Содержание к диссертации
Введение
Обзор литературы 8
1. Гипоксия плода; причины и следствия 12
2. Влияние антенатальной гипоксии на центральную нервную систему 14
3. Эффекты антенатальной гипоксии на висцеральные системы и гемодинамику 18
4. Влияние антенатальной гипоксии на метаболизм 21
5. Регуляторные пептиды 24
6. Аналог AKIT4-7PGP - семакс 26
7. (3-казоморфины 27
Материалы и методы исследования 32
1. Исследование резистентности самок крыс к острой гипобарической гипоксии в период прогестации 35
2. Регистрация поведенческой активности и ЭКГ у самок крыс в постгипоксическом периоде в тесте "Открытое поле" 38
3. Регистрация локального мозгового кровотока у самок крыс 40
4. Морфометрические характеристики потомства 43
5. Регистрация поведенческой активности и ЭКГ у потомства самок крыс 43
а) Тест "Норковая камера" 44
б) Тест "Приподнятый крестообразный лабиринт" 45
в) Тест "Избегание плаванья" 46
г) Тест "Условный рефлекс пассивного избегания" 46
6. Определение уровня биогенных аминов в головном мозге крысят 47
а) Определение содержания серотонина в стволе и коре больших полушарий головного мозга крысят 48
б) Определение содержания дофамина и норадреналина в стволе и коре больших полушарий головного мозга крысят 48
7. Статистическая обработка результатов
IV. Результаты исследования
Часть 1. Влияния острой гипобарической гипоксии на беременных самок крыс в период прогестации (4-5 дни беременности); пептидергическая коррекция
Глава 1.1. Исследование влияний острой гипобарической гипоксии на беременных самок крыс в период прогестации 49
Глава 1.2. Анализ влияний интраназального введения пептидной констелляции и ее отдельных компонентов на беременных самок крыс в отсутствие острой гипоксии 63
Глава 1.3. Пептидергическая коррекция влияний острой гипоксии на беременных самок крыс 70
Часть 2. Влияния острой гипоксии, проведенной на стадии прогестации, на развитие новорожденных крысят; пептидергическая коррекции
Глава 2.1. Исследование влияний острой гипоксии, проведенной на стадии прогестации, на развитие новорожденных крысят 89
Глава 2.2. Исследование влияний интраназального введения пептидной констелляции или ее компонентов на стадии прогестации в отсутствии гипоксии на развитие потомства 109
Глава 2.3. Коррекция пептидной констелляцией или ее компонентами последствий острой гипоксии, проведенной на стадии прогестации у новорожденных крысят 125
V. Обсуждение 143
Заключение 155
Выводы 157
Список литературы 158
- Влияние антенатальной гипоксии на центральную нервную систему
- Исследование влияний острой гипобарической гипоксии на беременных самок крыс в период прогестации
- Исследование влияний острой гипоксии, проведенной на стадии прогестации, на развитие новорожденных крысят
- Коррекция пептидной констелляцией или ее компонентами последствий острой гипоксии, проведенной на стадии прогестации у новорожденных крысят
Влияние антенатальной гипоксии на центральную нервную систему
Специальный интерес представляют влияния острой и хронической гипоксии плода на центральную нервную систему. В настоящее время асфиксия и гипоксически-травматические повреждения мозга не только остаются ведущей причиной смерти детей в антенатальном периоде, но и во многом определяют дальнейшее развитие ребенка, частоту психической и физической инвалидизации в последующем (Савельева Г.М., 1981; Vannucci R.C., 2000). Более 60% всей патологии нервной системы детского возраста составляют антенатальные повреждения мозга, которые непосредственно участвуют в развитии таких заболеваний, как детский церебральный паралич, эпилепсия, минимальная мозговая дисфункция (Nordstrom L., Aralkumaran S., 1998).
Частота заболеваний нервной системы по России составляет 40-50 случаев на 1000 детей, при этом считается, что абсолютное большинство всех нервно-психических заболеваний обусловлено или связано с антенатальной гипоксией и зависит от степени гипоксии и эффективности терапии новорожденных в раннем постнатальном периоде.
Гигоксическая ишемия на клеточном и субклеточном уровне вызывает в мозге плода ряд изменений: усиление выброса эндогенных аминокислот, аспартата и глутамина, активацию NMDA-рецепторов, увеличение проникновения ионов кальция через мембрану и перекисного окисления мембранных липидов, массивный выброс эйкозаноидов, простагландинов, лейкотриенов и цитокинов, снижение синтеза белка в клетках головного мозга (Habek D., 2000; Berger R., Gamier Y., 2000). Перечисленные выше изменения в мозге плода приводят к ранней индукции последующей гибели нервных клеток (Berger R., Gamier У., 2000).
Показано, что гипоксия угрожает функциям мозга в течение всей жизни, начиная с ранних стадий внутриутробного развития до старости человека. Более того, антенатальная гипоксия является дополнительным фактором нейродегенерации, а также снижения когнитивных и других поведенческих функций в процессе взросления. Так, у перенесших антенатальную гипоксию новорожденных крысят впоследствии отмечается заметный дефицит нервной ткани в гигшокампе (включая область СА1), коре, полосатом теле, а также значительное нарушение памяти (Almli C.R., 2000). Потеря нейронов в результате антенатальной гипоксии идет в две стадии: в начале во время гипоксического воздействия и позднее во время реперфузионной реоксигенации (Nordstrom L., 1998).
Антенатальная гипоксия вызывает временное отставание прорастания холинергических и серотоиинергических волокон в гиппокамп и неокортекс, а также приводит к усиленной нейродегенерации серотоиинергических аксонов в процессе развития. Антенатальная гипоксия подавляет гшшокампальную холинергическую активность и изменяет способность связывания мускариновых рецепторов в гиппокампе в раннем постнатальном периоде. Изменение развития аксональной арборизации пре- и постсинаптических холинергических функций может лежать в основе ряда дефицитов поведения (Nyakas С, 1996).
Прямые доказательства патологических влияний антенатальной гипоксии были получены в экспериментах на животных. У перенесших антенатальную гипоксию новорожденных крысят отмечался дефицит глиальных элементов в коре, а также нарушение взаимоотношений между созревающими нервными клетками и капиллярами, связь между которыми устанавливается через глию. По мнению авторов, это является одной из причин трофических расстройств нервной ткани (Жукова Т.П., 1984).
У месячных крысят, перенесших гипоксию на 18-19-м дне антенатального развития, отчетливо выступали признаки недоразвития дендритного дерева многих нейронов коры и их патологические изменения. Наблюдались уменьшение числа конечных разветвлений дендритов, обеднение клеток шипиками, варикозности по ходу отдельных дендритов, особенно в их дистальных отделах. (Dambska-M, 1992). Эти данные косвенно могут свидетельствовать о стойких нарушениях взаимоотношений между нейронами коры и подкорковыми структурами, а также о возможных изменениях синаптического аппарата нейронов под влиянием антенатальной гипоксии. У таких крысят с некоторым запозданием начинались процессы миелинизации в белом веществе головного мозга. К месячному возрасту у крыс, перенесших гипоксию, процессы миелинизации в белом веществе головного мозга не заканчивались. К этому времени еще сохранялись незрелые волокна наряду с отдельными патологически измененными и дегенерирующими волокнами.
Таким образом, у животных перенесших гипоксию в анте- и постнатальном периоде, стабилизации нервной ткани не наступает. Наоборот, после некоторой аЕТИВацнИ пОСТ?. КЛЕТОЧНЫХ ЗЛемСНТОВ КОТ Ы чяпт\тяр;т em.TR и лгоютгкно быстпое развитие атрофических процессов (Жукова Т.П., 1984).
Особенностью мозгового кровотока у новорожденных детей в норме является его стабильность с первых часов жизни, в то время как у детей, перенесших асфиксию при рождении, наблюдается его нарушение, причем степень и длительность этих изменений зависит от тяжести асфиксии (Дегтярева Н.В., 1993).
В спинном мозге у животных, перенесших внутриутробную гипоксию, также отмечаются выраженные морфологические изменения нервных клеток, спинальных ганглиев, проводящих путей. Кроме того, наблюдается изменение сосудистого русла спинного мозга: увеличение числа венозных сосудов и их расширение (преимущественно в поясничном отделе), а также расширение капиллярной сети. Процесс повреждения структур спинного мозга, начавшийся еще внутриутробно, продолжается и после рождения (Жукова Т.П., 1984).
Антенатальная гипоксия оказывает значительное влияние на поведенческие характеристики. Так, например, исследование детенышей крыс, чьи матери были подвергнуты гипобарической гипоксии во время беременности, выявило нарушения в поведении потомства на 8-25 дни постнатального развития (Trofimov S.S., 1993a,b). Гемическая гипоксия у самок крыс на 10-19 дни беременности приводила к уменьшению количества жизнеспособных крысят в помете, а также к нарушению двигательной активности и снижению обучения у потомства (Koziar V.S., 1994).
В ряде случаев тяжелые изменения нервной системы в результате антенатальной гипоксии у детей развиваются постепенно и становятся явными, когда их лечение оказывается уже недостаточно эффективным. Возможность судить о полноте компенсации наступает только после формирования основных функций ЦНС. Как было показано ранее, срочные эффекты гипоксии на ЦНС у новорожденных выражены не столь явно благодаря наибольшей защищенности мозга по сравнению с другими системами организма. Однако на многочисленных моделях гипоксии показано наличие отставленных последствий, которые в большинстве случаев необратимы. Например, такие отставленные эффекты постнатальной гипоксии, как изменение ориентировочно-исследовательской реакции, уровня тревожности и способности к обучению, были показаны в исследованиях П.В. Балан (1999).
В зависимости от зрелости мозга во время кислородного голодания и тяжести воздействия повреждения, возникшие в результате гипоксии, могут варьировать от ТЯЖЕЛОЙ vMCTE HHOK ОТСТЙЛОСТИ И МОТОПНЫХ г,?.ССТпОЙСТВ О Ч боДЬШВГ измр.ирнгтй поведения (Nyakas С, 1994). Одним из проявлений антенатальной гипоксии является синдром дефицита внимания с гиперактивностью (СДВГ), который относится к наиболее распространенной патологии детского возраста. По данным разных авторов его распространенность составляет от 1 до 18 %. У детей с СДВГ выделяются два типа нарушений: с одной стороны, это дефицит внимания, с другой - гиперактивность и импульсивность. Не относясь к тяжелым психоневрологическим заболеванием, СДВГ, тем не менее, привлекает большое внимание в связи с проблемами обучения и поведения детей с этим синдромом. Последние катамнестические исследования показали, что нарушения поведения при СДВГ с возрастом не проходят, а лишь приобретают другие формы (Сорокин А.Б., 1999).
В ряде экспериментов было показано влияние антенатальной гипоксии на половую дифференцировку мозга у крыс. Так, хроническая гипоксия самок крыс на последней неделе беременности привела к демаскулинизации и/или феминизации сексуального поведения у самцов в потомстве. При этом было выявлено снижение уровня тестостерона у потомства (Herman R.H., 1993, 1994).
Кроме того, внутриутробная гипоксия вызывает существенные сдвиги баланса биогенных аминов головного мозга как в раннем, так и в отставленном постгипоксических периодах. В работе L.D. White и Е.Е. Lawson (1997) было показано, что хроническая антенатальная гипоксия на позднем сроке эмбрионального развития у крысят изменяет уровень ферментативного синтеза катехоламиновых систем. Так, в первую неделю постнатального развития регистрировали уменьшение уровня тирозин гидроксилазы (катализирует образование ДОФА) и N-метилтрансферазы (катализирует образование адреналина) в дорзальнои части медуллы, тогда как в вентральной части регистрировали увеличение; на второй неделе внутриутробного развития низкий уровень N-метилтрансферазы в дорзальнои части медуллы сохранялся.
Исследование влияний острой гипобарической гипоксии на беременных самок крыс в период прогестации
Острая гипоксия относится к числу патологических стрессорных воздействий высокой степени тяжести. При подъеме на "высоту", соответствующую 11,5 тысячи метров, во время моделирования острой гипоксии возможны даже летальные исходы. Известно, что резистентность к острой гипоксии зависит от возраста и пола экспериментальных животных (в частности, белых нелинейных крыс), однако сравнительной характеристики гипоксической резистентности небеременных и беременных самок крыс в доступной литературе мы не нашли. В связи с этим была проведена предварительная оценка резистентности к острой гипоксии небеременных самок крыс и крыс на 4-5-й дни беременности, соответствующие периоду прогестации, в течение которого происходит переход из стадии морулы в стадию бластулы и перемещение зародыша из яйцеводов в матку.
В процессе работы были выявлены животные с разной степенью устойчивости к гипоксии. Как было указано в методике, для анализа устойчивости самок крыс к острой гипобарической гипоксии всех животных разделили на две группы по показателю времени жизни "на высоте". Крыс, время жизни которых составляло более 10 минут, относили к группе условно высокоустойчивых, менее 10 минут - условно низкоустойчивых особей. Подобное разделение показало, что среди беременных самок крыс, перенесших ОГТ на 4-5 дни беременности, в 2,8 раза меньше высокоустойчивых особей, чем в группе небеременных (табл.3).
Показатели индивидуальной устойчивости к гипоксическому воздействию (время потери позы (ВПП), время жизни (ВЖ), время реституции (ВР)) рассчитывали только для группы низкоустойчивых животных, так как в группе высокоустойчивых после 10 минут пребывания на "высоте" гипоксию прерывали, не дожидаясь остановки дыхания. Из таблицы 3 видно, что низкоустойчивые беременные самки крыс по показателям времени реституции медленнее восстанавливаются после острой гипоксии, чем небеременные.
Таким образом, мы можем сделать вывод, что самки крыс на раннем сроке беременности обладают меньшей устойчивостью к гипоксии, чем небеременные животные. Возможно, это связано с тем, что уже на данном сроке беременности происходят значительные перестройки в организме животного, что делает его более уязвимым к разного рода сгрессорным воздействиям.
Как говорилось ранее (обзор литературы), среди висцеральных систем одной из наиболее чувствительных к стрессорному воздействию является сердечнососудистая система. Особенно важно проследить нарушения работы сердца у беременной самки крысы в анализируемый нами период, когда даже кратковременные изменения могут вызвать значительную кислородную недостаточность эмбриона и повлиять в дальнейшем на развитие потомства. В связи с этим нами было проведено исследование изменений RR интервалов ЭКГ и производных коэффициентов у беременных самок крыс в период прогестации во время острой гипобарической гипоксии. Так как во время моделирования ОПТ самок крыс делили на группы условно высоко- и низкоустоичивых, анализ RR интервалов проводили отдельно в каждой из групп.
Исходные характеристики ЭКГ, регистрируемые в условиях свободного поведения, были примерно одинаковыми у всех беременных самок крыс (табл.4).
Наблюдаемое замедление ЧСС в условиях умеренного стрессирования, которое вызывалось нашими манипуляциями, является закономерной реакцией "замирания", характерной для ночных грызунов (Крушинская Я.В., 1996). Более выраженное падение ЧСС в группе высокоустойчивых животных косвенно свидетельствует об их большей "стрессированности".
Изменение показателей ЭКГ во время гипоксии у низкоустойчивых самок крыс представлено в таблице 5. Из таблицы видно, что в момент окончания подъема на "высоту", то есть к началу моделирования острой гипоксии, у животных регистрировали снижение значений RR интервала, рост показателей амплитуды моды и коэффициента монотонности. Наблюдаемые изменения сердечного ритма в момент начала моделирования гипоксии говорят о включении адаптационных механизмов к кислородному голоданию за минуту подъема на "высоту". Судя по направленности изменений указанных показателей, можно предполагать смещение баланса вегетативной регуляции в сторону усиления симпатической компоненты, направленного на частичную компенсацию кислородной недостаточности. Однако острая гипоксия является, по-видимому, столь сильным воздействием, что адаптация сердечного ритма к кислородной недостаточности напутается Поглте ЧЯИР:ПТТИ?ЛНИЯ гттткрмя ия "тллг»т\г" регистрировали достоверное увеличение среднего значения RR интервала, вариабельности ритма и снижение показателей амплитуды моды и коэффициента монотонности, что также свидетельствует об изменении баланса вегетативной регуляции, но в противоположном направлении по сравнению с изменениями, регистрируемыми при подъеме на "высоту".
Восстановление исходного ритма сердца у низкоустойчивых самок крыс наблюдали в момент, соответствующий времени реституции, то есть более чем через 3 минуты после прекращения моделирования гипоксии. При этом другие показатели достоверно отклонялись от значений, регистрируемых в "норме", в противоположном направлении по сравнению с периодом острой гипоксии: регистрировали достоверное уменьшение вариабельности ритма, а также увеличение показателей амплитуды моды и коэффициента монотонности, что свидетельствует об активации симпатоадреналового компонента регуляции.
У высокоустойчивых к гипоксии беременных самок крыс анализ изменения показателей ЭКГ во время подъема на "высоту" выявил сходные с низкоустойчивыми животными изменения ЭКГ: достоверное снижение значений RR интервала и увеличение амплитуды моды (табл.6). Таким образом, мы можем сделать вывод, что к моменту подъема на "высоту" у самок крыс независимо от их устойчивости к гипоксии происходят однонаправленные изменения баланса вегетативной регуляции.
Исследование влияний острой гипоксии, проведенной на стадии прогестации, на развитие новорожденных крысят
Как было показано ранее (глава 1.1.), острая гипобарическая гипоксия проведенная на 4-5-й дни беременности (в период прогестации), приводит к достоверному изменению поведенческой активности на фоне выраженного вегетативного дисбаланса, причем эти эффекты в основном затрагивают только высокоустойчивых самок крыс. В связи с этим перед нами стояла задача оценить возможные последствия острой прогестациоуной гипоксии на развитие потомства по ряду показателей. Было проведено исследование физического взросления по показателям прироста веса и массы тела, времени открывания глаз, а также поведенческой активности, уровня тревожности, способности к обучению, изменения баланса вегетативной регуляции и деятельности сердца. Кроме того, в дополнительной серии эксперимента мы исследовали влияние острой гипоксии на данном периоде внутриутробного развития на баланс биогенных аминов в коре и стволе головного мозга у крысят.
Тестирование новорожденных животных проводили на 15-18-й (1-й возраст), 22-25-й (2-й возраст), 36-39-й (3-й возраст) дни постнатального развития. Выбор данных возрастов был сделан с учетом того, что эти периоды являются переломными в процессе онтогенеза новорожденных животных, так как в это время происходит созревание тех или иных физиологических функций организма: 1-й возраст - открывание глаз и формирование позы стояния; 2-й возраст - переход к дефинитивному типу питания; 3-й возраст - препубертатный период, когда наблюдается повышенная моторная и исследовательская активность, хорошее запоминание экспериментальной обстановки (Аршавский И.А., 1982; Балан П.В., 1999; Розен В.Б., 1994). Кроме того, на 57-60 дни жизни (4-й возраст) -пубертатный период, когда происходит половое созревание, мы провели дополнительную серию эксперимента для того, чтобы выяснить сохраняются ли влияния острой прогестационной гипоксии после завершения периода препубертатного развития.
В каждом из исследованных возрастов использовали группы животных, не участвовавших ранее в тестировании, то есть привыкания к экспериментальной обстановке с возрастом не происходило. В связи с отсутствием достоверных ПСДС2ІЛХ СТЛЇГ-ІЕЙ внутри зкспаримснтольиьіА групи, все данные, полученные на самцах и самках внутри каждой группы были объединены.
Так как более глубокие последствия острой гипоксии на исследованные характеристики имели место у беременных самок крыс, квалифицированных как высокоустойчивые к гипоксическому воздействию, мы провели анализ влияний острой гипоксии периода прогестации на развитие потомства с разделением на группы животных, рожденных от высоко- и низкоустойчивых самок. При этом было показано, что у высокоустойчивых к острой гипоксии самок по сравнению с самками, не подвергавшимися гипоксии, достоверно чаще рождались мертворожденные крысята и чаще встречалась гибель новорожденных крысят в последующие дни жизни (табл.13). Кроме того, потомство высокоустойчивых самок, достоверно хуже прибавляло в весе и росте, начиная с 29-го дня жизни, тогда как крысята, полученные от низкоустойчивых самок, по этим показателям не отличались от контроля. Однако отставание во времени открывания глаз у крысят к 18-му дню жизни было одинаковым в обеих экспериментальных группах (рис.24).
Полученные данные позволили предположить, что отставание в физическом развитии у крысят, выраженное особенно ярко в потомстве высокоустойчивых самок крыс, может оказать влияние и на поведенческие характеристики. С этой целью крысята четырех возрастных групп были протестированы в "норковой камере". Внутривозрастной анализ показал, что в 1-й возрастной группе, то есть на 15-18-й дни жизни, в контрольной группе крысят наблюдали достоверное увеличение ГДА и ВДА на третий и четвертый дни тестирования по сравнению с первым днем (рис.25). Данное увеличение моторной и исследовательской активности, скорее всего, связано с тем, что на этом этапе развития у крысят происходит открывание глаз и становление позы стояния.
. Однако у потомства высокоустойчивых особей общая направленность изменений ВДА была той же, что и в контроле.
Кроме того, у крысят, рожденных от низкоустойчивых самок, наблюдали достоверное снижение ГДА и ВДА, а также увеличение груминга по сравнению с контрольными значениями, тогда как у потомства высокоустойчивых самок регистрировали обратное явление - достоверный рост ГДА, ВДА и падение груминга (рис.25). При этом было отмечено, что обе группы крысят, перенесших острую гипоксию в период прогестации, достоверно отличались друг от друга. Интересным является тот факт, что в данной возрастной группе в зависимости от устойчивости к острой гипоксии беременных самок крыс у их потомства наблюдается сочетание гипоактивности на фоне увеличения эмоционального напряжения (у потомства низкоустойчивых самок) или гиперактивности на фоне пониженного эмоционального напряжения (у потомства высокоустойчивых самок).
Сопоставление поведенческой активности с характеристиками физического развития в 1-й возрастной группе показывает, что существенных различий в приросте массы и роста не было как между группами животных, полученных от низко- и выеокоустойчивых самок, так и по отношению к контролю, однако процент крысят с неоткрывшимися глазами к 18-му дню жизни в потомстве низко-и высокоустойчивых крыс был достоверно большим, чем в контроле. Это явление совпадает с тем, что в случае ГДА и ВДА именно к 17-18-му дням жизни и появляется достоверное отличие между контролем и потомством самок, подвергнутых острой гипоксии.
Во 2-й возрастной группе, то есть на 22-25-й дни жизни, у контрольных крысят регистрировали достоверное снижение ГДА от первого к последующим дням тестирования (рис.26), которое, скорее всего, было связано с появлением способности к запоминанию экспериментальной обстановки; другие показатели при этом не изменялись.
Сравнительный анализ ориентировочно-исследовательских реакций у потомства низко- и высокоустойчивых самок крыс во 2-й возрастной группе показал, что так же, как и в 1-ом возрасте, у всех крысят присутствовали отклонения от контрольных значений, причем для потомства низкоустойчивых груминга) и более выраженное запоминание экспериментальной обстановки (по показателям ГДА и ВДА), а для потомства высокоустойчивых животных - более высокое эмоциональное напряжение и нарушение процесса запоминания экспериментальной обстановки за счет резко выраженной гиперактивности на третий день тестирования (рис.26).
Таким образом, можно сделать вывод, что как, и в 1-й, так и во 2-й возрастной группе прогестационноая острая гипоксия приводит к изменению возрастной динамики становления моторной и исследовательской активности.
В 3-й возрастной группе, то есть на 36-39 дни жизни, в основном отличия от контрольной группы были зарегистрированы у потомства высокоустойчивых самок крыс; эти отличия затрагивали все показатели ориентировочно-исследовательской активности, кроме показателя норок (рис.27). У потомства низкоустойчивых самок в этой возрастной группе регистрировали только достоверное падение груминга по сравнению с контролем (рис.27). В целом функционально! состояние потомства высокоустойчивых самок крыс в этом возрасте можно оценить как исходно гиперактивное, однако при повторном помещении в "норковую камеру" у них наблюдали более выраженное падение двигательной активности (рис.27).
Обобщенный анализ отклонений ориентировочно-исследовательских реакций потомства крыс, перенесших острую гипоксию, представлен в таблице 14. Из таблицы видно, что отклонения от контрольного паттерна поведения есть как у потомства низко-, так и высокоустойчивых самок во всех возрастных группах; исключением является потомство низкоустойчивых особей 3-й возрастной группы по показателям ГДА и ВДА. Однако при сравнении потомства низко- и высокоустойчивых самок становится очевидным, что, как правило, эти отклонения разнонаправлены, что и приводит к появлению достоверных отличий между этими группами. В целом отклонения у потомства низкоустойчивых самок выражались в снижении ГДА и ВДА в последние два дня тестирования в 1-м и 2-м возрасте при одновременном падении груминга во 2-м возрасте. В 3-м возрасте отличий от контроля в потомстве низкоустойчивых особей практически не было. У крысят, рожденных от высокоустойчивых самок крыс, картина была противоположной: увеличение ГДА и ВДА в первых двух возрастных группах, сопровождавшееся снижением груминга в 1-м возрасте и его ростом во 2-м возрасте. Кроме того, в этой группе животных отклонения сохранялись и в 3-м возрасте.
Коррекция пептидной констелляцией или ее компонентами последствий острой гипоксии, проведенной на стадии прогестации у новорожденных крысят
Так как ранее (глава 2.1.) нами было показано, что острая гипоксия периода прогестации оказывает влияние на развитие потомства, мы предположили, что профилактическое интраназальное введение констелляции регуляторних пептидов (семакса и р-казоморфина-7) беременной самке крысы позволит ослабить или полностью устранить эти негативные влияния на крысят. Такое предположение было сделано на основании полученных в главе 1.3. данных, где мы показали, что использование констелляции у низкоустойчивых самок позволяет снять все влияния острой гипоксии, а у высокоустойчивых животных - почти все.
Как было показано в главе 2.1., прогестационная гипоксия приводит к увеличению процента пометов с мертворожденными крысятами у высоко-, но не у низкоустойчивых самок крыс. Пептидная констелляция значительно уменьшала этот показатель, более того, этот эффект проявлялся даже по отношению к низкоустойчивым самкам и к контрольным животным (табл.22). Анализ влияния компонентов показал, что наблюдаемое уменьшение этого показателя не может быть объяснено как объединение эффектов отдельных компонентов, так как р казоморфин-7 не влиял, а семакс даже увеличивал этот показатель (табл.22). Таким образом, пептидная констелляция оказала позитивное влияние на течение беременности не только в постгипоксическом периоде, но и в норме, что привело к увеличению числа живорожденных крысят. Пептидная констелляция оказала положительное влияние и на жизнестойкость крысят в течение всего периода наблюдения: процент летальности 126 сходное действие (табл.22).
Влияние пептидной констелляции и ее компонентов на прирост массы и роста на 29-й и 36-й дни постнатального развития, в которые выявлялись негативные последствия прогестационной гипоксии у потомства высокоустойчивых самок крыс, выражались не только в устранении этих последствий, но и в достоверном увеличении этих показателей по отношению к контрольной группе. Особенно ярким эффект прироста массы и роста был у потомства низкоустойчивых самок крыс (рис.42). В этой же группе констелляция и ее компоненты благотворно влияли на время открывания глаз, однако у потомства высокоустойчивых самок эффекты констелляции оказались противоположными, а семакс не изменял этого показателя (рис.42).
Так как ранее (глава 2.1.) нами бьшо показано влияние острой гипоксии периода прогестации на поведенческие характеристики потомства, мы решили проверить, сможет ли констелляция, обладающая по сравнению с компонентами наиболее широким спектром положительного действия, устранить или частично уменьшить негативные эффекты прогестационного кислородного голодания. В связи с этим мы исследовали коррегирующие влияния констелляции на поведение крысят, перенесших гипоксию на стадии прогестации.
К наиболее тяжелым последствиям острой прогестационной гипоксии, выявленным в постнатальном периоде, относятся изменения ориентировочно-исследовательской реакции в тесте "норковая камера", возникающие у потомства высокоустойчивых самок крыс: снижение способности к запоминанию экспериментальной обстановки на фоне гиперактивности в 1-м и 2-м возрастах, а также резкий переход от гиперактивности к гипоактивности на фоне пониженного эмоционального напряжения в 3-й возрастной группе. Анализ эффектов констелляции пептидов в этом случае был затруднен, так как, и об этом уже говорилось ранее, процент высокоустойчивых особей на данной стадии беременности был крайне низок. Как было указано в главе "Материалы и методы исследования", тестирование проводилось только один раз в каждой возрастной группе. Все самки, от которых бьшо получено потомство для исследования ориентировочно-исследовательской реакции в 3-й возрастной группе, оказались низкоустойчивыми к острой гипоксии, в связи с этим нам удалось исследовать влияние констелляции на потомство высокоустойчивых самок только в 1-й и 2-й возрастных группах.
Как следует из данных таблицы 23 к 23A, s 1-й и 2 й гезрастных группах у потомства высокоустойчивых самок крыс профилактическое интраназальное введение пептидной констелляции устраняло все негативные последствия прогестационной гипоксии на ориентировочно-исследовательские реакции в тесте "норковая камера", возвращая показатели к контрольным значениям. Такая ярко выраженная нормализация поведения свидетельствует о способности констелляции к защите эмбриона в прогестационный период от повреждающего влияния острой гипоксии.
Сопоставление этих данных с морфометрическими показателями свидетельствует об одновременном значительном приросте массы и роста, что могло стать одной из причин усиленной моторной активности. Следует отметить, что пептидная констелляция не всегда устраняла влияния прогестационной гипоксии на показатель груминга (табл.24 и 24А).
Таким образом, полученные данные позволяют сделать вывод, что констелляция всегда устраняет влияния прогестационной острой гипоксии на поведенческие характеристики в тесте "норковая камера" у потомства высокоустойчивых самок крыс, а также, как правило, у потомства низкоустойчивых особей. Причем в случае последних при устранении эффектов гипоксии возможно не просто возвращение к контрольным значениям, а даже изменение показателя в направлении, противоположном действию гипоксии.
Исследование коррегирующего эффекта пептидной констелляции на уровень тревожности потомства высокоустойчивых самок крыс в тесте "приподнятый крестообразный лабиринт" на 22-й день жизни показало, что все влияния прогестационной гипоксии, выражавшиеся в росте тревожности, устраняются (табл.25 и 25А). У потомства низкоустойчивых крыс эффекты острой гипоксии были противоположными; констелляция устраняла эти эффекты на 22-й день
Изменение способности к обучению у крысят, пере-иестих ОСттю прогестационную гипоксию, бьшо выявлено только в тесте "условный рефлекс пассивного избегания": в 3-м возрасте у потомства высокоустойчивых самок крыс способность к обучению, оцениваемая по коэффициенту обучаемости (см. главу "Материалы и методы исследования"), была снижена, тогда как у потомства низкоустойчивых самок не изменялась; а в 4-м возрастном периоде у потомства низкоустойчивых особей регистрировали улучшение обучения. К сожалению, из-за малой численности высокоустойчивых животных мы не смогли проверить коррегирующего влияния констелляции в этой группе. Однако анализ потомства низкоустойчивых самок крыс показал, что констелляция не просто устраняет влияние гипоксии, а приводит к достоверному изменению способности к обучению по сравнению с контрольной группой, противоположно направленному по сравнению с эффектом гипоксии (табл.26).
