Содержание к диссертации
Введение
Глава 1. Взаимодействие тромбоцитов с сосудистой стенкой и клетками крови (Обзор литературы) 14
1.1. Адгезия тромбоцитов к различным компонентам сосудистой стенки 14
1.2. Адгезивный контакт тромбоцитов и форменных элементов крови 23
1.3. Особенности тромбоцитарно – лимфоцитарного взаимодействия 33
1.4. Роль тромбоцитов в регуляции функций и миграции Т-лимфоцитов в сосудистую стенку 46
1.5. Атеросклероз как воспалительное и тромботическое заболевание: Роль CD4 + лимфоцитов 56
ГЛАВА 2. Материалы и методы исследований 66
ГЛАВА 3. Роль тромбоцитов и некоторых адгезивных молекул в контактном взаимодействии лимфоцитов с различными компонентами экстрацеллюлярного матрикса .
3.1.1. Роль тромбоцитов в адгезии CD4+ лимфоцитов к фибронектину в условиях статики 82
3.1.2. Адгезия лимфоцитов CD 4+ к фибронектину в условиях тока 84
3.1.3. Адгезия свежевыделенных из крови доноров лимфоцитов CD 4+ к фибронектину в условиях статики и тока 87
3.1.4. Адгезия лимфоцитов CD4 + к поверхности, покрытой фибронектином, предварительно обработанной бедной тромбоцитами плазмы и богатой тромбоцитами плазмой 90
3.1.5. Роль 4 (CD49) и 5 (CD49e) интегринов в тромбоцит-зависимой адгезии лимфоцитов CD4 к фибронектину 92
3.1.6. Роль CD40l (CD154) , PSGL -1 (CD162) и 2-интегринов (CD18)
в тромбоцит-зависимой адгезии CD4+ лимфоцитов к
фибронектину 93
3.2.1. Роль тромбоцитов в адгезии лимфоцитов CD4+ к коллагену 95
3.2.2. Участие 1, 2 интегринов в адгезии лимфоцитов CD4+ к коллагену на поверхности предварительно покрытой тромбоцитами 98
3.3.1 Сравнительная оценка адгезии лимфоцитов CD4+ клона в присутствии тромбоцитов к фибронектину, коллагену и экстрацеллюлярному матриксу 99
3.3.2. Роль тромбоцитов в адгезии нормальных свежевыделенных лимфоцитов к фибрину 104
ГЛАВА 4. Тромбоцитарно-лейкоцитарные взаимодействия в норме 108
4.1. Адгезия тромбоцитов с различными видами лейкоцитов 108
4.2. Взаимодействие тромбоцитов с различными субпопуляциями лимфоцитов 112
ГЛАВА 5. Тромбоцитарно - лейкоцитарные взаимодействия при стабильной стенокардии 119
5.1. Число лейкоцитов и лимфоцитов у больных стабильной стенокардией 119
5.2. Тромбоцитарно-лейкоцитарных адгезия и функциональное состояние тромбоцитов у больных стабильной стенокардией на фоне лечения препаратами ацетилсалициловой кислоты 120
5.3. Функциональные свойства тромбоцитов в норме и у больных стенокардией 128
ГЛАВА 6. Физиологическое, патогенетическое и клиническое значение оценки лимфоцитарно тромбоцитарной адгезии 134
Глава 7. Обсуждение полученных результатов 155
Выводы 193
Список литературы
- Особенности тромбоцитарно – лимфоцитарного взаимодействия
- Адгезия свежевыделенных из крови доноров лимфоцитов CD 4+ к фибронектину в условиях статики и тока
- Сравнительная оценка адгезии лимфоцитов CD4+ клона в присутствии тромбоцитов к фибронектину, коллагену и экстрацеллюлярному матриксу
- Тромбоцитарно-лейкоцитарных адгезия и функциональное состояние тромбоцитов у больных стабильной стенокардией на фоне лечения препаратами ацетилсалициловой кислоты
Особенности тромбоцитарно – лимфоцитарного взаимодействия
Циркулируя в просвете сосуда, тромбоциты находятся в непосредственной близости к поверхности эндотелиальной выстилки, однако при этом не проявляют своей способности к стойкой адгезии, что обусловлено их анти-адгезивными свойствами. [251]. В результате нарушения равновесия между про- и анти-адгезивными свойствами кровяных пластинок, по причине механического нарушения целостности сосудов или же под действием патогенных стимулов, происходит незамедлительная адгезия тромбоцитов к поврежденному участку. Взаимодействие тромбоцитов с сосудистой стенкой, в состав которой входят эндотелиальные клетки, гладкомышечные клетки, фибробласты и компоненты ECM, является ключевым инициирующим событием в нормальных тромбоцитарных защитных реакциях и в запуске некоторых патологических процессов.
Ответ на повреждение сосудов будет обусловлен характером их поражения. Пластиночная адгезия зависит от протеиновой матрицы, вступающей в контакт с компонентами крови, а также от ее гемодинамических свойств, и требует синергизма различных адгезивных рецепторов, что, в конечном счете, приводит к последующей активации и агрегации тромбоцитов. В стенке сосудов присутствуют различные типы коллагенов. Как известно, коллагены I, III и VI типов обеспечивают адгезию и агрегацию тромбоцитов [198]. На их поверхности были идентифицированы несколько предполагаемых коллаген-связывающих белков, такие как интегрин 21 (GP Ia-IIa в преинтегриновую эру), GP IV (CD-36) и белок (р65) массой 65 кДа, который специфичен для коллагена I типа [100, 217]. GP IV может отсутствовать на мембране кровяных пластинок, что обнаружили у 5% японцев, и при этом их функция и гемостаза в целом не изменялась [131, 236, 336]. Также не было подтвержден факт существования молекулы p65 работами других ученых. Таким образом, неоспорим факт, что 21 и GP VI участвуют в коллаген-опосредованной адгезии и агрегации кровяных пластинок, но особый вклад каждого из рецепторов в эти процессы до конца еще не раскрыт [92, 218].
Фибриноген присутствует в кровотоке в растворимой белковой форме, также он содержится в -гранулах тромбоцитов, но в норме он не является составляющей ECM. Он необходим для нормальной агрегации тромбоцитов, но не участвует в первичном контакте с поврежденной сосудистой стенкой. Тем не менее в условиях эксперимента иммобилизованный фибриноген является в потоке субстратом для адгезии тромбоцитов, избирательно опосредованной IIb3 (рис.1.1.) молекулами в указанной конформации на неактивных тромбоцитах [291]. Конечным продуктом процесса коагуляции является образование фибрина, который представляет собой сшитый, нерастворимый в воде полимер фибриногена, необходимый для окончательной консолидации тромбоцитарных агрегатов в тромбах, и способствующий адгезии кровяных пластинок. Таким образом, фибрин, покрывающий поврежденную сосудистую поверхность, может служить субстратом для начальной адгезии тромбоцитов. Особое значение при этом имеет синергизм с иммобилизированным VWF, связывающийся со своим GP Ib рецептором [142]. Поскольку фибрин быстро образуется в сосудах с низкой скоростью сдвига, его вклад в начальную адгезию тромбоцитов может быть более значимым в участках венозного, чем артериального кровообращения. В перфузионных системах эти форменные элементы способны лишь ограничено адгезировать к поверхности, покрытой очищенным фибриногеном или фибрином. Так, в случае превышения скорости сдвига более 1000-2000 s-1, тромбоциты в минимальном количестве контактируют с этой поверхностью [228]. Следует отметить, что прилипшие кровяные пластинки активируются и буквально распластываются на поверхности, покрытой иммобилизованным фибриногеном/ фибрином, однако на фоне отсутствия других адгезивных субстратов формируются только небольшие по размерам тромбы.
Фибронектин является важным адгезивным субстратом, поддерживающим осуществление многих фундаментальных биологических процессов [163]. К этому белку тромбоциты обладают двумя основными рецепторами: 51 и IIb3, из которых последний для проявления своей функции требует активации [246, 283]. Известно, что 51 обеспечивает адгезию кровяных пластинок к эндотелиальному ECM [291]. Последнее время накоплены прямые доказательства участия фибронектина в образовании тромбов. Ключевым фактом явилось наблюдение того, что тромбоциты мышей, дефицитных по VWF и фибриногену, могут образовывать тромбы в участках поражения сосудов. Как правило, у таких животных в случае повреждения сосуда его окклюзии не наблюдается, что объясняется необходимым участием VWF в адгезии тромбоцитов в участках с повышенной скоростью сдвига. В этих условиях тромбоцитарные агрегаты нестабильны, в результате чего образуются эмболы, которые могут заблокировать кровоток в нижележащих отделах кровеносного русла. Кроме того, мыши, лишенные IIb3, в подобной ситуации вообще не способны образовывать тромбы, что наводит на мысль об участии 3-лиганда в адгезивном взаимодействии этих форменных элементов друг с другом. Кандидатом на выполнение указанной функции выступает фибронектин [322]. В частности, установлено, что у мышей, с искусственно вызванным недостатком фибронектина плазмы наблюдалась задержка роста тромба и снижение стабильности тромбоцитарных агрегатов [232]. Предполагается, что фибронектин может выступать в качестве синергиста с VWF и фибриногеном в обеспечении контакта между кровяными пластинками посредством IIb3. Результаты и выводы сделанные ранее оспариваются в некоторых работах, которые отмечают неоднозначность этого вопроса. На самом деле, у мышей с тройным дефицитом VWF, фибриногена и фибронектина в плазме, у которых можно было бы ожидать более значительного уменьшения способности к тромбообразованию, фактически эти нарушения развиваются менее выражено, чем у мышей с двойным дефицитом — VWF и фибриногена [285]. В результате этих исследований напрашивается вывод, что фибронектин плазмы не обеспечивает VWF/фибриноген-независимое образования тромбов, а, скорее наоборот, является фактором ингибирования агрегации тромбоцитов. Формируется противоречие — с одной стороны недостаток фибронектина в плазме вызывает нестабильность тромбов при их выделении, но с другой — устраняет дефект у VWF / фибриноген-дефицитных мышей [231, 232]. В результате высказано предположение, что растворимый фибронектин плазмы может подавлять проадгезивную функцию IIb3, однако после перехода в нерастворимые ECM-подобные фибриллы может усиливать тромбообразование [285].
Вышеупомянутая гипотеза еще не доказана и до сих пор не может объяснить многие стороны тромбообразования. Известно, что растворимый плазменный фибронектин образует фибриллярные сети на поверхности фибробластов, кровяных пластинок и других клеток, обеспечивая, таким образом, субстрат, вносящий свой вклад в стабильное прикрепление тромбоцитарных агрегатов [113]. Фибронектин, собранный в волокнистые структуры, поддерживает начальную адгезию кровяных пластинок, непосредственно или косвенно ассоциируясь с коллагеном и/или VWF. В экспериментальных условиях, исключая in vivo, очищенный фибронектин является довольно неэффективным субстратом для адгезии тромбоцитов, что свидетельствует о необходимости для проявления адгезивной функции наличия супрамолекулярных взаимодействий с другими лигандами [237].
Адгезия свежевыделенных из крови доноров лимфоцитов CD 4+ к фибронектину в условиях статики и тока
Впервые адгезивное взаимодействие между тромбоцитами и базофилами, а также некоторыми другими типами лейкоцитов, было изучено в 1992 г. LG de Bruijne-Admiraal и совт. Исследователи обнаружили, что базофилы способны адгезировать на своей поверхности кровяные пластики в изолированной базофильно-тромбоцитарной суспензии. Подсчет коагрегатов осуществлялся с помощью проточного цитометра, после инкубации клеток и тромбоцитов меченными специфическими поверхностными антителами с иммуннофлюорисцентной меткой. Кроме того, авторы установили, что этот тип взаимодействия зависит от содержания Са2+ и со стороны тромбоцитов опосредуется Р-селектином. В общей сложности 4,6% от всех базофилов контактирут с тромбоцитами, после активации последних число коагрегатов возрастает в несколько раз. При дальнейшем изучении литературы по этому вопросу более глубоких исследований нами найдено не было.
С помощью магнитной сепарации Исследователь выделял эозинофилы и смешал их с тромбоцитами, в результате чего в этой суспензии регистрировались эозинофильно-пластночные агрегаты. Внесение тромбина сопровождалось увеличением числа клеточно-тромбоцитарных коагрегатов. Предварительное добавление антител против Р-селектина устраняло стимулирующее действие тромбина на розеткообразование. Отсюда был сделан вывод, что такой вид взаимодействия опосредуется Р-селектином и, возможно, имеет большое значение в клеточной физиологии и развитии патологии, связанной с функцией тромбоцитов и эозинофилов. За последнее десятилетие рядом исследователей выявлена способность эозинофилов вступать в адгезивное взаимодействие с тромбоцитами при патологии. Так, L.H. Ulfman в 2003 г. обнаружил, что кровяные пластинки в условиях потока усиливают адгезию эозинофилов к поверхности активированного эндотелия [268]. Автором сравнивалась интенсивность этого явления у здоровых лиц и больных астмой. Даже в случае блокирования с помощью антител VLA-4 и E-селектина количество адгезированных эозинофилов на эндотелии, предварительно выделенных из крови у больных астмой, превышало контрольные цифры в несколько раз. Установлено, что в процессе перфузии крови, тромбоциты и эозинофилы формируют кластеры-скопления. Использование блокирующих антител против Р-селектина, экспрессированным на поверхности активированных тромбоцитов, приводило к устранению роста числа адгезированных клеток и кластерообразования. На основании этих опытов исследователь делает вывод, что P-селектин, несущие на своей поверхности тромбоциты, обеспечивают стойкую адгезию эозинофилов к активированному эндотелию.
У больных астмой различной степени тяжести с помощью метода проточной цитометрии определялось содержание тромбоцитарно эозинофильных комплексов в кровотоке. Обнаружено, что P-селектин-положительные тромбоциты вступают в комплексообразование с эозинофилами. Это явление сопровождается экспрессей 1-интегринов на эозинофилах с последующим усилением их адгезивных свойств к сосудистой стенке и миграции в легочную ткань. Возросшая клеточная активация и миграция в ткань легкого приводит к ухудшению состояния больного [235].
Установлено, что моноциты способны адгезировать на своей поверхности тромбоциты. Увеличение числа моноцитарно тромбоцитарных агрегатов является ранним признаком острого инфаркта миокарда и служит более чувствительным маркером активации кровяных пластинок in vivo, чем поверхностная экспрессия P-селектина на тромбоцитах [108]. Атеросклеротическое поражение характеризуется моноцитарной и макрофагальной аккумуляцией в сосудистой интиме. Тромбоциты, фиксированные на сосудистой стенке, эффективно опосредуют моноцитарный роллинг и последующее прикрепление клеток к эндотелию даже в условиях высокого напряжения сдвига. Роллинг моноцитов обеспечивается Р-селектином на поверхности активированных кровяных пластинок и PSGL-1, постоянно присутствующего на клеточной мембране [222]. Доказано, что независимо от PSGL-1 молекула CD 15 (Lewis X) на мембране моноцитов способна взаимодействовать с P-селектином. Первоначальная связь между тромбоцитарным Р-селектином и моноцитарным PSGL-1 вызывает усиление экспрессии 2-интегрина CD11b/CD18 [M2, мембран-активированный комплекс 1 (Mac-1)] на поверхности мембраны моноцитов, усиливая адгезию тромбоцитов. Лейкоцитарный Мас-1 связывается с GPIb [245] и JAM-C на тромбоцитах. Mac-1, расположенный на мембране моноцитов, способен связываться с молекулами фибриногена и через GPIIbIIIa опосредовать адгезию с кровяными пластинками [194]. Кроме того, доказано участие в качестве адгезивного моста молекулы CD 36, присутствующей на моноцитарной и тромбоцитарной мембранах, через тромбоспондин [71]. В дополнение ко всему CD40L-CD40 контактное взаимодействие между тромбоцитами и моноцитами приводит к экспрессии TREM-1, способного связывать TREM-1 лиганд на мембране кровяных пластинок (рис. 1.5.) [195].
Сравнительная оценка адгезии лимфоцитов CD4+ клона в присутствии тромбоцитов к фибронектину, коллагену и экстрацеллюлярному матриксу
Процессы первичного гемостаза, которые обусловлены адгезией, агрегацией и последующей ретракцией тромбоцитарной пробки невозможно рассматривать в отрыве от процессов коагуляционного гемостаза. На поврежденном участке сосудистой стенки всегда экспрессируется тканевой фактор, который запускает внешний путь свертывания и за счет PF4 инициируется внутренний путь образования протромбиназы. Конечным проявлением обоих путей свертывания служит появление фибриновых нитей и организацией плотного фибринового сгустка за счет сокращения его тромбцитарного компонента. Сгусток буквально «нафарширован» различными форменными элементами крови, благодаря чему в нем в условиях статики формируется уникальная микросреда для дальнейшей клеточной активации и миграции в зону поражения. Так лимфоцитами и макрофагами высвобождаются различные классы цитокинов [3] тромбоциты практически полностью высвобождают содержимое гранул и т.д. Поэтому особый интерес представляет дальнейшая судьба клеточно-тромбоцитарных коагрегатов в составе фибринового сгустка. Для выяснения роли фибрина во взаимодействии лимфоцитов и тромбоцитов, выделенных из крови практически здоровых доноров, с адгезивной поверхностью в условиях статики мы использовали миллипорные фильтры покрытые фибрином. Контролем служили фильтры, пропитанные Na CL 0,9% (контроль 1) или аутологичной бедной тромбоцитами плазмой (контроль 2). На дно лунок пластикового планшета помещали предварительно подготовленные фильтры и вносили предварительно подготовленную лимфоцитарно-тромбоцитарную суспензию выделенную из крови практически здоровых лиц. После инкубации в условиях статики и последующей отмывки, клеточный пул ресуспендировали и подсчитывали в световом микроскопе число лимфоцитарно-тромбоцитарных коагрегатов оставшихся в взвеси.
Установлено, что после инкубации тромбоцитов и лимфоцитов на поверхности фильтров с фибрином их количество в суспензии снижалось практически в 2,5 раза в сравнении с фильтрами, пропитанными NaCL 0,9% или бедной тромбоцитами плазмой. При этом снижалось как среднее количество тромбоцитов на один лимфоцит, так и общее число лимфоцитов (p 0,05). Снижение их количества в суспензии указывает на адгезию лимфоцитов в составе коагрегатов с тромбоцитами к фибриновому покрытию. Таким образом, лимфоциты способны контактировать с фибрином, находясь в составе лимфоцитарно-тромбоцитарных коагрегатов (Рис 3.14., 3.15. ), причем ведущее значение имеет наличие самого фибрина, а не плазмы. контроль (БтрПл) фибрин
Процент лимфоцитарно-тромбоцитарных коагрегатов в суспензии отмытых лимфоцитов после инкубации на адгезивной поверхности в условиях статики. Адгезию ЛТК изучали на предложенной нами модели, где в качестве адгезивной поверхности использовали миллипорные фильтры. В первой серии экспериментов контролем служили фильтры, смоченные физиологическим раствором. В дальнейшем в качестве контроля использовали фильтры, пропитанные бедной тромбоцитами плазмой в опыте фильтры покрытые фибрином. Отмытую взвесь лимфоцитов помещали на поверхность фильтров и инкубировали в термостате в течение 40 мин. После инкубации осуществляли 3-х кратную отмывку фильтров физ. раствором и подсчитывали число коаегргатов. ±SD, 8-10 экспериментов, p 0,05 vs контроль.
Взаимодействие тромбоцитов с различными видами лейкоцитов Известно, что тромбоциты способны вступать в контактные взаимодействия с различными видами лейкоцитов. Установлено, что циркулирующие тромбоцитарно-лейкоцитарные комплексы имеют важное значение для их последующей активации и миграции в ткани. В опытах на мышах выявлено, что искусственно вызванная тромбоцитопения приводит к значительной потере способности лейкоцитов (нейтрофилов) мигрировать в ткань легких в модели острого воспаления. Причем ведущую роль в этом процессе играет молекула адгезии PSGL-1 и ее лиганд P-селектин [109]. В начальной серии экспериментов мы оценивали содержание лейкоцитарно-тромбоцитарных коагрегатов в циркулирующей крови практически здоровых лиц в двух возрастных группах. Обнаружено, что у практически здоровых доноров 18 - 25 лет, тромбоциты способны вступать в контактное взаимодействие со многими видами лейкоцитов. Так в процентном отношении количество тромбоцитарно-клеточных агрегатов составило (Ме [25-й; 75-й]): в общем пуле лейкоцитов (PLC) 5,49% [4,96; 6,40] (рис. 4.1.), в общем пуле гранулоцитов (PGC) 4,36% [3,83; 4,41], причем среди этих клеток на долю нейтрофилов (PNC) приходилось 88,75% [69,09; 93,04]. Среди моноцитов (PMC) 15,01% [10,16; 39,68] клеток вступали в контакт с тромбоцитами, среди лимфоцитов (PLymphC) 2,87% [2,45; 3,37] находились в клеточно-тромбоцитарном адгезивном контакте (рис. 4.2.). Полученные нами данные согласуются с некоторыми работами других исследователей [108, 191, 288].
Установлено, что у практически здоровых лиц в группе 45-55 лет адгезия тромбоцитов наблюдалась с теми же видами лейкоцитов, однако в сравнении с 18 - 25 летними донорами наблюдалось увеличение степени общих лейкоцитарно-тромбоцитарных коагрегатов (PLC) в 1,8 раза (р=0,02), и рост количества PGC в 2,1 раза (р=0,01) (рис. 4.3.).
Адгезивное взаимодействие лейкоцитов и тромбоцитов в циркуляции у практически здоровых лиц 18-25 лет. Число лейкоцитарно-тромбоцитарных коагрегатов (Ме [25-й; 75-й]) составило 5,49% [4,96; 6,40] в общем пуле лейкоцитов (квадрат D2). Образцы крови после фиксации преинкубировались со специфическими антителами к тромбоцитам (CD 41) и моноцитам (CD45), в качестве негативного контроля использовались Ig G (Beckman Coulter). Антитела были мечены красителями PC-7 и ECD. Подсчет лейкоцитарно-тромбоцитарных агрегатов осуществлялся на проточном цитометре FC 500 (Beckman Coulter, Brea, CA, USA). Минимум 5000 лейкоцитов оценивалось за один тест.
Адгезивное взаимодействие моноцитов и тромбоцитов (А), а также лимфоцитов и тромбоцитов (Б) в циркуляции у практически здоровых лиц 18-25 лет. Число моноцитарно-тромбоцитарных коагрегатов (Ме [25-й; 75-й]) составило 15,01% [10,16; 39,68] среди всех моноцитов (квадрат H2). Количество лимфоцитарно-тромбоцитарных коагрегатов (Ме [25-й; 75-й]) составило 2,87% [2,45; 3,37] среди всех лимфоцитов (квадрат H2). Образцы крови после фиксации преинкубировались со специфическими антителами к тромбоцитам (CD 41) и моноцитам (CD14) или Т-лимфоцитам (CD 3), в качестве негативного контроля использовались Ig G (Beckman Coulter). Антитела были мечены красителями PC-5 и PC-7. Подсчет лейкоцитарно-тромбоцитарных агрегатов осуществлялся проточным цитометром FC 500 (Beckman Coulter, Brea, CA, USA). Минимум 5000 лейкоцитов оценивалось за один тест.
Тромбоцитарно-лейкоцитарных адгезия и функциональное состояние тромбоцитов у больных стабильной стенокардией на фоне лечения препаратами ацетилсалициловой кислоты
Обнаружено, что у больных стабильной стенокардией II и III функциональных классов, выявлено увеличение числа коагрегатов практически во всех видах исследуемых клеточно-тромбоцитарных коньюгатов кроме общего пула лимфоцитов. Практически у этих же типов лейкоцитов выявлен рост Р-селектина в составе коагрегатов с тромбоцитами. Кроме того, обнаружены признаки гиперагрегации тромбоцитов у этой категории больных. Все это указывает на активированное состояние тромбоцитарного звена системы гемостаза. Исследуемые показатели в группе больных, получавших в качестве дезагреганата аспирин, были снижены в сравнении с группой пациентов его не принимавших. Однако присутствие аспирина в терапии у данной группы больных не изменяло общего количества лимфоцитарно-тромбоцитарных коагрегатов.
Таким образом, аспирин возвращал повышенные показатели лейкоцитарно-тромбоцитарных агрегатов к уровню контрольной группы.
Популяция лимфоцитов неоднородна и у различных их типов степень и скорость экспрессии рецепторов значительно отличаются. Для выявления роли различных видов лимфоцитов в клеточно-пластиночной адгезии в группе пациентов нами исследовалась эта способность у Т-хелперов, В лимфоцитов, T –лимфоцитов и Т-клеток. Установлено, что у больных стабильной стенокардией, не принимавших аспирин, способность адгезировать на своей поверхности тромбоциты возрастала среди Т-клеток хелперов и у минорной субпопуляции - Т-лимфоцитов, у других видов лимфоцитов отличий не выявлено. Интересен тот факт, что в контрольной группе Т-лимофциты выявлялись в небольшом количестве: всего 1,6% [1,02; 2,85] от общего числа лимфоцитов, и они практически не вступали в адгезивный контакт с тромбацитами. У больных без терапии аспирином число этих клеток составило 2,7% [1,52; 4,30] и фактически все эти клетки адгезировали на своей поверхности кровяные пластинки.
Как в случае с гранулоцитами прием аспирина снижал количество коагрегатов как у Т-хелперов, так и у Т-лимфоцитов до контрольных цифр.
Известно, что аспирин ингибирует экспрессию GP IIb/IIIa и Р селектина на поверхности тромбоцитов [64, 237]. Ранее нами установлено, что именно эти молекулы служат мостами в СD4+ лимфоцитарно тромбоцитарном взаимодействии [261]. Поэтому особый интерес представляет эффект аспирина на экспрессию адгезивных молекул в составе клеточно-тромбоцитарных коагрегатов. Для этого в следующей серии экспериментов нами исследовалась экспрессия Р-селектина в составе лейкоцитарно-тромбоцитарных агрегатов. в следующей серии экспериментов мы исследовали степень экспрессии Р-селектина среди различных субпопуляций лимфоцитов, контактирующих с тромбоцитами. Обнаружено, что у больных стенокардией среди В-лимфоцитарно тромбоцитарных коагрегатов Р-селектин фактически не экспрессировался, а степень экспрессии этой молекулы возрастал в составе Т-клеточно тромбоцитарных агрегатов, особенно высока в сравнении с контролем степень экспрессии наблюдалась у Т-лимфоцитов. Интересен тот факт, что именно Т-лимфоциты обладают значительной реактивностью и способностью взаимодействовать с Р-селектином. Также выявлено, что у больных принимавших аспирин степень экспрессии Р-селектина, как и само наличие коагрегатов с Т-лимфоцитами падает фактически до ноля. Таким образом именно Р-селектин-обусловленный адгезивный мост имеет ключевое значение для формирования тромбоцит- Т-лимфоцитарных коагрегатов, а аспирин контролирует это взаимодействие. Kleindienst R., еще в 1993 г. обнаружил присутствие большого количества активированных Т-лимфоцитов в сосудистой стенке, при начальном ее поражении атеросклерозом. На животной модели он и соавторы доказали, что иммунизация кролика heat-shock protein (HSP) 65 Mycobacterium tuberculosis индуцирует развитие атеросклероза. Также они предположили, что (HSP) 65 может выступать в качестве антигена для иммуннокомпетентных клеток и приводить к развитию в дальнейшем перекрестных иммунных реакций. Причем, в качестве перекрестного антигена могут выступать гомологичные молекулы с молекулярной массой 60-кД, подобные белки сами могут входить в систему HSP (HSP60). С помощью иммуногистохимиии было обнаружено наличие HSP60 на эндотелии, гладких мышечных волокнах, на поверхности мононуклеаров в образцах, полученных из пораженных атеросклерозом аорт, коронарных сосудов и сонных артерий (исследование проводилось на материале лиц возрастом от 18 до 88 лет). Исследователи также выявили усиленную экспрессию TCR на мембране активированных лимфоцитов в составе участков сосудов с начальными этапами развития атеросклероза. При оценке популяционного состава TCR+Т-лимфоцитов обнаружено, что в большей степени встречались TCR+ T-лимфоциты (91%), а также TCR+ T лимфоциты (9,71%). Удивительно, что именно T-клетки в большей степени обнаружены в субэндотелиальной зоне в участках с сосудов с признаками начинающегося атеросклероза (те же сведения встречаются у других авторов, например [138]. По мере продвижения в атеросклеротической бляшке к жировому ядру лимфоцитов этого типа становится все меньше. Ученый утверждают, что степень экспрессии HSP 65 положительно коррелирует со степенью развития атеросклеротического поражения и основные участники из лимфоцитов в распознавании этого антигена T-лимфоциты, а также T-клетки.
