Содержание к диссертации
Введение
Глава 1. Обзор литературы 8
1.1 Особенности иммунной реактивности у человека в условиях Севера 8
1.2 Медико-биологические эффекты применения фукоидана 13
1.3 Применение фукоидана при различных иммунных патологиях 17
Глава 2. Материалы и методы исследования 26
2.1 Характеристика обследованных 26
2.2 Методы исследования 27
Глава 3. Результаты собственных исследований и их обсуждение 35
3.1 Состояние иммунной системы у людей с хроническими воспалительными процессами до и после приема фукоидана 35
3.2 Состояние иммунной системы у людей со злокачественными новообразованиями до и после приема фукоидана 41
3.3 Состояние иммунной системы у людей со вторичными иммунодефицитами дои после приема фукоидана 46
3.4 Определение механизма действия на клетки иммунной системы у беспородных белых мышей послевнутрибрюшинного введения фукоидана 55
Заключение 79
Выводы 90
Указатель литературы 92
- Особенности иммунной реактивности у человека в условиях Севера
- Применение фукоидана при различных иммунных патологиях
- Состояние иммунной системы у людей с хроническими воспалительными процессами до и после приема фукоидана
- Состояние иммунной системы у людей со вторичными иммунодефицитами дои после приема фукоидана
Введение к работе
Актуальность исследования. В современных условиях техногенного загрязнения, на фоне ухудшающейся экологической обстановки, изменений социальной структуры населения, проблемы здоровья населения становятся особенно актуальными. Важнейшее влияние на здоровье человека оказывает состояние его иммунной системы.
Климат и условия жизни на Севере не являются комфортными для человека. Длительное проживание на Севере формирует дисбаланс иммунных механизмов, фоновое напряжение иммунной системы с последующим сокращением резервных возможностей регуляции иммунного гомеостаза [30].
В современной литературе достаточно часто обсуждаются вопросы эффективности иммунокоррекции и иммунореабилитации при различных патологических процессах без достаточно полного выяснения механизмов функционирования иммунной системы в условиях иммуностимуляции. В то же время, использование иммуностимулирующего фактора оправдано при достаточно четком знании объекта и спектра влияния препарата, прямо и косвенно обусловленных спектра влияния препарата, механизма его воздействия, прямо и косвенно обусловленных реакций. Кроме того, влияние иммуномодулятора предоставляет возможность выявления резервных реакций регуляции иммунного гомеостаза. Это особенно важно знать относительно населения, проживающего в дискомфортных северных условиях.
Иммуномодуляторы растительного и водорослевого происхождения более эффективны, когда они получены из местного сырья. Мало того, использование местного сырья для получения биологически активных 'веществ экономически выгодно.
Ламинария, Бурая водоросль (Laminaria) произрастает в Белом, Карском и Баренцевом морях и запасы её имеют промышленное значение. Фукоиданы, полученные из бурых водорослей, являются биологически активными веществами, достаточно подробно изучены их антикоагуляционные, антиатеросклеротические и противоишемические свойства; сведения об их иммуномодулирующей способности единичны и касаются эффективности использования для лечения онкологических заболеваний. Состав фукоиданов неоднороден и могут быть получены фракции, имеющие различную молекулярную массу и степень сульфатирования молекул, что существенно влияет на уровень биологической активности. Представляет интерес исследование иммуномодулиругощих свойств фукоидана, полученного нами по оригинальной методике с применением экологически чистых способов выделения.
Цель и задачи исследования. Цель работы - установить особенности функционирования иммунной системы под влиянием фукоидана, выявить механизмы стимуляции и их взаимосвязь.
Для достижения поставленной цели были поставлены следующие задачи:
Изучить активность фагоцитов in vitro и in vivo в присутствии и под влиянием фукоидана
Установить особенности миграции лимфоцитов, моноцитов, нейтрофилов под влиянием сульфатированного полисахарида.
Выявить реактивные сдвиги пролиферативной фазы иммунной реакции под влиянием испытуемой фракции полисахарида.
Определить изменение процессов дифференцировки иммуно-компетентных клеток под воздействием фукоидана.
5. Изучить влияние фукоидана на гуморальный механизм иммунитета. Положения, выносимые на защиту, 1. Повышение активности и эффективности фагоцитарной защиты под воздействием фукоидана происходит за счет активизации процессов миграции, хемотаксиса нейтрофилов, моноцитов и макрофагов, а также увеличения захватывающей и переваривающей способности фагоцитов. 2. Фукоидан активирует процессы лимфопролиферации с развитием лимфопролиферации в иммунокомпетентных органах. 3. Под воздействием испытуемого препарата усиливается миграция нейтрофилов и моноцитов в место введения препарата. 4. Под воздействием испытуемого препарата выше уровень дифференцировки иммунокомпетентных клеток с увеличением содержания в периферической крови Т-хелперов, цитотоксических лимфоцитов и естественных киллеров. 5. Испытуемый полисахарид активирует экспрессию молекул СДЗ+, СД5+, СД25+, СД71+, HLA DR.+ на мембране лимфоцитов.
Научная новизна исследования. Впервые установлены механизмы стимулирующего влияния фукоидана на активность фагоцитоза (хемотаксис, захватывающую и переваривающую способность фагоцитов).
Впервые определены типы фагоцитов, которые активируются под воздействие испытуемого полисахарида;
Установлено, что сульфатированные полисахариды стимулируют пролиферацию лимфоцитов с увеличением концентрации моноцитов, нейтрофилов и лимфоцитов в периферической крови;
Определено, влияние фукоидана на дифференцировку иммунокомпетентных клеток - Т-хелперов, цитотоксических лимфоцитов, естественных киллеров и В-лимфоцитов;
Впервые установлено влияние фукоидана на повышение концентрации IL-Іри INF-y.
Научно-практическая значимость исследования. Полученные в работе новые данные могут быть использованы в практическом здравоохранении при разработке схем применения фукоидана для лечения иммунодефицитных состояний при хронических процессах, злокачественных новообразованиях, а также для профилактики экологически зависимых иммунодефицитов; в научных исследованиях в области физиологии, иммунологии, онкологии; в учебных учреждениях при подготовке врачей, биологов, фармакологов.
Результаты исследования внедрены в практику работы врачей МК «БИОКОР» для лечения имунодефицитных состояний (акт внедрения от 14.03.2005), а также в научных исследованиях для стимуляции фагоцитоза и нагрузочных тестах (акт внедрения 15.03.2005).
Работа выполнена в Институте физиологии природных адаптации Уральского отделения Российской Академии Наук (Архангельск) в соответствии с планом НИР (номер государственной регистрации 01.2.0010811).
Апробация работы. Результаты диссертационной работы доложены на конгрессе с международным участием «Человек и лекарство» (Москва, 2003), конгресса с международным участием «Современные проблемы аллерлгологии, иммунологии и иммунофармакологии» (Москва, 2003) конференции с международным участием «Биологические аспекты экологии человека» (Архангельск, 2004), симпозиуме с международным участием «Проблемы адаптации человека к экологическим и социальным условиям Севера» (Сыктывкар, 2004), заседании областного отделения научного Общества Российской академии аллергологов и клинических иммунологов (Архангельск, 2004), всероссийском научном форуме с международным участием имени академика В.И. Иоффе «Дни иммунологии в Санкт-Петербурге» (Санкт-Петербург, 2004).
По результатам диссертации опубликовано 10 работ.
Структура и объем работы. Диссертации изложена на 114 страницах машинописного текста и состоит из введения, трех глав, заключения, выводов. Работа иллюстрирована 17 таблицами и 8 рисунками. Библиография включает 80 отечественных и 112 зарубежных публикаций.
Особенности иммунной реактивности у человека в условиях Севера
Взаимодействие организма человека и окружающей среды определяется комплексным влиянием климатических и социальных факторов, наследственными свойствами организма и состоянием его адаптационных механизмов [14, 15 19, 36 47, 49]. Данный постулат нашел полное подтверждение при изучении особенностей функционирования организма человека в неблагоприятных условиях Севера. Воздействие неблагоприятных факторов на организм человека может быть непосредственным - на биологические ритмы физиологических функций, показатели эндокринной системы, обменные процессы, тканевое дыхание, ферментные системы через регуляторные механизмы, молекулярные, субмолекулярные и клеточный уровни [41, 60, 76]. Взаимодействие антропогенных факторов с суровой природой создает особенно мощный комплекс вредных влияний на организм человека, снижает его устойчивость и способствует росту заболеваемости [40, 42, 44, 56, 57, 59].
Хорошо изучены и обсуждены особенности реактивных реакций мужского и детского организмов [2, 3, 35, 46, 55], тогда как физическое состояние жителей Севера, особенности их адаптивных реакций, остаются до сих пор недостаточно исследованы [13, 18, 75, 183]. Изменения показателей, характеризующих функциональную активность иммунной системы, наблюдаются в дискомфортной для человека среде. Характер реактивных сдвигов на неблагоприятные факторы вначале однотипен и включает снижение содержания Т-лимфоцитов в периферической крови [22, 23, 24, 25, 26, 34, 53, 71,78,79].
Лимфокин-активированные клетки (ЛАК), некоторые из них несут маркеры CD3+, другие субпопуляции несут CD 16+. Для всех ЛАК характерен маркер СШ1Ь+. Моноклональные антитела против CD5+ проявляют митогенную активность вместе с антителами против CD3+ и интерлейкином-2 в выработке цитотоксических клеток [12, 17, 63, 87, 122]. Указанный процесс может происходить в результате повреждения Т-лимфоцитов, изменения микроциркуляции, рециркуляции и повышенной их потребности. Все дальнейшие процессы определяются спецификой, продолжительностью, степенью, дозой воздействия комплекса неблагоприятных факторов [137, 176, 127].
Особенностью иммунного статуса жителей Европейской территории страны является тенденция к низкому содержанию Т-лимфоцитов и сывороточных IgA на фоне высоких концентраций HTOB,Ig М и Ig G. Низкое содержание Т-лимфоцитов компенсируется в некоторой степени общим увеличением лимфоцитов, но, несмотря на это, абсолютное их количество в средних результатах несколько ниже общепринятых границ [21, 22, 23, 24, 25, 30,57,58,81, 182].
Условием, определяющим направленность формирования экологически зависимых иммунодефицитов, является состояние одного из важнейших инициирующих и заканчивающих процесс иммунной реакции механизмов защиты - фагоцитоз. Дефицит фагоцитарной защиты это не только высокий уровень воспалительных процессов и их осложнений, но и нарушение обмена веществ, дефект внутриутробного развития, ускоренное старение, рост патологии аутоиммунного и онкологического профиля [22, 45, 70, 82]. Фагоцитарная и функциональная активность нейтрофильных лейкоцитов на Севере в значительной степени снижена [32, 52, 78, 89, 136].
Лимфоцитоз в периферической крови под воздействием общего охлаждения обеспечен В-лимфоцитами. Это результат более сильного торможения Т-лимфоцитоза, а также более быстрого перехода Т-клеток из циркуляции в ткани. Динамический анализ лимфопролиферативных реакций, выявляемых у коренных жителей Европейского Севера, дает основание полагать, что лимфопролиферация воспалительного характера переходит впоследствии в лимфопению и нейтропению, которые отражают дизадаптационные процессы и нарушение баланса в системе механизмов иммунного гомеостаза. Таким образом, главной причиной лимфопений среди жителей северных территорий является широкое распространение состояний с признаками лимфопролифераций [23, 26, 30, 39, 70, 185].
Дефицит сывороточного IgA является довольно распространенным вариантом иммунного дисбаланса на Севере [34, 54], что свидетельствуют косвенно об активизации аутоиммунных процессов [45, 178] и нестабильности ситуации по аутосенсибилизации [20, 24, 29, 88].
Для Севера характерна высокая распространенность значительных концентраций IgM [34, 79], что является не только отражением напряженности гуморальной защиты против возбудителей, но и аутосенсибилизацией, значительная частота которой является особенностью иммунного статуса северян [44]. Установлена значительно более высокая частота выявления аутоантител у практически здоровых, родившихся и живущих на Севере [21, 27, 33,71].
Общепринято считать, что реагины отражают состояние аллергии, связанное с каскадом освобождения большого количества вазомоторных аминов, вызывающих сосудистые реакции, спазм гладкой мускулатуры, повышение проницаемости мембран [16, 17, 73, 102, 130, 132], В большом количестве работ, проведённых на Севере, нашел факт подтверждения наличия аномально высоких концентраций в крови Ig Е. Также выявлено аномально высокие концентрации циркулирующих иммунных комплексов среди взрослых жителей, что влияет на уровень заболеваемости, связанной с нарушением микроциркуляции, клеточной кооперации и фагоцитоза [24, 63, 69, 72].
Выявлен высокий уровень аутосенсибилизации у практически здоровых жителей Севера, проживающих в Архангельской области, Республике Коми и Ненецком Автономном округе. Повышенные уровни содержания антиядерных аутоантител сочетаются с наличием целого спектра аутоантител к рецепторам клеточной мембраны и гормонам. При этом регистрируются довольно высокие концентрации аутогемагглютининов, лейкоагглютининов, лимфоцитотоксинов. Повышенное содержание наблюдается обычно на фоне общей аутосенсибилизации с широким спектром выявляемых аутоиммуноглобулинов. Частота регистрации повышенных концентраций аутоантител заметно нарастает с увеличением продолжительности светового дня [31, 60, 65, 68].
Распространённость иммунодефицитных состояний на Севере, по всей вероятности, не связана с прямым повреждением иммунокомпетентных клеток. Одним из важнейших звеньев патогенеза дисбалансов является изменение реактивности различных типов клеток. С этих позиций наиболее сильным воздействием могут обладать нейтрофильные лейкоциты, самая большая популяция клеток в составе лейкограммы. Полиморфноядерные нейтрофильные лейкоциты продуцируют высоко реактивные метаболиты кислорода, фактор некроза опухоли а, угнетают цитотоксичность естественных киллеров, подавляют пролиферативный ответ лимфоцитов. Установлено: характерная для северян персистирующая нейтропения коррелируется в мембранных CD8+, CD 16+ , CD4+, а также HLA-DR+. Следовательно, нейтропения на Севере возникает в результате клеточной и комплемент зависимой цитотоксичности с активацией экспрессии мембранных антигенов комплекса гистосовместимости класса 2 [10, 32, 66, 96, 97, 100, 105, 109]. Увеличение содержания CDllb является компенсаторной реакцией, в какой-то степени снижающей эффект лимфопении и торможения спонтанной РБТЛ [124].
Применение фукоидана при различных иммунных патологиях
Приведенные данные свидетельствуют о важности изучения вопросов, связанных с использованием иммунокорректирующих и иммуномодулирующих препаратов в комплексе средств, направленных на профилактику и лечение хронической патологии, иммунодефицитных состояний различной этиологии, [38, 67]. К настоящему времени в литературе имеется достаточное число доказательств роста числа заболеваний, обусловленных нарушениями системы иммунитета. Зависимость между заболеваниями, связанная с иммунопатологией, состоянием иммунного статуса населения и степенью экологического неблагополучия в регионе установлена при обследовании населения ряда городов и регионов страны, характеризующихся различными климато-географическими особенностями [5, 6,7].
Доказано, что при динамическом слежении за иммунным статусом населения, особенно в экологически неблагоприятных регионах, можно выявить развитие нарушений иммунитета на доклинических этапах развития заболевания, установить частоту заболеваний с нарушением иммунитета в регионе [71, 72].
Многие данные свидетельствуют о влиянии фукоидана на ВИЧ-инфекцию. Этот процесс основывается на ингибировании адсорбции между вирусом ВИЧ и СД4-КВ результате этого происходит взаимодействие фукоидана с молекулой белка экспрессированной на поверхности СД4+, чтобы не произошло взаимодействие белка gpl20 клеточной оболочки вируса с СД4+. Механизм этого ингибирования определяли с помощью рекомбинированной СД4+ (гТ4) и gpl20 (rgpl20), чтобы непосредственно изучить их молекулярную взаимосвязь в присутствии других вирусных и клеточных структур. Декстран сульфат так же, как фукоидан, подавлял взаимодействие гТ4 и rgp!20. Исследования показали, что фукоидан и СД4+ ингибировали соединение rgpl20, а также фукоидан вступал в реакцию с участками на СД4+, с которыми антитела не связываются [99, 129, 138, 187]. Недавние исследования показывают, что сульфатированные полисахариды (декстран сульфат и фукоидан) снижают возможность проникновения ВИЧ- инфекции, В опытах фукоидан показал более низкую активность против ВИЧ- инфекции по сравнению с декстран сульфатом (500 кДа) [151, 152]. При использовании нормальной человеческой сыворотки и EDTA-плазмы как источника S-белка и витронектина в связаной ферментом пробе иммуносорбента, фукоидан вызывает депонирования сывороточной формы S-белка на иммобилизированой СД4+ и rgpl20. Это объясняет эффект ингибирования ВИЧ [153, 170].
Отдельные работы свидетельствуют, что человеческий сывороточный белок Mal-HSA подавляет вирус иммунодефицита человека тип-1 (ВИЧ-1) in vitro. Необходимо также ингибировать взаимодействие между неинфицированными СД4+- клетками и ВИЧ-1 инфицированными клетками для предотвращения образования синсидия. Взаимодействие между неинфицированными СД4+ клетками и ВИЧ-1 блокировалось фукоиданом, который обладает анти-ВИЧ активностью и подавляет транскриптазную деятельность ВИЧ-1 [86, 135, 173].
Существуют мнение о ведущей роли L-селектина (СД62Ь) в аллергической реакции, которая блокируется фукоиданом. Эффект этой реакции обнаружен в ингибировании рецепторной функции СД62Ь [147]. Изучено ингибирующее влияние сул ьфатиро ванных полисахаридов - фукоидана и гепарина на взаимодействие Р-селектина с модельным углеводным лигандом in vitro и способность фукоидана ингибировать экстравазацию лейкоцитов при экспериментальном перитоните у крыс. Рецепторную активность Р-селектина in vitro оценивали по его способности связывать меченный биотином синтетический лиганд - Sialyl-Lea/x, конъюгированный с полиакрил амидом (РАА). Фукоидан и гепарин ингибировали связывание меченого лиганда как с очищенным Р-селектином, так и с активированными тромбоцитами, экспрессирующими Р-селектин на поверхности. Активность фукоидана на два порядка величин превышала ингибирующую активность гепарина. Поскольку Р-селектин играет важную роль в развитии ранней фазы воспаления, изучено также противовоспалительное действие фукоидана при Р-селектинзависимом перитоните у крыс. Перитонит вызывали внутрибрюшинным введением раствора пептона и характеризовали как по увеличению общего числа клеток в перитонеальном экссудате, так и по процентному содержанию нейтрофилов.
Внутривенное введение фукоидана вызывало зависимое от дозы и времени ингибирование выхода нейтрофилов в брюшную полость. Минимальная доза фукоидана, ингибирующая выход нейтрофилов на 96,8± 2,9%, составила 0,8 мг на крысу. Наилучший ингибирующий эффект достигался при инъекции фукоидана в первые 15 мин после введения пептона. Значительный эффект (около 80% ингибирования) наблюдался также при через 1,5 часа. Введение фукоидана через 2,5 часа после иньекции пептона не оказывало заметного ингибиругощего действия. Можно предположить, что фукоидан блокирует воспаление на ранней стадии его развития за счет взаимодействия его с Р-селектином.[64, 114].
Селектин играет важную роль в воспалительных реакциях, он усиливает взаимодействие между лейкоцитами и эндотелиальными клетками. В эксперименте у мышей при искусственно созданном колите при использовании фукоидана происходит снижение повреждающего действия на слизистую оболочку [171, 192]. Особый интерес вызывает роль селектина при недостаточной перфузии в печени. При использовании фукоидан не подавляет активацию комплемента в течение перфузии и ингибирует селектин-зависимые взаимодействие между лейкоцитами, тромбоцитами и сульфат-содержащими политиканами на поверхности сосудистого эндотелия [133].Основное действие фукоидана на Р-селектиновй лиганд при взаимодействии in vitro - это способность ингибировать трансудию лейкоцита при перитоните. Деятельность Р-селектина in vitro основана на способности связывать лектин меченый синтетический лиганд с фукой даном. Фукоидан ингибировал взаимодействие меченого лиганда и очищенного Р-селектина и активированных тромбоцитов экспрессируемых Р-селектин на поверхности.
Состояние иммунной системы у людей с хроническими воспалительными процессами до и после приема фукоидана
Обследовано 180 человек, с хроническим воспалительным процессом различной локализации в возрасте от 20 до 45 лет. В составе обследованных лиц 63 человек с диагнозом хронический бронхит в возрасте 25-45 лет, 67 человек с диагнозом хронический ринит (20-40 лет) и 50 человек с диагнозом острое респираторное заболевание (20-45 лет), все больные принимали фукоидан через рот в дозе 5 мг/кг в течение 4 недель.
Процент активных в реакции фагоцитоза нейтрофильных лейкоцитов до лечения в средних результатах составляет 43,54±2,8б%, , что существенно ниже общепринятых значений, а фагоцитарное число 3,21±0334. После курса лечения происходит значительное увеличение содержания функционально активных нейтрофилов до 85,26±13,21%, фагоцитарное число составляет 5,62±0,65 у 89,57 и 87,53 % обследованных (табл. 1),
Общее содержание Т-клеток в средних результатах находится в пределах CD5+- 1,18±0,27х109кл/л, зрелых функционально активных CD3+ -1,16±0,18х109 кліп. В результате применения фукоидана происходит увеличение клеток с рецепторами CD5+ и CD3+ соответственно до 1,28±0,19 и 1,23±0,21 х109кл/л.(р 0,05) у 66,21% и 63,95%.
Содержание В-лимфоцитов довольно значительно и даже в средних результатах несколько превышает общепринятые границы 0,54±0,11 х109 кл/л; после применения фукоидана уровень содержания В-лимфоцитов заметно снижается (0,46±0,15 х109кл/л) у 40,21% обследованных.
В целях выяснения путей активизации лимфоцитов изучали содержание фенотипов с рецепторами к IL-II (CD25+), трансферрину (CD71+) и антигенам гистосовместимости класса II (HLA DR+).
Содержание указанных клеток во всех случаях было достаточно велико и в среднем составляет (соответственно 0,82±0Д7; 0,65±0Д2 и 0,72±0Д2х109 кл/л). Фоновая активизация иммуннокомпетентных клеток у людей с хроническим воспалительным процессом обеспечивается с участием трех вариантов пролиферации посредством IL-II, трансферрина и антигенов гистосовместимости класса II. В результате проведенного курса лечения регистрируется увеличение концентраций активированных лимфоцитов (соответственно 1,28±0,13 хЮ9 кл/л, (р 0,05); 1,24±0,23 х109 кл/л, (р 0,01); 0,87±0,11 хЮ9 кл/л), увеличение происходило у 59,45% (CD25+), 61,76% (CD71+) и 39,68% (HLA DR+) людей.
Повышенная фоновая активизация иммунокомпетентных клеток оказывает влияние на содержание и соотношение дифференцированных Т-хелперов и цитотоксических лимфоцитов. Концентрации Т-хелперов (CD4+) даже в усредненных результатах в пределах нормы (0,72±0,18х109 кл/л). Концентрации цитотоксичных лимфоцитов (CD8+) велики (0,68±0,13х109 кл/л). Содержание естественных киллеров в среднем составили 0,48±0,11х109 кл/л. Через месяц применения фукоидана происходит изменение в сторону уменьшения в уровне содержания Т-хелперов и составляет 0,55±0,15х109 кл/л у 49,34%, концентрация цитотоксических лимфоцитов не претерпевала значительных изменений (0,67±0,19 хЮ9 кл/л), а содержание естественных киллеров увеличилось до 0,69±0,14 хЮ9 кл/л (р 0,05) у 53,59% обследованных.
Уровни сывороточных иммуноглобулинов характеризуются высоким содержанием IgM, IgE и широкой распространенностью дефицита IgA (табл. 2). В средних результатах концентрации IgM составили 1,94±0}32 г/л, дефицит IgA наблюдается у 86% обследуемых при усредненном содержании 0,99±0,23 г/л. Содержание IgG у всех обследуемых находится в пределах физиологических колебаний. Дисбалансу содержания сывороточных иммуноглобулинов соответствует увеличение концентрации циркулирующих иммунных комплексов как средних, так и крупных по молекулярной массе. В усредненных результатах и те, и другие, особенно средние, в значительной степени превышают предельный уровень (2г/л). После приема фукоидана происходит снижение содержания IgM (1,23±0,37 г/л) у 56,21% обследованных, IgE (56,38±8,23 ед/мл) у 47,69%, концентрация IgA незначительно увеличивается под действием препарата до 1,09±0,22 г/л у 60,08%, а содержание IgG не претерпевает значительных изменений (15,58±1,11 г/л).
С этих позиций было интересно проверить изменения, происходящие с различными цитокинами (табл. 2). Так концентрации IL-1 при хроническом воспалительном процессе находятся выше физиологической нормы, особенно это характеризуется соотношением его форм IL-Ia и IL-p. Концентрация IL-a более чем в 2 раза выше концентрации IL-p, что не характерно для физиологической нормы (соответственно 0,9б±0,13 и 0,46±0,07 пг/мл). Применение фукоидана в течение 4 недель снижает уровень содержания IL-a (0,64±0,11 пг/мл) у 41,59%, в то же время уровень содержания IL-p увеличивается (0,88±0,09 пг/мл) у 61,52% обследованных.
Содержание IL-2 как основного цитокина, относящегося к воспалительным цитокинам находилось выше физиологической нормы, что свидетельствует о активации иммуной системы по пути гиперчувствительности замедленного типа с характерным повышенным уровнем IL-2, составило 0,66±0,09 нг/мл. Снижение уровня IL-2 до 0,52±0,07 нг/мл у 52,01% обследованных фиксируется после применения курса фукоидана.
В результате исследования у больных с хроническими воспалительными процессами выявлялись аномально высокие концентраций РЭА и ФНО-a. Кроме того, концентрации самого ракового эмбрионального антигена в усредненных результатах довольно велики 2,93±0,31 нг/мл, По имеющимся литературным данным, концентрации ракового эмбрионального антигена, превышающие 2нг/л, как правило, выявляются в более позднем возрасте (55 лет и старше). Подобные результаты, получены относительно ФНО-a, являющимся воспалительным цитокином широкого спектра действия.
Состояние иммунной системы у людей со вторичными иммунодефицитами дои после приема фукоидана
Концентрация CD 4+ находится в пределах физиологической нормы и не претерпевает каких-либо значительных изменений в результате приема фукоидана.Концентрация цитотоксических лимфоцитов (CD8+) в пределах физиологической нормы и составляет 0,33±0,12х109 кл/л, после курса препарата происходит значительное увеличение уровня цитотоксических лимфоцитов, и оно составило 0,56±0,11х109 кл/л (р 0,05), у 61,37% обследуемых.
С этих позиций было интересно проверить изменения, происходящие с различными цитокинами (табл. 3). Так концентрация IL-1 при злокачественных новообразованиях находится в пределах физиологической нормы и характеризуется соотношением его форм IL-la и IL-p. Концентрация IL-a почти в 2 раза выше концентрации IL-p, что не характерно для физиологической нормы (соответственно 0,46±0,03 и 0,26±0,08 пг/мл). Применение фукоидана в течение 4 недель увеличивает уровень содержания IL-a в у 51,26% обследуемых, в то же время уровень содержания IL-p увеличивается у 53,56% обследуемых, но преобладания концентрации IL-P над IL-a не происходит (соответственно 0,83±0,12 пг/мл (р 0,01), 0,58±0,06 пг/мл (р 0,05)).
Содержание IL-2 как основного цитокина, относящегося к воспалительным цитокинам, находилось выше физиологической нормы, что свидетельствует об активации иммуной системы по пути гиперчувствительности замедленного типа с характерным повышенным уровнем IL-2, составило 0,57±0,09 нг/мл. Снижение уровня IL-2 фиксируется после применения курса фукоидана и составляет 0,45±0,07 нг/мл у 43,57% обследованных.
В результате исследования у больных со злокачественными новообразованиями аномально высокие концентраций РЭА и ФНО-a. Кроме того, концентрация самого ракового эмбрионального антигена в усредненных результатах довольно велика 11,56±0,24 нг/мл. Подобные результаты получены относительно ФНО-a, являющегося воспалительным цитокином широкого спектра действия, средние концентрации которого составили 0,88±0,11 нг/мл. Действительно, повышенная фоновая активность иммунной системы обеспечивает сокращение резервных возможностей с последующим формированием дефицита и дефектов ее функционирования. Применение фукоидана в дозе 5 мг/кг значительно снижало уровень РЭА и составило 6,26±0,14 нг/мл (р 0,01) у 82,57% обследованных, в то же время происходит снижение активности ФНО-а (0,63±0,06 нг/мл; р 0,05) у 59,27% обследованных.
Проведенный корреляционный анализ показывает, что у людей со злокачественными новообразованиями 3-4 стадии до приема фукоидана не выявлено корреляционных связей. После приема фукоидана нами выявлены следующие корреляционные связи. Содержание IL2 в достаточной степени коррелирует с уровнями CD4+ и CD8+ (г=0,42 и 0,49); TNF-ct коррелирует с уровнями CD 16+ (г=0,51).
В содержании ИНФ-у происходят значительные изменения в сторону увеличения концентрации с 1,34±0,34 до 2,92±0,23 пг/мл (р 0,01) у 86,55% больных.
Фукоидан в дозе 10 мг/кг в течение 4 недель увеличивает содержание естественных киллеров и цитотоксических лимфоцитов у больных злокачественными новообразованиями, что повышает эффективность противоопухолевого иммунитета (соответственно с 0,48±0,09 до 0,77±0,11х109 кл/л (р 0,05) и с 0,33±0Д2 до 0,56±0,11х109 кл/л (р 0,05)) у 62,36% и 61,37% обследованных.
У больных раком желудка с дефицитом содержания лимфоцитов с рецептором к трансферину после курса лечения увеличивается содержание Т-лимфоцитов с рецептором к интерлейкину-2 (с 0,66±0,13 до 0,87±0,12х109 кл/л, (р 0,01), CD71+ (с 0,49±0,06 до 1,19±0,33х109 кл/л, (р 0,01) и HLA DR+ (с 0,5б±0,14 до 0,84±0,15хЮ9 кл/л, (р 0,05)).
Через 1 месяц после применения фукоидана регистрируется увеличение концентрации IL-la с 0,46±0,07 до 0,83±0,12 пг/мл (р 0,01), в то же время концентрация IL-lp значительно увеличивается с 0,26±0,07 до 0,58±0,06 пг/мл (р 0,05) у 51,26% и 53,56% обследованных.
У людей, страдающих злокачественными новообразованиями, фукоидан увеличивает содержание интерферона-у с 1,34±0,34 до 2,92±0,23 пг/мл (р 0,01) у 86,55%, при снижении уровня РЭА с 11,56±0,24 до 6,26±0Д4 нг/мл, (р 0,01) у 82,57% больных.
У больных раком выявляются повышенные концентрации ФНО-а (0,88±0,11 нг/мл), применение фукоидана снижает концентрацию ФНО-а (0,63±0,06 нг/мл, (р 0,05) у 59,27% больных.
Корреляционные связи выявлены после приема фукоидана между содержанием интерлейкином - 2 и CD4+, CD8+ (г=0,42 и 0,49); TNF-a, CD16+ (1=0,51).
