% поли-этиленгликоле с молекулярной массой 6000. Метод основан на свойствах малых концентраций полиэтиленгликоля вызывать преципитацию иммунных комплексов [47].

Из органов иммунной системы (костный мозг, тимус, селезенка) делали мазки, из которых выводили миело, тимо и спленограмму, согласно общепринятых методик.

2. Иммунно-биохимические исследования тканевых реакций организма-после применения ПДС проводили на группах коров с персистентным желтым телом яичника при наличии хламидиоза генитальной формы.

3. группа (п=8) - обработка ПДС в дозе 20 мл/гол/сут, подкожно, в течение 10 суток.

4. группа (п=4) - применение ПДС, в той же дозе и кратности, и тилозина 200 - 10 мл/гол/сут, внутримышечно, в течение 5 суток.

5. группа (п=4) — введение тилозина 200 по схеме 2-ой группы.

6. группа (п=4) — контрольная (без обработки)

Тилозин 200 применяли как базисный (контрольный) вариант лечения животных с хламидиозом (наставление утвержденное Департаментом ветеринарии Минселъхоза России от 23.04.99.).

Группы животных формировали по принципу пар аналогов с учетом их возраста, массы тела, количества отелов, текущей молочной продуктивности и одинакового содержания.

Отбор влагалищных смывов для выявления хламидийной инфекции производили во всех группах до и после применения препаратов, с промежутком 10 суток, а в первой группе и через 25 суток после последнего введения ПДС.

Кровь для исследований брали из яремной вены в пять пробирок. Одну из них стабилизировали гепарином (25 ед/мл), из других получали сыворотку. Взятие крови у коров осуществляли по схеме аналогичной отбору влагалищных смывов.

Диагноз на персистентное желтое тело яичников ставили по результатам двукратных ректальных, исследований с интервалом 15 суток [40] и данным техника-осеменатора (отсутствие половой охоты у коров в течение 3-4 месяцев после родов).

Предварительный диагноз на хламидиоз устанавливали по обнаружению специфических антител хламидийной инфекции методом серологического исследования - РДСК (реакция длительного связывания комплемента). Данная реакция основана на определении в исследуемой сыворотке, в присутствии комплемента, степени гемолиза эритроцитов барана. Окончательный диагноз — после выделения хламидии из влагалищных смывов методом постановки биопробы на белых мышах или куриных эмбрионах, с последующим обнаружением хламидии в мазках-отпечатках из паренхиматозных органов (селезенка, печень, легкие) или желточных мешков, окрашенных по Стемпу и флуоресцирующими хламидийными имунноглобулинами. В пер-вом случае обнаруживали мелкие круглые образования малиново-красного цвета, расположенные отдельно или скоплениями внутри или вне клеток; во

48 втором - четко светящиеся единичные и множественные гранулы ярко-зеленого цвета. Данные исследования проводили в соответствии с методическими указаниями по лабораторной диагностике хламидийных инфекций у животных (Департамент ветеринарии Минсельхозпрода России, от 30.06.1999г.)

Количественное содержание в сыворотке крови таких стероидных гормонов, как прогестерон, кортизол, эстрадиол-17(3 определяли методом твердофазного иммуноферментного анализа. Первые два гормона исследовали согласно инструкций утвержденных Департаментом государственного контроля качества, эффективности безопасности лекарственных средств и медицинской техники МЗ РФ от 05.01.2001 г. и 8.10.2000 г., а эстрадиол 17р - на основании инструкции предложенной ООО «Хема-медико» (2000г). Данные исследования основаны на измерении спектрофотометром оптической плотности связанных гормонов со специфическими антителами, фиксированными в твердой фазе, с последующим расчетом их концентрации по калибровочной кривой.

Механизм нейрогуморальной регуляции половой цикличности

Половой цикл - сложный нейрогуморальний рефлекторный процесс, сопровождающийся комплексом физиологических и морфологических изменений в половых органах и во всем организме самки от одной стадии возбуждения до другой [22,149]. В норме периодичность полового цикла коров в среднем составляет 21 сутки, но может колебаться от 18 до 23 суток [119]. У коров с удоем свыше 15 кг в сутки продолжительность полового цикла равняется 26-28 суткам [9].

Различают последовательно сменяющиеся три стадии полового цикла: возбуждения, торможения и уравновешивания. Стадия возбуждения включает в себя следующие четыре физиологических процесса-феномена: течка, половое возбуждение, половая охота, овуляция [66]. Течка - характеризуется ярко выраженными пролиферативными процессами в половых органах, сопровождающимися разрастанием и увеличением секреторной функции желез слизистых оболочек яйцепроводов, матки, преддверия влагалища с выделением слизи из половых путей и раскрытием канала шейки матки. Половое возбуждение - проявляется беспокойством, уменьшением аппетита, снижением молочной продуктивности самки, вспрыгиванием на нее других самок, но при этом самка самца не допускает. Данное поведение связывается с увеличением уровня эстрогенов в крови, что в дальнейшем ведет к возникновению половой охоты [22]. Половая охота - сексуальная реакция самки на самца, проявляющаяся в готовности самки к спариванию. Самка стремится приблизиться к самцу, принимает позу для спаривания. В среднем половая охота длится 12-18ч. Овуляция - процесс разрыва созревшего фолликула и выхода его содержимого вместе с яйцеклеткой. Происходит через 10-15 ч после завершения половой охоты, чаще рано утром [119]. Центром регуляции половой цикличности служит гипоталамо-гипофизарная система, которая, в свою очередь, находится под постоянным влиянием факторов внешней среды, из которых наибольшее значение имеют количество и качество кормов, условия содержания и др. [106]. Гипоталамус расположен в передней части промежуточного мозга под зрительным бугром и состоит из ряда клеточных ассоциаций (гипоталамиче-ских ядер). Он воплотил в себе центр многих регуляторных процессов - от простых автономных рефлексов до сложных поведенческих актов. Гипофиз находится в турецком седле задней клиновидной кости черепа. Представляет объединение трех долей - передняя (аденогипофиз), средняя и задняя (нейрогипофиз), являющиеся отдельными эндокринными образованиями. Гипоталамус с задней долей имеет нервную связь, а с аденогипофизом -сосудистую (портальная система гипофиза) [6]. В перикариотах нейросекре-торных нейронов преоптической области гипоталамуса синтезируется ней-ропептид люлиберин (гонадолиберин) или так называемый гонадотропин-рилизинг-гормон [30]. Данный нейропептид по аксонам нейросекреторных клеток гипоталамуса попадает в первичную капиллярную сеть срединного возвышения гипоталамуса. Затем вместе с кровью капиллярной сети поступает в портальную венную систему, идущую по гипофизарной ножке в аденогипофиз, где, переходя во вторичную капиллярную сеть, стимулирует его эндокринные клетки (гонадотрофы) к синтезу и секреции гонадотропинов (фолликулостимулирующий гормон - ФСГ и лютеинизирующий гормон -ЛГ) [30, 106, 156]. Исследованиями установлено, что существует два типа гонадотропинов: циклические и тонические, находящиеся под контролем гипоталамуса [119]. Центр тонической секреции гонадолиберина (аркуатная область) включен в систему регуляции постоянно, функция которого заключается в обеспечении достаточного синтеза гонадотропинов, необходимых для контроля роста фолликулов и оптимальной секреции эстрогенов. Центр циклической регуляции (преоптическая область) включается на стадии созревания фолликулов, когда уровень продукции эстрогенных гормонов приближается к максимуму [108]. ФСГ - активирует и стимулирует рост фолликулов, овуляцию, развитие желтого тела, синтез прогестерона и андрогенов [21, 119]. При этом ФСГ действует специфически только в присутствии определенного количества ЛГ и, наоборот, ЛГ - в присутствии ФСГ [106]. Под действием пролактолиберина, образующемся в гипоталамусе, в аденогипофизе синтезируется и пролактин, основная роль которого состоит в поддержании функции желтого тела, ускорении роста и развития молочной железы, усилении ее функции после родов [30]. Отмечено, что нейрогипофиз не является эндокринной железой, так как нонапептидные гормоны вазопресин и окситоцин синтезируются в супраоп-тических и паравентрикулярных ядрах гипоталамуса. По аксонам гипотала-мо-гипофизарного пучка, берущих начало в выше указанных ядрах, они поступают в нейрогипофиз, где депонируются и через аксоно-вазальные синапсы секретируются в кровь. Биологическое действие вазопрессина связано с антидиуретическим и сосудосуживающим эффектами; окситоцина - со стимуляцией сокращений миометрия и миоэпителия молочных желез [21, 156].

Нонапептидные гормоны на уровне ЦНС изменяют характер обмена моноаминов, тормозят секрецию люлиберина; на уровне аденогипофиза увеличивают чувствительность гонадотрофоцитов к люлиберину, стимулируют секрецию адренокортикотропного гормона и пролактина; на уровне половых желез - активизируют метаболические, эндокринные и генеративные функции фолликулов яичников [139]. Функция гипоталамуса, в свою очередь, находится под контролем моно-аминоэргических нейронов, вырабатывающих нейромедиаторы: катехолами-ны (норадреналин, дофамин) и индоламины (серотонин). Их роль заключается, соответственно, в возбуждении или торможении функциональной активности пептидэргических нейронов, продуцирующих гонадотропин-релизинг-гормон [106]. Следовательно, нервные импульсы, возникающие в ответ на внешние раздражители и поступающие через зрительный, слуховой, обонятельный и тактильный анализаторы в подкорковые центры и кору головного мозга через адренергические системы, контролируют гипоталамо-гипофизарно-гонадальный гормонопоэз [108, 192, 9]. Исследованиями установлено, что вызванные изменения норадреналином в гипоталамусе связаны с образованием цАМФ в преоптической области, усиливающей синтез либе-ринов [194].

Определенное место в регуляции механизмов гипоталамо-гипофизарной системы со стороны ЦНС отводится опиоидным пептидам: энкефалинам, эн-дорфинам и динорфинам, которые, локализуясь в нервных окончаниях, участвуют в передаче нервных импульсов в качестве нейромедиаторов.

Установлена 3-х ступенчатая периодичность роста фолликулов яичников в течение полового цикла, продолжительностью 7 дней [106]. Однако Saumande J. утверждает, что не существует особых периодов для образования фолликулов, их рост наблюдается как в начале цикла, так и за 10 дней до эст-руса [234]. Начальные стадии роста фолликулов, в отличие от стадии формирования полости, протекают очень медленно [197]. В этот период рецепторы фолликулярных клеток наиболее чувствительны к ФСГ, чем к ЛГ [170].

Примордиальные фолликулы яичников, заложенные еще при внутриутробном развитии, под действием ФСГ начинают интенсивный рост и превращаются во вторичные [119]. Согласно же точки зрения Черемисинова А.Г., первичные фолликулы образуются на протяжении всей жизни самки [169]. В этот период появляется доминантный фолликул - один из фолликулов, опережающий в росте другие.

Биологические механизмы защиты организма при хламидиозе

В последние годы особую опасность приобрели такие малоизученные генитальные инфекции, как хламидиоз, микоплазмоз и реккетсиозы, которые имеют тенденцию к распространению. Хламидиозы являются типичными половыми инфекциями [98]. Значительно распространены почти во всех странах мира, занимающихся животноводством [64, 84], в особенности скотоводством и овцеводством [77].

Хламидиоз относится к контагиозным заболеваниям животных и человека, вызываемых хламидиями, сопровождающихся разнообразными по клиническому и патологическому проявлению признаками - от сепсиса до аборта, от энтерита, пневмонии до энцефалита и менингита, от конъюнктивита до артрита [59, 204, 205].

В настоящее время известно четыре вида хламидий: Chlamydia psittaci, Chi. trachomatis, Chi. pneumoniae, Chi. pecorum. У животных выделяют два вида хламидий: СЫ. psittaci и Chi. pecorum [93, 109].

Хламидий являются облигатными внутриклеточными грамотрицатель-ными паразитами. По структуре и химическому составу близки к бактериям, однако, они не обладают многими метаболическими механизмами необходимыми для самостоятельного существования. К бактериальным характеристикам хламидийной клетки относятся: морфологические признаки, присущий феномен деления вегетативных форм, наличие клеточной стенки, содержание в клетке ДНК и РНК, характер энзиматической активности, чувствительность к ряду антибиотиков широкого спектра действия, наличие общего ро-доспецифического антигена [53].

Хламидийная инфекция обладает тропизмом к клеткам цилиндрического эпителия слизистых оболочек. Chi. psittaci, в отличии от других видов, не обладает хозяиноспецифичностью [59]. Адаптируется к различным органам и тканям [101]. Некоторые штаммы хламидий обладают селективным тропизмом к определенным клеткам ЦНС [185].

Особенностями хламидий является энергозависимый от хозяина паразитизм и уникальный внутриклеточный цикл развития [126].

В клетках хозяина хламидий образуют цитоплазматические включения, представляющие собой популяцию микроорганизма, состоящую из трех форм микробных клеток: элементарные тельца (ЭТ) - инфекционные формы, ретикулярные тельца, (РТ) - вегетативные формы, цитоплазматические включения (ЦВ). ЭТ адаптированы к внеклеточному существованию, являются высокой инфекционной формой возбудителя, метаболически малоактивны. Аналоги клеточной стенки и цитоплазматической мембраны стабильны у ЭТ, лабильны у РТ и цитоплазматических включений. В цитоплазме ЭТ имеется нуклеотид, содержащий ДНК и рибосомы. РТ имеют овальную или неправильную форму, содержат как РЕК, так и ДНК, а цитоплазматические включения - преимущественно ДНК. РТ быстро разрушаются во внешней среде, чувствительны к антибиотикам, но в клетках хозяина проявляют высокую метаболическую активность. Фагоцитированные клеткой ЭТ преобразуются через переходные формы в РТ. Размножающиеся путем бинормального деления, РТ превращаются через переходные формы и цитоплазматические включения в ЭТ нового поколения. Этот цикл длится 48-72ч и завершается разрывом мембраны включения и ограничением мембран клетки-хозяина. Содержимое включение поступает во внеклеточную среду и ЭТ инфицируют новые клетки. Характерными особенностями ЭТ являются: способность стимулировать свой эндоцитоз чувствительной клеткой; инги-бировать слияние лизосом с фагосомами, содержащими цитоплазматические включения; быть устойчивыми к действию антибиотиков [53, 164]. Вакуоль клетки, с располагающимися в ней ЭТ, окружает дериватная мембрана, которая защищает последних от действия лизоцима [109]. Одновременно одна эпителиальная клетка может подвергнуться адсорбции несколькими элементарными тельцами [126].

Так как хламидий являются энергетическими паразитами, то они нуждаются в лейцине, фенилаланине и глутамине. Chi. psittaci, в отличии от СЫ. trachomatis, может размножаться при отсутствии гистидина [93].

При неблагоприятных для развития условиях нарушается регуляция внутриклеточного развития хламидийной клетки, что способствует L-подобной трансформации и дальнейшей персистенции хламидий. Перси-стенция подразумевает долговременную ассоциацию хламидий с клеткой-хозяином, когда они находятся в жизнеспособном состоянии. При этом уменьшается метаболическая активность хламидий, останавливается их рост и деление, задерживается дифференциация в ЭТ, что приводит к скрытому (латентному) состоянию. Персистенции хламидий способствует присутствие антибиотиков, недостаток питательных веществ, иммунные факторы. Хламидий способны проникать и в дефицитную клетку, оставаясь там, в неинфекционном состоянии. При благоприятных условиях персистирующие формы хламидий реверсируют в исходные формы и в последующем преобразовываются в инфекционные ЭТ [53]. Персистирует возбудитель в стенке кровеносных сосудов [153] и эпителии кишечника [230].

Источником инфекции являются больные животные. Возбудитель выделяется с истечениями из половых органов и абортированным плодом [59], околоплодными водами [109], с фекалиями [248] и мочой животных [164]. Обнаруживаются хламидий в отделяемом пораженного влагалища [245], в молоке и молозиве коров в течение 60 дней после экспериментального заражения [88]. Выделяется возбудитель во внешнюю среду в течение месяца до аборта и 30-45 дней после него [52].

Рост заболеваемости наблюдается после завоза в хозяйство латентно больных животных или хламидионосителей. Особую опасность представляют племпредприятия и племенные хозяйства, неблагополучные по хламидио-зу [98], так как в распространении хламидиоза важную роль имеет инфицированная сперма быков-производителей [12]. Резервуаром инфекции являются птицы [164]. Хламидий выделяют из клещей и насекомых, обитающих в местах размещения животных [230]. Заражение взрослых животных происходит через слизистые оболочки при случке или искусственном осеменении, а также через пищеварительный тракт с кормом и водой [59, 164]. Интенсивность течения болезни зависит от вирулентности возбудителя, возраста и пола животного [64]. В летний период наблюдается снижение распространяемости возбудителя [227].

Иммунотропные свойства ПДС при экспериментальном заражении крыс Chlamydia psittaci

При экспериментальной хламидийной инфекции у белых крыс (Табл. 3) отмечается снижение эритроцитов на 1,72x1012 / л (р 0,001) и гемоглобина на 7,70 г/л (р 0,02), что указывает на развитие анемии. Возрастает количество ретикулоцитов на 8,70 %. Уровень лейкоцитов и тромбоцитов уменьшается, соответственно на 4,70 и 12,0х109/л. В лейкоцитарной формуле регистрируется возрастание абсолютного числа палочкоядерных нейтрофилов на 0,25, моноцитов на 0,36х109/л (р 0,001), а также их относительных значений на 3,90 (р 0,001) и 6,74% (р 0,001). Наблюдается снижение содержания лимфоцитов на 4,58х109/л (р 0,001) или 16,38% % (р 0,01); эозинофилов на 0,16x109/ л или 1,0% (р 0,01); базофилов до нуля, а сегментоядерных нейтрофилов увеличение относительных значений на 7,2 % или уменьшение на 0,50x10%.

Применение зараженным хламидиозом крысам ПДС, вызывает рост гемоглобина в 1,09, эритроцитов в 1,36 (р 0,001) и тромбоцитов в 1,05 раза. Уровень ретиколоцитов снижается на 10,40%. Существенные сдвиги обнаруживаются и в лейкоцитарной формуле. Происходит уменьшение палочкоядерных нейтрофилов в 2,73 (р 0,001) или на 3,99 (р 0,001); моноцитов в 2,31 раза (рО.001) или на 7,57 % (р 0,01). Возрастает количество лимфоцитов в 1,36 (р 0,02) или на 5,20 (р 0,001); эозинофилов в 2,5 раза (р 0,001) или на 0,87 % (р 0,01); увеличивается число базофилов. Сегментоядерные нейтро-филы понижаются на 8,80%, но общее их количество возрастает на 0,33х109/л.

При сравнении морфологических показателей крови с данными здоровых интактных животных отмечается, что уровень гемоглобина и количество эритроцитов возрастает на 6 г/л и 1,70x10 /л. Содержание тромбоцитов и лимфоцитов несколько выше - на 1,70 и 3,50x109/л. Палочкоядерные и сегментоядерные нейтрофилы понижены в 1,06 раза или на 0,09 и 1,60х109/л. Абсолютное и относительное количество лимфоцитов повышено соответственно на 0,62х109/л или 3,12%, а содержание моноцитов понижено на 0,10х109/л или 0,83%. Таким образом, введение ПДС экспериментально зараженным животным вызывает восстановление структурных элементов в крови как эритроцитарного, так и лейкоцитарного рядов и приближает их к физиологическим показателям.

Использование ПДС на здоровых крысах ведет к незначительному снижению уровня гемоглобина, количества эритроцитов, тромбоцитов, ретику-лоцитов и лейкоцитов. Вызывает уменьшение процентного соотношения па-лочкоядерных и сегментоядерных нейтрофилов и увеличение лимфоцитов и моноцитов. Остальные показатели остаются без изменений.

На фоне пониженного содержания общего количества лейкоцитов и лимфоцитов у животных первой группы, инфицированных возбудителем хламидиоза, отмечаются изменения показателей фенотипов Т-лимфоцитов (Табл. 4). Так, количество СДЗ клеток снижается на 13,30 (р 0,05); СД4 - на 12,80 (р 0,01), а СД8 - возрастает на 2,90%. Абсолютные значения вышеуказанных показателей, соответственно, уменьшается в 2,5 (р 0,01); в 2,85 (р 0,001) ив 1,84 раза (р 0,001). Концентрация В-лимфоцитов, представленных фенотипом СД20, возрастает на 2,70%, а их количество снижается на 0,77x109/л. Уровень естественных киллеров - СД56 уменьшается на 4,10% (р 0,01) или в 4,1 раза (р 0,001). Происходит возрастание РТМЛ на 40,80%.

При разложении иммуноглобулинов по классам наблюдается увеличение Ig М на 2,25 (р 0,001); Ig G на 1,61, a Ig А снижение на 0,86 г/л. Регистрируется уменьшение циркулирующих иммунных комплексов в 1,26 раза.

Соотношение Т-хелперов/Т-супрессорам составляет 1,29, тогда как у здоровых животных равняется 1,99. Данные изменения баланса СД4/СД8 обусловлены, в первую очередь, снижением Т- хелперов.

Таким образом, полученные данные иммунного статуса лабораторных животных первой группы указывают на развитие острого воспалительного процесса с аутоиммунным характером протекающей инфекции.

Применение таким животным ПДС способствует увеличению общего количества Т-лимфоцитов, несущих TCR-рецепторов, в 1,24 (р 0,05) или на 4,41 (р 0,001); Т-хелперов в 1,40 (р 0,01) или на 3,04 (р 0,01) и уменьшение Т-супрессоров в 1,05 раза или возрастание на 1,23х109/л (р 0,001). Количество зрелых В-лимфоцитов снижается на 3,30%, а их абсолютное число увеличивается в 1,90 раза (р 0,001). Число естественных киллеров возрастает на 2,90% или 0,5x109/л. Уровень циркулирующих иммунных комплексов увеличивается 13,80%. Показатели РТМЛ уменьшаются на 40,30%. Содержание IgM снижается в 1,53 (р 0,001), a IgG и А увеличивается, соответственно в 1,11 и 2,12 раза (р 0,001).

Баланс СД4/СД8 возрастает до 1,90, что ниже нормы всего лишь на 0,09. Увеличение соотношения Т-хелперов/Т-супресорам связано с возрастанием первых и снижением последних.

При сравнении иммунных показателей здоровых животных с данными второй группы следует, что применение ПДС ведет к максимальному приближению последних до нормы, а некоторых и выше: СДЗ, СД4, СД8, Ig G, Ig А. Общее количесиво лимфоцитов превышает показания интактных животных на 0,90% или 0,53x10%. Уровень Т-хелперов увеличен на 1,10 или в 1,09, а Т-супрессоров на 1,60% или в ІДраза. Процентное содержание зрелых В-лимфоцитов снижено на 0,06%, а их абсолютное значение увеличено на 0,06x10%. Количество естественных киллеров понижено на 1,20% или в 1,09 раза. Содержание IgM, G и А выше нормы на 1,20, 2,80 и 1,26 г/л. Количество циркулирующих иммунных комплексов снижено на 4,5, а показатель РТМЛ на 1,5%.

По результатам второй группы видно, что использование ПДС ведет к снижению воспалительного процесса и уменьшению аутоиммунных реакций. Введение здоровым животным плаценты денатурированной суспендированной вызывает незначительные колебания показателей клеточного и гуморального иммунитетов.

Изменение белковых показателей сыворотки крови коров с персистентным желтым телом при хламидиозе генитальной формы, после обработки ПДС и тилозином 200

Установлено, что во всех группах животных бактерицидная активность сыворотки крови находится на нижних границах физиологических показателей и в среднем по группам составляет 36,13%. Лизоцимная активность сыворотки крови ниже средних показателей и в среднем равна 12,81% по всем группам. Данные фагоцитарной активности полиморфноядерных нейтро Применение ПДС животным с нарушенной половой цикличностью из-за наличия персистентного желтого тела яичника и больных генитальной формой хламидиоза увеличивает их лизоцимную активность сыворотки крови в 2,4 раза (р 0,01), бактерицидную активность в 2 раза (р 0,01), а фагоцитарную активность полиморфноядерных нейтрофильных лейкоцитов крови в 1,35 раза (р 0,02). Это свидетельствует о выраженном иммуностимулирующем действии препарата.

Комплексное использование ПДС и тилозина 200 ведет к снижению ли-зоцимной активности сыворотки крови на 1,50 %, возрастанию бактерицидной активности на 27,50 (р 0,01) и фагоцитарной активности нейтрофильных лейкоцитов сыворотки крови на 25,75 % (р 0,01).

При сравнении показателей естественной резистентности животных второй группы с данными первой группы обнаруживается, что у коров после комплексной обработки лизоцимная активность сыворотки крови снижена на 17,25, бактерицидная на 11,75, а фагоцитарная активность полиморфноядер-ных нейтрофилов на 12,25%. Таким образом, при совместном применении ПДС с антибиотиком сохраняется его иммуномодулирующий эффект. У животных третьей группы после применения тилозина 200 прослеживается тенденция снижения лезоцимной активности сыворотки крови и увеличения бактерицидной, а также рост фагоцитарной активности лейкоцитов крови, соответственно: в 1,75; 1,14 и 1,13 раза. Показания факторов естественной резистентности организма животных контрольной группы в течение всего периода исследования остаются без существенных изменений. У животных всех групп, имеющих нарушения функций яичников и хла-мидийную инфекцию, обнаруживается высокий уровень сегментноядерных нейтрофильных лейкоцитов, в среднем 45,94, что превышает физиологические показатели нормы на 10,94% и, в сравнении со среднепараметрическими данными, отмечено низкое содержание лимфоцитов - 48,81%. Уровень моноцитов между группами имеет существенные колебания, но у всех он ниже нормы. Остальные показатели в пределах допустимых значений (Табл. 9). Применение ПДС животным первой группы вызывает снижение сигмен-тоядерных нейтрофилов на 10 и увеличение лимфоцитов на 8,25 %. Возрастает содержание моноцитов на 1,5 %. Значимых изменений в остальных показателях лейкоцитарной формулы не обнаруживается. Во второй группе при комплексном применении ПДС и тилозина 200 происходит также уменьшение полиморфноядерных нейтрофилов в 1,13 и рост лимфоцитов в 1,11 раза. Однако концентрация моноцитов снижается на 0,25%. У животных третьей группы отмечается уменьшение на 1,50 сегментоядерных нейтрофильных лейкоцитов и 0,75% моноцитов. Концентрация лим-фоцитарных клеток возрастает на 0,75, а эозинофильных лейкоцитов на 1,5%. В контроле уровень лимфоцитов остается без существенных изменений, содержание сегментоядерных нейтрофилов снижается на 2,75, а моноцитов и эозинофилов соответственно увеличивается на 1,75 и 1,0%. Изменение белковых показателей сыворотки крови коров с персистентным желтым телом при хламидиозе генитальной формы, после обработки ПДС и тилозином 200 У животных первой группы, имеющих нарушение половой цикличности в виде персистентного желтого тела и больных хламидиозом, концентрация альбуминов и а-глобулинов находится на нижних границах физиологических значений, 3-глобулины - в пределах нормальных показателей, у-глобулины -на ее верхних границах (Табл. 10). После применения ПДС наблюдается снижение альбуминов на 1,05 % , но спустя 25 суток заметно их увеличение, по сравнению с показателями после обработки на 0,35%. Уровень а-глобулинов остается без существенных изменений на всем протяжении исследования. Содержание (3-глобулинов возрастает на 0,90, с последующим снижением на 0,31 %. Концентрация у-глобулинов в течение всего периода остается без изменений. Уровень иммуноглобулинов в первой группе после курса применения ПДС увеличивается на 13%, с последующим достоверным возрастанием к 25 суткам в 1,28 раза, в сравнении с первоначальными показателями. Это указывает на иммуномодулирующее действие ПДС на протяжении всего периода исследования. Белковый коэффициент в данной группе соответственно равен - 0,53; 0,51; 0,52.

Похожие диссертации на Восстановление воспроизводительной функции у коров с персистентным желтым телом на фоне хламидиоза генитальной формы бионормализатором из плаценты

Т-лимфоциты в восстановлении воспроизводительной функции у коров после отела Хлопонин Всеволод Серафимович

Закономерности восстановления кроветворной функции у лиц, подвергшихся хроническому радиационному воздействиюВарфоломеева Татьяна Александровна

Физиологические основы восстановления зрительных функций при утомлении у пользователей персональными компьютерами с помощью массажа и офтальмотренингаТимченко Татьяна Валентиновна

Изучение когнитивных функций и механизмов их восстановления после повреждения гиппокампа каиновой кислотойЛебедев Денис Сергеевич

Особенности репродуктивной функции коров и физиологического статуса телят при применении пробиотика и стимулирующих средствДементьев, Сергей Васильевич

Совершенствование применения простагландинов, гонадотропинов, рилизинг-факторов для повышения воспроизводительной функции коров и телокЛопарев Владимир Иванович

Физиологическое обоснование применения препаратов селена для повышения репродуктивной функции коров в условиях Свердловской областиЛиходеевская Оксана Евгеньевна

Стимуляция репродуктивной функции коров антиоксидантами, адреноблокаторами и средствами природного происхожденияМасалов Владимир Николаевич

Влияние кормовых, гормональных и экологических факторов на воспроизводительную функцию коровНиятбеков Алибек

Воспроизводительная функция коров симментальской породы и ее коррекция в условиях Республики БашкортостанСитдиков Ильшат Хамитович