Содержание к диссертации
Введение
1. Обзор литературы
1.1 Печень и ее роль в организме
1.2 Опиоидные пептиды как регуляторы физиологических функций организма
1.3 Транскраниальная электростимуляция как новый неинвазивный метод воздействия на антиноцицептивную систему человека и животных
2. Собственные исследования
2.1 Материал и методы исследований
2.2. Результаты исследований
2.2.1 Влияние различных режимов ТЭС на физиологический статус кроликов и собак
2.2.2 Содержание р-эндорфина в крови кроликов и собак при использовании разных режимов ТЭС
2.2.3 Функциональная активность печени у кроликов и собак после применения ТЭС
2.2.4 Гематологические показатели у кроликов и собак с дисфункцией печени после проведения ТЭС
2.2.5 Морфологическая структура печени у кроликов при её дисфункции и после ТЭС
2.2.6 Функциональное состояние печени у собак при дисфункции и после применения ТЭС в комплексе с налоксоном
2.2.7 Функциональное состояние печени у собак при дисфункции и после применения ТЭС в комплексе с D-фенилаланином
2.2.8 Способ восстановления функциональной активности печени у собак при её дисфункции
с использованием ТЭС 90
3. Обсуждение результатов исследований 93
Выводы 103
Практические предложения 106
Список литературы 107
Приложения 132
- Печень и ее роль в организме
- Опиоидные пептиды как регуляторы физиологических функций организма
- Влияние различных режимов ТЭС на физиологический статус кроликов и собак
- Морфологическая структура печени у кроликов при её дисфункции и после ТЭС
Введение к работе
Актуальность темы. В конце 60-х годов прошлого столетия D. Reynolds при изучении механизмов электронаркоза установил, что непосредственная электрическая стимуляция некоторых медиально расположенных структур мозгового ствола, к которым относятся ядра гипоталамуса, околопроводного серого вещества и продолговатого мозга, может избирательно вызывать выраженную анальгезию у животных без развития наркозоподоб-ного состояния. Такая анальгезия стала называться стимуляционной.
Дальнейшие исследования показали, что эффекты электростимуляции некоторых отделов головного мозга не ограничиваются только анальгезией, характеризуются также общей саногенетической направленностью на защиту организма от повреждающих воздействий. Так возникло новое понятие антиноцицептивная система. Эта система обеспечивает нормализацию психофизиологического статуса, стимулирует репаративную регенерацию повреждённых тканей, купирует болевые синдромы и поддерживает нормальные иммунные реакции организма.
Исследование механизмов возникновения вышеуказанных гомеостати-ческих эффектов привело учёных к обнаружению опиатных рецепторов, широко представленных во всех органах и тканях, и связывающихся с ними ли-гандов - эндогенных опиоидных пептидов, вырабатываемых собственным организмом.
Важнейшим из эндогенных опиоидных пептидов является р-эндорфин - нейропептид, широко представленный в мозге и во всем организме.
Установлено, что Р-эндорфин может в организме выступать одновременно в качестве гормона, нейротрансмиттера и нейромодулятора (Э. Коста, М. Трабуки, 1981). Помимо Р-эндорфина указанными свойствами обладают также и другие эндогенные опиоидные пептиды — энкефалины, серотонин. Именно антиноцицептивная система вместе с эндогенными опиоидными пептидами и опиатными рецепторами составляют систему защитных механизмов мозга.
В 90-х годах прошлого столетия в результате многолетних исследований, проведенных группой ученых во главе с доктором медицинских наук, лауреатом Государственной премии и премии Правительства РФ в области науки и техники, профессором В.П. Лебедевым, была показана возможность стимуляции защитных механизмов мозга посредством неинвазивного транскраниального воздействия электрическим током определенных параметров (ТЭС). Был установлен и доказан опиатный механизм этой стимуляции, изучена роль её серотонинергического, ГАМК-ергического и холинергического звеньев (ВЛ. Лебедев и др., 1998). В дальнейшем В.П. Лебедевым и сотрудниками были разработаны специальные модели аппаратов для проведения ТЭС под общим названием «Трансаир».
В настоящее время метод ТЭС широко используется в медицинской практике. Его применяют для нормализации психофизиологического статуса и снижения утомляемости (В.П. Лебедев-и др., 2001; 2003; 2005); нормализации системной и региональной- гемодинамике (О.С. Медведев и др., 2005); стимуляции неспецифической резистентности организма (А.В. Рубцовенко и др., 1998; Н.Л. Груцкевичи др., 2005).
В последние годы метод ТЭС привлек внимание и ветеринарных специалистов. В литературных источниках имеются сведения о применении ТЭС для регуляции половой функции у свиней (О.Б. Сеин, 1991; 1994; 2008), для телят, больных диспепсией (М.В. Беседин, 1999; 2000) и анемией (Д.ВЛ. Скачков, 2007), кастрации самцов (Ю.В. Храмов, 1998), выполнении хирургических операций (Д.Ф. Давлетбердин и др., 2002), стимуляции функционального состояния желудка у животных (С.А. Кизилов, 2004; О.Б. Сеин и др., 2008). В то же время во всех этих работах авторы используют различные способы наложения электродов, параметры постоянного и импульсного тока, продолжительность и кратность ТЭС. Всё это свидетельствует о том, что метод ТЭС в практике ветеринарной медицины находится на стадии становления и требует дальнейшего изучения и производственных апробаций.
Чтоікасается влияния T3G на функциональное состояние печени у животных, то встречающиеся; в источниках литературы, не многочисленны и зачастую носят противоречивый характер. Поэтому требуются дополнительные исследования гепатокорректорных эффектов ТЭС с, применением комплексных подходов.
Печень и ее роль в организме
Печень - крупная, дольчатая железа. Она принимает прямое или косвенное участие почти во всех видах обмена, является главным органом в поддержании гомеостаза — способности организма животного сохранять динамическое постоянство внутренней среды. Функциональные изменения печени приводят к возникновению нарушений в других органах (B.C. Постников и др., 1993; Л.И. Ефанов и др., 2004).
Паренхима печени состоит из долек многогранной (5 - 6, реже 4 или 7 граней) формы диаметром 1-1,5 мм, высотой 1,5 - 2,5 мм. Остовом печени является соединительно-тканная капсула, которая, проникая внутрь, создает границы долек, состоящих из сгруппированных в балки печеночных клеток (гепатоцитов).
Междольковая вена (ветвь воротной вены), печеночная артерия и желчный проток составляют печеночную триаду. В центре печеночной дольки располагается выносящий сосуд - центральная вена, которая, в свою очередь, у основания дольки открывается в сублобулярную или собирательную вену, ветвь печеночной вены. Таким образом, кровоток в печеночной дольке проходит от периферии к центру. Гепатоциты расположены в балках ради-ально и оплетены печеночными капиллярами (синусоидами), по которым циркулирует смешанная артериально-венозная кровь. Иннервация (симпатическая и парасимпатическая) печеночных долек осуществляется главным образом за счет нервных стволов, пучков и сплетений, расположенных в меж-дольковых прослойках. Нервные волокна проникают в печеночные дольки до гепатоцитов и эндотелиальных клеток. Начальными элементами желчевыво-дящей системы являются межклеточные желчные каналы, образованные ана-стомозирующими между собой цитоплазмотическими мембранами смежных гепатоцитов (O.R. Braekkan, 1962). С двух сторон желчные канальцы ограни чены посредством системы шлюзных механизмов (В; Koch, 1963). На периферии, сливаясь друг с другом, они образуют перилобулярные желчные ходы (холангиолы), которые впадают в междольковые желчные протоки - холан-гидукты. Ток желчи, имеет противоположное относительно кровотока на-, правление от центра к. периферии. Соединительнотканные элементы печени (эндотелий синусоидов, звездчатые клетки Купфера, обладающие фагоцитарной активностью и фибробластические клетки) образуются, фибробласта-ми. Наряду с вышеназванными долями печени принято различать ещё портальные дольки и печеночные ацинусы. Портальными дольками называют участки ткани вокруг портального треугольника. Печеночный ацинус - микроскопические участки .печеночной паренхимы, неопределенной формы и различной величины, сосредоточенные вокруг портального поля и ограниченные центральными: венами- двух смежных печеночных долек (В: Ko chi 1963; Е. Dolganski et al., 1984; Mac Sweem, 1983): Изменения; в. портальных; дольках и печеночных ацинусах при поражениишечени более выражены.
Вїструктурепеченивьіделяют также пространство Дйссе, включающее синусоид с окружающими его прилежащей паренхимой и желчным каналь-. цем, а также; печеночные пластинки, состоящие-из одного ряда клеток (Б:ВІ Уша, 1974, 1979; В. Koch, 1963).
Для клеток печени? характерна гетерогенность. Центролобулярные клетки дольки крупнее периферических. Клеточные элементы разных отделов дольки отличаются друг от друга по ультраструктуре, содержанию ферментов и других химических компонентов. Активность большинства ферментов в печеночных клетках периферии дольки выше, чем в печеночных клетках центра дольки (А.Ф. Блюгер и др., 1962); В периферическом отделе долек расположен слой мелких темных гепатоцитов с базофильной цитоплазмой, не содержащих; гликогена (запирательная или пограничная пластинка).
Клетки периферической зоны дольки осуществляют главным образом функции фильтрации и накопления веществ, поступающих из крови ворот ной вены, участвуют в детоксикации, а клетки центра дольки активно синтезируют белки плазмы крови, участвуют в метаболизме билирубина, экскреции в желчные пути экзогенных и эндогенных веществ.
Клетки периферии дольки первыми омываются кровью, поступающей из воротных вен и печеночных артерий, вследствие чего они находятся в оптимальных условиях снабжения- кислородом и питательными веществами. Дыхание в них происходит в основном аэробным путем через цикл Кребса. Клетки центра дольки, находящиеся в худших условиях снабжения кислородом, получают большую часть энергии за счет гликолиза (Т. Feszt et. al., 1960).
Особенности кровоснабжения обусловливают неодинаковую степень поражения гепатоцитов. Гепатотоксины, поступающие по системе воротной вены, действуют на периферии печеночной дольки, а токсические вещества, поступающие по системе печеночной артерии, оказывают повреждающее действие на всем протяжении печеночной дольки. При этом центролобуляр-ные гепатоциты, находящиеся в худших условиях оксигенации, повреждаются сильнее периферических. Гликоген, прежде всего, исчезает из центральной и накапливается в периферических дольках.
Все процессы метаболизма в живом организме прямо или косвенно связаны с печенью, которая является основным органом обмена веществ. Она принимает участие в обмене белков, углеводов, липидов, витаминов, пигментном и водно-солевом обменах.
Печень выполняет следующие основные функции в обмене белков: синтез специфических белков плазмы; образование мочевины и мочевой кислоты; синтез холина и креатина; трансаминирование и дезаминирование аминокислот, что весьма важно для взаимных превращений аминокислот, а также для процесса глюконеогенеза и образования кетоновых тел.
При заболеваниях печени определение фракционного состава белков плазмы (или сыворотки) крови нередко представляет интерес, как в диагностическом, так и в прогностическом плане. Патологический процесс в гепа тоцитах резко снижает их белково-синтетические возможности; в результате содержание альбумина в плазме крови резко падает, что может привести к снижению онкотического давления плазмы крови, развитию отеков, а затем асцита. Отмечено, что при циррозах печени, протекающих с явлениями асцита, содержание альбуминов в сыворотке крови на 20 % ниже, чем при циррозах без асцита.
При поражениях печени нарушается также процесс дезаминирования аминокислот, что приводит к увеличению их концентрации в крови и моче. Так, если в норме содержание азота аминокислот в сыворотке крови составляет примерно 2,9 - 4,3 ммоль/л, то при тяжелых заболеваниях печени (атро-фические процессы) эта величина увеличивается до 21 ммоль/л, что приводит к аминоацидурии. Например, при острой атрофии печени содержание тирозина в суточном количестве мочи может достигать 2 г (при норме 0,02 - 0,05 г/сут).
Печень участвует в синтезе и обмене большого числа специфических белков-ферментов, которые подразделяют на секреторные, индикаторные и экскреторные. Секреторные ферменты (прокоагулянты, холинэстераза, церу-лоплазмин) гепатоциты выделяют в плазму. Индикаторные ферменты выполняют определенные внутриклеточные функции. Одни из них в норме находятся в плазме (альдолазы, трансаминазы), другие (глютаматдегидроге-наза) отсутствуют. Однако при ряде патологических процессов количество индикаторных ферментов в плазме крови возрастает во много раз.
Опиоидные пептиды как регуляторы физиологических функций организма
Опиоидные пептиды представляют собой новый класс биоорганических соединений, выполняющих в организме роль межклеточных и межтканевых нейрорегуляторов. Широкий И" пристальный интерес, проявляемый к этим соединениям со стороны исследователей самого различного профиля, обусловлен целым рядом обстоятельств. Прежде всего, эндогенные опиоиды - особая группа нейромедиаторов и нейромодуляторов; специализированных в отношении небольших групп нейронов головного наспинного мозга, физиологическая функция которых, по-видимому, сводится к обеспечению аналь-гетических эффектов, а также деятельности экстрапирамидальной, лимбиче-ской И неироэндокринной систем. Открытие опиоидных пептидов создало предпосылки для формирования новых направлений в области нейрофизиологии. Вместе с тем-изучение физиологических функций эндогенных опиои-дов обусловило развитие широкого фронта исследований по выяснению» их роли в патогенезе многих заболеваний человека и животных (Э. Кост и др., 1981).
В настоящее время известно более 20 эндогенных опиоидных пептидов. К их числу принадлежат энкефалины и эндорфины, которые были выделены, из тканей мозга и гипофиза, а.также недавно обнаруженные - экзорфи-ны, динорфины и лейморлины. Из всех эндогенных опиоидных пептидов наиболее изучены эндорфины и энкефалины.
Эндорфины образуются при расщеплении проопиомеланокортина (ПОМК), в молекуле которого одновременно с р-липотропином (частью ко торого является р-эндорфин) содержатся а-, р и у- меланоцитостимулирую-щий и адренокортикотропный гормоны.
Энкефалины состоят из 5 аминокислот с последовательностью близкой к N-концу Р-эндорфина. Энкефалины различаются между собой только С-терминальным аминокислотным остатком, который включает метионин и лейцин (J. Hughes et al., 1975; N. Ling et al., 1976; S.J. Watsen et al., 1979; W.D. Youndetal., 1994).
Опиоиды, как и все регуляторные пептиды, являются секретируемыми продуктами и образуются путем посттрансляционного процессинга белковых предшественников (Y. Berman et al., 2000). В эндоплазматическом ретику-лууме, комплексе Гольджи и в секреторных везикулах осуществляется про-цессинг биологически активных пептидов (О.А. Гомазкови др., 1989). Ведущую роль в образовании энкефалинов и эндорфинов играет целый ряд эндо-пептидаз: динорфин - превращающий фермент, энкефалинобразующий фермент, ангиотензин - превращающий фермент, эндоолигопептидаза А, а также конвертазы и протеиназы (А.Н. Вернигора и др., 1995; Л.Ф. Панченко и др., 1994; A.V. Azarian et al., 1994; M.D. Camargo et al., 1994; G. Silberring et al., 1992). Одним из важнейших ферментов конечной стадии процессинга энкефалинов в мозге является карбоксипептидаза Н, участвующая в процессинге многих регуляторных пептидов (А.Н. Вернигора и др., 1995). Помимо кар-боксипептидазы Н выделен ряд аминопептидаз и ФМСФ- карбоксипептидаза, которая образуется в секреторных везикулах и тесно связанные с образованием ОП в различных органах и тканях (А.Н. Вернигора, 1995). Под влиянием какого-либо стимула: медиаторы, другие регуляторные пептиды, ц-АМФ, происходит изменение внутриклеточной концентрации Са2+, и образовавшиеся опиоиды секретируются клеткой и мигрируют к клеткам-мишеням.
Существует довольно большой перечень ферментов, участвующих в разрушении ОП. Среди них: ангиотензинпревращающий фермент, энкефа-линаза A (H.S. Fisher et al., 2000), аминопептидаза М и ариламидаза (R. Miller et al., 1983). Следует отметить, что протеолитическим ферментам принадле жит важная роль в обмене нейропептидов, причем действие внеклеточных ферментов, носит регулирующий характер (Л.Ф: Панченко и др:,. 1995; S.Muller et al., 1999): Показано, что энкефалины и продукты, их гидролиза, участвуют в; регуляции активности ферментов процессинга и деградации., пептидов,.что имеет важный;биологический смысл, состоящий.в регуляции уровня нейропептидов при патологических- состояниях организма: алкоголизме, стрессе,, патологии гипофиза и т.д. Подобная ауторегуляция предотт вращает систему от возможного истощения: при чрезмерной нагрузке (А-.Н. Вёрнигора и дp.,.1992); Энкeфaлины.Jxopoшo изoлиpoвaны в своих депо: После высвобождения, они быстро инактивизируются, так что зависимость не развивается (Э1Кост и. др;, 1981; /Si.Gudmundsson et ah, 1999)
Эндогенные опиоидные пептиды; широко распространены вюрганизме: сновная-і масса, внутрймозговых опиоидов; представленая энкефалинами. Их: количество; определяемое радиоиммунологическим-мётодом; составляет 90% от всех.эндогенных опиоидов: Большее, содержание энкефалиновйобнаружи-вается? в области полосатого тела: и гипоталамуса: при- относительно низком; их.уровнев коре головного мозга; и мозжечке (F.A-. Вартанян: и др., 1984;; Э; Дикенсощ 1994; A. Bayonet al., 1980). В то же время встречаютсяюни ив периферической нервной» системе (J: Hughes et al., 1977).
Регионарное распределение Р-эндорфинов более ограниченное. Клетки; . содержащие.Р-эндофин;,локализуются преимущественно в области аркуатно-го и вентромедиального ядер гипоталамуса :(Э; Дикенсощ 1994;;N. Ogawa et al.,..1979): Віостальньїх областях обнаруживаются только нервные волокна и терминалии эндорфинреактивных нейронов.
. Широкое распространение в нервной системе, а также локализация, опиоидных пептидов в; нервных окончаниях позволяют предположить об их участии в передаче нервных импульсов в качестве нейромедиаторов,илишей-ромодуляторовї наряду с общеизвестными медиаторами. Это? предположение основывается на изучении действия опиоидных пептидов на активность от дельных нейронов различных областей нервной системы, а критерием выбора исследуемой области является содержание данного пептида или рецептора1 к нему (А.А. Поленов, 1979; ГЛ. Вартанян и др., 1984; И.Г. Акмаев, 1993; М. Denavit-Saubil et al., 1978).
Основным действием опиоидных пептидов является торможение как спонтанной, так и вызванной электрической активностью отдельных нейронов (М. Denavit-Saubil. et al., 1978). Известно, что опиаты могут воздействовать на, клетки-мишени по эндокринному, нейрокринному, паракринному и медиаторному типу. В настоящее время выявлено, по меньшей мере, пять субпопуляций опиатных рецепторов: мю-рецепторы (лиганд-морфин), дельта-рецепторы (лиганд-энкефалины), капна-рецепторы (лиганд-динорфин и неоэндорфины), эпсилон-рецепторы (лиганд-Р-эндорфин) и сигма-рецепторы (лиганд-аллил-норметазин). Опиоидные рецепторы расположены не только в структурах нервной системы, но и в различных тканях и органах, в связи с чем они принимают активное участие в регуляции многих физиологических функций (А.Д. Дмитриев, 1982; Е.И. Чазов и др., 1984; А.А. Папин и др., 1984; В.Н. Бабичев, 1984; О.А. Гомазков, 1993, 1995; J.F. Bruni et al., 1977; T.J. Cicero et al., 1979).
И.П. Ашмарин и др. (1988), анализируя влияние различных нейропеп-дидов на физиологические функции организма, отмечают, что (3-эндорфин вызывает сложные эффекты со стороны частоты сердечных сокращений и дыхания. В свою очередь, результаты опытов, проведенных О.Е. Осадчим и др. (1997) на кошках, указывают, что выраженность кардиотропных эффектов зависит не только от опиоидного пептида, но и от особенностей его химической структуры, в частности, участков аминокислотной последовательности.
Влияние различных режимов ТЭС на физиологический статус кроликов и собак
В настоящее время в медицинской, практике применяются экспериментально обоснованные режимы ТЭС. Выбраны оптимальные параметры постоянного и импульсного токов, продолжительности и кратности проведения электростимуляции (В.П. Лебедев и др., 2003, 2005). Что касается применения ТЭС на-животных, то в этом случае однозначного мнения у исследователей нет.
В источниках литературы встречаются сведения о применении ТЭС на разных видах животных. При этом авторы приводят данные, которые носят весьма противоречивый характер. Например, М.В. Беседин и др. (1997, 1999), при проведении ТЭС у телят использовал постоянный ток, который плавно 1 увеличивался от 0 до 6,5 мА в течение двух минут, затем подавался на элек i троды импульсный ток с частотой 70 - 80 Гц, длительностью импульсов 3-4 мс и амплитудой 3 мА. Продолжительностью одного сеанса электростимуля с ции составляла 30 минут, кратность применения один раз в день в течение трёх дней подряд. Аналогичный режим ТЭС использовал С.А. Кизилов (2004) при работе на свиньях и А.В. Найденков (2007) на овцах. В то же вре мя Д.Ф. Давлетбердин (2002) применял импульсный ток прямоугольной формы частотой 300 Гц, длительностью импульсов 0,1 мс и силой тока от 10 до 15 мА. Сеанс ТЭС осуществлялся в течение 5-9 минут.
Учитывая, что для кроликов и собак параметры ТЭС до настоящего времени точно не установлены, мы провели исследования по изысканию оптимального режима электростимуляции для животных этих видов.
За основу были взяты режимы, рекомендуемые М.В. Бесединым (2000) иВ.П. Лебедевым (2005).
Для.проведения:зкспериментов;бьіла.сформированаігруппа кроликов (7 голов) и собак (5 голов); Вшервом эксперименте:как:для.кроликов, таки со--бак использовали режимы ТЭС,, которые предусматривали подачу, на электроды, расположенные в области лобной (катод) и затылочной (анод)-костей,, постоянного тока плавно нарастающего в течение: двух мин от 0 до 6,0 мА, затем на электроды в той: же полярности подавался импульсный ток с часто-то» 70 ц, длительностью 3;0 мс и амплитудой-3 0! мА.. Продолжительность одного сеанса составляла 30 минут.
В -то же время было отмечено, что при использовании первого варианта режима ТЭС как у кроликов, так и собак отмечалосы повышение частоты пульса и дыхания, (табл. 1). Через-30 минут у большинства животных после окончания; сеанса ТЭС данные показатели приближались к исходным величинам:
При помещении животных после ТЭС в клетки (места их постоянного содержания) большинство кроликов-постоянно перемещались по клетке, обнюхивали её, подходили к кормушке, однако корм не принимали. У собак также была повышена двигательная активность и отсутствовал аппетит.
Описанные выше поведенческие реакции наблюдались у большинства кроликов и собак, однако у некоторых животных поведение имело инойс характер. Так, у кроликов №-3, № 7 и собаки № 4 реакция на электростимуляцию была более выраженной, чем у других животных. Они вели себя беспокойно во время всего периода ТЭС. Кролики постоянно трясли головой, пы-тались освободиться от электродов, собаки ложились на живот, вставали, затем вновь ложились и делали так несколько раз во«времЯ Сеанса ТЭС. Данные животные вели себя беспокойно и после электростимуляции. Повышенная двигательная активность у них сохранялась в течение 20-30 минут после окончания ТЭС, после чего они успокаивались, а некоторые животные находились в подавленном состоянии.
При использовании второго варианта ТЭС поведение подопытных животных несколько отличалось от такового при применении первого варианта электростимуляции. Как у кроликов, так и собак в первые минуты ТЭС наблюдалось кратковременное возбуждение, однако оно заканчивалось быстрее, чем при первом варианте режима электростимуляции. В этом опыте не было животных с неадекватным поведением. После сеанса как кролики, так и собаки адаптировались к окружающей обстановке быстрее, у них раньше появлялся аппетит, чем при- использовании первого варианта электростимуляции. Гематологические показатели в период ТЭС представлены на рисунках 5 - 9, из которых следует, что все изучаемые показатели находились в пределах физиологической нормы. Отмечено увеличение содержания эритроцитов и гемоглобина у всех кроликов и собак через 60 минут после электростимуляции по сравнению с фоновыми показателями, однако это увеличение было статистически недостоверным (р 0,05). В то же время в крови собак, при первом режиме ТЭС, через 60 минут после сеанса регистрировалось увеличение содержания лейкоцитов, что указывает на повышенную реактивность их организма.
Из источников литературы следует, что механизм действия ТЭС тесным образом связан с опиоидергическими системами организма. В частности Л.Н. Айрапетов и др. (1985) и В.П. Лебедев (1986) указывают на то, что анальгезия, возникающая при транскраниальном воздействии в условиях выбранного режима, имеет опиоидный характер. При этом исследования проводились авторами на мелких лабораторных животных — мышах и крысах. Учитывая это, нами были проведены эксперименты по определению содержания эндогенного опиоидного пептида [3-эндорфина в крови кроликов и собак после транскраниального электровоздействия.
Морфологическая структура печени у кроликов при её дисфункции и после ТЭС
Анализ гистологической структуры печени показал, что у кроликов опытной группы, которые подвергались ТЭС, структура печени преимущественно представлена светлыми гепатоцитами, которые прилегают друг к другу. Печёночные дольки сформированы, границы долек хорошо различимы. Дольки имеют многоугольную форму, с закругленными углами.
В каждой дольке просматривается 2-3 центральные вены. Печёночные балки и синусоидальные капилляры хорошо различимы на протяжении всей дольки.
Цитоплазма гепатоцитов чаще однородная, однако встречаются клетки с ячеистой структурой. В цитоплазме гепатоцитов обнаруживаются жировые включения, а также гликоген в виде небольших глыбок. При этом включения гликогена встречались преимущественно в периферических гепатоцитах, а в центролобулярных гепатоцитах они обнаруживались редко.
Гистологический препарат печени кролика. Сосуды сдавлены увеличиными в объеме гепатоцитами. Окраска: гематоксилин-эозин; увеличение 400. которые у кроликов опытной, группы не встречались. В частности в печени выявлялась ячеистая структура, в некоторых случаях отмечались расширения пространства Диссе. Имели место микроциркуляторные нарушения, центральные вены заполнены форменными элементами крови (рис. 24, 25). В ге-патоцитах уменьшалось количество гликогена, а количество жировых включений, наоборот, увеличивалось. При этом архитектоника балочной структуры гепатоцитов сохранялась и не отличалась от таковой у кроликов опытной группы.
Таким- образом, приведённые нами гистологические исследования свидетельствуют о том, что ТЭС обладает гепатопротекторными свойствами и оказывает положительное влияния на морфофункциональное состояние пе-ченипри её дисфункции.
Учитывая, что налоксон является антагонистом опиоидных пептидов, нами были проведены эксперименты по выяснению его влияния на гепато-протекторные эффекты ТЭС. С этой целью собакам перед электростимуляцией вводили внутрибрюшинно налоксон в дозе 1,0 мл/кг дважды с интервалом 15 мин. У всех животных брали кровь во время постановки их на опыт и в конце эксперимента. В крови определяли общие гематологические показатели и показатели, отражающие функциональную активность печени.
Эритроциты, лейкоциты. Содержание эритроцитов изменялось в пределах физиологических норм. При постановке на опыт их содержание в крови собак составляло 5,6±0,18 1012/л, через 12 час оно повысилось до 5,7±0,22 1012/л, после чего уменьшилось до 5,5±0,30 10,2/л (р 0,05).
Количество лейкоцитов также колебалось в незначительных границах (9,3±0,15 - 9,6±0,22 109/л). При этом минимальное их содержание регистрировалось перед проведением ТЭС, а максимальное - через 24 час после электростимуляции.
Гемоглобин. Концентрация гемоглобина в крови подопытных собак изменялась параллельно содержанию эритроцитов. В начале эксперимента его уровень составлял 115,0±8,20 г/л. Затем незначительно увеличился до 116,8±7,9 г/л, после чего понизился до 116,0±7,9 г/л.
Глюкоза. Содержание глюкозы в крови-собак перед проведением сеанса ТЭС находилось на относительно низком уровне (3,3±0,09 ммоль/л). Через 12 час после окончания эксперимента её содержание в крови подопытных животных достоверно повысилось до 3,6±0,07 ммоль/л (р 0,05), а через 24 час составляло 3,5±0,11 ммоль/л.
Общие липиды. У собак с дисфункцией печени до электростимуляции содержание общих липидов составляло 3,2±0,26 г/л, через 12 час после ТЭС оно находилось на том же уровне. Однако через 24 час содержание общих липидов в крови собак уменьшилось до 3,0±0,17 г/л.
Билирубин общий. До начала эксперимента и,через 12 час после проведения сеанса ТЭС содержание билирубина в крови собак находилось на одинаковом уровне и в среднем составляло 3,8 мкмоль/л. Через 24 час после проведения электростимуляции концентрация билирубина-в крови собак понизилась до 3,7±0,16 мкмоль/л.
Аминотрансфёразы, щелочная фосфатаза. Ферментативная активность аминотрансфераз крови у собак до проведения эксперимента находилась на относительно высоком уровне: АлАТ — 178,3±14,0; АсАТ — 89,6±8,7 мкмоль/л с. Последующие исследования показал и; что активность Ал AT через 12 час после сеанса ТЭС практически не- изменялась (1;70-5=Ы1,2. мкмоль/л с), а; через 24 час повысилась (182,5±12j0 мкмоль/л с). Ферментативная активность АсАТ. после введения налоксона и проведения сеанса ТЭС уменьшилась и через 12 час составляла 8Т,0±7,3 мкмоль/л с, ачерез 24 час-79,5±9 8 мкмоль/л с. Однако выявленные различия были статистически недостоверными (р 0;05);
Ферментативная активность, щелочнойi фосфатазы до начала эксперит мента составляла:489-8±20-9:мкмоль/л с, через? 12 час после введения.налок-сона и ТЭС несколько увеличилась и достигала 495,6±2Г,Г мкмоль/л с, однако через 24 час онавновь понизилась
Аналогичным образом изменялось и содержание альбуминов. До: начала эксперимента на их долю из всех фракций белка приходилось 50,5±3,07 %, после ТЭС их содержание в крови уменьшилось и находилось в пределах 49,7±3,11 - 48,8±2,09 %. Не отмечалось существенных изменений и со стороны а-глобулинов. До проведения электростимуляции их содержание в крови было минимальным (14,7±0,55 %), а затем оно незначительно повысилось и через 12 и 24 час соответственно составляло 15,8±0,63 и 15,0±0;54 % (p 0j05). Содержание у-глобулиноввшериод эксперимента находилось,практически на одинаковом уровне и изменялось в.небольших границах. 18,0±0j48 - 18,7±0;74 %.
