Содержание к диссертации
Введение
1. Обзор литературы 10-31
1.1. Применение простагландинов, гонадотропинов и рилизинг факторов для повышения уровня воспроизводства крупного рогатого скота 10-16
1.2. Стимулирование воспроизводительной функции у проблемных коров 17-19
1.3. Нарушения фолликулогенеза у коров и телок 19
1.3.1. Персистентное желтое тело 19-21
1.3.2. Овариальные кисты и гипофункция яичников 21-24
1.4. Послеродовые осложнения 24-28
1.5. Использование проблемных коров в качестве доноров эмбрионов 28-31
2. Собственные исследования 32-87
2.1. Материал и методы исследований 32-35
2.2. Результаты собственных исследований 35-87
2.2.1. Эффективность отечественных гормональных препаратов при восстановлении плодовитости проблемных коров 35-47
2.2.2. Результаты применения гормональных препаратов при нарушениях фолликулогенеза
2.2.3. Профилактика послеродовых осложнений у коров 63-74
2.2.4. Показатель суперовуляторнои реак-иди при использовании проблемных коров в качестве доноров эмбрионов 74-83
2.2.5. Эмбриопродуктивность коров после устранения овариопатологии 83-87
3. Обсуждение 88-102
Выводы 103-104
Библиографический список 106-123
- Применение простагландинов, гонадотропинов и рилизинг факторов для повышения уровня воспроизводства крупного рогатого скота
- Стимулирование воспроизводительной функции у проблемных коров
- Материал и методы исследований
- Эффективность отечественных гормональных препаратов при восстановлении плодовитости проблемных коров
Применение простагландинов, гонадотропинов и рилизинг факторов для повышения уровня воспроизводства крупного рогатого скота
В настоящее время гормональные методы находят широкое применение в системе биотехнологии воспроизводства крупного рогатого скота. Исследованиями установлена и практикой подтверждена возможность целенаправленной регуляции воспроизводительной функции короЕ и телок путем обработки их гормональными препаратами и многолетними испытаниями подтверждена их безвредность (55, 67).
Теоретические принципы гормональной регуляции половой функцией были разработаны в начале 30-х годов отечественными учеными под руководством академика М.М.Завадов ского(10, II, 12). Американскими исследователями было обнаружено наличие в крови жеребых кобыл гонадотропинов, способных регулировать рост, развитие, созревание и овуляцию одного или множества фолликулоЕ (26). С тех пор научными коллективами проведены многочисленные исследования по испытанию различных препаратов для интенсификации репродуктивной функции. В настоящее время с целью дальнейшей перспективы повышения эффективности методов биотехнологии воспроизводства сложились следующие направления исследовательской работы; I) улучшение качества гормональных препаратов; 2) разработка методов прогнозирования эффективности применения гонадотропинов; 3) разработка методов оптимизации популяции антральных фолликулов в яичниках коровы к моменту гормональных обработок (42).
Биотехнические методы синхронизации половых циклов с помощью гонадотропйнов и простагландинов позволяют вызывать охоту у коров и телок в назначенный день и даже в определенные часы суток и плодотворно их осеменять, в то время, как спонтанную охоту пропускают в 40-5ОІ случаях (39). Это дает возможность реально планировать все этапы технологии воспроизводства в соответствии с требованиями экономической целесообразности, что определяет значение данного биотехнического приема. Расчеты показывают, что при 4С$ случаев не зафиксированной охоты и при 5( оплодотворяемости после первого осеменения выход телят уменьшается на 7-8 голов в расчете на 100 коров. Таким образом, очевидна реальная возможность индуцированием охоты устранять такое негативное явление в практике скотоводства, как пропуск, либо неправильную фиксацию охоты, что традиционными методами сделать весьма проблематично (39).
Практические условия требуют таких методов воздействия при синхронизации охоты, которые обеспечивали бы высокую степень вероятности ее проявления у максимального числа обработанных животных в течение 24-часового периода при одинаковом интервале времени между обработкой и началом охоты - 48 часов и, одновременно, высокий показатель числа плодотворно осемененных животных (68).
Первоначально, для вызывания охоты у коров и телок применяли механическое устранение желтого тела, ректально (энуклеацию). В настоящее время энуклеацию применять не рекомендуют. Одной из причин негативного отношения специалистов к энуклеации является большая вероятность возможных осложнений (82, 61).
Учитывая, что синхронизация охоты через посредство ректально проводимой энуклеации желтого тела часто осложняется и может приводить к кистозному перерождению яичника (82, 61), в 50-х годах начали разработку методов синхронизации охоты с использованием для этой цели прогестерона или гестагенов. На основе их введения имитировали удлинение лютеальной фазы полового цикла. В ответ на стабильную концентрацию прогестерона происходит снижение функциональной активности гнпоталамо-гипо-физарного комплекса и, следовательно, торможение развития, роста и оЕулянии фолликулов. Прекращение введения препаратов предполагает наступление синхронного эструса у всех или большинства обработанных животных. Средний процент стельности после осеменения в синхронизированную гестагенами охоту низкий и в лучшем случае не превышает 5($ (8).
В настоящее время наиболее перспективным для синхронизации астрального цикла считают применение синтетических прост-агландинов. Если при введении гестагенов эффект охоты достигается в результате 15-дневной премедикации» то простагландини SW обладают специфической способностью быстро лизировать желтое тело, в течение нескольких часов. Причем, происходящие при этом физиологические процессы в ПОЛОЕОЙ системе в определенной степени аналогичны тем, которые проявляются при спонтанной регрессии желтого тела, и поэтому при осеменении в индуцированную охоту получают приемлемые показатели оплодотворяем ос ти.
Стимулирование воспроизводительной функции у проблемных коров
Реально влиять на повышение эффективности генетического прогресса конкретного стада возможно лишь в том случае, если в практике селекции используют высокопродуктивных животных. Коров с удоем более 8 тыс. кг молока за лактацию в хозяйствах России учтено всего 493 головы, а странах СНГ - от 2 до 179 голов (49). Для реализации селекционных программ такого количества недостаточно. Обостряет недостаток высокий уровень выбраковки коров, который достигает 20-30$ поголовья, причем выбраковывают, как правило, высокопродуктивных коров. Даже в странах с высоко развитым животноводством средняя продолжительность продуктивной жизни коров колеблется от 3,5 до 5,0 лет (50, 51).
В дополнение к этому ситуацию обостряет наличие проблемных животных, т.е. "коров с функциональными расстройствами воспроизводительной системы вследствие хронических стрессовых воздействий" (3). Коров, не оплодотворившихся в течение 150 дней после отела, так же квалифицируют "проблемными". Их количество в течение различных лактационных периодов может колебав ся в пределах от 24,5 до 77,7%. В среднем оплодотворяемость "nj лемных коров" после одного осеменения снижается до 28,4$, а се] вис-период увеличивается свыше 144 дней, в то время как у здоровых коров эти показатели составляют соответственно 59,0- и 85-93 дня (27, 23, 109, 3). В настоящее время с целью повышения показателей плодовитости в стадах с большим процентом проблемных коров разработаны и применяют различные биотехнические приемы. Так, для плодотворного осеменения (после нескольких безуспешных) считают целесообразным проведение стимулирования овуляции посредством аналога люлиберина» либо хо риогонического гонадотрошша. Этим методом добивались улучшения оплодотворяемоети, по сравнению с контролем, на 4,8$. Увеличения числа оплодотворяемых коров достигают и при параллельном введении аналогов гонадолиберина. Показатель оплодотворяе-мости коров при этом был Еыше на 9,2-15,3$ (18, 112). Благодаря инъекции аналога гонадолиберина и последующему через 24 часа дополнительному осеменению, получали более высокие показатели оплодотворяемости проблемных коров по сравнению с контрольными животными. Считают, что последовательное улучшение показателей следует ожидать, если предварительно проводить профилактическую санацию матки. Для этого с равной долей успеха можно применять люгозоль, йодосол, ваготил, растворы антибиотиков (70, 72).
В различных публикациях приводимые примеры оценивают противоречиво. Так, в некоторых опытах получали повышение эффективности осеменений на 11,7-19,6$ относительно контроля. В других исследованиях сделан вывод, что результаты осеменения параллельно инъекции ХГЧ или гонадолиберина отрицательные (81, 123, I), а профилактическая санация матки улучшения показателей оплодотворяемости не дает (70, 71).
Ряд авторов высказывает резко отрицательное отношение к массовому применению аналогов гонадолиберина и других гормональных препаратов (ГСЖК, ФОТ, хориогонического гонадотропина и простагландине), принимая во внимание унифицированный подход к применению этих средств (65, 37, 38). Однако, есть публикации, отражающие исследования, в которых получены положи тельные результаты при сравнительно широком унифицированном применении гормональных средств с.целью профилактики. Но и в них значительной и высокодостоверной разницы показателей оплодотворяемости не находили. Это предполагает необходимость продолжения поиска методов гормональной стимуляции на основе тщательно проведенных диагностических исследований (80, 38), а "аномалия-симптом" нарушения лютеолитического механизма матки, вызываемый изменениями нормального гормонального соотношения в организме, приводящий к удлинению времени функционирования желтого тела в яичнике дольше 20-30 дней после окончания полового цикла или родов"(46, 48). Его диагностику осуществляют двукратным, с интервалом в 3-4 недели исследованием (34). Существует и иная точка зрения на данные нарушения, причем ее сторонники считают энуклеацию единственным методом восстановления функции яичника (64). Ряд исследователей с этой точки зрения не согласны (136, 5), учитывая возможные негативные последствия ректальной энуклеации желтого тела, а также положительный опыт широкого применения препаратов простагландине (136, 5» 46). .
Материал и методы исследований
Индуцирование половых циклов, вызывание суперовулявди, проведение операций по извлечению зародышей, определение эффективности разных препаратов, осеменение коров и телок осуществляли по методикам и инструкциям Вйіа (16, 37).
Концентрацию гормонов в крови коров определяли радио-иммунологаческим методом. Стимуляция активности яичников при различных форлах нарушения фолликулогенеза проиллюстрировали опытами, проведен-ными на более чем 250 коровах с использованием различных биорегуляторов, как отечественного, так и импортного производства; ФСГ, ГСЖК, в комплексе с аналогами гокадолиберина, хо-рмогонического гонадотрошша человека, синтетическими простагландинами в разных сочетаниях и дозировках. Эффективность использования в качестве доноров эмбрионов выбракованных высокопродуктивных коров испытаны на 80 животных»
Разработки по УВЧ терапии и профилактике гинекологических заболеваний проиллюстрированы результатами опытов на более чем 100 ЖИЕОТНЫХ.
Для диагностики нарушений фолликулогенеза и эндометрита у коров использовали комплексный метод в соответствии с Методическими указаниями по диагностике, лечению и профилактике акушерско-гинекологических болезней и ветеринарному контролю за воспроизводительной функцией коров (1985).
Терапевтическую эффективность электромагнитного поля УБЧ малой мощности при ректальном расположении излучателя в сравнительном аспекте изучали на коровах, имеющих послеродовые осложнения,.
Для лечения коров использовали специальный аппарат (ДГЗ-І УБЧ) с ректальным излучателем длинноволновых электромагнитных волн УВЧ малой мощности. Применяли установку один раз в день в течение 8-Ю дней при ЕЫХОДНОЙ мощности генератора 30 Вт и экспозиции 10 мин.(рис. 2).
Животных контрольных групп лечили по схемам, рекомендуемым областными ветлабораториями и принятыми в хозяйствах. Ректально определяли величину, консистенцию, болезненность, тонус, реакцию матки отвечать сократимостью в ответ на ректальную пальпацию.
Способность коров к оплодотворению после УВЧ-лечения и продолжительность бесплодия устанавливали по данным зоотехнического учета осеменения и ректальных исследований на стельность. Контроль за общим состоянием ПОГОЛОЕЬЯ до и во время опыта проводили согласно методам, принятым в современной ветеринарной клинической диагностике.
Эффективность воздействия и время реабилитации определяли по показателям выздоровления и восстановления воспроиз
Показатели температуры тела, пульса, дыхания и румина-вди у проблемных короЕ исследовали до начала и после проведения мероприятий. В опыты брали тех коров, у которых эти показатели находились в пределах нижней и верхней границы нормы.
В ряде случаев описание методики экспериментов сочли целесообразным давать по ходу текста»
В работе применены общезоотехнические методы исследова-НЕЙ, племенные записи, материалы зоотехнического учета по воспроизводству в стадах хозяйств, а также материалы ветеринарного учета. Статистическую обработку проводили по Е.К.Мер-курьевой (29, 30),
Предварительными исследованиями нами проведена сравнительная оценка эффективности пршленения для синхронизации охоты синтетических аналогов простагландине - эстуфалана и ани-проста. В качестве объективного критерия исследовалась динамика гормонального фона в крови подопытных животных.
Эстуфалан выпускает НПО "Карбоген" института органической химии РАН с рекомендуемой дозой внутримышечного ВЕЄДЄНИЯ 2 мл, которая содержит 500 мкг действующего вещества. В последних сериях лютеолитического агента-антипроста, выпускаемого АОЗТ "Уфимский витаминный завод", масса действующего вещества в дозе препарата снижена до 250 мкг. По данным производственных испытаний для получения синхронизационного эффекта охоты с использованием этого препарата необходимо введение дозы в 1,5-2,0 раза больше рекомендуемой. Проведенный анализ динамики гормонального фона показал, что анипрост в рекомендуемой дозе (2 мл), содержащей 250 мкг действующего вещества по клопроетенолу, не обеспечивает полного лизиса ткани желтого тела. Изменения уровня концентрации прогестерона в течение 72 часов после инъекции препарата составили лишь 0,2-0,55 нг/мл при исходном значении показателя 1,7 0,24 кг/мл, Известно, что Е таких случаях большинство животных ВСЛЄДСТЕИЄ слабой реакции на простагландин в охоту не приходит или проявляет "тихую охоту", то есть без клинически выраженных признаков.
Эффективность отечественных гормональных препаратов при восстановлении плодовитости проблемных коров
Во всех случаях при аналогичных сроках происходило повышение до максимальных величин концентрации эстрадиола до 31,5 3,5 - 40 0±5,2 пг/мл, причем совпадало по времени с клинически выраженными признаками охоты.
Таким образом, динамика показателей обусловливает возможность после синхронизации охоты зстуфаланом проводить осеменение коров фронтально через 48 часов после инъекции препарата. При синхронизации охоты анипростом осеменение необходимо проводить в фиксированную охоту. Б противном случае неизбежно произойдет снижение, показателя оплодотворяемости до 60 .
Установлено, что при синхронизации охоты только аналогами простагландйна результаты осеменения в индуцированную охоту могут варьировать в широких пределах. Включение гонадотро-пинов в схему синхронизации охоты простагландинами в определенной степени унифицирует процессы, происходящие в яичниках обрабатываемых животных, обеспечивая равномерный по времени приход животных в охоту и, как следствие, - повышение стабильности положительных результатов осеменения животных (52).
Собственными исследованиями установлено, что с одинаковой эффективностью в комплексе с простагландинами можно использовать как сывороточные (ГСЛК, фоллигон), так и гидофи-зарные гонадотропины (фоллитрошщ,, ФСГ-супер). Оптимальной дозой гонадотропных препаратов для этой цели следует считать 300-350 ед для короЕ и 150 ед для телок (табл. 2, 3). При комплексной обработке гонадотропные препараты рекомендуется вводить за 3-5 часов до введения простагландинов.
В практике воспроизводства молочных коров суммарно после трех осеменений до 9($ животных могут становиться стельными. Оставшиеся нестельными 10$ и более коров попадают в разряд "проблемных", для успешного осеменения которых требуется, как правило, специальное вмешательство. Предполагают, что после двух безуспешных осеменений во время третьего эструса имеет место вероятность лютеинизации фолликула. Это служит основанием стимулировать овуляцию соответствующими медикаментозными средствами, для чего рекомендуют вводить аналоги гонадолибери-на или хориогонического гонадотропина человека. Однако». данные литературы, оценивающие влияние этих препаратов на эффективность осеменения противоречивы.
В своих исследованиях мы провели два опыта с целью определения эффективности введений аналога гонадолиберина и ХГЧ параллельно третьему осеменению. В первом опыте в качестве аналога гонадолиберина использовали сурфагон в дозе 15 мкг, а в качестве хориогонического гонадотропина - хорулон (Голландия) в дозе 1500 Ш. Препараты вводили внутримышечно двум группам коров, причем, первой группе - в спонтанную охоту, второй - в индуцированную. Охоту во второй группе (включая контрольных животных) вызывали введением 2 мл эструмата внутримышечно в лютеальную фазу полового цикла при хорошо выраженном желтом теле в одном из яичников. Во втором.-опыте вместо хорулона применили ХГЧ Покровской биофабрики, а вместо эстру-мата - эстуфалан в тех же дозировках. Обработки контрольных животных в обеих опытах ЕО время осеменения не проводили.
Анализ полученных данных (табл. 4 ) показывает некоторый положительный эффект в первой группе относительно контроля.
Решающее положительное влияние было достигнуто во второй группе. Практически все животные второй группы, не ставшие стельными после осеменения в индуцированную охоту, были плодотворно осеменены в последующую спонтанную, в то время как оставшиеся нестельншли животные первой группы не ооеменились и в дальнейшем (наблюдения продолжали на протяжении 3-х спонтанных циклов, следующих после индуцированной охоты).
В условиях практики бывает трудно выяснить причину многократных перегулов коров. Отсутствие положительного результата после первого и второго осеменения в определенной мере мокно объяснить неправильным выбором Бремени проведения осеменения, так как при этом не отмечают нарушений в процессе овуляции. Однако в дальнейшем, как показывают наши исследования методом ректального контроля, во время третьего эструса в большинстве случаев происходит нарушение процесса овуляции, сопровождающееся атрезией фолликула при увеличении продолжительности эструса. Для некоторых хозяйств это явление весьма типично и периодически может принимать массовый характер. Наши данные по этому аспекту находятся в соответствии с данными литературы, причем причина нарушения процесса овуляции во время третьего эструса во многом не ясна и требует своего разрешения.
Таким образом, в наших исследованиях применение аналогов Гн-Рф и препаратов ІІЧ параллельно осеменению коров после перегулов может давать существенное увеличение показателя опло-дотворяемости при осемненении в индуцированную охоту. Возможно, что при этом улучшение оплодотворяемости происходит вследствие детерменированного, по сравнению со спонтанной охотой, осеменения. Следует отметить одинаковый эффект препаратов, как импортных, так и отечественного производства.
