Содержание к диссертации
Введение
Глава 1. Обзор литературы. Современное состояние проблемы регенерации печени .
1.1 Физиологическая и репаративная регенерация печени 7
1.2. Способы стимуляции регенерации печени 15
1.3. Особенности действия хорионического гонадортопина и мидийного гидролизата на физиологические процессы в организме. Собственные исследования. 23
Глава 2. Материал и методы исследования
2.1. Схема постановки экспериментов. 35
2.2. Морфологические методы 38
2.3 Биохимические методы исследования 42
Глава 3. Морфологические изменения в паренхиме интактной печени при воздействии на нее хорноническим гонадотропином и применение мидийного гидролизата, хорионического гонадотропина и комплекса этих препаратов для стимуляции регенерации печени после резекции ее у интактных животных
3.1. Морфофизиологические изменения в интактной печени при воздействии на нее хорионического гонадотропина 44
3.2. Применение хорионического гонадотропина, мидийного гидролизата и комплекса этих препаратов с целью стимуляции регенерации печени после резекции ее у интактных животных . 49
Глава 4. Применение хорионического гонадотропина, мидийного гидролизата, и комплекса этих препаратов после резекции печени с целью коррекции изменений в печени, вызванных введением СС
4.1. Применение хорионического гонадотропина, мидийного гидролизата и комплекса этих препаратов после после резекции печени с целью коррекции изменений в печени, вызванных введением ССІ4 . 70
Глава 5. Влияние хорионического гонадотропина на печень крыс, измененную введением этанола
5.1. Изучение сочетанного действия четыреххлористого углерода и этанола на печень 100
5.2. Применение хорионического гонадотропина с целью коррекции изменений в печени, вызванных введением этанола 119
Глава 6. Обсуждение полученных результатов 127
Выводы 137
Литература 139
- Способы стимуляции регенерации печени
- Применение хорионического гонадотропина, мидийного гидролизата и комплекса этих препаратов с целью стимуляции регенерации печени после резекции ее у интактных животных
- Применение хорионического гонадотропина, мидийного гидролизата и комплекса этих препаратов после после резекции печени с целью коррекции изменений в печени, вызванных введением ССІ4
- Применение хорионического гонадотропина с целью коррекции изменений в печени, вызванных введением этанола
Способы стимуляции регенерации печени
Вопросы регуляции регенерационных процессов в печени и их стимуляции носят проблемный характер и интенсивно изучаются в настоящее время. Интенсивность специфических функций печени и темп размножения гепатоцитов контролируется различными звеньями системы гомеостаза. В процессе нормальной жизнедеятельности в клеточных популяциях различных тканей поддерживается общая масса клеток каждой популяции на более или менее постоянном уровне. У нормальных взрослых особей соотношение общих размеров различных органов остается постоянным. Для объяснения механизмов, регулирующих пролиферативную активность клеток, рядом авторов, была выдвинута гипотеза, о наличии особых регулирующих веществ -кейлонов (W.S.Bulllough: 1973, J.S. Houck ,1976; D.L. Lord.et al. , 1976; Maner H.R., 1975). Первоначально кейлоны считались факторами, которые подавляют митоз. Считалось, что кейлоны способны выйти из клеток, и диффундировать к другим, соседним клеткам или проникать в кровоток. В тех случаях, когда организм теряет большое количество специализированных клеток, например при удалении значительной части печени, общее количество вырабатываемых сохранившимися клетками кейлонов оказывается недостаточным для подавления пролиферации. Предполагалось, что содержание кейлонов в клетках печени находится в равновесии с содержанием кейлонов в плазме крови, которая омывает гепатоциты. После резекции печени содержание кейлонов как в крови, так и в клетках печени снижается. Интенсивная пролиферация гепатоцитов после резекции печени прдолжается до тех пор, пока их численность не увеличится настолько, что концентрация вырабатываемых этими клетками кейлонов в плазме крови, омывающей клетки достигнет нормального уровня, после чего митотическое деление гепатоцитов значительно снижается.
К настоящему времени в области раскрытия молекулярных механизмов, контролирующих процесс регенерации печени достигнуты определенные успехи. Имеются доказательства, что клеточный цикл эукариот контролируется группой белков, называемых циклинами, которые образуют комплекс с циклин-зависимыми киназами, управляющими ключевыми событиями во время деления клеток ( S.Musson et. al. 1999; J.N.Albreht et al.1993; J.A.Ehrenfried at al. 1997). Регенерация печени после резекции характеризуется синхронным вступлением гепатоцитов в новые клеточные циклы, что приводит с течением времени к полному восстановлению массы печени. Прогрессирование клеточного цикла требует активизации циклин-зависимых киназ, что регулируется циклинами и ингибиторами циклин-зависимых киназ. У крыс после резекции происходит быстрая индукция циклинов Д и Е- типа и их катализаторов - циклин-зависимых киназ 2 и 4 . В регенерирующей печени образуются комплексы , содержащие циклин-Е и циклин-зависимую киназу-2, что приводит к усилению активности циклин - зависимой киназы-2. Регенерирующая печень возвращается к ее первоначальному весу на седьмой день после операции, при этом активность циклин-зависимой киназы -2 достигает уровня, равного таковому у ложнооперированных животных. Была обнаружена двухфазная индукция ингибитора циклин - зависимых киназ - Р 21. Первый пик активности наблюдался через 6 часов после резекции, и последующие пики активности обнаруживались через 24 и 72 часа после операции. Выделение Р-21 в две фазы предполагает, что этот белок может регулировать как раннюю пролиферацию, так и последующее ингибирование восстановления гепатоцитов. (J.A.Ehrenfhed et al. 1997). Увеличение выделения циклинов А и Д было найдено так же у людей с различными острыми и хроническими заболеваниями печени. (J.H.Albreht at al. ,1993).
Идентифицирована группа веществ, присутствующих в плазме крови, и управляющих ростом и дифференцировкой клеток органа. К ним относятся эпидермальный фактор роста (ЭФР), фактор роста гепатоцитов (ФРГ), трансформирующий рост фактор альфа (ТРФа), которые являются митогенами, а так же группа трансформирующих рост факторов бета (ТРФрЧ, ТРФ32 , ТРФ(3 3), ингибирующие митогенез и стимулирующие апоптоз гепатоцитов (S.Naguchi et al.1991; S. Olsen et al 1998.G.K. Michalopulos, 1990; M.Scotte, 1997.Zarnegar R et al. 1991; E.M.Weber , et al. 1994; S. Eguchi et al 1998 T.Kinoshita et. al 1991 A.Francavilla et al .1986; A.Hayata et al. 1999).
Предполагают, что различные пептидные гормоны регулируют регенерацию печени посредством взаимодействия с поверхностными рецепторами клеточных мембран гепатоцитов, чувствительность которых меняется в зависимости от фазы клеточного цикла. При добавлении эпидермального фактора роста к культуре гепатоцитов, выделенных через 24 часа после резекции печени, наблюдалось увеличение инкорпорации НЗ тимидина в 3 раза по сравнению с нормальными гепатоцитами. Митогенный эффект подтверждался так же прямым измерением количества ДНК в культуре клеток. (A. Francavilla et al .1986). При удалении бруннеровых желез двеннадцатиперстной кишки, источника эндогенного эпидермального фактора роста, происходило торможение регенерационных процессов в печени.( S.Olsen et al 1988). Повидимому, ФРГ является наиболее мощным митогеном для гепатоцитов, инициирующим регенерацию печени после ее резекции. В опыте с резекцией 70% массы печени активность ФРГ в остатке печени начала увеличиваться через 24 часа после операции паралельно нарастало количество м-РНК ФРГ, которое достигло максимума через 24 часа. Увеличение активности ФРГ и уровня м-РНК было в данном случае значительно менее выражено, чем таковое у крыс с гепатитом , вызванным ведением ССЬ.Однако самое раннее увеличение активности ФРГ в плазме крыс было замечено через три часа после резекции части печени. То есть, несмотря на то, что во время регенерации печени в остатке органа происходит инициация синтеза ФРГ, первоначальный синтез ФРГ, возможно, происходит вне печени, и он попадает в нее с кровью. (T.Kinoshita et al 1991Д. Zarnegar etal.,1991)
В опытах S.Eguchi . et al. 1998, было показано, что полная замена крови после резекии 70% массы приводила к значительному снижению регенерации, что выражалось в уменьшении показателя меченого ядерного антигена пролиферирующих клеток и сокращения уровня ФРГ в плазме крови. Полная замена крови у животных после резекции печени подавляла раннюю стадию регенерационного процесса отчасти из-за сокращения ФРГ отчасти из-за того , что кровь была очищена .
L.Winters et al. в опытах на обезьянах бабуинах, печень которых была резецирована в объеме 20% массы органа установили, что между уровнем ФРГ и количеством лейкоцитов в плазме крови существует линейная зависимость. ФРГ содержится также в желчи, и регенерация после резекции печени была существенно снижена у крыс после наружного дренажа желчи. (A. Hayata et al. 1999). Выделение ТРФ а связано с репликацией ДНК в гепатоцитах, которая наблюдается в регенерирующей печени в ответ на резекцию или токсическое поражение. В экспериментах с различным объемом резекции печени у крыс ( 30% или 80%) было обнаружено, что уровень ТРФа и регенерационный ответ различались в соответствии с объемом резекции печени. Пик выделения ТРФа и пик S фазы наблюдались на второй и шестой день при 80% и 30% резекции соответственно. Пластичность регенерационного ответа в печени может контролироваться не только митогенными факторами, но и комитогенами, например, норэпинефрином, который, не являясь митогеном сам по себе может инициировать рост гепатоцитов совместно с ЕФР, ФРГ, ТРФа ( G.K.Michalopulos,1990). Вазопрессин в физиологических концентрациях стимулировал митогенную активность гепатоцитов в культуре в присутствии ФРГ. Влияние этого гормона на регенерацию подтверждается и тем, что у лиц с наследственным дефицитом вазопрессина, оказывается, нарушено течение процесса регенерации печени (A.M.Metcalfe , 1997).
Применение хорионического гонадотропина, мидийного гидролизата и комплекса этих препаратов с целью стимуляции регенерации печени после резекции ее у интактных животных
При изучении гистологических препаратов, полученных при забое через двое суток после резекции , в оставшихся долях печени наблюдались значительные изменения гистологической картины по сравнению с интактной печенью. Особенно ярко была выражена жировая инфильтрация. Большинство гепатоцитов оказалось заполнено крупными каплями жира. Отмечалось расширение кровеносных сосудов, купферовские клетки были активированы. Наблюдались дегенеративные изменения гепатоцитов, вплоть до их гибели, что выражалось в значительном снижении НГ. Отмечались изменения ядер (кариопикноз, кариорексис, кариолизис) и цитоплазмы (гидропическая , баллонная дегенерация) этих клеток . Наряду с процессами дегенерации на эти сроки исследования обнаруживались признаки регенерации.
У интактных животных митотический индекс клеток печени составлял 0,002 %о . На вторые сутки после операции наблюдался подъем митотической активности гепатоцитов, табл.5.
В группе оперированных животных, не получавших гормон, митотический индекс на вторые сутки после резекции печени составлял 5,7 ±_0,10 %о. В группе крыс, получавших ХГ после резекции печени, митотический индекс на вторые сутки составил - 8,5 ± 0,08%о ; у животных, получавших МИГИ-К он был немного ниже - 8,1±075;%о . Максимальная митотическая активность на этот срок наблюдалась в группе животных, получавших ХГ в комплексе с МИГИ-К, которая составляла 13,95.%о. ± 0,55( Р 0,0001 в сравнении с оперированным контролем и группами, получавшими ХГ и МИГИ-К каждый в отдельности ). При проведении морфометрического анализа паренхимы печени выявилось резкое снижение общего количества нормальных гепатоцитов у оперированных животных на единицу тест-площади препарата. Это согласуется с данными И.М. Солопаевой (1969), которая, также обнаружила резкое снижение этого показателя на данный срок.
Общее количество НГ в группе оперированного контроля составило 4,55 ±0,42 ,что было значительно ниже, чем у интактных животных -10,9±0,45 Очевидно, это снижение было связано с частичной гибелью гепатоцитов после травмы органа и с гипертрофией печеночных клеток, наблюдаемой в ответ на травму, табл.6, рис.6.
В группе оперированных животных, получавших ХГ, на вторые сутки после операции также наблюдалось значительное уменьшение среднего количества нормальных клеток на тест-площадь препарата - 7,50±0,41 по сравнению с интактными крысами - 10,9±0,45. Однако это уменьшение количества нормальных печеночных клеток было достоверно менее выраженным, чем в группе оперированного контроля (Р 0,0001). Общее количество нормальных гепатоцитов на тест-площадь препарата в группе оперированных животных, получавших МИГИ-К, через двое суток после начала стимуляции составляло 7,45 ±0,25 и было примерно таким же как в группе животных, получавших ХГ - 7,50±0,41 ( различия по сравнению с группой оперированного контроля так же
Наиболее высоким на вторые сутки содержание нормальных гепатоцитов было в группе животных, получавших хорионический гонадортопин в комплексе с мидийным гидролизатом 9,11+0,24 и при сравнении с группой оперированного контроля, а так же группами, получавшими ХГ и МИГИ-К каждый в отдельности различия оказались достоверными (Р 0,0001).
Таким образом, подсчет общего количества нормальных гепатоцитов на тест-площадь препарата показал, что хорионический гонадотропин способствует более быстрой нормализации паренхимы печени крыс после ее резекции, по сравнению с крысами оперированного контроля, что согласуется с данными И.М. Солопаевой (1969).
Обращает на себя внимание способность мидийного гидролизата вызывать более быструю нормализацию паренхимы, по сравнению с оперированными животными, не получавшими стимуляторов. Однако наиболее выраженный эффект на нормализацию структуры паренхимы был достигнут при введении хорионического гонадотрошша совместно с медийным гидролизатом , о чем свидетельствует самое высокое количество нормальных гепатоцитов в данной группе животных.
Наряду с подсчетом общего количества нормальных гепатоцитов у крыс после резекции печени подсчитывалось количество нормальных одноядерных и нормальных двухъядерных гепатоцитов.
При сравнении среднего количества нормальных одноядерных гепатоцитов, было выявлено, что имеются достоверные различия в их количестве между группами, получавшими указанные препараты и группой оперированного контроля. (Р 0,0005), табл.б, рис.7.
Среднее количество нормальных одноядерных гепатоцитов в группе оперированного контроля составило 2,96 ±0,24; в группе крыс, получавших хорионический гонадотропин, количество этих клеток равнялось -5,88±0,36; в группе , получавшей МІІДШІНЬІЙ гидролизат - 5,78 +0,17; и в групппе, получавшей одновременно хорионический гонадотропин и мидийный гидролизат- 7Д9±0,20
Определение количества двухъядерных гепатоцитов показало снижение этого показателя у оперированных животных по сравнению с интактными. У интактных животных среднее количество нормальных двухъядерных гепатоцитов составляло - 2,83+ 0,23, а у оперированных животных f не получавших дополнительно стимуляторов регенерации количество этих клеток было снижено до 1,58. ± 0,18 {? 0,05), табл.6, рис.9.
Это также согласуется с данными З.А. Рябининой , В.А. Бенюш 1967; И.М.Солопаевой 1969, наблюдавшими резкое уменьшение количества нормальных двухъядерных гепатоцитов на вторые сутки после операции. В группе животных, получавших хорионкческий грнадотропин, количество нормальных двухъядерных гепатоцитов было более высоким - 1,62±0,05 , чем у оперированных животных не получавших лечения - 1,58 ±0,18(PZ0,001) еще более высоким - 1,77+0,06 оно было у животных, получавших МИГИ - К и комплекс МИГИ-К + Х.Г- 1,78±0,06 (PZ0,0002 HPZ0,0005).
Известно, что после резекции части печени не только в зоне ампутационной раневой поверхности, но и в глубине оставшихся после операции долей печени подвергается дегенерации и гибели большое количество печеночных клеток. Поэтому, мы посчитали возможным провести подсчет дегенерирующих клеток в поле зрения, считая, что этот показатель в значительной мере, наряду с другими, отражает состояние паренхимы, регенерирующей после резекции печени и дополнительной стимуляции регенерации.
При подсчете дегенерирующих гепатоцитов на вторые сутки после резекции печени выявилось существенное увеличеіше их количества у оперированных животных, по сравнению с интактными (1,57±0,02) и 12,7± 0,37- после резекции). Количество дегенерирзлющих клеток в печени животных через двое суток после начала введения хорионического гонадотропина достоверно снижалось (7,83±0,21) в группе животных, получавших ХГ по сравнению с группой оперированных животных, не получавших гормона ( 12,7±0,37, при PZ0,001) Так же достоверно более низким по сравнению с группой крыс оперированного контроля было количество дегенерирующих гепатоцитов было в группе крыс, получавшей МИГИ-К - 7,53+0,38.(PZ 0,001). Однако, как и при изучении общего количества нормальных гепатоцитов, наилучший результат был достигнут при совместном введении ХГ и МИГИ-К . В этой группе количество дегенерирующих гепатоцитов было самым низким на тест-площадь препарата - 6,99 + 0,62 (при Р 0,001) отличия по сравнению с животными не получавшими стимуляторов также были достоверны, табл.6, рис.8.
Известно, что на ранних сроках регенерационного процесса после резекции печени наблюдается гипертрофия гепатоцитов и полиплоидизация их ядер, что наблюдали авторы И.А. Алов 1964; З.А. Рябинина 1964; З.А. Рябинина, В.А.Бенюш 1968.
В нашем опыте восстановительный процесс в регенерирующей печени также сопровождался гипертрофией гепатоцитов. Так на вторые сутки после операции, средний объем гепатоцитов составил в группе оперированного контроля - 5,79±0,12 и достоверно превысил норму - 3,8 ± 0,01 (Р 0,0028). Гипертрофия гепатоцитов наблюдалась и в группах животных, получавших препараты однако под влиянием ХГ объем гепатоцитов снизился и составил 5,21± 0,13 аналогичное снижение этого показателя наблюдалось в группе МИГИ - К - 5,28 + 0,13, ив группе крыс, получавших ХГ в комплексе с МИГИ-К - 5,23+0,03. Эти различия размеров гепатоцитов по сравнению с группой , оперированного контроля были достоверны (PZ 0,028), табл.6.
Применение хорионического гонадотропина, мидийного гидролизата и комплекса этих препаратов после после резекции печени с целью коррекции изменений в печени, вызванных введением ССІ4
Прежде чем приступить к изложению результатов собственных исследований, целесообразно описать изменения, происходящие в печени под влиянием CCL4, который был использован в нашем опыте для воспроизведения хронического токсического поражения печени у животных.
Введение CCL4 быстро вызывает тяжелые нарушения в состоянии печени крыс. Уже через 24 часа после введения одной его инъекции четыреххлористого углерода в печени животных наблюдаются значительные изменения, которые раньше всего обнаруживаются в центре печеночных долек и выражаются в значительной дистрофии гепатоцитов. На периферии долек начинается пролиферация этих клеток. В гепатоцитах, расположенных в средней части долек печени, исчезает гликоген и накапливается жир. Клетки, расположенные в перипортальных частях печеночных долек, сохраняют гликоген и гипертрофируются. Это совпадает по времени с появлением митотической активности этих клеток, причем митотически делящиеся гепатоциты обнаруживаются через 36-48 часов после однократного введения четыреххлористого углерода, сначала в перипортальных отделах долек, а потом они распределяются диффузно по всему органу. Максимум митозов наступает через 40 часов после введения четыреххлористого углерода. Увеличению митотической активности предшествует усиление синтеза ДНК, который начинается через 24 часа после введения CCL4. В течение последующих дней состояние паренхимы печени после однократного введения CCL4 постепенно нормализуется и через 5-14 дней становится нормальным.
По данным J.Hoffman ,M.B.Nimes, S.Lapan, et al., (1955), уже через 48 часов после однократного введения CCL4 в печени обнаруживались митозы. Наибольшая интенсивность митотического деления клеток наблюдалась между 36-42 часами после начала введения гепатотоксина, когда количество меченых печеночных ядер увеличивалось больше, чем в 250 раз по сравнению с контрольными значениями ( С. М. Leevy, R.M. Hollister, R.Schmid, et al., 1959). Через 72 часа после начала введения CCL4 появилось большое количество митотически делящихся печеночных клеток, а через 120 часов структура печени нормализовалась, количество митозов при этом снижалось. В результате воздействия на печень крыс четыреххлористым углеродом повышалась так же плоидность ядер печеночных клеток ( J. Post; A.Klein, J Hoffman, 1960).
B.K. Верин (1965,1968), изучая процесс восстановления печени в результате длительного введения CCL4, уже на ранних этапах после отравления отмечал в печени два параллельно происходящих процесса: дегенерация и регенерация ткани. Максимум митозов автор наблюдал на 10 -15 сутки после начала введения CCL4 (20-25%о). Через месяц после начала его введения дегенеративные изменения развивались медленнее. Митотическая активность печеночного эпителия так же снижалась до 4-5%о .
На ранней стадии патологического процесса под влиянием CCL4 на фоне развития центролобулярного некроза в ткани печени повышалось содержание ДНК, о чем свидетельствует быстрое выявление в ядрах тимидина НЗ и появление максимального количества митотически делящихся неповрежденных клеток паренхимы и клеток желчных протоков (Е. Rubin et al, 1968).
После введения CCL4 наблюдается снижение концентрации АТФ, накопление неорганического фосфата и цитрата в митохондриях . В первые часы после его введения происходит поражение клеточных мембран, что сопровождается выходом печеночных ферментов в кровь, при этом тормозится выход в кровь липопротеидов и увеличивается содержание в печени нейтрального жира. В основе этих повреждений гепатоцитов лежит образование в них под влиянием CCL4 высокоактивных перекисей, которые обладают сильным повреждающим действием на клетку. Они разрушают мембраны эндоплазматического ретикулума, что необратимо нарушает его функции. В результате эти процессы приводят к деструкции и гибели гепатоцитов. При воздействии четыреххлористого углерода пораженные клетки некротизируются. При повторных введениях четыреххлористого углерода дегенеративные изменения в паренхиме становятся устойчивыми и начинается развитие фиброзных изменений вплоть до развития цирроза печени (Н. Фрундер, 1968).
По данным J.Hoffman ,M.B.Nimes, S.Lapan, et al .(1955 ), повторное введение крысам CCL4 затормаживает процесс восстановления. Однако Г.С. Якобсон (1971) не наблюдал замедления восстановительных процессов после трехкратной затравки CCL4. Уже через день после последнего введения четыреххлористого углерода он отмечал выраженное увеличение числа гепатоцитов с тетра - и октаплоидным содержанием ДНК в ядрах гепатоцитов, возрастание количества митозов. При этом ультраструктура гепатоцитов существенно не отличалась от наблюдаемой после однократного введения CCL4. Таким образом, в печени в этих условиях отмечалось усиление митотического деления гепатоцитов и полиплоидизация их ядер.
При длительном введении гепатотропного яда некоторые авторы наблюдали иногда снижение ДНК (Е.М. Антакова с соавт.,1972; М.М.Мирохмедов с соавт. 1974) или малозаметное увеличение ее количества ( Л.К. Седокур, 1971), но большинство исследователей, особенно при циррозе печени обращали внимание на повышение концентрации ДНК в ткани печени или в ядрах гепатоцитов ( М.И. Расулов,1968, Н.А.Ковтуняк, Л.Г. Бордяковская, 1972; А.А.Пальцин,1973; E.Rubin, Hutterer F.,Danon G. et al.1963; N. Rabinovichi, E.Wiener, 1963; S. Winaver et al. 1960; G. Richter et al .1966; R. Bhanshali et al .,1969). А.А.Пальцин ( 1973) объяснял значительное увеличение синтеза ДНК в печени после длительной интоксикации CCL4 полиплоидизацией гепатоцитов. Другие авторы такое повышение содержания ДНК в печени объясняют наличием большого количества ее сильно развитой сети стромальных клеток в органе, включая клетки инфильтратов (Е. Rubin et al. 1961; H.Bhansali et al., 1969)
Авторадиографическое исследование регенерирующей печени при различной частоте введений CCL4 показало, что при более частом введении его, количество меченых печеночных клеток, то есть интенсивно синтезирующих ДНК, во много раз превышало их число в печени мышей, которым это вещество вводили реже ( Д.С.Саркисов , Л.Д.Крымский, К.В. Боцманов , Б.В. Втюрин, К.Н. Дзарахохов, 1969).
Биохимические данные J. Post., F.Klein., J.Hoffman., (1960) показали, что через 48 часов после повреждения печени крыс CCL4 количество дезоксинуклеопротеидов увеличивается, а затем падает в сравнении с первоначальным уровнем.
A.Lahiharju (1964) обнаружил через 2 дня после инъекции ССЬд повышение индекса включения НЗ тимидина .Г.С. Якобсон, Г.М.Вакулин., О.А.Громова., и др. (1970) так же отмечали достоверное увеличение в гомогенате печени концентрации нуклеиновых кислот.
В исследованиях S. Bengmark, R. Olsson ( 1966) при фиброзе печени , вызванном введением CCL4, тоже было выявлено увеличение содержания нуклеиновых кислот.
Представляют интерес данные о динамике белковых фракций в результате введения CCL4. Спустя 24 часа после однократной затравки кроликов CCIA Б.Е.Смоличев (1961) наблюдал гиперглобулинемию , сопровождаемую гиперальбуминемией . При последующем введении сниженное в начале количество у- глобулинов увеличивалось. Эти результаты получили подтверждение в опытах с использованием S35. Оказалось, что включение изотопа в альбуминовую фракцию уменьшилось, а в глобулиновую увеличилось. Установлено, что по мере нарастания числа инъекций CCL4 происходит гипертрофия гепатоцитов в основе которой лежит увеличение размеров ядер и гиперплазия ультраструктур ( Д.С. Саркисов и др. 1969).
По данным электронной и люминисцентной микроскопии в печени, подвергшейся действию CCL4, в первую очередь наблюдаются изменения в эндоплазматическом ретикулуме, происходит вакуолизация цистерн гранулярного эндоплазматического ретикулума, гранулы исчезают, увеличивается количество свободных рибосом, наблюдается гипертрофия гладкого ЭПР, набухание митохондрий ( M.Bassi, 1960, К. R. Rees, Х.Р. Sinha , W.V. Spect, 1961, К. R. Rees, J.F. Smith, 1963; Д.С.Саркисов , Б.В.Втюрин,1964, 1965; Д.С.Саркисов , Б.В. Втюрин, 1967, 1968; HJ. Zimmerman ,1968.).
Применение хорионического гонадотропина с целью коррекции изменений в печени, вызванных введением этанола
Роль алкоголя, как этиологического фактора алкогольных поражений печени, в настоящее время признается большинством авторитетных исследователей, поэтому поиск средств для коррекции изменений в печени, вызванных алкоголем особенно важен, учитывая рост потребления алкогольных напитков в мире. ХГ, прежде зарекомендовавший себя как надежный стимулятор регенерации, для коррекции изменений структуры печени, вызванных алкоголем, был применен нами впервые.
Для изучения влияния ХГ на печень, измененную действием алкоголя, крысам вводили этанол ежедневно по 2 мл в виде 40% раствора через зонд в желудок в течение 4-х месяцев. В процессе воспроизведения патологии погибло 60% животных. Остальные были разбиты на две группы. Первая группа животных не получала ХГ и служила контролем. Вторая группа животных получала инъекции ХГ. Крысы были забиты на 2-е , 7-е и 21 - е сутки после начала введения гормона.
При гистологическом исследовании препаратов крыс, получавших этанол мы наблюдали следующую картину:
Структура печени не была нарушена, синусоиды расширены, центральные вены полнокровны, гепатоциты в центральных отделах долек более светлые, мелкие, с мелкими ядрами. В некоторых случаях наблюдается зернистая гидропическая дегенерация гепатоцитов.
В отдельных гепатоцитах кроме белковой дистрофии появляются мелкие капли жира. Дегенеративно-некротические изменения гепатоцитов носят различный характер: во многих клетках цитоплазма почти совсем отсутствует, видны лишь ее фрагменты, нарушается целостность клеточной мембраны. Иногда можно наблюдать изменения гепатоцитов, происходящие по типу 120 коагуляционного некроза. При этом происходит разрыв ядра и видны лишь мелкие его фрагменты, реже происходит кариопикноз. Затем обычная округлая форма гепатоцитов утрачивается, цитоплазма сморщивается, уплотняется.
Такие гепатоциты теряют связь с другими гепатоцитами, выталкиваются в синусоиды и напоминают тельца Каунсильмена. Часто вокруг таких клеток наблюдается скопление звездчатых ретикулоэндотелиоцитов, фибробластов и клеток макрофагального ряда. Портальные тракты умеренно расширены за счет увеличения количества соединительной ткани и инфильтрированы фибробластами и клетками макрофагального ряда.
Уже на вторые сутки после начала введения гормона среднее суммарное количество нормальных гепатоцитов было достоверно более высоким у крыс, получавших ХГ - 9,78±0,28 (Р 0,02) по сравнению с животными, не получавшими гормон. - 8,96+0,16, табл.20, рис.46.
Соответственно, количество дегенерирующих гепатоцитов у крыс, получавших ХГ было достоверно (Р 0,01) более низким : 2,68±0,12; чем у крыс, не получавших глрмон - 4,23+0,20. Среди дегенерирующих гепатоцитов подсчитывалось количество гепатоцитов с разрушенными клеточными мембранами (ДГрм). У крыс, с алкогольным поражением печени количество дегенерирующих гепатоцитов с разрушенными клеточными мембранами составило на 2-е сутки 3,61±0,15 . Введение ХГ привело к достоверному снижению ДГрм до 1,85±0,17((Р 0,01). Величина коэффициента нормализации паренхимы у крыс, получавших ХГ 3,76+0,7, что достоверно превышало его величину у нелеченых животных -2,16 ±0,13 (Р 0,01).
Объем гепатоцитов (Ргеп) у животных, получавших ХГ (4,24 ±0,13) на данный срок достоверно не отличался от объема гепатоцитов у животных не получавших лечения ( 4,47+0,17) и был выше, чем у интактных животных (3,81±0,11) при Р 0,05, что говорило об имеющей место гипертрофии гепатоцитов.
При подсчете объемной плотности соединительнотканных клеток в ткани органа было выявлено достоверное (Р 0,01) повышение этого показателя (0,67 ± 0,04) у животных контрольной группы по сравнению с интактными , что говорило об активации стромы органа под влиянием токсического действия этанола. Под влиянием ХГ происходила нормализация этого показателя до уровня такового у интактных животных - 0,33+0,09.
Еще более выраженное действие ХГ на нормализацию структуры паренхимы печени было обнаружено на седьмые сутки после первой инъекции гормона (см. табл 21. ).
Количество нормальных гепатоцитов на тест - площадь препарата также было достоверно более высоким у крыс, получавших гормон, по сравнению с контрольными животными -10,3 ± 0,2 и 8,94 + 0,27 ( Р 0,01),рис.46.
Количество дегенерирующих гепатоцитов, наоборот, более высоким было в контрольной группе - 3,75 ± 0,15 и 1,75 + 0,08 - у крыс, получавших гормон. (Р 0,01) рис.47. Количество ДГ с разрушенными клеточными мембранами еще более снижается на этот срок под влиянием гормона - 0,54+0,15 по сравнению с контролем (2,02±0,18; при Р 0,01), рис.48.
Наиболее ярко стимулирующее действие гормона отражает коэффициент нормализации паренхимы, который на данный срок был более чем в два раза выше у крыс получавших гормон - 6,04 ± 0,4, в то время как у крыс контрольной группы он составил — 2,4 ± 0,09 (Р 0,01).
ХГ приводил так же к снижению объемной плотности соединительнотканных клеток на тест-площадь препарата у крыс, по сравнению с контролем. Рстк у крыс, получавших гормон - 0,19 ± 0,04 и Рстк в контроле - 0,41 ±0,02, рис.49.
При изучении объемов гепатоцитов выявилось, что на седьмые сутки в контрольной группе явление гипертрофии еще сохраняется и объем гепатоцитов у этих животных - 4,67+0,14 достоверно отличается от уровня интактных -3,81± 0,11 ( Р 0,01), тогда как у животных, получавших гормон в объеме гепатоцитов по сравнению с интактными достоверно не различались.
