Содержание к диссертации
Введение
Глава 1. Обзор литературы. Гистофизиология мужских половых желез в антенатальном и постнатальном периоде 10
1.1. Становление генеративной функции мужских половых желез в антенатальном и постнатальном периодах 10
1.2. Становление эндокринной функции мужских половых желез в антенатальном и постнатальном периодах 20
1.3. Регуляция эндокринной и генеративной функции мужских половых желез в антенатальном и постнатальном периодах 24
Глава 2. Материалы и методы исследования 47
2.1. Общая характеристика экспериментальных животных 47
2.2. Экспериментальные модели хронических поражений печени.. 48
2.2.1. Модель поражения печени экспериментальных животных с использованием Е. Coli 48
2.2.2. Моделирование D (+) — галактозаминового поражения печени у экспериментальных животных 51
2.3. Описание методов исследования 53
2.3.1. Морфологические методы исследования семенника 53
2.3.2. Морфометрические методы исследования семенника 54
2.3.2.1. Оценка генеративной функции семенника 54
2.3.2.2. Анализ эпидидимальных сперматозоидов половозрелых самцов от потомства самок крыс с хроническим экспериментальным поражением печени различного генеза 58
2.3.2.3. Оценка двигательной активности сперматозоидов 58
2.3.3. Оценка инкреторной активности семенника 60
2.3.4. Оценка эндокринной функции семенника методом твердофазного иммуноферментного анализа 62
2.3.5. Статистические методы исследования 62
Глава 3. Результаты собственных исследований 65
3.1. Характеристика весовых параметров мужской половой железы экспериментальных животных 65
3.2. Анализ генеративной функции семенников экспериментальных животных 68
3.2.1. Характеристика величины семенных извитых канальцев 68
3.2.2. Характеристика сперматогенных клеток 71
3.2.3. Характеристика фолликулярных клеток (клеток Сертоли) 100
3.2.4. Анализ двигательной активности сперматозоидов 104
3.3. Анализ инкреторной активности семенников потомства самок крыс с
хроническим экспериментальным поражением печени 116
3.3.1. Морфологическая характеристика интерстициальных эндокриноцитов 117
3.3.1.1. Оценка площади интерстициальной соединительной ткани 117
3.3.1.2. Количественная характеристика клеток Лейдига 121
3.3.1.3. Содержание лютеинизирующего гормона гипофиза и тестостерона в сыворотке крови экспериентальных животных 131
3.4. Результаты статистического анализа 132
3.4.1. Корреляционный анализ 133
3.4.2. Метод ранжирования 138
Глава 4. Обсуждение полученных результатов 142
Выводы 168
Список литературы 170
Приложение
- Становление генеративной функции мужских половых желез в антенатальном и постнатальном периодах
- Моделирование D (+) — галактозаминового поражения печени у экспериментальных животных
- Характеристика весовых параметров мужской половой железы экспериментальных животных
- Количественная характеристика клеток Лейдига
Введение к работе
Актуальность проблемы. Сложившаяся демографическая ситуация в России в настоящее время (низкий уровень рождаемости и высокая смертность) остается крайне неблагоприятной, поэтому сохранение и восстановление репродуктивного здоровья в современном мире является важнейшей медицинской и государственной задачей. В целом по стране превышение числа умерших над числом родившихся составило 1,1 раза по состоянию на 1 октября 2009 г. (Демографический ежегодник России, 2009). Согласно данным литературы, репродуктивные проблемы в браке, включающие бесплодие, невынашивание беременности и перинатальную патологию, являются важной составляющей демографических процессов, поэтому попытки их разрешения имеют не только медицинскую, но и социальную значимость. Во всем мире одна из 5-7 супружеских пар страдает бесплодием и в половине случаев причиной этого является мужской фактор (База данных «Здоровье для всех», 2003). В последние годы отмечается рост числа бесплодных браков, увеличение количества семейных пар, у которых происходило невынашивание беременности, а число врожденных аномалий, не имеет тенденции к уменьшению (Артифексова А.А., 1999). Частота бесплодных браков в России в настоящее время колеблется от 8 до 17% (Кулаков В.И., Прилепская В.Н., 2002; Останин А.А. и др., 2006). При этом, у 20-25% этих пар основной причиной бесплодия является «мужской фактор», который в сочетании с «женским фактором» дополнительно проявляет себя еще в 30 - 40% случаев (Crosignani P.G., Rubin B.L., 1998; Корякин М.В., Акопян АС, 2000).
Репродуктивное здоровье женщин выделяется своей особой значимостью, так как оно напрямую связано со здоровьем детей, а следовательно с будущим государства и нации. Данные литературы свидетельствуют о неуклонном снижении состояния здоровья женщин детородного возраста (Гимадеев М.М. и др., 1998). При этом в структуре заболеваний особое место занимает патология гепатобилиарной системы: хронические гепатиты, холециститы, холангиты, желчнокаменная болезнь, дискинезии желчевыводящих путей (Подымова С.Д., 1998; Шехтман М.М., 2000). Согласно данным литературы, у потомства от матерей с патологией гепатобилиарной системы нарушается структурно-функциональное становление различных систем жизнеобеспечения, в том числе нарушение становления репродуктивной системы. Это определило устойчивый интерес к проблемам репродуктивного здоровья мужчин, так как в литературных источниках все больше появляется сообщений о снижении количества и качества семенной жидкости у мужчин и росте случаев урогенитальной патологии (Swan S. et al., 2000; Thonneau P., 2003).
В связи с вышеизложенным, цель настоящего исследования выявление особенностей морфофункционального становления генеративной и эндокринной функции семенников потомства самок крыс с хроническим экспериментальным поражением печени различного генеза.
Цель исследования обусловила постановку следующих основных задач:
Определить особенности становления процесса сперматогенеза у потомства самок крыс с экспериментальным поражением печени различного генеза.
Изучить особенности структурно-функционального становления эндокринной функции семенников потомства самок крыс с хроническим экспериментальным поражением печени различного генеза.
Проанализировать двигательную активность эпидидимальных сперматозоидов у половозрелого потомства самок крыс с хроническим экспериментальным поражением печени различного генеза.
Провести сравнительный анализ особенностей морфофункционального становления мужской половой железы у потомства самок крыс с экспериментальным поражением печени, вызванным Е. Coli и D(+) - галактозамином.
Научная новизна
На адекватных экспериментальных моделях, воспроизводящих различные формы поражения печени у матери, впервые установлены общие особенности морфофункционального становления семенников у их потомства: угнетение генеративной функции и изменение эндокринной функции (увеличение секреторной активности клеток Лейдига у животных опытной группы 1 (Е. Coli) и снижение таковой у животных опытной группы 2 (D(+) - галактозамин)).
Впервые установлено, что хроническое поражение печени у самок крыс различного генеза обусловливает нарушение становления генеративной (достоверное снижение весовых параметров семенников, величины извитых семенных канальцев, снижение суммарного содержания сперматогенных клеток, снижение суммарного содержания сперматогоний, сперматоцитов I и II порядков, сперматид и сперматозоидов, уменьшение количества клеток Сертоли, увеличение числа семенных извитых канальцев со слущенным эпителием, суммарного содержания гигантских сперматогенных клеток, в том числе, с разрушенными ядрами, происходит угнетение двигательной активности сперматозоидов, их общее содержание в единице объема достоверно снижено) и эндокринной функций (статистически значимое увеличение площади интерстициальной ткани семенника, снижение содержания активных клеток Лейдига и увеличение неактивных типов данных клеток, уменьшение диаметра и площади ядер клеток Лейдига) семенников их потомства.
Новыми являются данные по сравнительному анализу морфофункциональных особенностей семенников потомства от самок крыс с экспериментальным поражением гепатобилиарной системы: у животных опытной группы 1 (Е. Coli) выявлены статистически значимые изменения генеративной и эндокринной функции семенников, а у животных опытной
группы 2 (D(+) - галактозамин) достоверно более выраженные нарушения генеративной функции семенников, в том числе двигательной активности эпидидимальных сперматозоидов.
Теоретическая и практическая значимость работы
Результаты проведенных исследований углубляют и расширяют представление о физиологических механизмах, лежащих в основе нарушения становления репродуктивного здоровья потомства от матерей с экспериментальным поражением печени.
Полученные результаты могут быть использованы для этиологически и патогенетически обоснованного планирования ведения беременности с целью обеспечения рождения здорового и морфофункционально зрелого потомства.
Экспериментальные данные, выявленные в ходе проведенного исследования, научно обосновывают целесообразность выделения потомства матерей с хронической патологией гепатобилиарной системы различной этиологии в группу риска в связи с возможным нарушением репродуктивного здоровья.
Результаты проведенного научного исследования используются в научно-исследовательской и учебной деятельности кафедры гистологии, эмбриологии и цитологии ГОУ ВПО «Челябинская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию» (в курсе «Органы репродукции», «Нарушения внутриутробного развития человека»), а также в учебном процессе биологического факультета Челябинского государственного университета (в курсе «Физиология человека и животных»).
Положения выносимые на защиту:
1. Экспериментальная патология матери в виде хронического
поражения гепатобилиарной системы является
существенным фактором риска, оказывающим
неблагоприятное влияние на антенатальное и постнатальное
становление генеративной функции семенников потомства.
2. Экспериментальная патология гепатобилиарной системы у
самок крыс негативно влияет на двигательную активность
мужских половых клеток
3. Хроническое экспериментальное поражение печени самок
крыс, моделируемое путем введения фильтрата E.Coli и D (+)
- галактозамина, обусловливает нарушение эндокринной
функции семенников потомства.
Апробация материалов работы
Материалы диссертации были обсуждены на IX Международном конгрессе морфологов «Медико-экологические проблемы возрастной морфологии» (Бухара, 2008); на II Международной научно-практической конференции «Адаптация биологических систем к естественным и экстремальным факторам среды» (Челябинск, 2008); на VI итоговой научно-практической конференции молодых ученых Челябинской государственной
медицинской академии (Челябинск, 2008); на Всероссийской научной конференции «Нейробиологические аспекты морфогенеза и регенерации» (Оренбург, 2008); на конференции, посвященной десятилетию биологического факультета Челябинского государственного университета (Челябинск, 2008), на VI Международной конференции «Актуальные проблемы биологии и ветеринарной медицины мелких домашних животных» (Троицк, 2009), на заседании Челябинского отделения Всероссийского общества анатомов, гистологов и эмбриологов (Челябинск, 2009). Публикации
По теме диссертации опубликовано 8 работ, в том числе 1 статья в издании, рекомендованном ВАК РФ.
Объем и структура диссертации
Основное содержание работы изложено на 208 страницах машинописного текста, содержит 31 таблицу, 40 рисунков, из которых 22 микрофотографии. Диссертация состоит из введения, обзора литературы (глава 1), описания материалов и методов исследования (глава 2), собственных результатов исследования (глава 3), обсуждения полученных результатов (глава 4), выводов и списка использованной литературы, включающего 348 источников, в том числе 227 работ зарубежных авторов, приложения.
Становление генеративной функции мужских половых желез в антенатальном и постнатальном периодах
Половая система реализует фундаментальную биологическую функцию сохранения и поддержания процесса жизни. Гаметогенез обеспечивает репродукцию целого - организма, а стероидогенез через влияние половых гормонов на процесс транскрипции генов участвует в клеточной репродукции частного - белковых веществ в этом организме. Репродукция является основным и самым сложным свойством жизни (Устинкина Т.И., 2007).
Сперматогенез - комплекс высоко упорядоченных процессов, которые включают в себя развитие сперматогенного эпителия, через серии ассоциаций зародышевых клеток (Clermont Y., 1972). Сперматогенез млекопитающих - комплекс многоступенчатых процессов, которые участвуют в формировании сперматогоний из стволовых клеток, возобновлении и дифференцировании сперматогоний в первичные сперматоциты; мейоз, с помощью которого диплоидные сперматоциты развиваются в гаплоидные сперматиды, и спермиогенез в котором круглые сперматиды созревают в сперматозоиды (De Kretser D.M., 1998; Baarends W.M., 1999; Zhao G.Q., 2002; Eddy E.M., 2002; Быков B.A., 2000; Останин A.A., 2006). Сперматогенез - хорошо скоординированная программа развития, в которой различные шаги определяются типом клетки, уровнем специфической индукции или репрессии выраженности определенных генов. Многие из генов выражены преимущественно или только в сперматогенных клетках и их регулирование может контролироваться на транскрипционном и посттранскрипционном уровне. Различные гормоны, сигнальные пути, факторы транскрипции, и взаимодействие с окружением играют критическую роль в регулировании различных стадий в этой программе дифференцировки (De Kretser D.M., 2000; Jegou В., 2000; Zhao G.Q., 2002; Eddy E.M., 2002). Процесс сперматогенеза у млекопитающих представляет собой длинную серию цитологических преобразований, совершающихся в клетках сперматогенного эпителия и приводящих к образованию уникальной клетки — сперматозоида, способного к автономному существованию и оплодотворению яйцеклетки. В результате сперматогенеза у самцов крыс формируется 10 зрелых сперматозоидов на грамм яичка в день (Wing T.Y., 1982; Russell L.D., 1990).
Для сперматогенеза характерна строгая временная и пространственная организация процесса. По точности во времени, с которой совершаются точные процессы дифференцировки в развивающихся половых клетках, сперматогенез сходен с эмбриональным развитием. Продолжительность сперматогенеза, как и продолжительность эмбрионального развития организма, является величиной, постоянной для данного вида животных, и не зависит от действия эндогенных и экзогенных факторов (Courot М., 1970; Clermont Y., 1972). Типы зародышевых клеток вовлеченных в этот процесс схожи у всех млекопитающих (Sharpe R.M., 1994; Franca L.R., 1999). Различия между видами существуют относительно числа зародышевых клеток, продолжительностью сперматогенеза и топографическим расположением сперматогенных стадий (Franca L.R., 2006). У человека 6 стадий с продолжительностью цикла сперматогенного эпителия 16 дней (Heller C.G., Clermont Y., 1963), продолжительность сперматогенеза составляет 74±4-5 дней (Heller C.G., Clermont Y., 1964), по другим данным, примерно 65 дней (Missell L.M., 2006), у крыс 14 стадий с продолжительностью цикла сперматогенного эпителия 12 дней, продолжительность сперматогенеза 48 дней (Clermont Y., 1950).
Сперматогенез по аналогии с оогенезом часто подразделяют на четыре периода (Соколов И.И., 1966): 1) период размножения половых клеток; 2) период роста, в течение которого размеры половых клеток заметно увеличиваются; 3) период созревания, включающий мейотические деления; 4) период спермиогенеза, когда происходит формирование сперматозоида из сперматиды. Однако, поскольку в ходе сперматогенеза рост половых клеток выражен слабо и не связан, как в оогенезе, с накоплением питательных веществ для будущего организма, правильнее 2-й и 3-й периоды объединить в один — период мейоза, тем более что в период роста основные события, совершающиеся в растущих сперматоцитах,— профаза мейоза, конъюгация хромосом и кроссинговер — направлены на подготовку мейотических делений.
Поэтому, некоторые исследователи, подразделяют сперматогенез на три этапа (Bloom W., Fawcett D.W., 1975; Roosen-Runge Е.С., 1977). Первый этап — сперматоцитогенез, когда происходит пролиферация сперматогоний с образованием ряда генераций, при этом каждая последующая генерация более дифференцирована, чем предыдущая. Деление сперматогоний последней генерации приводит к образованию сперматоцитов на стадии прелептотены. Сперматогоний возникают у эмбриона после образования семенника из недифференцированных половых клеток, называемых гоноцитами, стволовыми клетками или протогониями. Стволовые клетки располагаются в пристеночном слое семенных канальцев (Russell L.D., 1990; Ohta Н., 2000), или в особой зоне на слепом конце семенника и в большинстве случаев морфологически не отличаются от ранних сперматогоний. Стволовых клеток у самца крысы содержится приблизительно 418,5x10 клеток на семенник. Несмотря на сходство ранних сперматогоний со стволовыми клетками, на самом деле между ними существуют различия. В отличие от сперматогоний стволовые клетки лежат одиночно, не принимают участия в сперматогенном цикле и делятся нерегулярно с различными интервалами независимо от процесса сперматогенеза. Стволовые клетки переходят к клеточным делениям, которые не завершаются цитокинезом. В результате этого возникают синцитиальные скопления — клоны, в которых потомки одной клетки остаются соединенными при помощи межклеточных мостиков. Первые деления сперматогоний идут независимо от цикла сперматогенного эпителия, и лишь впоследствии деления становятся регулярными, соответствующими стадиям цикла (Hannah-Alava А., 1965). Для млекопитающих была разработана четкая терминология для типов дефинитивных сперматогоний на основании морфологических признаков ядер (Leblond СР., Clermont Y., 1952). Были выделены сперматогоний типа А, промежуточные и типа Б. Последние превращаются в сперматоциты.
Моделирование D (+) — галактозаминового поражения печени у экспериментальных животных
Одной из особенностей сперматогенеза, как процесса образования мужских половых клеток, является его волнообразное течение, а значит и волнообразное движение зародышевых клеток в продольном направлении по мере их созревания. Одновременно происходит движение зародышевых клеток, по мере их дифференцировки, от базальной мембраны к центру просвета канальца (Ухов Ю.И., Астраханцев А.Ф., 1983). В результате в сериях поперечных срезов канальцев выявляются последовательно различные стадии зародышевых клеток. При этом не все канальцы могут быть сопоставимы друг с другом, так как угол их сечения различен, вследствие этого для измерений пригодны лишь срезы с абсолютно круглыми очертаниями (строго поперечное сечение извитых семенных канальцев).
Измерение извитых семенных канальцев. Известно, что размеры извитых семенных канальцев увеличиваются по мере роста организма, а после полового созревания в течение длительного времени остаются в рамках постоянных величин. Изменение величины канальцев тесно связано с уменьшением числа внутриканальцевых клеток. Основными параметрами, определяющими величину канальцев, служат их средний диаметр и средняя площадь поперечного сечения. Диаметр извитых семенных канальцев мы определяли при помощи программно-аппаратного комплекса для анализа и обработки изображений в микроскопии, состоящей из тринокулярного микроскопа Motic ВА-400Т, цифровой цветной системы ввода изображений на базе цифровой камеры ProgRes СЗ, 1/1.8" высокого разрешения не менее 2080x1542 и программного обеспечения «ВидеоТест - Морфология 5.0». Диаметр оценивали как расстояние между двумя диаметрально противоположными точками, лежащими на границе между внутренней частью базальной мембраны и герминативными клетками. Производился подсчет 50 строго поперечных срезов извитых семенных канальцев при увеличении окуляра х10, объектива х10. Расчет вели на 1 срез извитого семенного канальца. Площадь канальцев определяли также на программно -аппаратном комплексе «ВидеоТест - Морфология 5.0», по формуле S = ж174, где тс = 3,14, d - диаметр извитого семенного канальца; единица измерения — мкм2.
Цитологический анализ зародышевых клеток. Прежде всего, нами производился подсчет суммарного количества сперматогенных клеток в извитых семенных канальцах. Оценке подлежали 30 строго поперечных срезов извитых семенных канальцев, в каждом из которых осуществлялся суммарный подсчет клеток сперматогенного эпителия. Согласно данным литературы (Ухов Ю.И., Астраханцев А.Ф., 1983; Иванова Л.А., Карташева А.Г., 1990), более чувствительным морфологическим критерием активности сперматогенеза является содержание сперматогонии в извитых семенных канальцах. Нами производился количественный анализ сперматогонии различных степеней зрелости (А, П, Б) (Бурнашева С. А., 1982): сперматогонии типа «А» (Ао - овальное ядро с диффузным, равномерно распределенным по ядру хроматином и одним или двумя четко очерченными ядрышками, Ai - А4 - сходны по строению со сперматогониями Ао, но хроматин в ядре более конденсирован и выявляется в виде небольшого участка в нуклеоплазме или у ядерной оболочки в сперматогониях типа А2, Аз - хроматин диффузный, но содержат несколько участков компактного хроматина в ядрах, А4 - ядра значительно мельче, чем в Аз - типе, хроматиновые гранулы более четкие), сперматогонии типа «П» (тип П -овальное ядро, зерен хроматина больше, чем в сперматогониях А4, ядрышко слезовидной формы, касающееся своим тонким концом ядерной оболочки), сперматогонии типа «Б» (тип Б - конденсация хроматина в ядрах выражена еще более резко, хроматиновые гранулы образуют неровную «корочку» у ядерной мембраны, ядрышко различной формы, не связано с ядерной мембраной). Также нами производился подсчет сперматоцитов I и II порядка, сперматид и сперматозоидов в 30-ти взятых наугад строго поперечных срезах извитых семенных канальцах. Цитологический анализ клеток сперматогенного эпителия производился при увеличении окуляра х10, объектива х40.
Одним из показателей чувствительности сперматогенеза к действию различных неблагоприятных факторов является количество канальцев со слущенным эпителием (Иванова Л.А., Карташев А.Г., 1990; Карташев А.Г., Баскурян А.К., Иванова Л.А., 1994; Гольдберг Е.Г., Боровская Т.Г. и др., 1995). Нами производился анализ 100 поперечных срезов извитых семенных канальцев при увеличении окуляра х10, объектива х40, среди которых выявлялись канальцы с клетками, потерявшими морфофункциональную связь с клетками своего клона и «слущенными» в просвет канальца.
О сохранности процессов сперматогенеза косвенно можно судить по количеству в семенных извитых канальцах гигантских сперматогенных клеток, в том числе, сперматогенных клеток с разрушенными ядрами (дегенеративные формы клеток сперматогенного эпителия) (Боровская Т.Г., Гольдберг Е.Д. и др., 2000). Нами просматривались 30 поперечных срезов семенных извитых канальцев при увеличении окуляра х10, объектива х40, в которых определялись гигантские сперматогенные одно- или многоядерные клетки, чаще всего, утратившие связь с клетками своего клона, с дегенеративными изменениями (фрагментированные и пикнотизированные ядра). Производился подсчет суммарного количества таких клеток и, отдельно, клеток с разрушенными ядрами.
Для выявления незаметных невооруженному глазу изменений предложен ряд индексов. Одним из таких важнейших показателей состояния сперматогенного пласта является индекс сперматогенеза (Саноцкий И.В., Фоменко В.Н., 1979; Черток В.М., Ботвич Т.А., 1998). Fogg & Cowing (1952) предложили разделить сперматогенный эпителий на 4 слоя: 1) слой сперматогоний; 2) слой сперматоцитов 1 и II порядка; 3) слой сперматид; 4) слой сперматозоидов. Исходя из этого, нами просматривались 100 канальцев, в каждом из которых производился подсчет количества слоев сперматогенного эпителия. Индекс сперматогенеза высчитывали по формуле I = Е а/А, где I - индекс сперматогенеза, а - количество слоев сперматогенного эпителия, обнаруженных в каждом канальце; А — количество подсчитанных канальцев (Саноцкий И.В., Фоменко В.Н., 1979).
Характеристика весовых параметров мужской половой железы экспериментальных животных
Как видно из таблицы 2, у крысят первой подопытной группы до периода полового созревания весовой индекс семенников снижен по сравнению с контролем. В тоже время, у крысят обеих подопытных групп весовой индекс семенников несколько превышает таковой в контроле после периода полового созревания. При этом у крысят второй опытной группы весовой индекс имеет тенденцию к повышению, по сравнению с контролем, начиная с периода полового созревания.
Таким образом, результаты данной серии исследования позволили выявить определенную закономерность. На большинстве сроков исследования у потомства самок крыс с экспериментальным хроническим поражением печени различного генеза имеет место снижение абсолютного веса семенников. При этом, на ранних стадиях постнатального периода весовой индекс мужской половой железы у подопытных крысят снижен по сравнению с контролем, а на поздних стадиях, напротив, имеет место тенденция к увеличению исследуемого показателя.
О генеративной функции семенников экспериментальных животных мы судили на основании показателей диаметра и площади поперечного сечения извитых семенных канальцев, суммарного содержания сперматогенных клеток, индекса сперматогенеза, среднего числа сперматогонии, спермацитограммы с использованием клеточного индекса Сертоли, цитологического профиля сперматогенеза и количества канальцев со слущенным эпителием.
О величине семенных извитых канальцев мы судили по диаметру и площади поперечного среза семенных извитых канальцев. Установлено (табл. 3), что у интактных крысят после рождения отмечается постепенное увеличение диаметра семенных извитых канальцев, достигающего максимального уровня к периоду половой зрелости. Так, если у интактных новорожденных крысят диаметр семенных извитых канальцев равен 51,78±0,897 мкм, то у 60-ти дневных крысят данной группы этот показатель составил уже 234,47±5,527 мкм. Аналогичная закономерность выявлена и у крысят обеих опытных групп. Так, если у подопытных крысят 1-ой опытной группы (Е.СоН) диаметр семенных извитых канальцев составил 49,00±0,689 мкм, то в период половой зрелости данный показатель оказался равен 198,78±4,699мкм. / показатель менялся с 50,12±0,818 мкм в период новорожденности до 189,13±5,196 мкм на 60-й день постнатального периода.
Обращает на себя внимание, что на всех сроках исследования выявлена тенденция к снижению исследуемого показателя у подопытных крысят по сравнению с контролем. При этом наиболее выраженные отличия диаметра извитых семенных канальцев у подопытных крысят по сравнению с контролем имеют место в период половой зрелости.
Анализ величины площади поперечного среза семенных извитых канальцев экспериментальных животных позволил выявить следующую закономерность. У интактных крысят после рождения отмечается постепенное увеличение исследуемого показателя, достигающего наибольшего значения в период половой зрелости (рис. 7).
Так, если у новорожденных крысят интактной группы площадь поперечного среза семенных извитых канальцев составила 2110,99±64,558 мкм , то у 60-ти дневных интактных крысят данный показатель достигает величины 43574±1592,515 мкм . Аналогичная закономерность выявлена и у крысят обеих подопытных групп. Так, если площадь семенных извитых канальцев у подопытных крысят в период новорожденности составила соответственно 1878,96±47,696 и 1930,63±24,451 мкм , то в период половой зрелости исследуемый показатель достигает своего максимума 31298,94±584,657 у крысят опытной группы 1 и 28387,04±1005,714 мкм2 у крысят опытной группы 2.
Как видно из рисунка 7, на всех сроках исследования площадь поперечного среза семенных извитых канальцев у крысят обеих подопытных групп снижена по сравнению с контролем, причем наиболее выраженное снижение исследуемого показателя у подопытных крысят обеих подопытных групп имеет место в период половой зрелости.
Таким образом, результаты данной серии исследования позволяют констатировать, что у потомства самок крыс с экспериментальным поражением печени имеет место снижение, по сравнению с контролем, на большинстве сроках исследования как диаметра канальцев, так и площади поперечного среза семенных извитых канальцев.
Сперматогенный пласт (рис. 8, 9) экспериментальных животных оценивали, прежде всего, с учетом суммарного содержания сперматогенных клеток, в том числе сперматогоний различной степени зрелости, сперматоцитов I и II порядка, сперматид, сперматозоидов, а также индекса сперматогенеза. Кроме того, производился подсчет числа семенных извитых канальцев со слущенным эпителием.
Анализ суммарного содержания сперматогенных клеток в семенных извитых канальцах позволил установить, что в процессе постнатального развития у экспериментальных животных в извитых семенных канальцах наблюдается постепенное увеличение содержания сперматогенных клеток, достигающего максимального значения к периоду половой зрелости (табл. 4).
Количественная характеристика клеток Лейдига
Для оценки интерстициальных клеток семенников нами производился подсчет числа эндокриноцитов из расчета на 1 поперечный срез семенного извитого канальца, а также оценивалось содержание различных морфофункциональных их типов (активных и неактивных) (рис. 36). Анализ суммарного содержания клеток Лейдига позволил выявить следующую закономерность (табл. 25).
Как видно из таблицы 25, у интактных крысят наибольший уровень содержания клеток Лейдига наблюдается в период новорожденности и составляет 48,82± 1,766. К подсосному периоду исследуемый показатель снижается до 27,94±0,825 и в дальнейшем до периода половой зрелости изменяется незначительно. У крысят опытной группы 1 (Е. Coli) также наибольшее содержание клеток Лейдига выявлено в период новорожденности (56,47±2,17). После чего отмечается постепенное уменьшение исследуемого показателя, достигающего наименьшего значения в период половой зрелости (27,29+0,469). У крысят опытной группы 2 (D - галактозамин) наибольший уровень содержания клеток Лейдига, также выявлен на 1-ый день постнатальной жизни (46,29± 1,707). Затем исследуемый показатель постепенно снижается и достигает наименьшего уровня к периоду полового созревания (25,23±0,334), в дальнейшем исследуемый показатель меняется незначительно. Как видно из рис. 37, у крысят опытной группы 1 на ранних стадиях постнатального онтогенеза суммарное содержание клеток Лейдига превышает таковое в контроле, а на поздних стадиях, напротив, снижено по сравнению с контролем. В то же время, у животных опытной группы 2 на всех сроках исследования суммарное содержание клеток Лейдига снижено по сравнению с контролем, исключение составили 15-ти дневные крысята, у которых исследуемый показатель заметно превысил таковой в контроле. Наиболее интересным показателем функционального состояния клеток Лейдига является содержание среди них активных (В, С, D) и неактивных типов (А, Е) (Портной А.С., 1970). Анализ субпопуляционного состава клеток Лейдига по уровню активности у экспериментальных животных позволил выявить следующую закономерность (табл. 26). У интактных крысят после рождения в период новорожденности количество неактивных клеток Лейдига достигает максимального значения 26,03±1,708 (53,1+1,926%), после чего, содержание неактивных клеток Лейдига постепенно снижается и достигает минимальных значений в период половой зрелости 8,37±0,304 (28,74±0,853%). Аналогичная закономерность выявлена и у подопытных крысят обеих опытных групп. Так, если у крысят опытной группы 1 на первый день постнатальной жизни содержание неактивных (А, Е) клеток Лейдига составило 25,57±1,085 (44,64±2,059%), то в период половой зрелости содержание неактивных клеток Лейдига 9,62±0,279 (35,3±1,137%). У крысят опытной группы 2 также наибольшее содержание неактивных клеток Лейдига приходится на период новорожденности 20,04±0,749 (43,63±2,511%), затем исследуемый показатель постепенно снижается и достигает минимального значения 8,81±0,146 (34,71±1,023%) в период половой зрелости. Обращает на себя внимание, что в период новорожденности, содержание неактивных клеток Лейдига у подопытных крысят обеих опытных групп, снижено по сравнению с контролем (табл. 26). В дальнейшем на большинстве сроков исследования содержание неактивных клеток Лейдига у подопытных крысят превышает таковой в контроле. Исключение составили 45-ти дневные крысята, у которых исследуемый показатель оказался несколько сниженным по сравнению с контролем. Анализ содержания активных клеток эндокриноцитов позволил выявить следующую закономерность (табл. 27). У интактных крысят наибольшее содержание активных клеток Лейдига приходится на период новорожденности 22,79±0,669 (46,9± 1,926%), затем исследуемый показатель снижается до периода половой зрелости, а затем увеличивается до максимального значения в период половой зрелости 20,75±0,557 (71,26±0,853%), не достигая, при этом, уровня исследуемого показателя в период новорожденности 22,79±0,669. У крысят опытной группы 1 наибольший уровень содержания активных клеток Лейдига приходится на период новорожденности 30,9±0,898 (55,37±1,865%). После чего, исследуемый показатель резко снижается к подсосному периоду 13,84±0,184 (38,02±0,270%). К периоду полового созревания содержание активных клеток Лейдига несколько увеличивается и стабилизируется (табл. 27). У крысят опытной группы 2 также наибольшее содержание активных клеток Лейдига (В, С, D) выявлено в период новорожденности 26,25± 1,033 (56,04±2,092%). К началу периода полового созревания количество активных клеток Лейдига резко снижается до уровня 14,95±0,15 (59,17±0,435%). Затем к периоду половой зрелости исследуемый показатель несколько возрастает, но остается на уровне более низком, чем в период новорожденности 16,55±0,596 (65,29±1,023%). Как видно из таблицы 27, у подопытных крысят обеих опытных групп в период новорожденности содержание активных клеток Лейдига превышает таковое в контроле. В дальнейшем на большинстве сроков исследования содержание активных клеток Лейдига у подопытных крысят обеих опытных групп снижено по сравнению с контролем. Увеличение числа неактивных клеток Лейдига на большинстве сроков исследования у подопытных крысят обеих опытных групп находит свое отражение и в уменьшении «индекса активности» интерстициальных эндокриноцитов, который отражает отношение числа активных клеток Лейдига к неактивным (табл. 28). Как видно из таблицы 28, у интактных крысят в период новорожденности индекс активности клеток Лейдига составляет 0,9±0,068, к 15-му дню постнатального развития данный показатель увеличивается и стабилизируется. Затем имеет место постепенное увеличение индекса активности эндокриноцитов, достигающего максимального значения в период половой зрелости (2,5±0Д08).
