Содержание к диссертации
Введение
Глава 1 Чувствительность различных отделов цнс к цитокинам и глюкокортикоидам 10
1.1 ЦНС и иммунно-нейро-эндокринные взаимодействия при стрессорных воздействиях 10
1.2. Поведенческие эффекты IL-1/3 14
1.3. Участие цитокинов в развитии резистентной и толерантной адаптационных стратегий 16
1.4. Нарушение механизмов отрицательной обратной связи в ГГАС при стрессорных воздействиях 21
1.5. Соотношение между прооксидантными и антиоксидантными системами в головном мозге в условиях хронического стресса 29
Глава 2. Материалы и методы исследования 33
2.1. Моделирование изучаемых состояний 33
2.2 Методы анализа изучаемых явлений 35
Глава 3. Влияние одночасовых иммобилизаций на соотношение между прооксидантными и антиоксидантными системами в отделах головного мозга крыс после дополнительного введения глюкокортикоидного и цитокинового препарата 41
3.1. Поведенческая активность и соотношение между прооксидантными и антиоксидантными факторами ЦНС у животных, подвергшихся одночасовым иммобилизациям после дополнительного введения препарата рекомбинаннтного 41
3.2. Поведенческая активность и соотношение между прооксидантными и антиоксидантными факторами ЦНС у животных, подвергшихся ежедневным одночасовым иммобилизациям после дополнительного введения глюкокортикоидного препарата триамцинолона ацетонида. 51
Обсуждение 60
Глава 4. Влияние редкочередующихся одночасовых иммобилизаций на соотношение между прооксидантными и антиоксидантными системами в отделах головного мозга крыс после дополнительного введения глюкокортикоидного и цитокинового препарата 71
4.1 Поведенческая активность и соотношение между прооксидантными и антиоксидантными факторами ЦНС у животных, подвергшихся одночасовым редкочередующимся иммобилизациям после дополнительного введения препарата рекомбинаннтного IL-1fi 71
4.2. Поведенческая активность и соотношение между прооксидантными и антиоксидантными факторами ЦНС у животных, подвергшихся редкочередующимся одночасовым иммобилизациям после дополнительного введения глюкокортикоидного препарата триамцинолона ацетонида 79
Обсуждение 88
Заключение 99
Выводы 103
Список литературы
- ЦНС и иммунно-нейро-эндокринные взаимодействия при стрессорных воздействиях
- Моделирование изучаемых состояний
- Поведенческая активность и соотношение между прооксидантными и антиоксидантными факторами ЦНС у животных, подвергшихся одночасовым иммобилизациям после дополнительного введения препарата рекомбинаннтного
- Поведенческая активность и соотношение между прооксидантными и антиоксидантными факторами ЦНС у животных, подвергшихся одночасовым редкочередующимся иммобилизациям после дополнительного введения препарата рекомбинаннтного IL-1fi
Введение к работе
Актуальность темы
Человек, постоянно соприкасающийся с современной цивилизацией, вынужден регулярно подвергаться действию хронического стресса, обозначаемого как стресс повседневной жизни. В этих условиях организм испытывает «аллостатическую нагрузку», под которой подразумевается нагрузка не от внешних факторов, а от медиаторов стресса, негативное действие которых на организм проявляется в ситуациях, когда они производятся в избыточном количестве или потому, что их производство не прекратилось после того, как стресс закончился (McEwen В., 1998). С момента появления новой научной дисциплины нейроиммуноэндокринологии, традиционные представления о механизмах поддержания гомеостаза претерпели значительные изменения. Различные клетки принадлежащие к иммунной, нервной или эндокринной системам, синтезируют идентичные сигнальные факторы, что говорит о наличии у них общего молекулярного языка для обмена информацией. Благодаря этому при стрессорных воздействиях иммунная система не может быть просто мишенью для катехоламинов и глюкокортикоидов, поскольку её медиаторы активно регулируют уровень активности центральных стресс-реализующих систем.
В гипоталамо - гипофизарно-адреналовой системе (ГГАС) регуляция обеспечивается механизмами «отрицательной обратной связи» со стороны глюкокортикоидов крови. Вместе с тем на чувствительность ГГАС к эндокринным сигналам существенное влияние оказывает общая реактивность организма. В свою очередь, предшествующие стрессорные эпизоды существенным образом меняют как реактивность как организма в целом, так и отдельных
органов и систем. Возможно, что на направленность этих изменений как по отношению к ГГАС, так и по отношению к головному мозгу как таковому влияет исходный режим стрессирования.
Ранее было показано, что в случае ежедневных иммобилизаций доминирует толерантная стратегия адаптации, характеризующаяся пассивным подчинением действию экстремального раздражителя (Волчегорский И.А. и соавт., 1998; Цейликман В.Э. 1998; Цейликман О.Б., 2005). Напротив, при редко чередующихся иммобилизациях господствует резистентная или стрессорная адаптационная стратегия, направленная на преодоление действия экстремального раздражителя (Цейликман В.Э. и соавт., 2005). Исходя из того, что для полярных адаптационных стратегий характерны различные стереотипы поведения, правомерно ожидать различную направленность поведенческих реакций между ежедневными и редко чередующимися иммобилизациями, как на базальном уровне, так и в ответ на дополнительное введение провоспалительных цитокинов и глюкокортикоидов. Известно, что вызванные стрессом изменения поведенческого статуса ассоциированы с дисбалансом между прооксидантными и антиоксидантными системами (Волчегорский И.А. и соавт., 2002). Однако остаётся не изученным влияние предварительных ежедневных и редко чередующихся иммобилизаций на поведенческую активность и соотношение между системой антиоксидантной защиты и липопероксидацией в различных отделах головного мозга в ответ на дополнительное введение экзогенных цитокинов и глюкокортикоидов.
Цель исследования
Изучить цитокин - зависимые и глюкокортикоид - зависимые изменения поведенческой активности и соотношение между активностью антиоксидантных ферментов и перекисным окислением липидов в различных отделах головного мозга у предварительно стрессированных животных.
Задачи исследования
Исследовать соотношение поведенческого статуса с балансом между активностью некоторых антиоксидантных ферментов и липопероксидацией в различных отделах головного мозга при ежедневных и редко чередующихся иммобилизациях.
Изучить влияние цитокинового и глюкокортикоидного препаратов на соотношение поведенческого статуса с балансом между активностью некоторых антиоксидантных ферментов и липопероксидацией в различных отделах головного мозга у нестрессированных животных.
Изучить влияние предварительных ежедневных и редко чередующихся одночасовых иммобилизаций на И-1(3-зависимые изменения поведенческой активности и соотношение между активностью антиоксидантных ферментов и перекисным окислением липидов.
Изучить влияние предварительных ежедневных и редко чередующихся одночасовых иммобилизаций на глюкокортикоид-зависимые изменения поведенческой активности и соотношение между активностью антиоксидантных ферментов и липопероксидацией в различных отделах головного мозга.
7 Научная новизна
Впервые установлено, что ежедневные одночасовые иммобилизации ограничивают, а редко чередующиеся усугубляют анксиогенные эффекты рекомбинантного IL-1 (3. Установлено, что ежедневные и редко чередующиеся одночасовые иммобилизации усиливают прооксидантные эффекты рекомбинантного IL-10 в среднем мозге и гипоталамусе. Обнаружено усиление двигательной активности животных, подвергнутых одночасовым иммобилизациям после дополнительного введения триамцинолона ацетонида. Показано модифицирующее влияние предварительных стрессорных воздействий на глю ко корти ко ид - зависимые изменения баланса между прооксидантными и антиоксидантными системами в различных отделах головного мозга. Это проявляется в увеличении каталазной активности и снижении ПОЛ в коре, а также в гипоталамусе, продолговатом и среднем мозге при редко чередующихся иммобилизациях и к изменениям противоположной направленности в этих отделах мозга при ежедневных иммобилизациях. Обнаружено, что в более поздние промежутки времени после завершения редко чередующихся иммобилизаций усиливается ПОЛ в различных отделах головного мозга. Внедрение результатов работы
Результаты диссертационной работы внедрены в педагогическую практику кафедры биохимии Челябинской государственной медицинской академии. Теоретическое и практическое значение
Обосновано представление о зависимости характера поведенческих реакций, а так же баланса между прооксидантными и антиоксидантными системами в различных отделах головного мозга при введении экзогенных цитокинов и глюкокортикоидов от режима стрессорных воздействий. Результаты исследования могут быть
использованы для разработки новых подходов к коррекции поведенческих расстройств и лабораторных тестов для определения чувствительности к цитокинам. Прогнозирование психотропных и нейротропных эффектов препаратов глюкокортикоидов и цитокинов возможно при исходном тестировании (до начала терапии) поведенческого и психического статуса пациентов. Это обстоятельство, по мнению автора, значимо в клинике большинства патологических состояний, связанных с нарушениями психического и поведенческого статуса. Положения, выносимые на защиту
У стрессированных животных изменения уровня тревожности при дополнительном введении экзогенного глюкокортикоида и цитокина зависят от исходного поведенческого статуса.
Отмена анксиогенного действия IL-10 при повторных трехкратных иммобилизациях сопровождается ограничением липопероксидации в среднем мозге. Усиление анксиогенного эффекта IL-1(3 при редкочередующихся иммобилизациях сопровождается усугублением липопероксидации в среднем мозге.
Направленность липопероксидации в ЦНС после введения глюкокортикоида стрессированным животным определяется её исходным уровнем.
Апробация
Результаты исследований доложены на Всероссийской научно практической конференции «Актуальные вопросы современной биохимии» (Киров, 2007), на 8 Международном Конгрессе «Здоровье и образование в XXI веке» (Москва, 2007) на Российском Конгрессе биохимиков и молекулярных биологов (Новосибирск, 2008).
Публикации
По теме диссертации опубликовано 8 печатных работ, из них две - в рецензируемых журналах по перечню ВАК Минобразования РФ (Проблемы эндокринологии, №6, 2003; Вестник ЮРГУ образования здоровья и физической культуры, №14, 2008).
Объем и структура диссертации
Диссертация изложена на 132 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов, двух глав собственных исследований, обсуждения результатов, выводов. Библиографический указатель включает 212 источника: 67 - на русском языке и 145 - иностранном языке. Работа содержит 25 таблиц, 13 рисунков.
ЦНС и иммунно-нейро-эндокринные взаимодействия при стрессорных воздействиях
Вскоре после того, как были открыты самые первые представители цитокинов (IL-1, IL-2, TNF и.т.д.), было обнаружено, что их продукция усиливается в условиях острого и хронического стресса (Корнева Е.А. и соавт., 1992). В дальнейшем было показано, что циркулирующие цитокины могут оказывать непосредственное влияние на активность Гипоталамо-Гипофизарно-Адреналовой-Системы (ГГАС). Так, продуцируемые мононуклеарами очага IL-1, IL-2, IL-3, TNF-ot проникают в ЦНС вследствие увеличения проницаемости гематоэнцефалического барьера. Кроме того, поступление цитокинов из циркуляции в головной мозг может проходить через фенестрированный эндотелий organicum vasculosus и lamina terminalis (Katsnura J. e. a., 1989; Strober W. e. a., 1988; Sternberg E. e. a., 1995; Kapkala L. e. a., 1995; De Souza E., 1993; Lightman A. e. a., 1993).
IL-1 считается ключевым цитокином, стимулирующим ГГАС (Dinarello С.А., 1988; River С, 1993; Tilders F.J. е. a., 1994). Причём IL-1p как цитокин, находящийся в циркуляции, привносит в стимуляцию ГГАС гораздо более заметный вклад, чем IL-1a, который является мембрано-ассоциированным цитокином (Карсаіа L. е. а., 1995). Основной механизм, через который IL-1 реализует свои ГГАС-стимулирующие эффекты, связан с активацией секреции КРФ из нервных терминалей median eminince (Berkenbosh F. е. a., 1987; Chover-Gonzalez A.J. t. a., 1994; Minami M. e. a., 1991; Ranshoff B.M., 1987). Кроме того, IL-1 потенцирует секрецию аргинин-вазопрессина из терминалей median eminince (Sternberg Е., Licinio J., 1995). Необходимо отметить, что через IL-1-зависимую стимуляцию секреции аргинин-вазопрессина реализуется феномен гиперчувствительности ГГАС к повторному введению цитокина (Schmidt E.D., 1995).
IL-1 увеличивает интенсивность транскрипции иРНК КРФ в паравентрикулярном ядре гипоталамуса ( River С, 1993 ). Кроме того, IL-1 увеличивает экспрессию гена c.fos в нейронах паравентрикулярного ядра гипоталамуса который действует как регулятор транскрипции (Brady L.C. е. а., 1994; Palkovitz М. е. а., 1995; Veening G.M. е. а., 1993). Регуляторные эффекты IL-1 на гипоталамическом уровне опосредуются путём активации норадренергических проекций паравентрикулярного ядра гипоталамуса, что имеет непосредственное отношение к усилению продукции КРФ (Dunn А., 1992). Имеются данные о способности 11_-13 снижать содержание норадреналина и серотонина в гипоталамусе и в гиппокампе (Connor Т. et al.,1998). Вместе с тем, данные других исследователей свидетельствуют об увеличении содержания серотонина в различных лимбических зонах при одновременном снижении содержания норадреналина. (Sonq с et al., 2006).
В последнее время появились данные о роли вагусной иннервации в опосредовании цитокинового влияния в отношении ГГАС (Wieczorec М., Dunn А.,2007). В этом исследовании показано, что субдиафрагмальная ваготомия предупреждает вызванную интраперитонеальным введением IL-1 активацию ГГАС. Последнее проявлялось в снижении в крови содержания АКТГ и кортикостерона. Предполагается, что через вагусную иннервацию опосредуется цитокин-зависимая активация синтеза норадреналина в гипоталамусе. Авторы этого сообщения подчёркивают, что вагусная иннервация является далеко не единственным путём, через который осуществляется IL-1 зависимая активация ГГАС. Кроме того, возможно непосредственное влияние цитокина на собственные рецепторы в кровеносных сосудах с последующей активацией циклооксигеназы. Это даёт возможность синхронизировать пирогенные эффекты цитокина с активацией ГГАС. Имеются данные о способности ингибиторов циклооксигеназы предупреждать кратковременную цитокин-зависимую активацию ГГАС и не влиять на долговременную активацию этой нейро-эндокринной оси (Dunn А., 2000). Следует отметить, что IL-1 зависимая активация ГГАС ассоциирована с увеличением содержания в гипоталамусе норадреналина и серотонина. При этом ингибиторы циклооксигеназы предупреждали увеличение содержания норадреналина в гипоталамусе, не влияя на содержание серотонина. Аналогичная закономерность прослежена для IL-6 зависимой активации ГГАС.
Регуляторные эффекты IL-1 на гипоталамическом уровне опосредуются различными механизмами. Так, IL-1 активирует норадренергические проекции паравентрикулярного ядра гипоталамуса, что имеет непосредственное отношение к усилению продукции КРФ (Dunn А., 1992). Помимо этого, зависимая от IL-1 стимуляция синтеза КРФ в парвацеллюлярной области гипоталамуса медиируется простагландинами группы Е (Katsnura G. е. а., 1989; River С, 1993). IL-1 - зависимое усиление синтеза простагландинов в гипоталамусе также имеет непосредственное отношение к реализации пирогенного эффекта данного цитокина (Saper С. В. е. а., 1997). Стоит добавить, что данный механизм также опосредует пирогенные эффекты TNF-a и IL-6.
Модулирующее влияние IL-1 в головном мозге также реализуется путём усиления продукции N0. Установлено, то во время воспаления происходит связывание 11_-1р с периваскулярным IL-1-RJ рецептором с последующей индукцией образования NO-синтетазы в периваскулярных областях гипоталамуса (Wong M.L. е. а., 1996). В связи с этим нельзя не упомянуть о существовании NO-зависимых механизмов активации ключевого фермента образования простагландинов - циклоксигеназы (Rettori V.M. е. а., 1992). Через активацию NO-ергических нейронов с последующим усилением образования простагландинов секрецию КРФ стимулируют также IL-2, IL-6, TNF-a и INF-y (McCann S., 1995). В отличии от остальных "эндокринных цитокинов" ИЛ-2 усиливает продукцию N0 за счет активации холинергической системы ЦНС (Karanth S., 1993). Стоит добавить, что IL-2-зависимое усиление секреции аргинин-вазопрессина также обусловлено стимуляцией NO-ергических нейронов.
Кроме того обнаружена способность IL-1 усиливать сигналы, передаваемые через аденозиновые рецепторы в стриатуме (Minor T.R.et al., 2006). Уместно отметить, что этот механизм задействован при травматическом стрессе.
Активирующее влияние "эндокринных цитокинов" на ГГАС реализуется и на гипофизарно-надпочечниковом уровне (Крымская Л.Г., 1992; Ebisur О., 1994; Jones S. е. а., 1993; Spangelo В., Bond В., 1994; Stepien Н. е. а., 1994). Так, IL-1, IL-2 и IL-6 усиливают синтез проопиломеланокортина в переднем гипофизе (Harbuz М. е. а., 1992; Lightman S., 1993; Fuller G., Greneth H., 1989; Kariogina A. et al., 2004), который, как известно, является предшественником не только для АКТГ, но и для опиоидных пептидов, а также (3 - липотропина. ML-4, являющийся антивоспалительным цитокином, угнетает транскрипцию иРНК проопиомеланокортина в аденогипофизе (Harbuz М. е. а., 1992; Lightman S., 1993).
Моделирование изучаемых состояний
Исследование выполнено на 250 лабораторных крысах массой 150 - 250 г. обоего пола. Использовались беспородные животные.
Животных содержали в стандартных пластмассовых клетках при комнатной температуре, двухразовом питании натуральным кормом в количестве, соответствующем суточным нормам. За 24 часа до опыта животным прекращали подачу пищи при неограниченном доступе к воде.
Эксперименты проведены в соответствии с этическими нормами и рекомендациями по гуманизации работы с лабораторными животными, отражёнными в "Европейской конвенции по защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и других научных целей" (Страсбург, 1985). Эвтаназию грызунов осуществляли цервикальной дислокацией. Моделирование изучаемых состояний Моделирование иммобилизационного стресса
Хронический стресс воспроизводился одночасовыми иммобилизациями, которые осуществлялись путём фиксации животного за конечности на спине с применением для этих целей прямоугольных планшет из фанеры. Нами были использованы два режима повторных стрессорных воздействий. Первый воспроизводился путём трехкратных одночасовых иммобилизаций с интервалом между воздействиями в 24 часа. Согласно полученным ранее данным В.Э. Цейликмана (1998), при таком способе моделирования хронического стресса развивается и доминирует толерантная стратегия адаптация.
Для второго режима повторных стрессорных воздействий характерно доминирование резистентной стратегии адаптации и наличие поведенческих расстройств, тревожно-депрессивного характера. Его воспроизводили четырехкратными одночасовыми иммобилизациями с интервалом в 72 часа между отдельными стрессорными эпизодами. Данную модель анксиогенного стресса можно рассматривать как модификацию классической модели повторных стрессорных воздействий по R.Kvetnansky (1970), связанную с сокращением в 2 раза количества эпизодов одночасового иммобилизационного стресса и увеличения промежутков между отдельными иммобилизациями. Увеличение временного интервала между отдельными стрессорными эпизодами затрудняет развитие габитуации, и каждое новое воздействие на животное содержит определённый элемент внезапности.
Поэтому данный режим иммобилизационного стресса гомологичен "стрессу повседневной жизни". Воспроизведение цитокин-зависимой активации ГГАС
Для воспроизведения цитокин-зависимой активации ГГАС мы применяли рекомбинантный человеческий IL-1 (3 (Беталейкин, Betaleukinum, hrlL-1 (3; ГНЦ РФ ГосНИИ особо чистых препаратов, г. Санкт-Петербург; препарат был любезно предоставлен профессором А.С.Симбирцевым) с удельной биологической активностью 108 ед/мг белка, который разводили изотоническим раствором 0,9% NaCI и вводили внутрибрюшинно в дозе 6,25 мкг/кг. Объём вводимой жидкости составил 1 мл на 100 г массы животного. Контрольные группы получали эквивалентное по объёму количество хлорида натрия.
Фармакологическое моделирование стрессорной активации ГГАС
Для фармакологического моделирования стрессорной активации ГГАС применялся глюкокортикоидный препарат пролонгированного действия триамцинолона ацетонид (кеналог; Veb Berline Chemie).
Суспензию кеналога разводили в 0,9% NaCI до концентрации 0,8 мг/мл и вводили крысам подкожно в объёме 2,5 мл/кг (доза - 2 мг/кг). Методы анализа изучаемых явлений Нейроэтологические методы Актограф «открытое поле»
Поведенческие реакции животных изучались в актографе "открытое поле", разработанном Волчегорским И.А. (1993) (риснок 2.1). Крыс помещали в актограф, после чего в течение 10 минут регистрировали число пересечений границ квадратов (горизонтальная активность), подъёмов на задние лапы (вертикальная активность) и количество выглядываний в отверстия (исследовательско-ориентировочная активность). Регистрировали также число стереотипных умываний (груминг).
Поведенческая активность и соотношение между прооксидантными и антиоксидантными факторами ЦНС у животных, подвергшихся одночасовым иммобилизациям после дополнительного введения препарата рекомбинаннтного
Предварительные ежедневные иммобилизации характеризовались развитием поведенческой депрессии. Как видно из таблицы 3.1, на всех сроках эксперимента происходило угнетение спонтанной двигательной активности. Примечательно, что максимальное снижение числа передвижений происходило во время двухкратной иммобилизации, для которой также характерны наиболее выраженные стрессорные сдвиги в системе крови (Цейликман В.Э.,1998). При однократной иммобилизации отмечалось достоверное угнетение исследовательско-ориентировочной деятельности животных. Начиная с двухкратной иммобилизации, снижался также уровень дефекации (таблица 3.1), что отражает торможение эмоциональной реакции страха. Детерминированная хроническим стрессом поведенческая депрессия носила устойчивый характер и сохранялась через 24 часа после завершения трёхкратной иммобилизации (таблица 3.1). Это проявлялось в снижении двигательной и исследовательско-ориентировочной активности (таблица 3.1) у стрессированных животных.
Дальнейшие исследования показали, что наблюдаемые поведенческие расстройства сопровождаются усилением анксиолитических реакций. Это проявляется в увеличении времени пребывания в открытых рукавах (с 32,67±8,92 сек. в контроле (n = 9) до 241,87 сек. в группе «стресс» (n=8), Р 0,01, U, А) и сокращении времени пребывания в закрытых рукавах «крестообразного лабиринта» по сравнению с контролем.
Через 120 часов после завершения стрессорных воздействий оставался пониженным уровень исследовательской активности животных. Так количество выглядываний в отверстия актографа снизилось с 3,66±0,25 раз /5мин до 1,75±0,22 раз /5мин. При этом наблюдалось снижение содержания изо-пропанол растворимых кетодиенов и сопряжённых триенов (таблица 3.2) в коре головного мозга.
В остальных изученных отделах ЦНЄ по содержанию молекулярных продуктов ПОЛ не обнаружено статистически значимых различий: В целом наблюдаемые сдвиги свидетельствуют о: развитии; у стрессированных животных поведенческих расстройств по, типу поведения болезни- илw «sickness behavior». Известно, что развитие этого паттерна связано с повышенной секрецией .провоспалительных цитокинов и прежде всего IL-1, обладающего способностью проникать через фенестрированный участок гемато-энцефалического барьера с последующей активацией ГГАС (Sternberg Е.М., Licinio J.,1995). Ранее были получены данные о способности ежедневных; иммобилизаций увеличивать чувствительность печени и иммунной системы к действию рекомбинантного IL-1P (Цейликман О.Б., 2005). Однако до сих пор отсутствуют аналогичные результаты в отношении ЦНС. Поэтому мы посчитали целесообразным исследовать этологические эффекты гІ1_-1[3(беталейкин) на фоне предварительных стрессорных воздействий.
Поведенческие эффекты цитокинового препарата проявлялись в восьмикратном снижении количества фекальных болюсов. Также отмечено угнетение локомоторной активности, проявлявшееся в снижении количества пересечённых квадратов в тесте «открытое поле», угнетение ориентировочной реакции, проявлявшееся в пятикратном снижении «вертикальных стоек», а также угнетения исследовательского поведения крыс, проявлявшееся в снижении количества выглядываний в отверстия актографа (таблица 3.3).
Через 24 часа после введения rlL-1(3 наблюдалось увеличение времени пребывания в закрытых рукавах крестообразного лабиринта при статистически недостоверной тенденции к снижению времени пребывания в открытых рукавах крестообразного лабиринта.
Подобные сдвиги свидетельствуют об анксиогенном действии данного цитокинового препарата (рисунок 3.3).
Предварительные стрессорные воздействия ограничивали IL-1 -зависимые проявления поведенческих расстройств. Это выражалось в увеличении вертикальной - ориентировочной активности в группе «стресс+г11_-1(3»(таблица 3.3).
В тесте «крестообразный лабиринт» у животных, получавших цитокиновый препарат после предварительных стрессорных воздействий, сформировались новые поведенческие стереотипы анксиолитического характера. Так было отмечено увеличение времени пребывания в открытых рукавах крестообразного лабиринта и сокращение времени пребывания в закрытых рукавах (рисунок 3.3).
Поведенческие эффекты цитокинового препарата ассоциируются с активацией ПОЛ в различных отделах головного мозга. В гипоталамусе увеличение содержания гептан - растворимых диеновых конъюгатов наблюдалось на фоне снижения содержания этой категории продуктов ПОЛ в изо-пропанольной фазе. Последнее может отражать усиление фосфолипазной реакции с транслокацией ацильных радикалов в гептановую фазу (таблица 3.4).
Поведенческая активность и соотношение между прооксидантными и антиоксидантными факторами ЦНС у животных, подвергшихся одночасовым редкочередующимся иммобилизациям после дополнительного введения препарата рекомбинаннтного IL-1fi
В результате проведенного исследования было установлено, что четырехкратный иммобилизационный стресс вызывает снижение поведенческой активности крыс. Это проявлялось уменьшением показателей локомоции и исследовательской активности животных при тестировании в "открытом поле" (таблица 4.1). Одновременно наблюдалось увеличение показателей груминга и анксиогенной дефекации. Кроме того, у стрессированных животных в 4 раза снижено время пребывания в открытых рукавах «крестообразного лабиринта» (P=0,028WW). Полученные результаты свидетельствует о гомологичности стресс-индуцированных расстройств поведения у крыс и меланхолической депрессии у человека. Данный тип психических расстройств рассматривается как следствие гипоталамической гиперпродукции КРФ, который считается центральным медиатором стрессогенной тревожности (O Connor Т.М. et al.,2000).
Обусловленные стрессом изменения поведенческой активности крыс сопровождались увеличением активности МАО в головном мозге (таблица 4.2). Изложенное, прежде всего, касается МАО-Б, так как использованный в работе гидрохлорид бензиламина является высокоселективным субстратом этой формы фермента. Дальнейшие исследования показали, что увеличение активности МАО обусловлено средним мозгом, не затрагивая при этом гипоталамус и кору головного мозга.
Несмотря на прирост церебральной МАО-активности, через 24 часа после завершения РЧИМ отмечено снижение содержания гептанофильных диеновых конъюгатов в головном мозге (с 0,167± 0,03 в контроле (п=10) до 0,084± 0,02 в опытной (п=10) группе, p 0,05U).
Через 96 часов после завершения редкочередующихся иммобилизаций наблюдалось увеличение церебральной МАО -активности (с 9,19±0,1 нмоль/мин/орган в контроле (п=12) до 11,05±0,26 в опыте (n=12), р =0,046 U) при одновременном увеличении содержания всех категорий молекулярных продуктов ПОЛ (таблица 4.10).
При этом в коре головного мозга наблюдалось только увеличение содержания гептан - растворимых кетодиенов и сопряжённых триенов (таблица 4.11). В гипоталамусе отмечено увеличение активности изо-пропанол растворимых кетодиенов и сопряжённых триенов (таблица 4.14) при одновременном увеличении активности СОД (таблица 4.15). В среднем мозге наблюдалось увеличение содержания изо-пропанол-растворимых кетодиенов и сопряжённых триенов (таблица 4.12) на фоне увеличения активности каталазы (таблица 4.15).
Таким образом, полученные результаты свидетельствуют о развитии анксиогенного стресса, связанного с гиперактивацией ҐГАС и САС. Ранее было показано, что при редко чередующихся иммобилизациях наблюдалось увеличение содержания IL-6, являющегося провоспалительным цитокином и принимающим непосредственное участие в активации ГГАС (Цейликман В.Э. и соавт., 2005; Волчегорский И.А. и соавт., 2002).
Вполне возможно, что развитие анксиогенного стресса имеет непосредственное отношение к цитокино - зависимой гиперпродукции кортиколиберина. Поэтому мы посчитали целесообразным изучить особенности поведенческого статуса крыс, дополнительно получавших рекомбинантный 11.-1(3 (rlL-1(3) после завершения серии редко чередующихся иммобилизаций (рисунок 4.1).
Полученные результаты свидетельствуют о модифицирующем влиянии предварительных стрессорных воздействий на поведенческие эффекты rll_-1(3. Так если в группе «rll_-13» наблюдалось снижение количества дефекаций, то в группе «стресс+ rll_-1(3» по сравнению с референтной точкой, в качестве которой использовали группу «rll_-ip», значительно увеличилось количество фекальных болюсов. Кроме того, несколько увеличилось время пребывания в закрытых рукавах крестообразного лабиринта. Этот факт нам представляется дополнительным доказательством усиления анксиогенных эффектов цитокинового препарата у предварительно стрессированных животных (рисунок 4.1).
Цитокин-зависимая активация ПОЛ особенно отчётливо проявлялась в среднем мозге, где у стрессированных животных через 24 часа после введения rll_-13 наблюдалось увеличение содержания гептан-растворимых диеновых конъюгатов по сравнению с группой «rll_-13» (таблица 4.7). Важно отметить, что упомянутый прирост продуктов ПОЛ в гептановой фазе синхронизирован со снижением продуктов ПОЛ в изо-пропанольной фазе. Это может быть связано с усилением фосфолипазной реакции. В гипоталамусе активация ПОЛ проявлялась в увеличении у животных группы «стресс+ г11_-1 (3» содержания изо - пропанол растворимых диеновых конъюгатов. Таким образом, в группе «стресс+ rlL-13» усугубление анксиогенных расстройств сопровождается усилением ПОЛ в среднем мозге и в гипоталамусе (таблица 4.8).
