Введение к работе
АКТУАЛЬНОСТЬ ПРОБЛЕМЫ. К настоящему времени описаны разнообразные изменения слизистой оболочки желудка, возникающие при воздействии различного рода повреждающих факторов: химического, физического, инфекционного; при этом морфологические изменения СОЖ при воздействии различного рода повреждающих агентов имеют свои особенности [Минушкин О.Н. и др., 2003; Каратеев А.Е., 2011]. Тем не менее, динамику структурных изменений слизистой оболочки желудка можно рассматривать как вариант типового патологического процесса (хронического воспаления), приобретающего ряд специфических черт, обусловленных конкретным этиологическим фактором [Шелехова К.В., 2004].
На сегодняшний день, согласно модифицированной Сиднейской классификации, по этиологическому принципу выделяют следующие типы хронических гастритов: атрофический (аутоиммунный тип А и мультифокальный), неатрофический или ассоциированный с H. pylori (тип В) и особые формы гастрита - химический (или реактивный рефлюкс-гастрит - тип С), радиационный, лимфоцитарный, неинфекционный гранулематозный и эозинофильный [Аруин Л.И., 2002; Кокшаров В.Н., 2007].
Морфологические изменения СОЖ и патогенез хронического гастрита заболевания имеет свои особенности для разных форм гастрита [Минушкин О.Н. и др., 2003]. Общепризнано, что наиболее часто встречается Helicobacter pylori – ассоциированный гастрит, однако не менее актуальной является и так называемая НПВП-гастропатия (одна из разновидностей химического гастрита, типа С) – повреждение слизистой оболочки желудка, вызванное приемом нестероидных противовоспалительных препаратов (НПВП). Нестероидные противовоспалительные препараты относятся к числу наиболее распространенных лекарственных средств, часто назначаемых врачами для лечения различных заболеваний у пациентов всех возрастных групп [Hawkey C.I. et al., 2001]. Известно, что во всем мире 300 миллионов людей используют нестероидные противовоспалительные препараты (NSAIDs) и 1,2% населения США принимает эти препараты ежедневно [Cavallini M.E. et al., 2006]. При этом НПВП относятся к безрецептурным средствам, и пациенты зачастую принимают их без предварительной консультации с врачом.
Важнейшей патологией, ассоциированной с НПВП, является НПВП–гастропатия [Каратеев А.Е., 2011]. В последнее время внимание исследователей все больше привлекают проблемы патогенеза, патоморфологии и поиск новых методов лечения НПВП-гастропатии. Это объясняется, прежде всего, тем, что многогранность патогенетических механизмов повреждения СОЖ при длительном приеме пациентом НПВП дает возможность коррекции различных звеньев патогенеза НПВП-гастропатии и служит обоснованием проведения комплексной терапии, учитывающей возможность сочетанного воздействия на общие механизмы патологического процесса. Тем не менее, вопросы патогенеза НПВП-гастропатии до настоящего времени остаются до конца не выясненными [Козлова И.В. и др., 2006; Mino-Kenudson M. et al., 2006; ., ., 2009; M., 2011].
В связи с этим, целью нашего исследования явилось изучение в экспериментальных условиях патогенетических механизмов повреждения слизистой оболочки желудка, сопровождающего длительное применение нестероидных противовоспалительных препаратов.
ЦЕЛЬ ИССЛЕДОВАНИЯ: в экспериментальных условиях изучить патогенетические механизмы повреждения слизистой оболочки желудка при длительном применении нестероидных противовоспалительных препаратов.
-
Разработать экспериментальную модель химического гастрита, вызванного длительным употреблением нестероидных противовоспалительных препаратов.
-
На экспериментальной модели исследовать изменения процессов апоптоза, клеточной пролиферации и секреции муцинов эпителиальными клетками СОЖ в условиях химического повреждения.
-
Изучить роль провоспалительных цитокинов в формировании патологических процессов в СОЖ при длительном применении НПВП.
-
Длительное использование в эксперименте нестероидных противовоспалительных препаратов в сочетании с 5%-ным раствором аскорбиновой кислоты, принимаемыми per os, позволяет воспроизвести морфологическую картину НПВП-гастропатии, что подтверждается результатами гематологических, гистологических и гистометрических исследований.
-
При экспериментальной НПВП-гастропатии наблюдается активация как процессов апоптоза, так и процессов пролиферации эпителиальных клеток СОЖ. Выявленные эффекты могут быть объяснены с позиции роли провоспалительных цитокинов в патогенезе НПВП-гастропатии.
-
При моделировании в эксперименте НПВП-гастропатии отмечается нарушение нормального зонального распределения муцинов в эпителии СОЖ, выявляемое гистохимическими и иммуногистохимическими методами.
НАУЧНАЯ НОВИЗНА. Установленные в процессе выполнения экспериментов морфометрические, гистохимические и иммуногистохимические константы позволяют расширить представление о гистологическом строении желудка интактных неинбредных белых крыс и использовать полученные данные в эксперименте.
Впервые выявлено, что пероральное введение неинбредным белым крысам в течение 21 дня нестероидных противовоспалительных препаратов (кетопрофен или нимесулид) в сочетании с 5%-ным раствором аскорбиновой кислоты вызывает у экспериментальных животных развитие НПВП-гастропатии, что проявляется в формировании в СОЖ сосудистых расстройств, дистрофических изменений ямочного эпителия, увеличении количества париетальных клеток в дне желез фундального и кардиального отделов, появлении в собственной пластинке слизистой оболочки большого количества гладких миоцитов, гипертрофии мышечной пластинки СОЖ. Морфометрическими исследованиями установлено, что у животных с экспериментальной НПВП-гастропатией отмечается достоверное увеличение средних показателей толщины СОЖ за счет увеличения ширины мышечной пластинки и статистически достоверное увеличение числа обкладочных клеток в эпителии желез. Выявлено, что при моделировании в эксперименте НПВП-гастропатии отмечается нарушение нормального зонального распределения муцинов, выявляемое гистохимическими и иммуногистохимическими методами. Продемонстрировано, что выявленные гистологические изменения в эпителии СОЖ сопровождаются изменениями в периферической крови животных.
Впервые установлено, что при экспериментальной НПВП-гастропатии наблюдается активация как процессов апоптоза, так и процессов пролиферации эпителиальных клеток СОЖ; при этом наиболее выраженная экспрессия маркеров и пролиферации (Ki-67), и апоптоза (FasL, TNF-) отмечается в покровно-ямочном эпителии. Полученные данные свидетельствуют о важной роли в апоптозе эпителиоцитов желудка апоптоза, опосредованного провоспалительными цитокинами.
Впервые выявлено, что при моделировании НПВП-гастропатии наблюдается достоверное увеличение по сравнению с контролем количества NFkB-позитивных клеток (как с локализацией маркера в ядре, так и с локализацией в цитоплазме) в теле, шейках желез и желудочных ямках на фоне практически неизменного их количества в дне желез. На основании данных иммуногистохимических исследований впервые установлено, что активация NFkB-сигнального пути провоспалительным цитокином TNF- при формировании патологических изменений, обусловленных длительным приемом НПВП, приводит не только к инициации апоптоза эпителиоцитов СОЖ, но и к его подавлению, что, возможно, определяет активацию пролиферативных процессов в эпителии СОЖ.
ТЕОРЕТИЧЕСКАЯ И ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ РАБОТЫ. В диссертационной работе дана полная гистологическая, гистохимическая, иммуногистохимическая и гистометрическая характеристика слизистой оболочки желудка интактных неинбредных белых крыс. Полученные результаты могут быть использованы в исследовательской работе при проведении экспериментов на нелинейных белых крысах.
В эксперименте показана роль нестероидных противовоспалительных препаратов в развитии химического поражения слизистой оболочки желудка. Разработанная экспериментальная модель позволяет детально изучить вопросы патогенеза НПВП-гастропатии и может быть использована для доклинической апробации новых лекарственных препаратов.
Полученные результаты определяют целесообразность включения в комплексную программу обследования пациентов с хроническим гастритом исследование провоспалительных цитокинов как в сыворотке крови, так и в гастробиоптатах при помощи иммуногистохимических методов.
АПРОБАЦИЯ ДИССЕРТАЦИОННОГО МАТЕРИАЛА И ПУБЛИКАЦИИ. Результаты исследований доложены и обсуждены на следующих конференциях: «Агрономия, агрохимия, агропочвоведение, агроэкология, общая химия, лесоведение, садово-парковое и садовое строительство, ветеринария и зооинженерия» Материалы LXX Всероссийской научно-практической конференции молодых ученых, аспирантов и студентов, посвященной 80-летию Пермской ГСХА «Молодежная наука и инновация» (Пермь, ПГСХА, 2010); «Материалы научной сессии ПГМА 2010 года» (Пермь, 2010); «Инновации молодых ученых агропромышленному комплексу Сибири и Урала 14-15 апреля 2010» Сборник материалов региональной конференции молодых ученых (Тюмень, 2010); «Инновационному развитию АПК - научное обеспечение» Сборник научных статей Международной научно-практической конференции, посвященной 80-летию ПГСХА (Пермь, 18 ноября 2010); «Современные наукоемкие технологии» №12 (Москва, 2010); «Материалы научной сессии 2011 года, посвященной 95-летию высшего медицинского образования на Урале и 80-летию ПГМА» (Пермь, 2011).
По теме диссертации опубликовано 11 научных работ, в том числе 3 - в журналах, рекомендованных ВАК РФ. Получен патент на изобретение и положительное решение о выдаче патента на изобретение.
ВНЕДРЕНИЕ В ПРАКТИКУ. Полученные в ходе экспериментальных и клинических исследований результаты используются в учебном процессе на кафедре нормальной, топографической и клинической анатомии и оперативной хирургии, кафедре патологической физиологии ГБОУ ВПО ПГМА имени академика Е.А. Вагнера» Минздравсоцразвития РФ, на кафедре внутренних незаразных болезней ФГБОУ ВПО «ПГСХА имени академика Д.Н. Прянишникова»; внедрены в работу отдела морфологических и патофизиологических исследований ЦНИЛ ГБОУ ВПО «ПГМА имени академика Е.А. Вагнера» Минздравсоцразвития РФ.
СВЯЗЬ РАБОТЫ С НАУЧНЫМИ ПРОГРАММАМИ. Работа выполнена в соответствие с планом НИР ГБОУ ВПО «ПГМА имени академика Е.А. Вагнера» Минздравсоцразвития РФ.
СТРУКТУРА И ОБЪЕМ РАБОТЫ. Диссертация включает следующие разделы и главы: содержание, введение, обзор литературы, материалы и методы исследования, три главы собственных исследований, обсуждение результатов, выводы, практические рекомендации, список литературы. Материалы диссертации изложены на 162 печатных страницах, содержат 25 таблиц, 37 рисунков, включают 226 литературных источников, из которых 105 - отечественных и 121 – иностранных авторов.
