Содержание к диссертации
Введение
ГЛАВА 1. CLASS Обзор литератур CLASS ы.
1.1. Особенности структурно-функциональной организации эритроцитов 11
1.2. Роль печени в поддержании постоянства внутренней среды организма 15
1.3. Экспериментальное поражение печени четыреххлористым углеродом 18
1 А. Роль перекисного окисления липидов и системы антиоксидантной защиты в патологии печени и эритроцитов 22
1.5. Тканевая гипоксия - основное звено токсического гепатита 30
1.6. Коррекция функций печени гепатопротекторами 34
1.7. Направленный транспорт биологических веществ в эритроцитах 43
1.8. Функциональное состояние эритроцитов при патологии печени 48
ГЛАВА 2. Материалы и методы исследований 56
ГЛАВА 3. CLASS Результаты и их обсуждени CLASS е.
3.1. Анализ функционального состояния печени и эритроцитов при хроническом токсическом гепатите.
3.1.1. Исследование активности трансаминаз, ЛДГ, щелочной фосфатазы, содержания общего билирубина и глюкозы в сыворотке крови при хронической интоксикации СС14 65
3.1.2. Исследование показателей системы ПОЛ-антиоксидант в ткани печени при хронической интоксикации CCU 70
3.1.3. Исследование показателей системы ПОЛ-антиоксидант в эритроцитах при хронической интоксикации СС14 73
3.2. Анализ функционального состояния печени и эритроцитов при парентеральном введении аскорбиновой кислоты.
3.2.1. Изучение активности трансаминаз, ЛДГ, щелочной фосфатази, содержания общего билирубина и глюкозы в сыворотке крови при парентеральном введении аскорбиновой кислоты 77
3.2.2. Изучение показателей системы ПОЛ- антиоксидант в гомогенате печени при введении аскорбиновой кислоты 88
3.2.3. Изучение показателей системы ПОЛ — антиоксидант эритроцитов при введении аскорбиновой кислоты 94
3.3. Анализ корреляционных связей между показателями ПОЛ-антиоксидантная система в ткани печени и в эритроцитах.. 100
Заключение 102
Выводы 123
Список литературы 125
- Роль печени в поддержании постоянства внутренней среды организма
- Функциональное состояние эритроцитов при патологии печени
- Исследование активности трансаминаз, ЛДГ, щелочной фосфатазы, содержания общего билирубина и глюкозы в сыворотке крови при хронической интоксикации СС14
- Изучение активности трансаминаз, ЛДГ, щелочной фосфатази, содержания общего билирубина и глюкозы в сыворотке крови при парентеральном введении аскорбиновой кислоты
Введение к работе
Актуальность проблемы:
Проблема поражений печени гепатотоксическими веществами остается по-прежнему весьма актуальной (Батурина Н.О., 1995; Шалхаров С, 1992). Это, очевидно, обусловлено анатомо-физиологическими особенностями этого органа, чутко реагирующего на экзо - и эндогенные интоксикации, бурным развитием химической промышленности и широким использованием ее продукции в народном хозяйстве, существенными отрицательными сдвигами в экологии и побочным действием применяемых фармпрепаратов. В увеличении частоты токсических поражений печени также весьма важная роль принадлежит алкоголизму, нарко - и токсикомании (Абдуллаев Н.Х.,1989).
В качестве экспериментальных моделей токсических гепатитов наиболее часто используют поражение печени тетрахлорметаном (ТХМ). Несмотря на то3 что влияние CCU на организм изучено достаточно подробно, дальнейшее углубленное исследование данной формы химической патологии и поиск адекватных методов их фармакологической коррекции представляется весьма актуальным. Это связано с тем, что, с одной стороны, экспериментальные модели с использованием тетрахлорметана, широко используются в научных исследованиях не только для решения вопросов гепатологии, но и ряда общебиологических проблем (Блюгер А.Ф., Карташова О.Я., 1983; Логинов А.С., Аруин Л.И., 1985; Одынец А.Г. и др., 1988; Скакун Н.П. и др., 1989). С другой стороны, СС14 продолжает применяться в различных областях народного хозяйства и быту, поэтому вероятность непосредственного контакта человека с этим ядом достаточно высока (Дубовая Т.К. и др., 1996; Губский Ю.Й., 1989).
Поступление в организм многих токсических веществ сопровождается циркуляцией ядов и их метаболитов в крови, вследствие чего клетки крови, особенно эритроциты, могут подвергаться непосредственному токсическому воздействию (Соколов В.В. и др., 1981). Кроме того, продукты некротизиро-ванной ткани, образующиеся в печени при ее патологии, могут индуцировать
7 нарушение целостности мембран и метаболизма эритроцитов (Блюгер
А.Ф., Майоре А.Я., 1982). Закономерности патологических изменений мембран эритроцитов имеют много сходного с механизмами повреждения гепа-тоцитов (Голиков С.Н., Саноцкий И.В., 1986; Рязанцева Н.В., Новицкий В.В., 2004). Этим определяется во многом однотипная реакция данных клеток на токсические воздействия (Матюшичев В.Б. и др., 1995), что позволяет использовать эритроциты как тест- объект для оценки тяжести патологических процессов в печени.
В экспериментальных и клинических исследованиях продемонстрировано, что ведущими структурно- метаболическими нарушениями, возникающими в печени при поражении четыреххлористым углеродом (ЧХУ), являются тканевая гипоксия и, сопряженная с ней, интенсификация перекисного окисления липидов (ПОЛ) (Блюгер А.Ф., Майоре А.Я., 1978; Алматов К.Т. и др., 1986; Абдуллаев Н.Х., 1989; Элерте Д.Л. и др., 1986). Известно, что тканевая гипоксия ведет к дисфункции жизненно важных органов, моно- и полиорганной недостаточности и к смерти организма (Симоненков А.П. и др., 2004).
Поэтому для сохранения структурной целостности и функциональной активности печени при ее токсическом поражении целесообразно применение антиоксидантов - препаратов, нормализующих энергетику тканей и восстанавливающих баланс между про - и антиоксидантними системами (Румянцева С.А., 2002).
Наиболее эффективным водорастворимым биоантиоксидантом является аскорбиновая кислота (АК). Она способна как непосредственно взаимодействовать с активными формами кислорода и ингибировать ПОЛ, так и участвовать в восстановлении других низкомолекулярных антиоксидантов (Кения М.В. и др., 1993). Но в высоких дозах аскорбиновая кислота способна оказывать прооксидантный эффект (Громовая В.Ф. и др., 1996; Aw Т., 1994). Снизить концентрации препарата и одновременно повысить его терапевтическую эффективность позволит метод направленного транспорта аскорбино-
8 вой кислоты с использованием эритроцитарных контейнеров (Генинг
Т.П., 1996).
Целью настоящего исследования явилось изучение функционального состояния эритроцитов при хроническом токсическом поражении печени.
В соответствии с целью работы были поставлены следующие задачи:
Изучить активность процессов ПОЛ и ферментативного звена антиоксидантной защиты (катал азы, глутатионредуктазы) в ткани печени и эритроцитах на фоне хронической интоксикации ССЦ.
Исследовать функциональное состояние печени интактных животных при различных способах введения высоких доз аскорбиновой кислоты.
Оценить интенсивность процессов ПОЛ и активность антиок-сидантных ферментов эритроцитов интактных животных при введении высоких доз аскорбиновой кислоты.
Изучить влияние высоких доз аскорбиновой кислоты на ферментативную активность сыворотки крови, а также уровень общего билирубина и глюкозы в крови животных с хроническим токсическим поражением печени.
Оценить влияние высоких доз аскорбиновой кислоты на активность ПОЛ в ткани печени и эритроцитах в условиях хронической интоксикации ССЦ.
Изучить активность ферментативного звена антиоксидантной защиты в ткани печени и эритроцитах на фоне коррекции хронического токсического гепатита аскорбиновой кислоты.
Провести корреляционный анализ между показателями ПОЛ -антиоксидантная система эритроцитов и ткани печени.
Научная новизна :
В работе впервые выполнено комплексное исследование показателей системы ПОЛ - антиоксидант в эритроцитах и печени при хроническом токсическом гепатите, вызванном длительным введением четыреххлористого
9
углерода. Обнаружена корреляционная связь между
содержанием МДА, активностью ферментов - антиоксидантов в эритроцитах и ткани печени при хронической интоксикации CCU и его коррекции аскорбиновой кислотой. Выполнено исследование системы ПОЛ - антиоксидант гепатоцитов и эритроцитов, а также показателей сыворотки крови при парентеральном введении аскорбиновой кислоты. Показана возможность направленного транспорта аскорбиновой кислоты в печень с применением носителей из аутологичных эритроцитов. Выявлено, что эффективность использования аскорбиновой кислоты для коррекции функций печени в условиях хронической интоксикации носит выраженный дозозависимый характер.
Теоретическая и практическая значимость:
Результаты исследования могут использоваться при создании тест-систем для наиболее полной и адекватной оценки функционального состояния печени по показателям периферической крови. Полученные данные могут быть использованы для интерпретации механизма действия СС14 на эритроциты, а также для оценки роли последних в развитии тканевой гипоксии печени. Результаты проведенных исследований позволяют утверждать, что конечный эффект от участия аскорбиновой кислоты в процессах ПОЛ определяется ее дозой. Выявлена целесообразность применения 25 мг/кг АК в комплексной терапии хронических токсических гепатитов. Полученные данные являются экспериментальным обоснованием для использования направленного транспорта аскорбиновой кислоты в качестве гепато протектора в лечении больных с хроническими поражениями печени токсического генеза. Результаты исследования могут быть применены в гастроэнтерологической клинике при интерпретации результатов лабораторных исследований в условиях экзогенной интоксикации различного генеза.
Положения, выносимые на защиту: 1. Хроническая интоксикация ССІ4 сопровождается усилением ПОЛ и разнонаправленными изменениями активности ферментов антиоксидантной защиты в эритроцитах и ткани печени.
2. Изменения показателей системы ПОЛ - антиоксидант эритроцитов при
ССЦ-интоксикации и его коррекции аскорбиновой кислотой коррелируют с таковыми в ткани печени.
3. Введение аскорбиновой кислоты на фоне хронического токсического по
ражения печени как внутривенно, так и направленным транспортом, ока
зывает гепатопротекторный эффект, который носит выраженный дозоза-
висимый характер.
4. При введении аскорбиновой кислоты в дозе 25 мг/кг внутривенно и с ис
пользованием эритроцитарных носителей наблюдается нормализация не
которых показателей эритроцитов.
Апробация работы:
Основные положения диссертации были доложены на региональной научно-практической конференции молодых ученых «Актуальные проблемы современного здравоохранения и экологии» (Ульяновск, 2003), научной конференции «Актуальные проблемы физиологии человека и животных» (Ульяновск, 2004), пятой международной многопрофильной конференции молодых ученых и студентов «Актуальные проблемы современной науки» (Самара, 2004).
Публикации:
По материалам диссертации опубликовано 8 научных работ.
Объем и структура диссертации:
Работа изложена на 168 страницах и состоит из введения, обзора литературы, главы «Материалы и методы исследования», главы «Результаты и их обсуждение», заключения, выводов и списка литературы, включающего 414 источников, в том числе 287 отечественных и 127 иностранных. Диссертация иллюстрирована 16 таблицами и 17 рисунками.
Роль печени в поддержании постоянства внутренней среды организма
В поддержании гомеостаза печень играет основную роль. Главенствующую позицию печень занимает в обмене аминокислот. Аминокислоты утилизируются для синтеза печеночных внутриклеточных белков, белков плазмы и тких соединений, как глутатион, глутамин. Большая часть аминокислот, поступающих в печень через воротную вену, расщепляется до мочевины. Образование мочевины обеспечивает выведение из организма аммиака, токсичного продукта белкового обмена. Печеночный катаболизм включает в себя две основные реакции: трансаминирование, роль катализатора которой выполняют ами-нотрансферазы, и окислительное дезаминирование, которое катализируется ок-сидазой L-аминокислот. Печень синтезирует не только необходимые ей белки, но и белки, необходимые для других органов. Из последних наиболее важен альбумин, который играет значительную роль в поддержании онкотического давления крови. К другим белкам, продуцируемым печенью, относятся факторы свертывания крови: фибриноген, протромбин, ингибиторы коагуляции и фибринолиза. Функции печени заключаются в поддержании уровня глюкозы в сыворотке путем гликогенеза, гликогенолиза, гликолиза, глюконеогенеза. Печень играет важную роль в метаболизме многих экзогенных препаратов (ксенобиотиков) и эндогенных веществ, в частности, гормонов. Следует отметить, что печень играет основную роль в регулировании уровня липопротеидов, осуществляемую путем синтеза и расщепления. Она служит основным местом синтеза холестерина и желчных кислот. Непосредственно связан с функцией печени обмен многих витаминов, в ней происходит их депонирование, частично разрушение. Не вызывает сомнения и участие печени в энергообмене и теплопродукции (Подымова С.Д., 1998; Скулачев В.П., 1989; Хазанов А.И., 1988, 1998; Подольски Д.К., Иссельбахер К.Дж., 1996; Ивашкин В.Т., 1998).
Основу структуры печени составляет долька, которая формируется из клеток, в первую очередь, гепатоцитов. Центр печеночной дольки - печеночная вена; радиально от нее располагаются гепатоциты, образуя балки. На периферии дольки, примыкая к ней, находится портальное поле с разветвлениями воротной вены, печеночной артерией и мельчайшим желчным протоком. В гепа-тоците различают васкулярныи полюс, в котором при помощи микроворсинок осуществляется эндоцитоз и экзоцитоз, и билиарный полюс, где при помощи микроворсинок происходит выделение веществ из клетки. О функции печени можно судить, в частности, по определению активности ферментов и их изо-форм в сыворотке крови (Федянин Ю.П., 1998).
Ферменты обнаруживаются в различных органоидах и отделах клеток. Большинство ферментов локализуется преимущественно в определенных отделах гепатоцита (Хазанов А.И., 1988).
Митохондрии содержат, в основном, ферменты энергетического обмена (ферменты окислительного фосфолирирования, цикла Кребса, АТФ-азу и др.). С гранулярной эндоплазматической сетью связаны ферменты белкового синтеза, с гладкой ее частью — ферменты углеводного, липидного обмена, большинства реакций детоксикации, с лизосомами - основные гидролазы (Хазанов А.И., 1988).
В зависимости от характера повреждающего агента в той или иной степени могут поражаться различные структуры гепатоцита, и в кровь, в первую очередь, будут выходить ферменты, локализованные в наиболее пострадавшей части клетки (Карташова О.Я., 1975; Горенков Р.В. и соавт., 1994). Распределение ферментов в различных отделах печени неодинаково, так, при преимущественном поражении центральных отделов дольки в сыворотке крови нарастает активность глутаматдегидрогеназы, при преимущественно поражении портальных трактов и прилегающих отделов печеночной дольки, в первую очередь, повышается активность трансаминаз, АлАТ и АсАТ, содержащихся в цитоплазме гепатоцита (Хазанов А.И., 1988, 1996). Нормальные уровни ферментов в плазме отражают соотношение между биосинтезом и высвобождением ферментов, а также их клиренсом из кровотока. Повышение скорости их обновления, повреждение клеток или индуцирование ферментов обычно приводят к повышению содержания ферментов в плазме крови. Ферменты можно использовать в качестве маркера, чтобы обнаружить и локализовать повреждение клеток. Содержание ферментов в плазме крови зависит от следующих факторов: 1) скорости высвобождения из клеток, которая в свою очередь определяется скоростью по 18 вреждения клеток; 2) степени повреждения клетки или 3) уровня пролиферации, или 4) индукции биосинтеза фермента. Последним двум факторам противостоит такой, как скорость клиренса фермента из плазмы крови (Зилва Дж.Ф., ПэннеллП.Р., 1988).
Таким образом, оценка состояния печени с использованием биохимического анализа крови и ткани органа является простым и информативным методом, позволяющим получить общее представление о локализации повреждения в печени, степени его выраженности и проследить динамику патологического процесса на фоне коррекции.
Функциональное состояние эритроцитов при патологии печени
Различные патологические процессы, в основе которых лежат аутоимун-ные расстройства, интоксикация, гипоксия и нарушения клеточного метаболизма, отражаются на функциональных и морфологических свойствах эритроцитов (Лисовский В.А. с соавт., 1986; Якубова P.P., Мурин А.В., 1990).
При хронических заболеваниях печени развиваются биохимические изменения в крови, в частности, в красных форменных элементах.
Блюгер А.Ф. с соавт. (1984) наблюдал повышение активности ключевого фермента глюкозомонофосфатного пути метаболизма глюкозы - Г-6-ФДГ в эритроцитах больных жировым гепатозом и циррозом печени. При этом авторы отмечают, что имеется определенная взаимосвязь между содержанием данного энзима в эритроцитах и патологией печени.
При острых и хронических гепатитах и циррозах в эритроцитах имеет место повышение активности некоторых ферментов: аденозиндезаминазы, глюко-зо-б-фосфатдегидрогеназы, ЛДГ (Броновец И.Н., Бестужева СВ., 1978; Козловский И.В., Окороков А.Н., 1982; Окороков А.И., 1988; Шкурова О.С., 1981).
Увеличение активности ЛДГ сопровождается изменением ее изофермент-ного спектра, что проявляется преобладанием 4 и 5 фракций этого фермента (Макаренко Е.В., 1987). Возрастание активности аденозиндезаминазы при хронических заболеваниях печени происходит одновременно и в сыворотке крови и в эритроцитах. Так как активность данного фермента в эритроцитах выше, чем в сыворотке крови, то предполагается, что одним из факторов, определяющим увеличение активности аденозиндезаминазы в сыворотке крови является поступление этого фермента из эритроцитов вследствие повышения проницаемости их мембран (Шкурова О.С, 1981).
Согласно данным, полученным Колобаевым В.И. и Мартыновым В.А. (1979, 1982), для эритроцитов больных гепатитом характерно снижение активности ЛДГ и Г-6-ФДГ.
При хроническом персистирующем гепатите и циррозе печени снижается активность Na, К-АТФаз, Са-АТФаз и НСОЗ-АТФаз, что обусловлено нарушением транспортной функции мембран эритроцитов (Макаренко Е.В., Козловский И.В., 1987). Это в свою очередь приводит к нарушению ионного состава эритроцитов.
При хронических заболеваниях печени изменяется электролитный состав эритроцитов. Имеет место снижение концентрации калия и железа, при одновременном повышении содержания натрия. Существенным изменениям при хронических заболеваниях печени подвергается содержание в эритроцитах микроэлементов. При этом отмечено увеличение концентрации алюминия, кремния и меди (Мишунина Н.А., 1985; Пишак В.П., 1970). При циррозах печени имеет место тенденция к снижению в эритроцитах содержания цинка (Кар-линскийВ.М., 1971).
При хронических формах патологии печени в эритроцитах отмечается снижение интенсивности биосинтеза порфиринов, что наиболее выражено при активном хроническом гепатите (Писанец М.П., Алагезян Д.С., 1987).
При хроническом персистирующем гепатите происходит изменение интенсивности пентозофосфатного пути обмена углеводов в эритроцитах, при котором повышенный синтез пентоз протекает без усиления потребления глюко 50 зы эритроцитами из инкубационной среды. У крыс с токсическим поражением печени найдено синхронное повышение потребления глюкозы и синтеза пентоз в эритроцитах (Чиркин А.А. и др.; 1983).
В красных форменных элементах больных циррозами печени увеличивается содержание фетального гемоглобина (Мишунина Н.А., 1985).
Весьма существенным метаболическим изменением, возникающим в эритроцитах при хронических заболеваниях печени и экспериментальном поражении органа ССІ4, является интенсификация в них ПОЛ (Хаснулин В.И., 1977; Брейдо В.В., 1991; Гичев Ю.П., Хаснулин В.И., 1986). О его усилении свидетельствует увеличение в красных форменных элементах концентрации ДК (Гичев Ю.П., Хаснулин В.И., 1986; Козловский И.В., Окороков А.Н., 1982; Окороков А.Н., 1988) или МДА (Узбекова Д.Г. и др., 1993; Рябиков А.Н. и др., 1991; Окороков А.Н., 1988; Блюгер А.Ф. с соавт., 1984). При этом показатели ПОЛ эритроцитов повышаются тем больше, чем больше распространены структурные и функциональные повреждения печени. По-видимому, активация процессов ПОЛ мембран эритроцитов на фоне снижения антиоксидантнои активности липидов может играть определенную патогенетическую роль при развитии хронических поражений печени (Гичев Ю.П., Хаснулин В.И., 1986).
Одновременно с усилением процессов ПОЛ происходит изменение деятельности системы антиоксидантнои защиты эритроцитов. При субкомпенси-рованном и декомпенсированном циррозе печени в эритроцитах снижается содержание восстановленного глутатиона (Сондоре В.Ю., 1984; Блюгер А.Ф. и др., 1984), уменьшается активность глутатионредиктазы (Сондоре В.Ю., 1984). По данным Блюгера А.Ф. с соавт. (1984), активность ГР при хронических поражениях печени (хронический персистирующий гепатит, жировой гепатоз, цирроз печени), напротив, возрастает. Таким образом, данные о содержании глутатиона в эритроцитах при хронических гепатитах неоднозначны. Некоторые исследователи в своих работах не наблюдали существенных изменений содержания восстановленного глутатиона в эритроцитах (Сондоре В.Ю., 1984), другие отметили его снижение (Матюшин Б.Н., Логинов А.С., 1996; Макаренко Е.В., 1987; Макаренко Е.В., Козловский И.В., 1989), При исследовании Блюгер А.Ф., Крупникова Э.З. с соавт. (1984) содержания восстановленного глутатиона и активности ферментативных систем, регулирующих его концентрацию в эритроцитах больных с острыми и хроническими поражениями печени, выявлена связь между содержанием восстановленного глутатиона, изменениями сорбционных свойств и осмотической стойкостью эритроцитов. Авторами высказывается предположение о том, что возникновение и развитие патологического процесса в печени происходит на фоне гипоксии, создаваемой функциональными нарушениями эритроцитов.
В эритроцитах детей с хроническими заболеваниями печени также отмечается изменение состояния глутатионзависимых ферментов: дефицит ГПО, повышение активности ГР и ГТ (Власова С.Н. и др., 1990).
Брейдо В.В. с соавт. (1991) отмечает, что у больных хроническим алкоголизмом на фоне усиления ПОЛ эритроцитов снижается активность СОД и ГПО клеток. При этом устойчивость эритроцитов к перекисному гемолизу была снижена у всех больных.
Имеются данные о снижении в эритроцитах при хронических заболеваниях печени активности общей и мембраносвязанной (Макаренко Е.В., Козловский И.В., 1989) каталазы. При всех формах хронической патологии печени Макаренко Е.В. с соавт. (1988, 1989) отмечают увеличение активности СОД и глутатионредиктазы, которое относится к изменениям адаптивного характера, направленным на предотвращение чрезмерного усиления ПОЛ. Эти данные подтверждаются рядом других авторов (Логинов А.С., Бендиков Э.А. и др., 1995; Логинов А.С., Матюшин Б.Н., 1994а, 19946, 1995; Матюшин Б.Н., Логинов А.С., 1992, 1996; Стречень СБ., 1992).
Исследование активности трансаминаз, ЛДГ, щелочной фосфатазы, содержания общего билирубина и глюкозы в сыворотке крови при хронической интоксикации СС14
Исследование активности трансаминаз, ЛДГ, щелочной фосфатазы, содержания общего билирубина и глюкозы в сыворотке крови при хронической интоксикации СС14. Как известно, содержание ферментов в плазме отражает соотношение между их биосинтезом и высвобождением из клеток, а также их клиренсом из кровотока. В зависимости от характера повреждающего агента могут поражаться различные структуры гепатоцитов, и в кровь, в первую очередь, будут выходить ферменты, находящиеся в наиболее пострадавшей части клетки (Голиков С,Н., Саноцкий И.В., 1986). Таким образом, ферменты сыворотки можно использовать в качестве маркеров, чтобы обнаружить и локализовать повреждение клеток (Подымова С.Д., 1998; Мосс Д.В., Баттерворт Дж.П, 1978).
В работе проведено изучение активности маркерных ферментов - АЛТ, ACT, ЛДГ, ЩФ, а также уровня общего билирубина и глюкозы в сыворотке крови экспериментальных животных. Результаты представлены в таблице № 1. Активность трапсаминаз в сыворотке крови при хроническом токсическом гепатите.
Индикаторные ферменты трансаминазы в норме присутствуют в крови в небольших количествах. АЛТ является исключительно цитоплазматическим энзимом гепатоцитов и сравнительно легко проникает в кровь. ACT, представленная цитоплазматическими и митохондриальными изоферментами, элиминирует из печени в меньшей степени. Повреждение клеток печени вызывает быстрое и усиленное высвобождение внутриклеточных ферментов гепатоцитов в кровоток (Подымова С.Д., 1998; Блюгер А.Ф., Новицкий И.Н., 1985). Поэтому определение активности ACT и АЛТ в сыворотке используется для ранней диагностики деструктивных процессов в ткани печени (Титов В.Н., 1990; 1993; 1996; Хазанов А.И., 1988; 1995; 1996; 1998).
Как следует из приведенных в таблице №1 данных, при хроническом токсическом гепатите имеет место достоверное и существенное повышение активности АЛТ (с 1,89±0,20 до 4,41±0,29 ммоль/чхл) и АСТ(с 1,55±0,30 до 3,31= 0,20 ммоль/чхл) в сыворотке крови. Изложенное выше позволяет предполагать, что длительное введение ЧХУ вызывает нарушение целостности плазматических мембран гепатоцитов, сопровождающееся выходом индикаторных ферментов в кровь.
Таким образом, хронический токсический гепатит приводит к выраженной трансаминаземии сыворотки крови.
Активность общей ЛДГ в сыворотке крови при хроническом токсическом гепатите.
ЛДГ- гликолитический фермент, катализирующий обратимую реакцию восстановления пировиноградной кислоты в молочную.
Как показывают результаты исследования (табл.№1) повышение активности трансаминаз в сыворотке животных с экспериментальным гепатитом сопровождается адекватным возрастанием общей активности ЛДГ (с 2977,63±93,28 до 6037,75±163,05 мкмоль/минхд), что может свидетельствовать о повышении проницаемости плазматических мембран гепатоцитов (Титов В Л., 1993; 1996).
Возрастание сывороточной активности общей ЛДГ при хронической интоксикации ССЦ происходит в результате увеличения в крови содержания печеночных фракций ЛДГ5 и, частично, ЛДГд (Абдуллаев Н.Х., Каримов Х.Я.,1989). Одновременно с возрастанием уровня ЛДГ в сыворотке, активность данного энзима как в общем гомогенате, так и в субклеточных фракциях печени снижается, возможно, в результате увеличения скорости их элиминации (Зимин Ю.В. идр.,2001).
Повышение активности ЛДГ в сыворотке крови так же может быть связано с распадом эритроцитов под действием токсического агента и является признаком начинающегося гемолиза (Рослый И.М. и др., 2000).
Возрастание активности ЛДГ, возможно, связано с преобладанием в гепа-тоцитах анаэробного обмена, что может свидетельствовать о развитии гипоксии ткани (Кораблев В.П., Лукиенко П.И., 1976; Абдуллаев Н.Х. и др., 1976; Кротова 3 Г. и др., 1977).
Таким образом, хроническое токсическое поражение печени сопровождается выраженной гиперферментемией ЛДГ сыворотки.
Активность щелочной фосфатазы в сыворотке крови при хроническом токсическом гепатите.
ЩФ относится к мембрансвязанным ферментам. Фермент присутствует в форме отдельных изоферментов в плазматических мембранах синусоидального полюса и мембранах микроворсинок гепатоцитов. Также активность фермента регистрируется в эпителии мельчайших желчных ходов (Титов В.Н., 1993, 1996; Хазанов А.И., 1995). На основании активности ЩФ оценивают реактивные изменения в эпителии желчевыводящих путей и плазматических мембранах гепатоцитов. Анализ результатов таблицы №1 указывает на достоверное возрастание уровня сывороточной ЩФ при хроническом гепатите с 90,28±1,25 до 160,73±5,68 мкмоль/минхл.
Наблюдаемое повышение уровня ЩФ может происходить в результате нарушения функции желчных путей, усиления синтеза фермента гепатоцитами и эпителием желчных путей. Но, возможно, развитие гиперферментемии ЩФ можно рассматривать как результат нарушения целостности мембран гепатоци-тов (Muriel P., Mourelle М., 1990; Титов В.Н., 1993, 1996). Тканевая гипоксия сопровождается снижением активности фермента (Коды няк И.П., Абрамова Л.И., 1991).
Изучение активности трансаминаз, ЛДГ, щелочной фосфатази, содержания общего билирубина и глюкозы в сыворотке крови при парентеральном введении аскорбиновой кислоты
В настоящее время накопилось достаточное количество данных о целесообразности использования аскорбиновой кислоты в патогенетической терапии токсических гепатитов (Челак Е.М., 1980; Скакун Н.П. и др, 1989; Шалхаров С, 1992). Это обусловлено с одной стороны тем, что АК обеспечивает нормальное протекание обменных процессов в ткани печени, с другой стороны, являясь фактором антиоксидантиой системы, она участвует в поддержание стабильного уровня ПОЛ мембран гепатоцитов.
В работе проведено исследование маркерных показателей сыворотки крови - активности АЛТ, ACT, общей ЛДГ, ЩФ, а также уровня общего билирубина и глюкозы при введении аскорбиновой кислоты традиционным внутривенным способом и направленным транспортом в эритроцитарных контейнерах.
Активность трансаминаз в сыворотке крови при парентеральном введении аскорбиновой кислоты .
Данные, отражающие изменение активности трансаминаз сыворотки крови представлены в таблицах № 4 и № 5.
При коррекции токсического гепатита путем парентерального введения АК нормализации уровня АЛТ в крови не происходит. Учитывая, что АЛТ локализуется в цитоплазме гепатоцитов (Титов В.Н., 1990, 1993, 1996), можно предполагать, что используемая схема коррекции токсического поражения печени не приводит к полному восстановлению клеточных мембран. Проведенные исследования также показали, что введение АК в исследуемых дозах как внутривенно, так и в ЭК не приводит к достоверному изменению активности АЛТ в сыворотке интактных животных.
Коррекция хронического токсического гепатита различными дозами АК с использованием традиционного введения и направленного транспорта показала, что нормализация активности ACT происходит только при введении ЭК с 25мг/кг АК. Остальные дозы витамина при обоих способах введения снижают содержание фермента в сыворотке по сравнению с животными с хроническим гепатитом, однако не восстанавливают активность ACT до уровня интактных животных. Применение АК в группах интактных животных не вызвало достоверных изменений активности фермента в крови при используемых способах введения.
Таким образом, показатели активности трансаминаз в сыворотке крови животных, получавших коррекцию гепатита внутривенным введением представленных доз АК, достоверно превышают показатели крови крыс, получавших те же дозы АК в ЭН. Введение АК как направленным транспортом, так традиционным внутривенным способом, не вызвало достоверных изменений уровня трансаминаз в крови интактных животных.
Активность общей ЛДГ в сыворотке крови при парентеральном введении аскорбиновой кислоты.
Показатели активности общей ЛДГ в сыворотке крови экспериментальных животных представлены в таблице №6.
Как показали результаты исследования, коррекция токсического гепатита парентеральным введением АК привела к достоверному снижению активности общей ЛДГ в крови во всех исследуемых группах. Наиболее выраженный спад уровня сывороточной ЛДГ наблюдался при введении 25 мг/кг АК как внутривенно (с 6037,75±163,05-в 8 группе до 3119,25±707,б2 мкмоль/мин х л), так и в ЭК(до 3265,63±328,50 мкмоль/мин х л).
Введение 25 мг/кг АК не вызвало достоверного изменения общей активности ЛДГ в сыворотке интактных животных. Использование более высоких доз АК сопровождается достоверным повышением уровня ЛДГ в крови крыс.
Таким образом, введение АК внутривенно и в ЭК на фоне хронической интоксикации приводит к снижению общей активности энзима. В группе ин-тактных животных применение 25 мг/кг АК не вызывает изменения уровня фермента, а использование более высоких доз АК вызывает достоверное повышение активности общей ЛДГ.
Активность щелочной фосфатазы в сыворотке крови при парентеральном введении аскорбиновой кислоты.
Результаты, отражающие изменение активности ЩФ в сыворотке, представлены в таблице №7.
Имеются данные, что АК повышает активность ЩФ. При снижении уровня АК в организме активность ЩФ снижается, при введении АК она возрастает (Ковалевский А. А., 1965).
В нашем исследовании коррекция хронического токсического гепатита парентеральным введением различных доз АК привела к достоверному снижению активности ЩФ в сыворотке. При внутривенном введении АК наиболее эффективной оказалась доза 100 мг/кг. При направленном транспорте АК животным с гепатитом наиболее значительное снижение уровня сывороточной ЩФ выявлено при дозе 50 мг/кг.
Введение аскорбата внутривенно в инкапсулированном виде сопровождается незначительным, но достоверным повышением активности ЩФ сыворотки интактных крыс, наименее выраженным в группах, получавших 25 мг/кг АК.
Таким образом, применение различных доз АК на фоне интоксикации ТХМ вызывает снижение активности энзима. Использование гепатопротектора в группах интактных животных приводит к незначительному достоверному повышению активности фермента.
