Содержание к диссертации
Введение
ГЛАВА 1. Процессы апоптоза в норме и при психической дезадаптации (Обзор литературы) 14
1.1. Апоптоз и его механизмы 14
1.1.1. Морфологические и биохимические проявления апоптоза 16
1.1.2. Природа апоптогенных сигналов и их рецепция 20
1.1.3. Система Fas/Fas-L в регуляции апоптоза клетки 23
1.1.4. Внутриклеточные факторы, участвующие в передаче сигналов при развитии апоптоза 26
1.1.5. Внутриклеточные ингибиторы апоптоза 28
1.2. Апоптоз в иммунной системе 30
1.2.1. Роль апоптоза в формировании клеток иммунной системы 30
1.2.2. Особенности апоптоза нейтрофилов 31
1.2.3.Апоптоз и патология иммунной системы 32
1.3. Стресс и апоптоз 37
1.3.1. Современные исследования апоптоза при депрессивных состояниях 43
1.3.2. Процессы апоптоза под влиянием ионизирующего излучения 47
CLASS ГЛАВА 2. Материалы и методы исследования CLASS 51
2.1. Характеристика клинического материала 51
2.2. Лабораторные методы исследования 64
2.3. Методы статистической обработки 68
ГЛАВА 3. Анализ апоптотическои гибели лимфоцитов и нейтрофилов периферической крови здоровых лиц 69
3.1. Общая характеристика апоптоза лимфоцитов и нейтрофилов в норме 69
3.2. Характеристика процессов запрограммированной гибели лимфоцитов и нейтрофилов в крови здоровых лиц разных возрастных категорий 73
ГЛАВА 4. Характеристика процессов апоптоза у лиц с посттравматическими стрессовыми расстройствами 79
4.1. Общая характеристика апоптоза лейкоцитов у лиц
сПТСР 79
4.2. Динамика процессов апоптоза у лиц с ПТСР в ходе реабилитации с применением цитофлавина 82
4.3. Запрограммированная гибель лейкоцитов у лиц с ПТСР в динамике терапии кортексином 88
ГЛАВА 5. Апоптоз лимфоцитов и нейтрофилов у лиц с депрессивной симптоматикой 93
5.1. Общая характеристика апоптоза лейкоцитов у лиц с депрессивным состоянием 93
5.2. Апоптоз нейтрофилов и лимфоцитов в динамике антидепрессивной терапии селективными ингибиторами обратного захвата серотонина 99
5.3. Запрограммированная гибель лейкоцитов периферической крови в динамике терапии растительным антидепрессантом 103
5.4. Оценка действия сочетанной фармакотерапии и
светотерапии на показатели апоптоза лейкоцитов 105
5.5. Сравнительная характеристика влияния антидепрессивной терапии на запрограммированную гибель нейтрофилов и лимфоцитов 114
Заключение 117
Выводы 128
Список литературы 131
Приложения 155
- Внутриклеточные факторы, участвующие в передаче сигналов при развитии апоптоза
- Характеристика клинического материала
- Характеристика процессов запрограммированной гибели лимфоцитов и нейтрофилов в крови здоровых лиц разных возрастных категорий
- Запрограммированная гибель лейкоцитов у лиц с ПТСР в динамике терапии кортексином
Введение к работе
Актуальность проблемы. Апоптоз - запрограммированная клеточная гибель, является нормальным физиологическим процессом, необходимым для жизнедеятельности организма, имеет широкое биологическое значение, вносит вклад в реакцию клеток на неблагоприятные внешние воздействия и проявление иммунной защиты Апоптоз - следствие действия на клетку различных факторов эндогенной и экзогенной природы Установлено, что апоптоз осуществляется и контролируется генетическими, иммунными, гормональными механизмами [Пушников Е Ф , Абросимов А Ю , 2001] Известна группа физиологических активаторов и ингибиторов апоптоза [Пальцев М А и др , 2003]
Апоптоз играет важную роль в реализации механизмов адаптации организма к воздействию различных стрессогенных факторов [Lucassen Р J et al, 2006] Стресс и гиперсекреция корти-зола являются индуцирующими факторами запрограммированной клеточной гибели лейкоцитов периферической крови [Heme V М et al, 2004] Эффекты кортизола в организме частично блокируются дегидроэпиандростероном, обладающим нейропротективным и стресспротективным действиями Определение уровня кортизола и нейростероидов характеризует состояние стресс-реализующих и стресс-лимитирующих систем организма и может иметь диагностическое и прогностическое значение [Herman J Р , Seroogy К , 2006]
Для современного развития общества характерно ускорение темпов жизни и, как следствие этого, обостряются проблемы психического здоровья населения [Sartorius N, 1999] Человек постоянно подвергается воздействию неблагоприятных, потенциально дестабилизирующих факторов, психическое состояние индивида в любой момент жизни может быть оценено с позиции адаптации-дезадаптации [Семке В Я и др , 1999] Психодеза-даптационные состояния понимаются как относительно стабильный симптомокомплекс, соответствующий регистру пограничных психических расстройств Пограничные психические состояния разделяют состояния психического здоровья (норма) с основными психическими заболеваниями, сопровождающимися психотическими и психопатологическими расстройствами [Семке В Я , 1999]
Невротические и депрессивные расстройства, основным причинным фактором в патогенезе которых является наличие
стрессового события, представляются адекватной моделью для изучения влияния стресса на регуляцию апоптоза
Актуальность данного исследования объясняется все большим распространением в последнее время невротических и депрессивных расстройств и возникающей в связи с этим необходимостью изучения индивидуальных реакций на психический стресс [Александровский Ю А , 1991, Краснов В Н , 1995, Семке В Я, 1999, Кекелидзе 3 И и др , 2000, Положий Б С, 2001, Чуркин А А , 2002, Levi L , 2001]
Невротические и депрессивные расстройства, представляя собой срыв адаптации, вне зависимости от причины, ее вызвавшей, развиваются по механизмам адаптации биологической системы к изменившимся условиям внешней или внутренней среды Нарушения механизмов регуляции, авторегуляции психических процессов под влиянием психотравмирующих факторов приводят к дисфункции всех гомеостатических систем организма В настоящее время во многих группах населения (субъекты образовательного процесса, военнослужащие и т д) формируются новые функциональные системы на уровне организма, обеспечивающие адаптацию к определенным условиям при воздействии длительных факторов Практически всегда выявляются группы риска развития процессов дезадаптации, характеризующиеся низкой величиной психического и физического здоровья [Васильев В Н , 2005, Медведев М А , 2005]
В последние годы в литературе представлены данные об участии и возможной роли нарушений процессов апоптоза в этиологии и патогенезе невротических и депрессивных расстройств [Ветлугина Т П , Волкова Е М , 1999, Черных Е И , Семке В Я, 1999, Мороз И, Александровский Ю А, 2000, Eilat Е , Mendlovic S , 1999, Lucassen Р J et al, 2001, Lee A L et al, 2001, Lista Varela A , 2003, Serafeim A et al, 2003]
Таким образом, представляется актуальным комплексное изучение апоптоза лейкоцитов периферической крови у лиц с невротическими и депрессивными расстройствами на клеточном и рецепторном уровнях и исследование факторов, участвующих в регуляции данного процесса
Цель исследования - изучение процессов апоптоза лейкоцитов периферической крови и его регуляции в норме и у лиц с психической дезадаптацией на модели невротических и депрессивных расстройств
Задачи исследования:
-
Изучить экспрессию FAS-рецептора как маркера апоптоза лимфоцитов и оценить морфологические признаки апоптоза нейтрофилов и лимфоцитов у здоровых лиц и лиц с психической дезадаптацией
-
Определить уровень гормонов стресс-реализующих и стресс-лимитирующих систем (на модели дегидроэпиандро-стерона и кортизола) и их взаимосвязь с показателями апоптоза у здоровых лиц и у лиц с ассоциированными со стрессом расстройствами
-
Исследовать апоптоз лейкоцитов, индуцированный действием различных регуляторных факторов (гипертермии, дегид-роэпиандростерона и синтетического глюкокортикоида пред-низолона) в нагрузочных пробах in vitro
-
Изучить влияние различных схем фармакотерапии на запрограммированную гибель лейкоцитов периферической крови у лиц с невротическими и депрессивными расстройствами
Научная новизна исследования. В результате проведенного комплексного исследования с использованием современных методов выявлены особенности процессов апоптоза лейкоцитов периферической крови у здоровых лиц в зависимости от пола и возраста Показано, что у лиц с психической дезадаптацией на модели невротических и депрессивных расстройств наблюдается повышенная апоптотическая активность лимфоцитов на рецепторном и клеточном уровнях Степень нарушения процессов апоптоза лейкоцитов периферической крови зависит от длительности стрессового воздействия
В данной работе впервые оценено влияние физиологических регуляторов (кортизола и дегидроэпиандростерона) на апоптоз нейтрофилов и лимфоцитов в нагрузочных пробах in vitro в норме у здоровых лиц и у пациентов в динамике фармакотерапии Показано, что специфический индуктор апоптоза - преднизолон in vitro приводит к увеличению уровня апоптоза лимфоцитов и сдерживает апоптоз нейтрофилов здоровых лиц даже в условиях длительной гипертермии Использование ДГЭАС приводит к снижению уровня апоптотической гибели лимфоцитов У лиц с невротическими и депрессивными расстройствами наблюдается угнетение индуцированного апоптоза нейтрофилов и лимфоцитов по сравнению с таковыми у здоровых людей
Результаты, полученные в данной работе, позволили охарактеризовать процессы апоптоза лейкоцитов в зависимости от клинических характеристик невротических и депрессивных расстройств в процессе различных схем терапии с использованием селективных ингибиторов обратного захвата серотонина, растительных антидепрессантов, светотерапии и цитопротекторов
Практическая значимость. Полученные данные об особенностях процессов апоптоза лейкоцитов периферической крови и его физиологической регуляции у лиц с невротическими и депрессивными расстройствами могут быть использованы для научно обоснованных рекомендаций по оценке адаптационных возможностей организма и дифференцированному назначению препаратов для терапии Исследование с применением индукторов апоптоза in vitro позволило выявить особенности запрограммированной гибели в зависимости от типа клеток Выделены информативные биологические показатели в качестве дополнительных клинико-диагностических критериев прогноза терапии стрессовых расстройств
Результаты исследования представлены в научно-методических рекомендациях «Методологические подходы к оценке биологических факторов психической дезадаптации (на примере невротических расстройств)» и в учебно-методическом пособии «Оценка апоптоза лимфоцитов и нейтрофилов при психических расстройствах» (утверждены Проблемной комиссией № 56 13 «Основные психические заболевания и наркология» Научного совета РАМН и МЗ РФ № 56 по медицинским проблемам Сибири, Дальнего Востока и Крайнего Севера)
Положения, выносимые на защиту:
-
Дегидроэпиандростерон и кортизол вовлечены в процессы регуляции запрограммированной клеточной гибели лейкоцитов периферической крови в норме и при психической дезадаптации
-
Индукция апоптоза клеток периферической крови при невротических и депрессивных расстройствах является адекватной временной преходящей реакцией целостного организма в ответ на стрессовую психотравмирующую ситуацию
-
Оценка экспрессии рецептора апоптоза и цитологический анализ апоптотических форм лейкоцитов в совокупности с гормональными показателями отражают адаптационные возможности и эффективность проводимой реабилитации у лиц с невротическими и депрессивными расстройствами
Апробация работы. Результаты проведенных исследований докладывались и обсуждались на III конференции молодых ученых России с международным участием «Фундаментальные науки и прогресс клинической медицины» (Москва, 2004), на XLII Международной научной студенческой конференций «Студент и научно-технический прогресс» (Новосибирск, 2004), на V Международном конгрессе молодых ученых и специалистов «Науки о человеке» (Томск, 2004), на 8th Multidiscipli-nary Conference of Biological Psychiatry «Stress and Behavior», (Санкт-Петербург, 2004), на V Конференции молодых ученых СО РАМН «Фундаментальные и прикладные проблемы современной медицины» (Новосибирск, 2004), на Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Метаболические механизмы иммунореактивности» (Красноярск, 2004), на VI Международном конгрессе молодых ученых и специалистов «Науки о человеке» (Томск, 2005), на Научной студенческой конференции «Старт в науку» (Томск, 2003—2005), на V Сибирском физиологическом съезде (Томск, 2005), на Отчетной сессии ГУ НИИ ПЗ ТНЦ СО РАМН (Томск, 2005), на VII конгрессе молодых ученых и специалистов «Науки о человеке» (Томск, 2006)
Внедрение результатов. Результаты исследования включены в программу подготовки врачей-ординаторов и аспирантов ГУ НИИ ПЗ ТНЦ СО РАМН и используются в учебном процессе на кафедре психиатрии Сибирского государственного медицинского университета в программе повышения квалификации врачей-психиатров, а также в подготовке студентов лечебного, педиатрического и медико-биологического факультетов Результаты внедрены в лечебный процесс отделений пограничных состояний и аффективных состояний клиник ГУ НИИ ПЗ ТНЦ СО РАМН
Публикации. По теме диссертации опубликовано 24 печатных работы, в том числе 7 журнальных статей, учебно-методическое пособие и методические рекомендации
Объем и структура диссертации. Работа изложена на 159 страницах машинописного текста Состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, результатов собственных исследований, заключения, выводов, списка использованной литературы, приложений Работа иллюстрирована 15 таблицами и 20 рисунками Библиографиче-
ский указатель включает 210 источников 91 отечественных и 119 зарубежных авторов
Внутриклеточные факторы, участвующие в передаче сигналов при развитии апоптоза
Поскольку апоптоз может быть индуцирован разнообразными факторами и воздействиями, естественно считать, что пути передачи соответствующих сигналов, по крайней мере, до определенного момента могут быть различными. В случае передачи сигнала через рецепторный комплекс TCR-CD3, рецепторы для глюкокортикоидов и цитокинов, эти пути в значительной своей части совпадают с нормальными путями передачи сигналов, т.е. апоптоз является процессом, родственным активации и дифференцировке клеток.
Как и при нормальной активации клеток, сигналы, обусловливающие развитие апоптоза, отличаются большой вариабельностью в отношении использования различных внутриклеточных факторов в зависимости от природы клеток и стадии их развития. Так, при запуске сигнала через TCR-CD3 развитие апоптоза тимоцитов зависит от Са2+, предотвращается циклоспорином А, ингибиторами биосинтеза РНК и белка, но не ингибиторами протеинкиназ. Развитие СОЗ-зависимого апоптоза зрелых Т-клеток не подавляется хелаторами Са2+, циклоспорином А, блокаторами макромолекулярных синтезов, но зависит от активности протеинкиназ.
Пока не изучены уровни и механизмы расхождения путей передачи сигналов к активации и апоптозу. Ключевые механизмы на поздних этапах передачи сигнала связаны с экспрессией генов и проявлением активности цистеиновых протеиназ семейства ICE, включая протеиназы Nedd-2 (lch-1) и СРР32 (apopain), а также сериновых протеиназ - гранзимов и цитолизинов.
Функцию регуляторов выбора клетками, содержащими множественные разрывы ДНК, между вступлением в митотический цикл (с последующей гибелью) и остановкой в фазе G1 выполняют продукты протоонкогенов - ранний активационный белок с-тус и онкосупрессор р53 (Chiu H.J. et al.f 2001).
В обычных условиях активации экспрессия с-тус сопутствует выходу клеток в цикл. При удалении ростовых факторов его экспрессия ослабляется, и клетка задерживается в фазе G1. В случае повышенной экспрессии с-тус на фоне устранения ростового фактора клетки входят в S-фазу и подвергаются апоптозу. Полагают, что с-тус обусловливает баланс размножения и гибели клеток при ответе на разного рода стимуляторы (Ярилин А.А., 1996).
Сходную роль играет белок р53, обозначаемый как онкосупрессор. В норме он выполняет роль отрицательного регулятора пролиферации клеток (Хаитов P.M., 2000). Обнаружено, что утрата или мутации его гена приводят к подавлению апоптоза и в то же время - к учащению развития опухолей после действия ионизирующей радиации. Наоборот, трансфекция гена р53 в опухолевые клетки обусловливает их апоптоз (Чумаков П.М., 2000).
Важным следствием изучения путей передачи сигналов к развитию апоптоза, а также механизмов его реализации, является разработка подходов к направленному контролю над этим процессом. Сами представления о природе и механизмах развития и разновидностях апоптоза сформировались в значительной степени благодаря исследованию его чувствительности к действию экзогенных (в отношении клетки) агентов. Изучение факторов, модулирующих развитие апоптоза, может стать основой для разработки подходов к фармакологическому контролю апоптоза, который играет важную роль в развитии многих заболеваний (Ярилин А.А., 1996).
Активная природа апоптоза и родство его сигнальных путей активационным предполагают существование внутриклеточных механизмов ингибирования апоптоза, а также возможность создания подходов к его модификации, в том числе медикаментозной.
В различных типах клеток обнаружено около полутора десятков аналогов гена Bcl-2f которые объединены в отдельное семейство благодаря наличию гомологичных доменов (Маянский Н.А., 2001). Продукт гена Bcl-2 имеет молекулярную массу 26 кД. Он экспрессируется на мембране митохондрий, в меньшей степени - на поверхности клеток. Гиперэкспрессия Bcl-2 защищает клетки от апоптоза, связанного с активацией через TCR-CD3, с действием глюкокортикоидов, с дефицитом ростовых факторов. Защитное действие может не проявляться при Fas-зависимом апоптозе, цитолизе, опосредованном киллерными лимфоцитами, при отрицательной селекции клонов тимоцитов. Продукт гена Bcl-2 обеспечивает выживание активированных клеток, экспрессирующих с-тус в отсутствие цитокинов, замещая их. Индукция гена Вс1-2может быть достигнута при воздействии на В-клетку через мембранный IgM или CD40 (Yin Х.М. et al., 1994).
Характеристика клинического материала
Исследование выполнено на базе лаборатории клеточных и молекул я рно-биологических исследований (руководитель лаборатории -доктор медицинских наук С.А. Иванова) ГУ НИИ психического здоровья ТНЦ СО РАМН (директор - академик РАМН В.Я. Семке). Проведенное исследование включало следующие этапы: изучение экспрессии FAS-рецептора как маркера апоптоза лимфоцитов и оценка морфологических признаков апоптоза нейтрофилов и лимфоцитов; определение уровня гормонов стрессреализующих и стресслимитирующих систем и их взаимосвязей с показателями апоптоза; проведение экспериментальных нагрузочных проб; изучение влияния различных схем фармакотерапии на запрограммированную гибель лейкоцитов периферической крови у лиц с психической дезадаптацией; статистическую обработку материала различными методами в зависимости от поставленных задач.
Группа здоровых лиц
Обследовано 59 соматически и психически здоровых лиц от 18 до 60 лет: 37 женщин (средний возраст - 36,43±2,22 лет) и 22 мужчины (средний возраст - 31,33±2,36 лет), не имеющих хронических заболеваний и не состоящих на диспансерном учете, без признаков перенесенных острых инфекционных заболеваний на момент обследования, и которые, по определению Р.В. Петрова и А.А. Михайленко (1990), «на момент обследования выполняли полный объем своих профессиональных обязанностей и вели привычный образ жизни».
Отбор здоровых лиц проводили, используя углубленный опрос с помощью специальной анкеты, разработанной в лаборатории клеточных и молекулярно-биологических исследований ГУ НИИ психического здоровья ТНЦ СО РАМН совместно с Институтом физиологии г. Тюбингена (Германия). Вопросы, приведенные в анкете, позволяют при формировании группы контроля исключить лица с возможными нарушениями соматического или психического здоровья. (Приложение 1).
Группа лиц с психической дезадаптацией
Обследовано 133 лица с психической дезадаптацией, проходивших курс реабилитации в отделении пограничных состояний клиник ГУ НИИ психического здоровья ТНЦ СО РАМН (руководитель отделения - академик РАМН, профессор В.Я. Семке) и в отделении аффективных состояний клиник ГУ НИИ психического здоровья ТНЦ СО РАМН (руководитель отделения - д.м.н. Е.Д. Счастный). Группа лиц с невротическими, связанными со стрессом, расстройствами
Обследован 61 человек с невротическими расстройствами, проходивший курс реабилитации в отделении пограничных состояний клиник ГУ НИИ психического здоровья ТНЦ СО РАМН (руководитель отделения - академик РАМН, профессор В.Я. Семке) и в отделении аффективных состояний клиник ГУ НИИ психического здоровья ТНЦ СО РАМН (руководитель отделения - д.м.н. Е.Д. Счастный). Средний возраст пациентов составил 36,78±1,66 лет. Распределение обследованных лиц по полу представлено в табл. 2. Лица с невротическими расстройствами были обследованы с помощью разработанной на базе отделения пограничных состояний ГУ НИИ ПЗ ТНЦ СО РАМН «Клинической карты обследования больного», адаптированной к задачам настоящего исследования.
Всего 34 Диагностическая оценка и клиническая квалификация невротических расстройств проводились врачами-психиатрами отделения пограничных состояний в соответствии с Международной статистической классификацией болезней, травм и причин смерти 10-го пересмотра (МКБ-10), шифр F4 «Невротические, связанные со стрессом и сома-тоформные расстройства» (Чуркин А.А., Мартюшов А.К, 1999). Диагностика неврозов осуществлялась с учетом принятых критериев, к которым относятся причинная связь с психотравмирующей ситуацией, невротические особенности личности, невротическая симптоматика (табл. 3).
Реакция на тяжелый стресс и нарушения адаптации включает расстройства, которые определяются на основании наличия одного или другого из двух причинных факторов: исключительно сильного стрессового жизненного события, вызывающего острую стрессовую реакцию, или значительного изменения в жизни, приводящего к продолжительно сохраняющимся неприятным обстоятельствам, в результате чего развивается расстройство адаптации. Стрессовое событие или продолжительные неприятные обстоятельства являются первичным и основным причинным фактором, и расстройство не возникло бы без их влияния. ПТСР рассматриваются как нарушенные адаптационные реакции на тяжелый пролонгированный стресс, в том смысле, что они препятствуют действию механизма успешной адаптации и поэтому ведут к нарушенному социальному функционированию.
Более важную, чем при других расстройствах в F43.-, роль в риске возникновения играет индивидуальная предрасположенность или уязвимость, но, тем не менее, считается, что состояние не возникло бы без стрессового фактора. Проявления различны и включают депрессивное настроение, тревогу, беспокойство (или их смешение); чувство неспособности справляться, планировать или продолжать оставаться в настоящей ситуации; а также некоторую степень снижения продуктивности в повседневных делах.
Посттравматическое стрессовое расстройство возникает как отставленная или затяжная реакция на стрессовое событие или ситуацию (кратковременную или продолжительную) исключительно угрожающего или катастрофического характера, которые в принципе могут вызвать общий дистресс почти у любого человека (природные или искусственные катастрофы, сражения, серьезные несчастные случаи, наблюдение за насильственной смертью других, роль жертвы пыток, терроризма).
Типичные признаки включают эпизоды повторного переживания травмы в виде навязчивых воспоминаний, снов или кошмаров, возникающих на фоне хронического чувства «оцепенелости» и эмоциональной притупленности, отчуждения от других людей, отсутствия реакции на окружающее, уклонение от деятельности и ситуаций, напоминающих о травме.
Характеристика процессов запрограммированной гибели лимфоцитов и нейтрофилов в крови здоровых лиц разных возрастных категорий
Проведено исследование процессов апоптоза и уровня гормонов, участвующих в модуляции апоптоза, у здоровых лиц от 18 до 60 лет в зависимости от пола и возраста. В первую группу обследованных вошли мужчины и женщины до 25 лет, во вторую - от 25 до 45 лет, в третью - старше 45 лет.
Исследование зависимости показателей запрограммированной гибели лимфоцитов и нейтрофилов от пола показало, что в группах женщин и мужчин значимых отличий в содержании клеток, подвергшихся апоптозу, не выявлено. У женщин процентное и абсолютное содержание лимфоцитов, экспрессирующих рецептор CD95 составило 11,7310,36% и 0,34±0,03хЮ9/Л, у мужчин -11,50±0,57% и 0,36±0,03х109/Л, р 0,05.
Нейтрофилы с морфологическими признаками апоптоза в мазках у женщин выявлялись в 0,21±0,12% случаев (0,008±0,004х109/Л), в группе обследованных мужчин - 0,77±0,36% случаев (0,004±0,004х109/Л), р 0,05. В относительном и абсолютном содержании лимфоцитов с фрэгментированным ядром в мазках крови также не показано значимых отличий: у женщин - 0,97±0,25% и 0,027±0,008х109/Л, у мужчин -0,72±0,25% и 0,022±0,011хЮ9/Л, р 0,05. При исследовании гормонального статуса в общей группе мужчин наблюдали повышение концентрации кортизола по сравнению с женщинами (492,77±28,35 нмоль/л и 405,17±25,03 нмоль/л соответственно, р 0,05). На этом фоне у мужчин также выявлено повышенное содержание дегидроэпиандростерона сульфата (3,36±0,32 пкг/мл, у женщин - 2,02±0,27 лкг/мл, р 0,05). Однако, соотношение ДГЭАС/кортизол, характеризующее баланс катаболических и анаболических процессов в организме, у мужчин и женщин находилось на одном уровне: у женщин - 0,5610,07%, у мужчин - 0,72±0,13%, р 0,05.
В результате анализа показателей апоптотической гибели лимфоцитов и неитрофилов периферической крови здоровых доноров, рандомизированных по полу и возрасту, установлено следующее (табл. 5).
Как видно из таблицы 5, относительное и абсолютное содержание в кровотоке лимфоцитов, экспрессирующих рецепторы готовности к Fas-зависимому апоптозу, у здоровых лиц разного пола всех возрастных групп не отличается.
В группе здоровых лиц до 25 лет не выявлено различий в содержании лимфоцитов и неитрофилов с морфологическими признаками апоптоза у женщин и мужчин.
Для мужчин возрастной группы от 26 до 45 лет характерно повышение процентного содержания апоптозных неитрофилов (0,98±0,33%, у женщин - 0,32±0,22%, р 0,05) и снижение содержания лимфоцитов с фрагментированным ядром (0,43±0,18, у женщин -0,94±0,37).
С возрастом различия в содержании неитрофилов с морфологическими признаками апоптоза нивелируются: в мазках крови у женщин и у мужчин старше 45 лет не наблюдали апоптотических неитрофилов.
Процентное и абсолютное содержание в циркуляции лимфоцитов с морфологическими признаками фрагментации ядра у женщин в разных возрастных группах остается на одном уровне (табл. 5). У мужчин наблюдали усиление апоптоза лимфоцитов в возрасте старше 46 лет (1,76±0,31%, у женщин - 0,9110,30%, р 0,05; 0,07±0,02х109/Л, у женщин - О.ОЗіО.ОІхЮ9/;!, р 0.05).
Индекс реализации апоптоза у женщин разных возрастных групп остается на одном уровне, а у мужчин увеличивается в зависимости от возраста: 3,72±3,72% в группе до 25 лет, 4,99±3,52% в группе от 26 до 45 лет и 17,81 ±0,86% в старшей возрастной группе, что статистически достоверно (р 0,001).
Результаты многочисленных работ показывают наличие ассоциации между уровнем ДГЭАС и возрастом (Feldman НА et al., 2001; Lunenfeld В., 2001; Tagliaferro A.R., Ronan A.M., 2001; Muller M. et al., 2003; Trichopoulou A. et ah, 2003; Steckelbroeck S. et al., 2004). Динамика настолько характерна, что по уровню ДГЭАС можно определить возраст человека. В проведенном нами исследовании зависимости концентрации стероидных гормонов от возраста и пола выявлено, что для сульфатной формы ДГЭА половые различия в молодом возрасте отсутствуют, а в возрасте после 45 лет его уровень у женщин значительно ниже, чем у мужчин (рис. 3: табл. 6).
Му ЯСИНЫ Концентрация кортизола в исследованных группах лиц мужского и женского пола до 25 лет находилась на одном уровне. В группе лиц 26-45 лет у мужчин концентрация кортизола выше; чем у женщин (514,78±41,99 нмоль/л и 392,71±29,11 нмоль/л соответственно, р 0,05). Также выше у мужчин данной группы и концентрация ДГЭАС (3,47±0,44, у женщин - 2,1510,25, р 0,05). В группе лиц старшего возраста различий в содержании кортизола в сыворотке крови выявлено не было (табл. 6).
Величина соотношения ДГЭАС/кортизол значимо не отличалась в группах обследованных доноров до 25 лет и 25-45 лет; у женщин после 45 лет наблюдали значительное падение этого показателя, что может быть сопряжено с плохим прогнозом процесса старения (Laughlin G.A., Barrett-Connor Е., 2000; Zanardi V., 2002; Goldman N. et al., 2004; Westerlund H. et al., 2004).
Анализируя полученные результаты можно заключить, что уровень показателей апоптотической гибели лимфоцитов и нейтрофилов периферической крови здоровых доноров зависит от пола и возраста. Усиление процесса апоптоза нейтрофилов выявлено у мужчин 26-45 лёт по сравнению с женщинами этой возрастной группы. Лимфоциты с фрагментированным ядром чаще встречались в мазках крови мужчин старше 45 лет.
Запрограммированная гибель лейкоцитов у лиц с ПТСР в динамике терапии кортексином
Содержание в кровотоке лимфоцитов, экспрессирующих рецепторы готовности к Fas-зависимому апоптозу, в группе лиц с ПТСР, получающих в дополнение к стандартной медикаментозной терапии кортексик существенно превышает аналогичный показатель в группе контроля, что отражает процессы активации лимфоцитов. У лиц данной группы содержание рецептора CD95 составило 17,31±1,06% (0;48±0,04хЮ9/Л) и 11,64±0,31% (0,34+0,03 109/Л) у психически и соматически здоровых лиц (р 0,05). После терапии кортексином наблюдали снижение данного показателя до значений нормы. В группе лиц, получающих стандартную медикаментозную терапию (группа сравнения), также обнаружено значимое усиление экспрессии рецептора CD95 и его достоверное снижение после проводимого лечения (рис. 7).
Оценка морфологических признаков апоптоза показала повышение содержания нейтрофилов с морфологическими признаками апоптоза (0,67±0,29%, в контроле - 0,4010,15%; 0.01±0,01хЮ9/Л, в контроле - 0,007±0,003 109/Л). Уровень лимфоцитов с фрагментированным ядром достоверно превышал значения, наблюдаемые в группе контроля (4,06±0,85%, в контроле -0,8810,18%, р 0,05; 0,11±0,04х109/Л1 в контроле - 0,026±0,007хЮ9/Л, р 0,05).
Применение нейропротектора кортексина не вызывало изменений в содержании апоптозных нейтрофилов (рис. 8).
В мазках крови пациентов группы сравнения чаще встречались нейтрофилы с морфологическими признаками, характерными для клеток, подвергшихся апоптотическим изменениям, но выявленные различия не были статистически достоверны. Проводимая фармакотерапия приводила к дальнейшему росту числа клеток с морфологическими признаками апоптоза (рис. 8).
Относительно динамики содержания лимфоцитов с фрагментированным ядром в мазках крови пациентов показано следующее: терапия кортексином способствовала статистически значимому снижению числа апоптозных клеток. В группе сравнения проводимая терапия не изменяла изначально невысокий уровень лимфоцитов с фрагментированным ядром (рис. 9). Антиапоптотическое действие кортексина обеспечивается входящими в его состав компонентами: микроэлементы, содержащиеся в препарате, играют важную роль в жизни клеток и формировании механизмов нейропротекции, участвуют в поддержании активности более 1000 клеточных белков и ферментов, регулирующих процессы клеточной динамики и апоптоза. Нейрохимические эффекты селена, входящего в состав кортексина, связаны с торможеним апоптоза и стимуляцией ангиогенеза (Платонова Т.Н. и др., 2005).
Определение содержания гормонов в сыворотке крови выявило, что концентрация кортизола у обследованных лиц до проведения фармакотерапии статистически значимо отличалась от соответствующих значений в контрольной группе (681,5б±56,36 нмоль/л и 443,13±23,00 нмоль/л, р 0,05). После терапии кортексином концентрация кортизола снижалась до 570,80±85,23 нмоль/л, однако различия не были достоверны. В группе сравнения уровень кортизола находился в пределах нормы (454;60±84,46 нмоль/л) и не изменялся после терапии.
Содержание дегидроэпиандростерона сульфата было снижено (1,57±0,36 пкг/мл у лиц с ПТСР основной группы, 1,67±0,79 пкг/мл у пациентов из группы сравнения, 2,31 ±0,24 пкг/мл в группе психически и соматически здоровых лиц, р 0,05). После проведения фармакотерапии в группе лиц, получающих кортексин, концентрация ДГЭА-сульфата не изменялась, в то время как в группе сравнения наблюдалось дальнейшее снижение концентрации этого нейростероида до 0,62±Ю,22 пкг/мл.
Таким образом, включение в комплексную программу реабилитации лиц с посттравматическими расстройствами метаболических препаратов, обладающих цитопротекторными и церебропротекторными свойствами, повышает эффективность медикаментозной терапии за счет нормализации процессов запрограммированной клеточной гибели: снижение экспрессии рецептора CD95, уменьшение содержания нейтрофилов и лимфоцитов с морфологическими признаками апоптоза, на фоне снижения концентрации кортизола.
