Введение к работе
Актуальность темы исследования. Учение о физиологической роли микроэлементов в организме, начатое фундаментальными работами академиков В.М. Вернадского (1927), А.П. Виноградова (1962, 1982), В.В. Ковальского (1960, 1974, 1981) и исследованиями А.О. Войнара (1960), Р.Н. Одынец (1976), В.В. Ермакова (1968, 2008) и многими другими исследователями, в последние годы выходит на новый уровень изучения интегративных механизмов клеточного метаболизма при недостатке или избытке микроэлементов в среде и кормах животных. Микроэлементный гомеостаз является одним из основных показателей нормального функционального состояния организма животных. Учитывая, что микроэлементы входят в состав и активизируют большое количество ферментов, гормонов, витаминов, нуклеиновых кислот и играют важнейшую роль во всех физиологических механизмах поддержания в норме работы функциональных систем организма, их недостаток является стресс-фактором, под влиянием которого изменяется весь ход обменных процессов и ухудшается функциональное состояние животных. При этом скрытый синдром гипомикроэлементозов, вызываемый недостатком микроэлементов в среде, все чаще диагностируют в различных геохимических регионах страны (Ермаков, 1967, 2008; Кутепов, 2003; Родионова, 2004; Самохин, 2004, 2008 и др.). Явных клинических симптомов при скрытых формах гипоэлементозов не наблюдается (Самохин, 2004, 2008; Ярован, 2008; Родионова и др., 2011).
В тоже время длительное воздействие различных стресс-факторов, например, низкое содержание физиологически важных микроэлементов в кормах, сопряжено с изменениями активности стресс-гормонов (Макаров, 2010), гемопоэза, метаболизма минералов, белков, углеводов, витаминов, липидов, процессов свободнорадикального окисления (СРО) и антиоксидантной системы (АОС), являющихся одним из фундаментальных молекулярно – клеточных механизмов патогенеза различных патологий, в т.ч. скрытых форм гипомикроэлементозов животных. Поэтому изучение интегративного влияния недостающих организму микроэлементов на механизмы поддержания постоянства внутренней среды организма, функциональное состояние эндокринной системы, метаболизм минералов, белков, антиоксидантных витаминов, углеводов, липидов, гематологические параметры, а так же свободнорадикальные процессы и различные звенья экзогенной и ферментативной антиоксидантной защиты является весьма актуальной задачей и имеет исключительное значение в осуществлении защитных и адаптационных реакций, сохранении гомеостаза, а так же в профилактике и коррекции различных форм гипомикроэлементозов у животных, находящихся в условиях низкого содержания ряда микроэлементов в среде.
Все вышеизложенное имеет не только актуальное, но и важное концептуальное и инновационное значение при комплексной разработке принципов выбора и применения недостающих микроэлементов с целью профилактики и коррекции скрытых форм гипомикроэлементозов, включающее влияние на гематологические, обменные процессы, повышение интегративных функций роста, развития и продуктивных качеств различных видов животных не только в Астраханской области, но и других регионах России.
Степень разработанности темы исследования характеризуется крайне недостаточной изученностью физиологического состояния, в т.ч. микроэлементного и свободнорадикального гомеостаза и антиоксидантного статуса животных в геохимических условиях Астраханской области. Очень мало данных имеется в литературе о крайне важной и актуальной проблеме комплексного влияния недостающих животным микроэлементов в конкретных регионах РФ на интегративные процессы минерального, белкового, углеводного и липидного метаболизма, гематологические показатели, работу эндокринной и антиоксидантной систем и морфо-функциональные параметры различных видов животных. Нарушение согласованности работы этих систем у животных при низком уровне в кормах физиологически важных микроэлементов может привести к накоплению в организме токсических продуктов свободнорадикальных процессов, которые подавляют клеточные механизмы энергообеспечения, ингибируют мембрано-зависимые ферменты, биосинтез аминокислот, белка, нуклеиновых кислот, нарушают проницаемость транспорта веществ через клеточные мембраны. Это предопределяет замедление роста и развития животных и снижение интегративных функций молокообразования, особенно у высокопродуктивных симментальских коров, завозимых в регион Нижней Волги (Астраханская область) из-за рубежа, в период их адаптации к новым геохимическим условиям.
Все вышеизложенное теснейшим образом связано с проблемой продовольственной безопасности страны и обеспечением населения России собственным качественным мясом и молоком от животных из различных геохимических регионов, что также обуславливает актуальность, цели и задачи настоящей работы.
Цель исследования заключалась в выявлении особенностей функционального состояния различных видов животных при скрытых формах комбинированных гипомикроэлементозов и их коррекции.
Для достижения поставленной цели нами были определены задачи:
изучить динамику обмена микроэлементов (Co, Se, J, Cu, Mn, Mo, Zn, Fe) при различных функциональных состояниях животных в геохимических условиях Астраханской области;
выявить видовые особенности физиолого-биохимических показателей жвачных и разновозрастных всеядных животных в условиях низкого уровня микроэлементов в среде и кормах;
изучить стационарный уровень свободнорадикального окисления и антиоксидантной защиты животных в различных физиологических состояниях;
исследовать гематологические показатели различных видов животных при скрытых формах гипомикроэлементозов;
выявить взаимосвязь макро- и микроэлементов, поступающих с кормом, с функционированием различных систем организма при скрытом комбинированном гипомикроэлементозе;
разработать модель фармакокинетики селеноорганического препарата диацетофенонилселенида (ДАФС-25) в организме всеядных животных;
концептуально обосновать выбор и необходимость применения конкретных физиологически важных микроэлементов для решения проблемы профилактики и коррекции скрытых форм гипомикроэлементозов с целью повышения уровня интегративных функций роста, развития и продуктивности животных.
Научная новизна: работа выполнена в русле современной интеграционной физиологии продуктивных животных. Впервые в геохимических условиях Нижней Волги комплексно, на единой методической основе, изучено содержание микроэлементов в основных компонентах наземных экосистем. Одновременно исследован физиологический статус завезенных из Австрии в Астраханскую область симментальских коров и местных симментализированных животных, а так же растущих поросят белой крупной породы.
Оригинальный характер носят комплексные исследования по выяснению видовых особенностей физиологического механизма влияния недостающих организму животных физиологически важных микроэлементов, включающих регуляцию обмена веществ и его коррекцию органическими препаратами селена, йода и легкоусвояемыми солями меди и кобальта, и их влияние на гемопоэз, общий Ca, неорганический Р, Se, J, Co, Cu, Mn и Zn, кислотную емкость, глюкозу, уровень антиоксидантных витаминов Е, А, С, содержание общих липидов, общего холестерина, триглицеридов, продуктов перекисного окисления липидов (ДК, МДА, основания Шиффа), активность антиоксидантных ферментов - каталазы, СОД, ГПО, показатель состояния антиоксидантной системы – перекисной резистентности эритроцитов (ПРЭ) и гормонов гипофиза (АКТГ), надпочечников (кортизола) и щитовидной железы - тироксина (Т4), естественной резистентности животных к оксидативному стрессу, количества в крови общего белка и его фракций, а так же аминокислот и морфо-функциональных параметров органов животных, которые в Астраханской области ранее не проводились.
Впервые проведенные в изучаемом регионе балансовые (обменные) опыты на сельскохозяйственных животных в различном физиологическом состоянии и исследования функционального статуса животных выявили у жвачных скрытый гипомикроэлементоз йода, селена и кобальта, а у разновозрастных всеядных – йода, селена и меди в процессе их выращивания.
Разработан способ решения проблемы профилактики и коррекции скрытых форм комбинированных гипомикроэлементозов животных различных видов. Работа вносит определенный вклад в изучение механизма взаимосвязи обмена микроэлементов с метаболическими процессами и гематологическими параметрами, а так же с показателями свободнорадикального окисления, антиоксидантной системой защиты и эндокринной системы.
В результате впервые проведенных на единой методологической основе исследований решена проблема комплексного изучения функционального состояния жвачных и всеядных животных в геохимических условиях Астраханской области - низкого уровня физиологически важных микроэлементов в среде и кормах. Разработана физиолого–биогеохимическая концепция выбора и применения недостающих микроэлементов в кормах и организме животных при скрытых формах комбинированных гипомикроэлементозов с целью повышения интегративных функций увеличения роста, развития и получения дополнительного количества высококачественного мяса и молока.
Теоретическая и практическая значимость.
Проведенные исследования, и анализ видовых и возрастных особенностей физиологического статуса животных в геохимических условиях низкого уровня в кормах Co, Se, J и Сu позволили на комплексной методологической основе изучить корректирующее влияние недостающих микроэлементов на различные функции организма; выявить интегративную взаимосвязь функций микроэлементов в организме с гематологическими параметрами, обменом белков, углеводов, липидов, витаминов; исследовать развитие окислительного стресса, свободнорадикальных процессов и изучить особенности антирадикальной защиты разных видов животных, а также определить влияние недостающих минеральных элементов питания на морфо-функциональные показатели органов, тканей и организма жвачных и всеядных животных. Разработанная научно-обоснованная физиолого-биогеохимическая концепция выбора и комплексного применения недостающих микроэлементов позволяет улучшить функциональное состояние завозимых и местных видов животных, осуществлять коррекцию скрытых форм комбинированных гипомикроэлементозов, повысить резистентность организма к стресс-факторам, адаптационные возможности завозимых высокопродуктивных животных, осуществлять профилактику гинекологических заболеваний, увеличить эффективность использования питательных веществ кормов. Все вышеизложенное предопределяет улучшение интегративных функций роста, развития, и, в конечном итоге, повышает процессы молокообразования и молокоотдачи, что обеспечивает высокое качество молока и мяса животных.
Исследована фармакокинетика селенорганического препарата ДАФС-25 в организме животных. Полученные экспериментальные данные и практические результаты служат теоретической основой концепции - выбора необходимых сельскохозяйственным животным микроэлементов в различных регионах России.
Результаты исследований носят инновационный характер, выданы фермерам и внедрены в практику животноводства в ряде хозяйств в Астраханской области. Кроме того, материалы диссертации включены в лекционные курсы «Физиология и этология сельскохозяйственных животных», «Диагностика болезней сельхозживотных», «Внутренние незаразные болезни животных» для студентов-ветеринаров аграрного факультета Астраханского государственного университета и студентов ветеринарного факультета Воронежского государственного аграрного университета имени Петра I, что подтверждено актами и картой обратной связи № 369 от 09.04.2011г.
Методология и методы исследования
Настоящая работа представляет собой законченное комплексное морфо-функциональное исследование, позволяющее принципиально по-новому осуществлять выбор и использование в питании различных видов животных недостающих в кормах микроэлементов; оценивать геохимическую обстановку Астраханской области и других регионов, предварительно изучив в балансовых опытах потребность животных в микроэлементах и установив их дозы; определять интегративное влияние недостающих микроэлементов на общее функциональное состояние животных в условиях низкого уровня селена, йода, кобальта и меди в среде и кормах с целью улучшения их физиологического статуса, адаптации завозимых из Австрии симментальских коров в регион Нижней Волги и повышения продуктивных функций различных видов животных.
Методы постановки экспериментов.
Работа выполнена на кафедре ветеринарной медицины и совместной научно-исследовательской лаборатории фундаментальных и прикладных проблем биогеохимии, физиологии и ветеринарной медицины Волго-Каспийского региона Астраханского государственного университета и ГЕОХИ имени акад. В.И. Вернадского РАН в рамках научного направления по изучению влияния недостающих в среде и кормах физиологически важных микроэлементов на функциональные системы организма животных при различных формах гипомикроэлементозов. Пробы почв, воды, растений, кормов, органов и тканей животных для анализа на химический элементарный состав отбирались по биогеохимической методике В.В. Ковальского (1974) в различных районах Астраханской, Волгоградской и Саратовской областей в 1998–2010 гг. на одних и тех же станциях сбора региона Нижней Волги. Всего собрано и исследовано 2911 проб.
Экспериментальная часть работы с животными проводилась с 2006 по 2012 годы на жвачных (коровы, телки, телята симментальской породы, завезенные в Астраханскую область нетелями из Австрии в 2006 г. в ООО «Пойменное» и КРФ «Светлана», местный симментализированный крупный рогатый скот) и всеядных животных (растущие поросята в возрасте от 2 до 9-ти месяцев) в СПХ «Красноярец» ООО Рыбоагрогаз Красноярского района Астраханской области.
В каждую группу в балансовых опытах по методике Томмэ (1969) отбирали по десять аналогичных животных, а в научно-хозяйственных – по 30 - 40 голов с учетом породы, возраста, массы, надоя молока коров и его жирности, периода лактации, стельности и исследования их на туберкулез и бруцеллез. Проведено четыре балансовых опыта в различные сезоны года на одних и тех же коровах, находящихся на привязи и три – на растущих поросятах. Свиньи содержались в индивидуальных клетках, полы которых облицевали оргстеклом с отверстиями для стока мочи. Животные получали кормовые рационы, составленные по нормам и методике ВИЖа (Попов, 1967; Томмэ, 1971; Калашников, Фисинин и др., 2003). Каждый балансовый опыт продолжался 30 дней. Из них 20 дней - подготовительный период и 10 – учетный. Ежедневно в течение учетного периода взвешивались полностью за сутки и отбирались средние пробы (100 гр.) кормов, кала, мочи и молока коров для анализа на содержание микроэлементов. Низкий уровень в среде Co, Se, J и Cu, отрицательные балансы кобальта, селена и йода у коров в I (предварительном) опыте и важная физиологическая роль этих микроэлементов, предопределили выбор и определение дозировок подкормки коров кобальтом (CoCl2 6H2O) в дозе 25 мг (в пересчете на чистый металл это составляет 6,19 мг) и йода - 0,6-07 мг в виде органического препарата йода «ЙОДДАР» - заключение ГУНИИ питания №72/Э-9023/б-06 от 24.08.06, свидетельство № 77.99.3.У.9536 от 27.09.06. Учитывая, что минеральные формы селена у жвачных усваиваются в два раза хуже, чем у свиней, что вызвано взаимодействием солей селена с микрофлорой рубца и образованием нерастворимых комплексов (Dembinski et all., 1992), мы выбрали органический препарат селена ДАФС-25, в котором содержится 25% Se, в дозе 0,05 мг/кг массы тела. ДАФС-25 (1,5-дефинил-3-селенопентадион) является безвредным селенорганическим препаратом, получившим одобрение ветфармбиосовета Департамента ветеринарии РФ, регистрационный №ПВР2.04.0185-96. Порошок ДАФС-25 растворяли за 5 дней до применения в свежем стерилизованном подсолнечном масле. Микроэлементы давали жвачным животным с корочкой хлеба 1 раз в день на голову с учетом массы тела в опытных группах в течение 2, 3 и 4-го опытов.
Поросятам, кроме ДАФС-25 (0,2 мг/кг), давали еще ЙОДДАР в дозе 0,2 мг на голову в сутки и 0,5 мг/кг сернокислой меди. В 1 мг CuSO4 H2O присутствует 0,256 мг Cu. Раствор микроэлементов в балансовых опытах выпаивали растущим всеядным индивидуально при помощи шприца с резиновым наконечником. В научно–производственных опытах микроэлементы в тех же дозах, что и в балансовых опытах очень тщательно смешивали с кормом и кормили животных в течение месяца с месячным перерывом до конца экспериментов.
Физиолого-биохимические методы.
Физиологические показатели изучались у 128 жвачных (коровы, телята, бычки, нетели) и 186 всеядных (разновозрастные свиньи) животных. Температуру, пульс и частоту дыхания животных исследовали 3 дня подряд в начале и в конце каждого опыта по общепринятым методикам (Кудрявцев,1974).
Каротин, кальций и фосфор в кормах животных и жир в молоке коров определяли по И.П. Кондрахину (2004), а гидрохимические показатели воды исследовали по общепринятым методикам (Привезенцев, 1973).
Взятие крови для исследования осуществлялось из ушной и яремной вены в 2 пробирки, в одну из которых помещали гепарин, стерильным одноразовым шприцом. В крови изучали количество форменных элементов, содержание гемоглобина, гематокрит, лейкоцитарную формулу – по общепринятым методам (Кондрахин, 2004). В сыворотке крови рефрактометрически оценивали количество общего белка, с использованием рефрактометра RL (Польша), а альбумины и глобулины - электрофоретически по А.Е. Гурвич (1986), глюкозу – с помощью цветной реакции с орто-толуидином, щелочной резерв – диффузным методом, каротин - по Кари и Прейсу в модификации Юдкина (Кондрахин, 2004). Общие липиды в сыворотке крови исследовались с помощью набора реактивов «БИОТЕСТ» фирмы «LACHEMA», общий холестерин – с помощью набора «ХОЛЕСТЕРИН - 12 ВИТАЛ» (производства ООО «ВИТАЛ Диагностик-С», СПб), с использованием цветной реакции Либермана и Бурдаха по методу Илька (Пустохвалова, 1999). Триглицериды определяли фотометрически при длине волны 425 мн (Назаренко, 2005). Количество общего кальция и неорганического фосфора плазмы крови – методом фотометрического титрования по Б.Д. Кальницкому и др. (1988).
Содержание витамина Е в сыворотке крови исследовали с помощью жидкостной хроматографии на хроматографе «Минихром» со сканирующим УФ детектором. Количество витамина А – по S. L. Tailor et all (1976) Содержание аскорбиновой кислоты - по А.Т. Петровой и др. (1979). Активность каталазы определяли по методу М.А. Королюк (1988), который основан на способности H2O2 образовывать с солями молибдена стойкий окрашенный комплекс, по интенсивности которого определяли активность фермента. Активность супероксиддисмутазы (СОД) изучали по ее способности конкурировать с нитросиним тетразолием за супероксидные анионы по методу С.И. Чевари (1985). Активность глутатионпероксидазы исследовали по R. Paglian Valentine (1967).
Диеновые конъюганты (ДК) определяли спектрометрически по УФ – спектром поглощения раствора липидов сыворотки крови при 233 нм (Плацер и др.,1970). Малоновый диальдегид (МДА) – исследовали по методике М. Michara et. al (1980), В.С. Бузлама и др. (1997), основанной на том, что продукты перекисного окисления липидов (ПОЛ) при высокой температуре в кислой среде вступают в реакцию с 2-тиобарбитуровой кислотой (ТБК) с образованием окрашенного триметинового комплекса, экстрагируемого бутанолом, имеющим максимум поглощения при 532 нм. Соединения типа основания Шиффа в плазме крови определяли по А.В. Архиповой (2004) на спектрофлуорометре «F-4010» (Hitachi, Япония) при длине волны 200нм.
Перекисную резистентность эритроцитов (ПРЭ) или их гемолитическую стойкость под влиянием определенных концентраций H2O2 в физрастворе исследовали по А.А. Покровскому (1964) с помощью спектрофотометра СФ-46. Естественную резистентность животных исследовали, используя методику О.В. Смирновой, Т.А. Кузьминой (1966) с кишечной палочкой. Аминокислоты в мышечной ткани свиней определяли на автоматическом анализаторе Hd-1200 E.
Тироксин (Т4) в сыворотке крови животных изучали иммуноферментным методом на анализаторе «Униплан» (Матрешина, 1988). Принцип метода основан на конкуренции между адсорбированным на поверхности лунок планшета тироксином и свободным тироксином в анализированном образце за активные центры связывания аффинных антител к тироксину, меченых пероксидазой. В результате на поверхности лунок планшета образуются комплексы антитела-тироксин. Результаты реакции исследовали на спектрофотометре вертикального сканирования при длине волны 450 нм. Количественное определение уровня АКТГ и кортизола в сыворотке крови проводилось твердофазным иммуноферментным методом с помощью теста Biomerica ACTH ELISA на иммуноферментном анализаторе «Elisys Quattro» (Германия). Физиолого-биохимические анализы выполнялись в биохимической лаборатории Астраханского областного онкологического центра Астраханской области, лаборатории биохимии и иммуноферментных анализов «Рекон», совместной лаборатории кафедры ветеринарной медицины АГУ и лаборатории биогеохимии ГЕОХИ им. акад. В.И. Вернадского РАН и областной ветеринарной лаборатории. Содержание йода в биологических объектах определяли родамидно-нитритным методом, ГОСТ 28-458-90 в ФГУП «ГОССИНТЕЗБЕЛОК».
Микроэлементы в биологических объектах определяли в Астраханской областной ветеринарной лаборатории, АГТУ и НИПИгаз (ИТЦ ООО Газпромдобыча Астрахань) атомно-абсорбционным методом (Прайс, 1976; Брицке, 1982) на спектрофотометре «HITACHI» 180-50, с использованием ацетилена, устанавливая на спектрофотометре одноэлементные лампы для Co – 240,7 нм, а для Mn, Zn, Fe, Cu, Ni и Мо – соответственно: 279,5; 324,7; 213,9; 252,8; 232,0 и 283,3 нм. Селен во всех собранных образцах определяли по методу И.И. Назаренко и В.В. Ермакова (1971) в модификации Т.М. Гусейнова (1975), который основан на способности 3,3-диаминобензидина избирательно образовывать комплексное соединение с четырехвалентным селеном, что регистрировалось на флуорометре ЭФ-ЗМ с помощью ртутнокварцевой лампы и светофильтров: первичным ФК-1- с максимумом пропускания 366 нм, и двумя вторичными - с узким максимум пропускания при 530 нм.
Гистологические методики включали изготовление препаратов печени и почек: фиксация в растворе Буэна, проводка через спирты возрастающей концентрации, заливка в парафиновые блоки, окраска гематоксилин – эозином с докраской по Маллории (Волкова и др., 1982). Анализ и фотографирование гистологических препаратов осуществлялись в лаборатории гистологии кафедры гидробиологии и экологии Астраханского государственного технического университета с помощью микроскопа Olimpus BX-40, BH-2 под методическом руководством проф. Н.Н Федоровой.
Моделирование фармакокинетических процессов (всасывание, распределения, выведение) различных доз селеносодержащего препарата диацетофенонилселенида (ДАФС-25) в организме растущих свиней, осуществлялось методом вычисления статистических моментов кинетических кривых (Соловьев и др., 1980; Wagner, 1975; Пиотровский, 1968) для линейной системы.
Результаты исследований обрабатывали статистически на компьютере с использованием программного пакета анализа Microsoft Excel 97 Pro, Statistika. Определяли стандартные статистические характеристики: среднее арифметическое, коэффициент вариации, ошибки среднего арифметического и коэффициент корреляции. Достоверность различий определяли по t-критерию Стьюдента (при уровне значимости 0,01-0,05).
Основные положения, выносимые на защиту:
-
Выбору и применению микроэлементных добавок должно предшествовать комплексное изучение биогеохимической ситуации региона, анализ результатов обмена микроэлементов в балансовых опытах и физиологического статуса различных животных в конкретных условиях регионов РФ.
-
В условиях низкого уровня в среде и кормах селена, кобальта, йода и меди в регионе Нижней Волги (Астраханская область) разные виды животных имеют отличающиеся отрицательные балансы микроэлементов в организме. У жвачных (симментальские коровы) наблюдается дефицит в организме Se, Co и J, а у всеядных (поросята в постнатальном онтогенезе) - Se, J и Cu. Балансы марганца, железа, молибдена и цинка у всех видов изучаемых животных положительные при различных физиологических состояниях.
-
Применение недостающих организму животных микроэлементов при скрытых формах гипомикроэлементозов положительно влияет на параметры крови, доводя их до физиологической нормы, осуществляя коррекцию процессов обмена минералов, белков, аминокислот, углеводов, витаминов, липидов, эндокринной системы, увеличивает активность каталазы и супероксиддисмутазы (СОД), глутатионпероксидазы (ГПО) и уменьшает уровень продуктов перекисного окисления липидов: диеновых конъюгатов (ДК), малонового диальдегида (МДА) и оснований Шиффа (ОШ), уменьшая уровень эритроцитов, подверженных гемолизу перекисью водорода.
Степень достоверности полученных результатов, выводов и предложений диссертации обусловлена их всесторонним теоретическим анализом, личным участием автора во всех экспериментах и анализах, проведенных с помощью современных методик, отечественного сертифицированного высокоточного импортного оборудования, приборов и реактивов зарубежных фирм, соответствующих компьютерных программ, математического моделирования процессов фармакокинетики применяемых дозировок органомикроэлементных препаратов и практическими результатами применения и внедрения предлагаемых инновационных методов выбора недостающих животным микроэлементов, получением дополнительного количества молока и мяса лучшего качества и экономическим расчетом повышения рентабельности производства животноводческой продукции в геохимических условиях Астраханской области, актами производственной проверки и внедрения, статистической обработкой полученных данных и широкой публикации данных диссертации в монографиях, статьях, докладах на большом числе международных научных конференций, научных школах, симпозиумах и т.п.
Апробация работы.
Основные результаты диссертационных исследований доложены и обсуждены на Международной научно-практической конференции «Современные аспекты экологии, физиологии и экологического образования» (Назрань, 2007); II Всероссийской научной конференции молодых ученых с международным участием «Актуальные проблемы современных аграрных технологий и эколого–физиологических исследований» (Астрахань, 24-26 апреля 2007); 15-й Международной конференции и дискуссионном научном клубе «Новые информационные технологии в медицине, биологии, фармакологии, физиологии и экологии (Ялта, Гурзуф, Крым, Украина, 2007); VI Международной биогеохимической школы «Биогеохимия в народном хозяйстве: фундаментальные основы ноосферных технологий и физиологии микроэлементов» (Астрахань-Москва, 20-26 сентября, 2008); VI съезде физиологов Урала и Сибири (Барнаул, 2008); Международной научно-практической конференции «Аридное земледелие - способы и технологии интенсификации» (Москва, 4-6 августа, 2009); I Всероссийской научно-практической конференции («Естественные науки и современность: проблемы и перспективы исследований» (Москва, 1-3 сентября, 2009); VI Всероссийской конференции молодых ученых с элементами научной школы «Актуальные проблемы инновационного развития агропромышленного комплекса» (Астрахань, 29 октября-1 ноября, 2009); Национальной научно-практической конференции с международным участием «Свободные радикалы, антиоксиданты и патологии человека и животных» (Смоленск, 2009); VII Всероссийской научной конференции молодых ученых с международным участием «Актуальные проблемы инновационного развития агропромышленного комплекса: будущее АПК» (Астрахань, 20-24 апреля, 2010); VI mezinarodni vedecko-praktika conference «Effektivni nastroje modernich» (Praha, 2010); Международной конференции с элементами научной школы «Экокультура, физиология, фитобиотехнологии и животноводство с целью улучшения качества жизни на Каспии» (Астрахань, 7-10 декабря, 2010); VII Международной конференции «Актуальные проблемы инновационного развития АПК» (Астрахань, 2011); VII mezinarodni vedecko-praktika conference, Moderni vymozenosti vecly (Praha, 2011); VII Международна научна-практична конференция «Настоящи изследования и развитие» (София-Белград, 17-22 января, 2011); VII Международной биогеохимической школы «Фундаментальные и инновационные аспекты биогеохимии и физиологии микроэлементов» (Астрахань-Москва, 2011); VIII Mezinarodni vdecko – praktica conference «Moderni vjmo zenosti vedj. Dil 22, Biologicke vedy zemepisa geologie, fiziologia, Zvrolekarstvi. Praha, 1012»; VIII MEDZYNARODOWEJ NAUKOWI – PRAKTYCZNEJ KONFERENCE. STRATEGICZNE FIZIOLOGIA PYTANIA SWIATOWEJ NAUKI. (Vol.25 – Pizemysi, 07-15 lutego 2012 roku); VIII Всероссийская научная конференция студентов и молодых ученых. Будущее АПК: наука и технологии, инновации и бизнес. Астрахань. – 2012.
Публикации.
По теме диссертации опубликовано 60 научных работ общим объемом 60,4 п.л., авторский вклад – 46,8 п.л., в т.ч. изданы 5 монографий (одна - в Германии), 22 статьи - в научных журналах, рекомендованных ВАК РФ для докторских диссертаций, статьи и материалы в рецензируемых журналах, материалах международных научных школ и различных научных конференций - 33. Цитируемость публикаций автора в РИНЦ составляет 45.
Структура и объем диссертации.
Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, 7 глав результатов собственных исследований, заключения, выводов, списка литературы и приложения. Работа изложена на 346 страницах, включает 77 таблиц, иллюстрирована 30 рисунками. Список литературы включает 664 наименования, в т.ч. 172 - иностранных.
Автор выражает глубокую благодарность д.б.н., профессору Д.Л. Теплому за помощь в выборе актуальных направлений исследований, д.м.н., профессору И.Н. Полунину, д.м.н., профессору Н.Н. Тризно за ценные критические и конструктивные замечания и советы, оказавшие большое влияние на формирование концептуальной основы при анализе исследований и д.м.н., профессору Н.Н. Федоровой за большую методическую помощь при анализе морфофизиологических препаратов органов животных, а также руководителям фермерских хозяйств и работникам АПК Астраханской области за представленную возможность проведения экспериментальной работы с сельхозживотными.
