Содержание к диссертации
Введение
1. Обзор литературы 11
1.1. Стресс как неспецифическое звено адаптации организма 11
1.1.1. Системы, реализующие и лимитирующие стресс 17
1.2. Характеристика регуляторных пептидов 20
1.2.1. Классификация регуляторных пептидов 22
1.2.2. Пути биосинтеза и продукты распада регуляторных пептидов 24
1.2.3. Источники пролинсодержащих пептидов 29
1.3. Нарушения функций желудка под действием стресса 31
1.4. Регуляторная активность пролинсодержащих пептидов 35
1.4.1. Противоязвенные свойства простейших пролинсодержащих пептидов 38
2. Материалы и методы исследования 40
2.1. Характеристика эксперимента 40
2.2. Характеристика используемых химических веществ в эксперименте 43
2.3. Порядок постановки опытов 44
2.4. Биохимические методы анализа полученного материала 46
2.5. Статистическая обработка полученных результатов 48
3. Результаты собственных исследований 49
3.1. Влияние пептидов Pro-GIy-Pro и Gly-Pro на секреторную функцию желудка у крыс 49
3.2. Секреторный ответ желудка собак на введение пептида Gly-Pro 53
3.2.1. Анализ желудочной секреции и показателей периферической крови в контрольных опытах у собак 53
3.2.2. Влияние Gly-Pro на секреторную функцию желудка у собак с исходно различными уровнями желудочной секреции 58
3.3. Влияние иммобилизационного стресса на показатели стресс-реакции и секреторную активность желудка у крыс 63
3.4. Влияние иммобилизационного стресса на показатели стресс -реакции и секреторную активность желудка у собак с исходно различными уровнями желудочной секреции 67
3.5. Влияние пептидов Pro-Gly-Pro и Gly-Pro на секреторную функцию желудка крыс после действия стресса 76
3.6. Влияние Gly-Pro на секреторную функцию желудка собак при стрессе 81
3.6.1. Изменение показателей желудочной секреции при введении Gly-Pro собакам с исходно различной секреторной активностью желудка после иммобилизации 81
3.6.2. Влияние превентивного стрессу введения Gly-Pro на секреторную функцию желудка у собак с исходно различными уровнями секреции 87
4, Обсуждение результатов 94
4.1. Характеристика секреторной функции желудка 94
4.2. Участие пептидов Pro-Gly-Pro и Gly-Pro в регуляции стимулированной карбахолином секреции желудка крыс и собак ... 97
4.3. Влияние иммобилизационного стресса на показатели стресс-реакции и секреторную активность желудка экспериментальных животных 105
4.4. Регуляция желудочной секреции пептидами Pro-Gly-Pro и Gly-Pro при действии стресса 116
Выводы 125
Литература 127
- Стресс как неспецифическое звено адаптации организма
- Влияние иммобилизационного стресса на показатели стресс -реакции и секреторную активность желудка у собак с исходно различными уровнями желудочной секреции
- Изменение показателей желудочной секреции при введении Gly-Pro собакам с исходно различной секреторной активностью желудка после иммобилизации
- Участие пептидов Pro-Gly-Pro и Gly-Pro в регуляции стимулированной карбахолином секреции желудка крыс и собак
Введение к работе
Актуальность проблемы. Изменения моторной и секреторной функций желудочно-кишечного тракта, по современным представлениям, являются обязательным компонентом реакции организма на стрессорное воздействие (Гуска Н.И., 1990; Перцов С.С., 1995; Пшенникова М.Г., 1999; Фурдуй Ф.И., 1990; Martinez-Augustin О., Sanches de Medina FJr., Sanches de Medina F., 2000). Ещё Г. Селье избрал эту систему одним из индикаторов стресса, а желудок — одним из его главных органов-мишеней. Стрессорные реакции желудка являются необходимым условием приспособления организма к изменениям в окружающей среде (Селье Г., 1960).
Открытие в системе регуляции пищеварительных функций регуляторных веществ создало новую концептуальную основу, во-первых, для изучения регуляции пищеварительной системы, во-вторых, её адаптации к действию стрес-сорных факторов, и, в-третьих, выяснения механизмов формирования патологических состояний желудочно-кишечного тракта (Овсянников В.И., 2003; Харченко ЕЛ. и др., 1987; Чипенс Г.И., 1980; Stewart M.S., Channabasavaiah К., 1979). Нейромедиаторы и гормоны различной химической природы в пищеварительной системе выполняют функции медиаторов и/или модуляторов. В настоящее время известно, что в формировании компенсаторно-приспособительных реакций со стороны желудочно-кишечного тракта в ответ на стресс и нарушение гомеостаза участвуют такие регуляторные пептиды, как энкефалины, эндорфины, серотонин, дофамин, АКТГ, ГАМК (Георгадзе А.К., Фомин В.Б. и др., 1990; Жукова Т.В., Евстратова Е.Ф., Бартенева Т.А., 1994; Зверков И.В., Виноградов В.А. и др., 1987; Корякина Л.А., Серова Л.И., 1989; Павлова В.И., 1990; Просекина Е.Ю., 2001; Смагин В.Г., Виноградов В.А., Булгаков С.А., 1984, 1987; Тимошин С. С, Швец С. И., Мурзина Н. Б., 1990; Циммерман Я.С., Ведерников В.Е., 1998; Ярыгин К.Н., Шитек А.Г., Полонский В.Н., 1986; Beaulieu S., Paolo Т., Barden N.. 1985; Mehta C.S., Strada S.J., 1994; Nigel W. Bunnett, 2005).
Активное изучение регуляторних пептидов привело к радикальному переосмыслению механизмов регуляции гомеостаза (Хавинсон В.Х., Малинин В.В., 2002). Выяснилось, что во многих случаях воздействие на физиологические процессы оказывают не целые молекулы, а их небольшие фрагменты - олиго-пептиды. Они отщепляются от достаточно длинных молекул в соответствии с потребностями организма и обладают определённой направленностью действия, специфичностью и собственной биологической активностью (Морозов В.Г., Хавинсон В.Х., Малинин В.В., 2000; Хавинсон В.Х., Малинин В.В., 2002). В этом аспекте большой интерес представляют малоизученные пептиды, которые были выявлены сравнительно недавно - глипролины (Ашмарин И.П. и др., 1998, 2002; Бакаева З.В. и др., 2004). К настоящему моменту, к семейству гли-пролинов относят Pro-Gly, Gly-Pro, Pro-Gly-Pro, циклический Pro-Gly, Gly-Pro-Gly-Gly и некоторые другие пептиды (Ашмарин И.П. и др., 1998,2002).
Пролинсодержащие пептиды обладают уникальным спектром физиологической активности. Они способны влиять на анальгетические реакции (Абрамова М.А., Самонина Г.Е. и др.,1997; Ray А.К., Dey Р.К., 1982), изменять удельную активность ферментов утилизации нейромедиаторов (Доведова Е.Л., Самонина Г.Е. и др., 1998), модулировать активность самих медиаторов (Бабская Н.Е., Ашмарин И.П., 1998). Глипролины обладают антикоагулянтной, фибри-нолитической и антитромботической активностью (Ашмарин И.П. и др., 1998; 2002), усиливают лимфоток брыжейки крыс, препятствуют развитию стрессо-генных нарушений микроциркуляции русла брыжейки крыс (Жуйкова С.Е., 2003; Смирнова Е.А., 2004). Короткие пролинсодержащие пептиды Pro-Gly-Pro, Pro-Gly, Gly-Pro обладают эффективным протекторным и лечебным противоязвенным действием (Абрамова М.А., Самонина Г.Е., Ашмарин И.П., 1996; Ашмарин И.П. и др., 1998, 2002; Бакаева З.В., Самонина Г.Е., 2005; Samonina G. et al., 2000). Имеются указания о влиянии цикло-GIy-Pro на консолидацию памяти (Ашмарин И.П. и др., 1998) и Pro-Gly-Pro на изменения поведения крыс, вызванные воздействием стресса (Копылова Г.Н. и др., 2004).
Накопленные данные являются основанием для фундаментальных исследований и работ медицинской направленности, рассчитанных на возможность, в конечном счете, использовать потенциал простейших пролинсодержащих пептидов. И в фундаментальном, и в медицинском плане целесообразен еще более широкий поиск возможных биологических активностей простейших пролинсодержащих пептидов (Ашмарин И.П. и др., 1998). Кроме того, для оценки реальной роли нейромедиаторов, гормонов или пептидов в системе регуляции желудочно-кишечного тракта необходимо изучение интеграции нейромедиа-торных и гормональных факторов в процессе реализации управляющих воздействий (Овсянников В.И., 2003).
Анализ литературы показал малочисленность и неоднозначность имеющихся данных о протекторном действии пролинсодержащих пептидов на слизистую оболочку желудка. Отсутствует информация о влиянии глипролинов на комплекс показателей желудочной секреции в условиях стимуляции деятельности желудка при стрессе. Крайне малочисленна информация об участии пролинсодержащих пептидов в защитных реакциях желудка. Отсутствуют данные о регуляции этими пептидами секреции слизи. Вплоть до настоящего времени не до конца изучены механизмы действия глипролинов и многие вопросы остаются открытыми. Не рассматривались особенности влияния дипептидных дериватов, которые образуются при гидролизе Pro-GIy-Pro и Gly-Pro-Gly-Gly под действием пролилпептидаз, на секреторную активность желудка. Не изучался вопрос о возможности глипролинов модулировать эффекты парасимпатической и сипматической нервных систем. Поэтому выше сказанное объясняет интерес данной научной работы к изучению действия пролинсодержащих пептидов на секреторную функцию желудка, стимулированную карбахолином, в условиях иммобилизационного стресса.
Цель исследования: изучить влияние дипептида Gly-Pro на секреторную активность желудка при иммобилизационном стрессе.
Для достижения цели последовательно решались следующие задачи:
Оценить особенности действия пролинсодержащих пептидов Pro-Gly-Pro и Gly-Pro на секреторную активность желудка крыс и собак на фоне карбахоли-на.
Изучить влияние временного интервала между введением физиологического раствора и карбахолина на секрецию желудка крыс после иммобилизационного стресса.
Исследовать особенности влияния иммобилизационного стресса на желудочную секрецию собак с исходно различными уровнями секреторной активности желудка.
Изучить особенности действия пептидов Pro-Gly-Pro, Gly-Pro на секреторную активность желудка при иммобилизации и определить их зависимость от реакции желудка на стрессорное воздействие и режима дозирования пептида.
Научная новизна и практическая значимость. В работе впервые проведён анализ действия пролинсодержащих пептидов (Pro-Gly-Pro, Gly-Pro) на секреторную активность желудка, стимулированную карбахолином с использованием модели иммобилизационного стресса. Показано, что характер ответа сочетанного действия пептидов Pro-Gly-Pro и Gly-Pro с аналогом холинергиче-ского нейромедиатора ацетилхолина - карбахолином и антистрессорная активность этих глипролинов в отношении слизистой оболочки желудка определялись: 1) структурной формой глипролинов, 2) интервалом времени между введением стимулятора и пептида, 3) исходным уровнем секреторной активности желудка, 4) моментом введения пептида относительно действия иммобилизационного стресса. Впервые установлено, что временной интервал между введением физиологического раствора и карбахолина после восемнадцатичасовой иммобилизации приводит к разным проявлениям стресс-реакции у крыс со стороны секреции желудка. Кроме того, отличия в стресс-реакции были зарегистрированы у собак с различными исходными уровнями желудочной секреции. Впервые обнаружена способность пептидов Pro-Gly-Pro и Gly-Pro изме- нять концентрацию кортикостероидов в крови животных, что может являться одним из возможных механизмов обеспечения глипролинами адаптивных реакций со стороны желудка в ответ на действие стресса.
Данная работа вносит вклад в развитие представлений о механизмах пеп-тидергической регуляции секреторной функции желудка в физиологических условиях и при действии стресса. Результаты работы раскрывают и расширяют представление о роли системы пептидных регуляторов в механизмах адаптации слизистой оболочки желудка к стрессорному воздействию и располагают к поиску лекарственных средств на основе данных пептидов. Основные положения работы могут быть использованы в качестве теоретической основы для прикладных исследований в научно — практических учреждениях, занимающихся проблемами профилактики и коррекции функционального состояния организма при воздействии на него длительной иммобилизации.
Результаты исследований используются в теоретических курсах «Трофология», «Эндокринология», «Основы межклеточной и внутриклеточной сигнализации», «Регуляторные пептиды», «Физиология человека и животных», читаемых на кафедре физиологии человека и животных Томского государственного университета.
Основные положения, выносимые на защиту:
1. Пролинсодержащие пептиды могут модулировать холинергические влияния на желудочную секрецию в нормальных физиологических условиях и в условиях иммобилизационного стресса.
2. Дипептид Gly-Pro - структурный компонент Pro-Gly-Pro, обладает само стоятельной физиологической активностью в отношении желудочной секреции по сравнению со своим предшественником. Его эффект зависит от временного интервала между инъекциями дипептида и карбахолина, исходного уровня сек реции желудка, направленности изменения секреции желудка под действием стресса и режима дозирования пептида.
Апробация работы. Основные положения диссертации докладывались на научных съездах и конференциях: «Физиология организмов в нормальном и экстремальном состояниях» (Томск, 2001), IV съезд Физиологов Сибири (Новосибирск, 2002), «Старт в науку» (Томск, 2002), «Биолого-почвенный факультет: прошлое, настоящее и будущее» (Томск, 2003), XIX съезд физиологического общества им. И.П, Павлова (Екатеринбург, 2004), V Сибирский физиологический съезд (Томск, 2005).
Публикации. По материалам диссертации опубликовано 8 работ, из которых 5 работ в рецензируемых журналах.
Объём и структура работы..Диссертация изложена на 158 страницах машинописного текста и состоит из списка сокращений, введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, результатов собственных исследований и их обсуждения, выводов и списка цитируемой литературы, включающего 253 отечественных и 83 зарубежных источников. Работа иллюстрирована 17 рисунками и 16 таблицами.
Стресс как неспецифическое звено адаптации организма
Задолго до того, как стали размышлять о стрессе, великий французский физиолог Клод Бернар (1857) впервые четко указал, что внутренняя среда живого организма должна сохранять постоянство при любых колебаниях внешней среды. Он осознал: «...именно постоянство внутренней среды служит условием свободной и независимой жизни» (цит. по Селье Г., 1979). На любое предъявляемое требование организм отвечает отклонением заданных параметров. В дальнейшем, выдающийся русский физиолог А.А. Богомолец в 1906 году на основании большого клинического материала установил, что различные воздействия на организм вызывают однотипные морфологические изменения в коре надпочечников (цит. по Горизонтову П.Д., 1973). А в 1926 году Г. Селье, обучаясь на втором курсе медицинского факультета, аналогично отметил, что у больных страдающих разными болезнями, так много одинаковых признаков и симптомов (Селье Г., 1979). Именно он, канадский ученый, впервые употребил слово «стресс» в 1936 году.
В своих исследованиях Г. Селье показал, что при воздействии разнообразных стрессоров (тревожное состояние или какой - либо конфликт, физическая нагрузка или какой - либо яд) организм отвечает неспецифическими реакциями защиты: учащением пульса, повышением артериального давления, увеличением в крови гормонов - кортикостероидов. Автор весь этот комплекс физиологических реакций назвал стрессом, что в переводе с английского означает «напряжение» (Селье Г., 1972; 1979). С этого момента Г. Селье считается основоположником разработки данной проблемы, и созданное им учение послужило толчком для дальнейших исследований.
Динамическое проявление стресса во времени, согласно концепции Г. Селье, называется «Общим Адаптационным Синдромом» (ОАС), который составляет неотъемлемый компонент срочного этапа адаптации ко всем без исключе ния факторам. Этот синдром играет важную роль в становлении долговременной адаптации. ОАС как синдром биологического стресса по Г. Селье развивается в виде трехфазной реакции, в которой имеются стадии: 1) тревоги; 2) сопротивления; 3) истощения. Гибель организма может наступить либо в стадии тревоги, либо в стадии истощения, а выздоровление пр щсходит в стадии сопротивления (Гаркави Л.Х., Квакина Е.Б., Уколова МЛ., 1990; Горизонтов П.Д., Белоусова О.И., Федотова М.И., 1983; Селье Г., 1972, 1979).
Открытая Г. Селье (1936) ответная реакция организма на стрессорный фактор сопровождается повышением активности гипофизарно-адреналовоЙ системы, что находит подтверждение у отечественных и зарубежных исследователей (Ажипа А.В., 1981; Анохин П.К., 1979; Виру А.А., 1981; Гаркави Л.Х., Квакина Е.Б., Уколова М.Л., 1990; Кассиль Г.К., 1983; Кокс Т., 1981; Меерсон Ф.З., 1986, 1993; Робу А.И., 1989; Судаков К.В., Юматов Е.А., Ульянский Л.С., 1988; Фурдуй Ф.И., 1990; Хайдарлиу С.Х., 1989; Штирбу Е.И., 1987; Эверли Дж., Ро-зенфельд Э., 1985; Brayn R.M.Jr., 1990; Dvorska I. et al., 1992; Kuwahira I. et al., 1993; Zhang J.F., Zheng F., 1997). В этих работах показано участие различных систем (органов и тканей, ЦНС, желёз внутренней секреции и т.п.) в реакции организма на стресс. Например, доктор Дж. Мейсон считает, что общим знаменателем всех стрессоров является активация физиологического аппарата, ответственного за эмоциональное возбуждение (цит. по Селье Г., 1979). Одновременно с этим необходимо отметить, что стрессовые ситуации присущи и низшим животным (Селье Г., 1979). Напрашивается вывод о том, что в основе всех описанных явлений лежат нервный фактор и рефлексы, вызываемые нанесением чрезвычайного раздражителя на организм. А.В. Вальдман с соавт. (1979) выделил две качественно различные категории стрессов. Первая - реакции, возникающие при воздействии на ткани физическим путем (физический стресс). Вторая категория - психические воздействия, вызывающие эмоционально -психические реакции, которые и являются источником последующих стресс -реакций (Заводская И.С., Морева Е.В., 1981). Таким образом, стрессом принято считать ту форму проявления адаптивных реакций, которая связана с включением нейроэндокринного звена, вызывающего мобилизацию всех систем организма (Горизонтов П.Д., Белоусова О.И., Федотова М.И., 1983). Теперь, исходя из современных представлений, стресс - это совокупность общих биохимических, физиологических, психологических реакций организма в ответ на действие чрезвычайных раздражителей различной природы и характера, вызванных «напряжением» функции в первую очередь органов, входящих, как неспецифические составные компоненты, в функциональные системы и обеспечивающих мобилизацию организма в целях поддержания гомеостаза или его адаптации (Фурдуй Ф.И., 1990).
Основное функциональное состояние и свойство любого организма - это адаптация. Именно она определяет возможности человека и животных в обеспечении жизнедеятельности и выживания в изменившихся условиях внешней среды (Гаркави Л.Х., Квакина Е.Б., Уколова М.Л., 1990; Казначеев В.П. и др., 2000; Шустов Е.Б., Новиков B.C., Горанчук В.В., 1999). Адаптивные механизмы включаются в ответ на воздействие многочисленных факторов среды и, особенно экстремальных. В результате происходит запуск обратимых метаболических изменений в организме, которые направлены на организацию адаптивных реакций с обязательным участием автономной нервной системы, повышая го-меостатическую устойчивость как целостного организма, так и стационарных состояний всех его систем, в том числе и пищеварительной (Меерсон Ф.З., 1986; Павлов С.Е., 1999; Пушкарев ЮЛ. и др., 1999; Судаков К.В., Юматов Е.А., Ульянский Л.С., 1988; Уголев A.M., Тимофеева Н.М., Груздков А.А., 1986; Фурдуй Ф.И., 1991).
Ф.З. Меерсон (1981) выделил три этапа в развитии адаптивных реакций. Первичный этап - срочной, но несовершенной адаптации (нейрогуморальный процесс) характеризуется гиперфункцией - это начало формирования функциональной системы, ответственной за адаптацию. Главными количественными критериями оценки состояния организма в этих первичных реакциях являются гормоны и медиаторы (Кассиль Г.Н., 1983; Панин Л.Е., 1978, 1983; Розен В.Б., 1981; Gordon R. et al., 1980; CedornL., 1985). За счет почти полной мобилизации резервов в этот период деятельность организма протекает на пределе его функциональных возможностей. Первичный этап далеко не в полной мере обеспечивает необходимый для организма адаптационный эффект (Меерсон Ф.З., 1981). Для переходного этапа (второго этапа) от срочной адаптации к долговременной характерна активация синтеза белков и нуклеиновых кислот в клетках системы, которая специфически ответственна за адаптацию. Мощность этой системы увеличивается и постепенно происходит уменьшение стресс - синдрома (Меерсон Ф.З., 1981). В безвыходных ситуациях второй этап может затягиваться и не осуществляется требуемая приспособительная реакция. Именно в этой ситуации возникают многочисленные стрессорные заболевания. Но в большинстве случаев переходный этап завершается, и развивается устойчивая адаптация -совершенная долговременная адаптация. На этом этапе образуются долговременные приспособительные реакции к определённому фактору или ситуации и развиваются конкретные изменения в физиологических системах. Всё это составляет так называемый «структурный след» (Векслер Л.И., Волжина Н.Г., Серебренникова Э.Г., 1987; Меерсон Ф.З., 1993; Хайдарлиу СХ, 1989).
Влияние иммобилизационного стресса на показатели стресс -реакции и секреторную активность желудка у собак с исходно различными уровнями желудочной секреции
Для исследования действия пептида на стрессорные изменения желудочной секреции в динамике сокоотделения у собак необходимо было рассмотреть действие самого ИС на желудочную секрецию животных с исходно различными уровнями секреторной активности желудка.
После ИС собак освобождали, выгуливали и промывали желудок. Затем внутримышечно вводили карбахолин в дозе 6 мкг/кг и физиологический раствор (внутривенно). Контрольные опыты на собаках заключались в изучении желудочной секреции в ответ на карбахолин в сочетании с внутривенным введением физиологического раствора. Время секреции с момента введения стимулятора составило 2,5 часа. Существенные различия между группами собак отмечены по степени выраженности стрессорной реакции. Так, после иммобилизации у собак первой группы с исходно низкой концентрацией глюкокортикгидов, содержание 11-ОКС увеличилось в 4,3 раза с (0,3 ± 0,04) мкмоль/л до (1,2 ± 0,04) мкмоль/л, (р 0,05), а у животных второй группы с исходно высокой концентрацией 11 ОКС - в 2,5 раза с (0,6 ± 0,08) мкмоль/л до (1,6 ± 0,08) мкмоль/л, (р 0,05).
Изменения лейкограммы заключались в резко выраженном нейтрофилёзе (за счёт сегментоядерных форм у первой группы собак и палочкоядерных форм у второй), моноцитозе и лимфопении. Содержание эозинофилов снижалось в первой группе собак и имело тенденцию к увеличению во второй группе (таблица 8).
Суммарное количество лейкоцитов у собак обеих групп после иммобилизации увеличилось на 95 % с (10061 ± 577,0)х(109/л) до (19617 ± 570,0) 109/л, (р 0,05). Характерное для первой группы собак высокое фоновое содержание палочкоядерных нейтрофилов после воздействия стресса не изменилось. В то же время во второй группе животных стресс вызывал увеличение палочкоядер ных нейтрофилов в 2 раза (таблица 8). В группах животных с исходно высоким и низким уровнями желудочной секреции содержание сегментоядерных ней трофилов в контроле не отличалось друг от друга и после действия стресса из менялось лишь в первой группе собак (увеличилось на 22 %). Более высокое процентное содержание эозинофилов в крови у собак первой группы уменьша ется после действия стресса на 54 % . Базофилы были характерны только для первой группы животных и их количество после ИС увеличилось в 3 раза. По сле действия иммобилизации исходно высокое содержание моноцитов у первой группы животных увеличилось на 39 %. Для второй группы собак было харак терно исходно низкое содержание моноцитов, однако, у них увеличение было более значительным (в 2,5 раза). Исходное количество лимфоцитов у собак этой первой группы было достоверно ниже (22,3 %), чем у второй группы жи вотных (37,3 %). ИС вызывал примерно одинаковое снижение количества лим фоцитов в крови (в первой группе на 65 %, во второй - на 67 %) и сохранял различия по этому показателю между группами (таблица 8).
В целом результаты данного эксперимента свидетельствовали о том, что у собак с исходно низким уровнем 11-ОКС в плазме крови увеличение гормонов после стресса более выражено, чем в группе животных с более высоким контрольным уровнем 11-ОКС и изменения лейкограммы неоднозначны.
Полученная в ходе исследования направленность изменений показателей стресс - реакции соответствуют данным других авторов, которые указывают на повышение уровня катаболических гормонов при стрессе, нейтрофильный лейкоцитоз, эозинопению, лимфопению в периферической крови у людей и экспериментальных животных (Голиков П.П., 1988; Гольдберг Е.Д. и др., 1990; Горизонтов П.Д. и др., 1983; Колесникова Л.А., Оськина И.Н., 2003; Ласукова Т.В., 1991; Просекина ЕЛО., 2001; Угарова О.П., 1985). Эта реакция относится к неспецифической реакции организма на внешнее воздействие.
Таким образом, в ходе экспериментов обнаружили результаты, которые указывают на зависимость величины и направленности наблюдаемых изменений картины крови от индивидуальных характеристик собак (исходного уровня показателей). Полученные результаты находят подтверждение в работах Н.К. Поповой и др. (1996), Л.А. Колесниковой, И.Н. Оськиной (2003). По всей вероятности, различия концентрации 11-ОКС и состава белой крови у собак данных групп как фоновые, так и после действия стресса связаны с исходно различной функциональной активностью гипофизарно-надпочечниковой системы у этих животных.
Изменения секреторной активности желудка у собак после действия стресса также существенно зависели от исходных показателей. Восемнадцати часовая иммобилизация оказывала угнетающее действие на объём выделяющегося сока у собак с исходно высоким уровнем секреции желудка. Суммарное за опыт ко-личество сока снизилось на 30 % (таблица 9), а в динамике снижение секреции начиналось с 90 минуты (рисунок 6А). У собак с исходно низким уровнем секреторной активности желудка ИС вызывал лишь тенденцию к увеличению суммарного за опыт количества желудочного сока (р 0,05) (таблица 9). Изменялась динамика сокоотделения: в первой пробе количество сока достоверно превышало фоновый уровень, но в четвёртой и пятой пробах сока наблюдалось статистически достоверное снижение объёма (рисунок 6Б). I,
После ИС темп секреции активных водородных ионов как суммарный за весь опыт, так и в динамике сокоотделения у собак с исходно высоким уровнем секреции желудка значимо не изменялся (таблица 9). Кислотность желудочного сока под действием стресса уменьшалась на 33 %, Снижение концентрации водородных ионов у собак первой группы наблюдали на 60 и 90 минутах эксперимента (рисунок 7А). Возможно, уменьшение концентрации активных ионов водорода было связано с увеличением при стрессе секреции бикарбонатов в желудке, что способствовало нейтрализации активных протонов,
Примечания: сплошная линия - карбахолин + физиологический раствор (контроль); пунктирная линия - карбахолин + физиологический раствор после иммобилизации; - отличия по сравнению с контролем достоверны (р 0,05). У собак с исходно низким секреторным потенциалом желудка восемнадцатичасовая иммобилизация привела к увеличению на 30 минуте темпа секреции водородных ионов и их снижению на 150 минуте опыта (рисунок 8). Такая компенсация объясняет отсутствие достоверных изменений суммарного темпа секреции протонов (таблица 9). Значительный рост секреции активных протонов в первой пробе (практически в 2,5 раза) повлёк за собой увеличение кислотности сока на 30 минуте эксперимента (рисунок 7Б), за счёт чего и отметили рост среднего значения концентрации активных водородных ионов на 30 % у собак второй группы (таблица 9). Угнетение темпа секреции активных протонов на 150 минуте опыта положительно коррелировало со снижением объёма отделяемого секрета, в результате чего концентрация водородных ионов оставалась на уровне фоновых значений.
Примечания: сплошная линия - карбахолин + физиологический раствор (контроль); пунктирная линия - карбахолин + физиологический раствор после иммобилизации; - отличия по сравнению с контролем достоверны (р 0,05). Полученные результаты обнаружили неоднозначность в изменении проте-олитической активности желудочного сока после иммобилизации у собак с исходно разной секреторной активностью желудка. Исходно высокая ферментативная активность у собак первой группы под влиянием стресса снижалась в 10 раз. В динамике протеолитическая активность сока у собак этой группы уменьшалась на протяжении всего эксперимента (рисунок 9А). Исходно низкая переваривающая способность у собак второй группы после иммобилизации увеличивалась в 2 раза (р 0,05) (таблица 9), в основном за счет увеличения первых двух проб (рисунок 9Б).
Изменение показателей желудочной секреции при введении Gly-Pro собакам с исходно различной секреторной активностью желудка после иммобилизации
Введение GP после иммобилизации оказывало стимулирующее действие на объём сока у собак с исходно высоким уровнем секреторной активности желудка и угнетающее действие у собак с исходно, низким секреторным потенциалом. Уменьшенное действием стресса, количество сока, выделившегося за весь опыт, увеличивалось на 64 % у собак первой группы (таблица 13) за счёт роста секреции на 90, 120 и 150 минутах опыта (рисунок 10А). Объём сока достигал контрольного значения.
У собак второй группы количество отделяемого за весь опыт сока снижалось по сравнению со значением после стресса на 20 % и тоже соответствовало уровню фоновой секреции. В динамике выделения сока у собак с низкими контрольными значениями желудочной секреции снижение количества сока отмечали на 60 минуте эксперимента (рисунок 10Б).
При введении GP после ИС у собак первой группы темп секреции активных водородных ионов увеличивался на 61 % и приближался к уровню фонового значения. В динамике желудочного сокоотделения рост темпа секреции водородных ионов был зарегистрирован на протяжении всего времени эксперимента, кроме 60 минуты (рисунок 11А). У собак с исходно низкой секреторной активностью желудка введение пептида после стресса вызывало уменьшение темпа секреции протонов на 27 % (таблица 13), особенно отчётливое на 30 минуте опыта (рисунок 11Б). Темп секреции водородных ионов в этой группе не отличался от исходных (контрольных) значений, что позволяет говорить о нормализующем влиянии GP.
С изменениями темпа секреции активных водородных ионов в группах собак связаны параллельные изменения кислотности, которая определялась концентрацией водородных ионов. Введение GP после иммобилизации собакам с исходно высокой секреторной активностью желудка привело к увеличению концентрации водородных ионов в соке на 89 %, которая была снижена действием иммобилизации. В результате этот показатель превысил фоновое значение на 27 % (таблица 13). Увеличение кислотности у собак первой группы наблюдали на протяжении всего опыта (рисунок I2A). Повышение кислотности, обу словленное стрессом, у собак с исходно низким уровнем секреторной активности желудка несколько нивелировалось (на 8 %) под влиянием GP, однако не до исходного уровня (таблица 13). Концентрация водородных ионов при введении пептида после ИС собакам второй группы превышала на 20 % контрольный уровень кислотности. Динамика кислотности собак с исходно низкой секреторной активностью желудка характеризовалась снижением концентрации протонов в 3-ей пробе желудочного сока (рисунок 12Б).
Введение GP после иммобилизации не изменяло протеолитическую активность, сниженную действием стресса у животных с исходно высоким уровнем секреторной функции желудка. По сравнению с фоновым уровнем протеолити-ческая активность была выше на 75 % . Увеличенное действием иммобилизации среднее значение активности протеолитических ферментов в группе с исходно низкой секреторной функцией желудка пептид не изменял, и оно в 3,5 раза превышало контрольное значение (таблица 13). У этой группы значимое увеличение активности ферментов в динамике отмечали на 120, 150 минутах эксперимента .
Примечания: сплошная линия - «стресс» (стресс + карбахолин + физиологический раствор), пунктирная - стресс + карбахолин + GP; - отличия относительно серии «стресс» статистически значимы (р 0,05)
При введении GP после ИС собакам с различным исходным уровнем секреторной активности желудка отмечено снижение количества фукозы на 24 % в желудочном секрете у собак с исходно низкой секреторной активностью.
Таким образом, направленность изменений показателей секреторной функции желудка после введения GP собакам на фоне стресса определялась направленностью их изменения при действии самого стресса, и зависела от исходного уровня функциональной активности органа жизотных. Действие GP, введённого после иммобилизации, на объём секрета, концентрацию и темп секреции водородных ионов желудочного сока было направлено на уменьшение вызванных стрессом изменений. Отмечено восстановление исходного уровня секреции сока и темпа секреции водородных ионов. Тем не менее, концентрация водородных ионов при введении GP после ИС собакам обеих групп превышала таковую в контрольных опытах, что является фактором агрессии в отношении СОЖ. Протеолитическая активность при введении GP после иммобилизации собакам не изменялась и оставалась на уровне постстрессорных значений: у собак с исходно высокой секреторной активностью желудка ниже уровня контрольных значений, а у собак с исходно низкой секреторной активностью оставалась значимо выше контрольного уровня. Содержание фукозы снижалось при введении пептида после стресса у собак с исходно низкой секреторной активностью желудка и практически достигало контрольного уровня.
