Содержание к диссертации
Введение
ГЛАВА 1. Обзор литературы
1.1. Патофизиологические аспекты ионизирующего и цитостатического воздействия на гемопоэз 11
1.2. Проблемы и перспективы фармакологической адаптации гемопоэза при цитостатическом и лучевом воздействии 25
1.3. Обоснование выбора препаратов для коррекции пострадиационных и цитостатических нарушений 31
ГЛАВА 2. Материалы и методы 37
ГЛАВА 3. Сравнительное исследование миелопротекторной эффективности мексидола, деанола ацеглумата и БЭМГС при лучевом повреждении костного мозга
3.1. Исследование динамики нарушений гемопоэза, клеточного состава венозной крови и некоторых показателей перекисного окисления липидов и антиоксидантнои защиты в плазме крови кроликов при экспериментальном радиационном воздействии 54
3.2. Исследование влияния мексидола на динамику нарушений гемопоэза, клеточного состава венозной крови некоторых показателей перекисного окисления липидов и антиоксидантнои защиты в плазме крови кроликов при экспериментальном радиационном воздействии 67
3.3. Исследование влияния БЭМГС на динамику нарушений гемопоэза, клеточного состава венозной крови и некоторых показателей перекисного окисления липидов и антиоксидантнои защиты в плазме крови кроликов при экспериментальном радиационном воздействии 85
3.4. Исследование влияния деанола ацеглумата на динамику нарушений гемопоэза, клеточного состава венозной крови и некоторых показателей перекисного окисления липидов и антиоксидантнои защиты в плазме крови кроликов при экспериментальном радиационном воздействии 94
3.5. Сравнительное исследование влияния соединений с антиоксидантным типом действия деанола ацеглумата, БЭМГС и мексидола на состояние гемопоэза, клеточного состава венозной крови и некоторых показателей перекисного окисления липидов и антиоксидантной защиты в плазме крови кроликов при экспериментальном радиационном воздействии 106
ГЛАВА 4. Сравнительное исследование миелопротекторной эффективности мексидола, деанола ацеглумата и БЭМГС при циклофосфановом повреждении костного мозга
4.1. Исследование влияния сочетанного применения циклофосфана и БЭМГС на гемопоэз, клеточный состав венозной крови и некоторые показатели перекисного окисления липидов и антиоксидантной защиты в плазме крови кроликов 115
4.2. Исследование влияния сочетанного применения циклофосфана и деанола ацеглумата на гемопоэз, клеточный состав венозной крови и некоторые показатели перекисного окисления липидов и антиоксидантной защиты в плазме крови кроликов 129
4.3. Сравнительное исследование влияния сочетанного применения циклофосфана и соединений с антиоксидантным типом действия деанола ацеглумата, БЭМГС и мексидола на гемопоэз, клеточный состав венозной крови и некоторые показатели перекисного окисления липидов и антиоксидантной защиты в плазме крови кроликов 141
ГЛАВА 5. Сравнительное исследование миелопротекторной эффективности мексидола, деанола ацеглумата и БЭМГС при доксорубициновом повреждении костного мозга
5.1. Исследование влияния сочетанного применения доксорубицина и БЭМГС на гемопоэз, клеточный состав венозной крови и некоторые показатели перекисного окисления липидов и антиоксидантнои защиты в плазме крови кроликов 152
5.2. Исследование влияния сочетанного применения доксорубицина и деанола ацеглумата на гемопоэз, клеточный состав венозной крови и некоторые показатели перекисного окисления липидов и антиоксидантнои защиты в плазме крови кроликов 167
5.3. Сравнительное исследование влияния сочетанного применения доксорубицина и соединений с антиоксидантным типом действия деанола ацеглумата, БЭМГС и мексидола на гемопоэз, клеточный состав венозной крови и некоторые показатели перекисного окисления липидов и антиоксидантнои защиты в плазме крови кроликов 181
Выводы 191
Практические Рекомендации 193
Список Использованной Литературы 194
- Проблемы и перспективы фармакологической адаптации гемопоэза при цитостатическом и лучевом воздействии
- Исследование влияния мексидола на динамику нарушений гемопоэза, клеточного состава венозной крови некоторых показателей перекисного окисления липидов и антиоксидантнои защиты в плазме крови кроликов при экспериментальном радиационном воздействии
- Сравнительное исследование влияния соединений с антиоксидантным типом действия деанола ацеглумата, БЭМГС и мексидола на состояние гемопоэза, клеточного состава венозной крови и некоторых показателей перекисного окисления липидов и антиоксидантной защиты в плазме крови кроликов при экспериментальном радиационном воздействии
- Сравнительное исследование влияния сочетанного применения циклофосфана и соединений с антиоксидантным типом действия деанола ацеглумата, БЭМГС и мексидола на гемопоэз, клеточный состав венозной крови и некоторые показатели перекисного окисления липидов и антиоксидантной защиты в плазме крови кроликов
Введение к работе
Актуальность исследования
Рост онкологических заболеваний, наблюдающийся в последние десятилетия, относит проблему их всестороннего исследования к числу остроактуальных и общественно значимых, распространенность онкологических заболеваний в мире возрастает. Сегодня в России регистрируется 52 случая злокачественных образования в час (Елисеев Ю.Ю., 2007). Расширяется список так называемых "профессиональных" онкологических заболеваний, связанных с определёнными видами человеческой деятельности (вредные производства, связанные с токсичными веществами, радиоактивными материалами, сильными электромагнитными полями и т.д.). Увеличивается общее онкогенное напряжение в результате ухудшения общей экологической ситуации, техногенных катастроф и других факторов (Козинец Г.И. и соавт., 1988; Жданов В.В., 1990; Чиссова В.И., 1995; Лыков А.П., 1998; Ильин Л.А., 2003).
Для лечения онкологической патологии широко применяется лучевая терапия, которая на протяжении последних десятилетий является одним из ведущих, высокоэффективных методов лечения различных форм онкологической патологии (Канаев СВ., 2002). Химиотерапия злокачественных опухолей также имеет широкое распространение не только как вспомогательный, но и как самостоятельный метод лечения. В клинической онкологии последнего десятилетия обнаруживается явная тенденция к использованию многокомпонентных программ лечения злокачественных заболеваний, в том числе сочетанного применения химио- и лучевой терапии (Переводчикова Н.И., 1986; Даценко B.C., 1981; Киселева Е.С., Волкова М.А., 1984; Fischer В., 1988; 1989; Anderson D.E., Badzioch M.D., 1989; Brady L.W., 1988 и др.). Однако применение
высокодозной химио- и радиотерапии ограничивается серьезными побочными эффектами. Особое место среди которых занимает депрессия кроветворения. (Chanock S.J., Pizzo P.А., 1997; Иванов С.Д., 2000; Плотников М.Б. и соавт., 2001; Сакаева Д.Д., 2003).
Исследования механизмов побочного действия цитостатической и лучевой терапии позволили установить, что их общим свойством является индукция окислительного стресса (Сипров А.В., 2004; Скопин П.И., 2005 и др.). Образование свободных радикалов становится причиной повреждения биомакромолекул - перекисного окисления липидов (ПОЛ), свободнорадикального повреждения нуклеиновых кислот, окисления белковых молекул и полисахаридов, а также изменения интегративных межклеточных и внутриклеточных сигнальных процессов, в том числе и в костном мозге. В результате возникает блокирование митотического цикла гемопоэтических элементов и подавление пролиферативной деятельности костного мозга.
Существующие препараты, применяемые для профилактики и лечения химиолучевой терапии, дороги, недостаточно эффективны и их количество невелико (Болдышев Д.А., 1993; Воротникова Т.В., 1995; Дыгай A.M. и соавт., 1997; Киньябулатов А.У., 1998; Борисов В.И., Бяхов М.Ю., 1999; Володина Г.И. и соавт., 1999; Калинин Н.Н., 1999; Беспалов Г.С. и соавт., 2000; Watson R.R., 1991; Gerster Н., 1993; Gareval Н., 1994). Поэтому целесообразно проводить исследования по изысканию новых лекарственных средств, обладающих миелопротекторной активностью. Учитывая, что у онкологических больных одним из механизмов реакции на возникновение и развитие опухоли является активация перекисного окисления липидов и значительные нарушения ферментативного звена антиокислительной защиты (АОЗ) (Морозкина Т.С., 1991; Казанова Г.В. и соавт., 1997; Кинзирский А.С., 1999; Carbonneau М. F. et al., 1991; Кормош Н.Г. и соавт., 2000 и др.), и эти же нарушения имеют место при
миелосупрессии на фоне лучевого и цитостатического воздействия (Олейник А.В., 1985; Patel J.M., 1983 и др.), то перспективной для поиска сопроводительной терапии при химиолучевом лечении является группа препаратов с антиоксидантной активностью.
Цель исследования: провести сравнительное исследование влияния мексидола, деанола ацеглумата и бисэтилметилгидроксипиридина сукцината (БЭМГС) на процессы костномозгового кроветворения в условиях экспериментальной лучевой и цитостатической (циклофосфан и доксорубицина гидрохлорид) супрессии гемопоэза.
Задачи исследования. При выполнении данной работы в соответствии с поставленной целью решались следующие задачи:
1. Изучить миелопротекторную эффективность мексидола, деанола
ацеглумата и БЭМГС в условиях экспериментальной лучевой супрессии
гемопоэза.
2. Исследовать воздействие мексидола, деанола ацеглумата и
БЭМГС на кроветворение в условиях экспериментальной
циклофосфановой супрессии гемопоэза.
3. Изучить влияние мексидола, деанола ацеглумата и БЭМГС на
состояние костномозгового кроветворения в условиях повреждения
гемопоэза доксорубицина гидрохлоридом.
4. Провести сравнительный анализ миелопротекторной
эффективности мексидола, деанола ацеглумата и БЭМГС.
Практическая значимость работы. Полученные данные расширяют представление о спектре фармакологического действия мексидола, БЭМГС и деанола ацеглумата и являются экспериментальным обоснованием для дальнейшего изучения их миелопротекторной эффективности на фоне химио- и радиотерапии.
Основные положения, выносимые на защиту:
Применение мексидола в изученной дозе и режиме введения способствует коррекции ряда послелучевых нарушений клеточного состава венозной крови (уменьшению степени анемии, тромбоцитопении, лейкоцитопении) и кроветворного костного мозга (сохранности общей клеточности, мегакариоцитов, уменьшению степени эритрокариоцитопении, гранулоцитопении, моноцитопении, лимфоцитопении). Деанола ацеглумат и БЭМГС в изученном режиме введения недостаточно корригируют пострадиационные нарушения клеточного состава костного мозга и венозной крови. Данные соединения уменьшают некоторые показатели ПОЛ и АОЗ в плазме крови кроликов. Деанола ацеглумат и БЭМГС оказывают более выраженное корригирующее действие на уровень МДА, чем мексидол, и способствуют повышению активности супероксиддисмутазы (СОД) плазмы крови.
Мексидол, деанола ацеглумат и БЭМГС уменьшают гемато- и миелотоксические эффекты циклофосфана. Все соединения корректируют цитотоксическое действие циклофосфана на эритроциты, ретикулоциты, лейкоциты, моноциты и лимфоциты, потерю гемоглобина. Мексидол в изученном режиме введения оказывает более выраженное миелопротекторное действие, чем деанола ацеглумат и БЭМГС. Миелопротекторная эффективность деанола ацеглумата в изученной дозе по некоторым показателям (общее количество миелокариоцитов, митотическая активность, уровень бластных клеток, эритрокариоцитов, моноцитов и лимфоцитов) сопоставима с таковой у мексидола в течение первых трех недель от начала применения. Исследуемые соединения снижают уровень МДА и повышают активность ферментов АОЗ - СОД и каталазы в плазме крови кроликов. Деанола ацеглумат и БЭМГС проявляют активность в отношении коррекции повышенного уровня МДА
в плазме крови на фоне циклофосфанового повреждения, сопоставимую с таковой у мексидола.
3. Применение мексидола, деанола ацеглумат и БЭМГС уменьшает гемато- и миелотоксические эффекты доксорубицина. Мексидол в изученной дозе и режиме введения оказывает более выраженное миелопротекторное действие, чем деанола ацеглумат и БЭМГС. Миелопротекторная эффективность БЭМГС в изученной дозе по некоторым показателям (общее количество миелокариоцитов, митотическая активность, уровень бластных клеток, гранулоцитарного пула, эритрокариоцитов, эозинофилов, моноцитов и лимфоцитов) сопоставима с таковой у мексидола. Изученные соединения снижают уровень МДА и повышают активность ферментов антиоксидантной защиты - СОД и каталазы в плазме крови кроликов. БЭМГС проявляет активность в отношении коррекции повышенного уровня МДА в плазме крови на фоне доксорубицинового повреждения, сопоставимую с таковой у мексидола.
Апробация работы. Результаты работы и основные положения диссертации доложены и обсуждены на Российской научно-практической
конференции с международным участием, памяти [Я. В. Костина| (Саранск, 2005), межрегиональной научной конференции «Актуальные проблемы медицинской науки и образования» (Пенза, 2007; 2009), Всероссийском конгрессе лучевых диагностов (Москва, 2007), VIII Международном конгрессе «Здоровье и образование в XXI веке» (Москва, 2007).
Проблемы и перспективы фармакологической адаптации гемопоэза при цитостатическом и лучевом воздействии
Низкая избирательность воздействия большинства цитостатиков (Fulda S., Susin S.A., Kroemer G., 1998) и лучевой терапии (Киселева Е.С., 1996) сопровождается повреждением нормальных тканей организма, в первую очередь гемопоэтическои, приводит к развитию синдрома полиорганной недостаточности, ухудшению качества жизни больных (Борисов В.И., Русаков И.Г., Богданова Н.В., 1986; Городецкий В.М., 1998). Вопросы профилактики развития гипо- и апластического состояний гемопоэза и вывода из них являются сегодня достаточно актуальными, несмотря на значительные научные достижения в области гематологии и регуляции механизмов пролиферации стволовых кроветворных клеток (Klastersky J.A., Sculier J.P., 1989; Dexter Т.М., 1989; Гольдберг Е.Д., Дыгай А.М. и соавт., 1991; 1997; Гольдберг Е.Д. и соавт., 1998; 1999). В последние годы вошли в клиническую практику препараты, вызывающие дифференцировку кроветворных клеток, поврежденных в результате цитотоксической химиотерапии (Eastgate J.А., 1993). Эти препараты представляют собой различные цитокины (гранулоцитарный колониестимулирующий фактор, гранулоцитарно-макрофагальный колониестимулирующий фактор и др.). Эти гемоцитокины увеличивают число митозов в костном мозге, а гранулоцитарно-макрофагальный колониестимулирующий фактор удлиняет период пребывания нейтрофилов в кровотоке, что уменьшает глубину фебрильной нейтропении и ускоряет выход больного из нее (Птушкин В.В., 2002; Matsui W. et al., 2005). В экспериментальных исследованиях на животных показано, что интерлейкин-1, введенный за 18-24 часа до облучения, проявляет свойства радиопротектора (Neta R., 1997; Аксенова Н.В. и соавт., 2001), а при однократном применении в первые четыре часа после радиационного воздействия выступает в качестве весьма эффективного средства ранней терапии лучевых поражений (Neta R., 1988; 1991; Легеза В.И. и соавт., 1995; Рогачева С.А., Симбирцев А.С., 1994; 1997; Рождественский Л.М. и соавт., 2001; 2002). Реализация радиозащитной активности препаратов интерлейкина-1 возможно проявляется в защите стволовых кроветворных клеток и предотвращении их апоптотической гибели (Dalmau S.R. and al., 1993), активации продукции эндогенных гемопоэтических ростовых факторов, стимуляции пролиферации и дифференцировки гемопоэтических клеток - предшественников в костном мозге и увеличении их числа (Casparetto С. and al., 1989; Moore М. A. and al., 1990; Testa N.G., 1991), действии на клеточные элементы кроветворного микроокружения, что обусловливает выделение колониестимулирующих факторов (Fibbe W.E. et al., 1999; Лебедев В.Г. и соавт., 2002), активации системы антиоксидантной защиты путем индукции марганцезависимой супероксиддисмутазы, глютатиона, церуллоплазмина, являющихся главными акцепторами свободных радикалов (Dalmau S.R. et al., 1997; Рогачева C.A., 1998; Ketlinsky S.A. et al., 2000), участии в реализации общего адаптационного синдрома путем активации практически всех звеньев гипоталамо-гипофизарно-адреналовой системы (Moore М.А. et al., 1990; Шахов В.П., 1990; Хлусов И.А., 1996; Рождественский Л.М., 2001). Гурьянцевой Л.А. с соавт., при изучении некоторых гемостимуляторов, выявлены следующие аспекты механизма их действия на гемопоэз (Гурьянцева Л.А. и соавт., 2006).
Так гранулоцитарный колониестимулирующий фактор непосредственно стимулирует пролиферацию и дифференцировку гемопоэтических клеток, кроме того, как известно, он вызывает мобилизацию колониеобразующих единиц - ГМ в периферическую кровь. Пантогематоген, обладая ноотропными свойствами (Суслов Н.И. и соавт., 1999), усиливает пролиферацию миелокариоцитов, возможно за счет цент альных нейро-эндокринных механизмов регуляции гемопоэза, эти данные подтверждают уже описанные в литературе возможности корректировать гомеостатическии дисбаланс, вызванный ионизирующим излучением, препаратом адаптогенного ряда — пантогематогеном и регулятором энергетического обмена «Янтарь - антитокс». D-глюкуроновая кислота и глицирам вызывают выраженное ускорение дифференцировки гемопоэтических предшественников вследствие быстрой нормализации структурно-функциональной организации костного мозга. Применение препаратов фрагментированной ДНК, полученные из органов мышей или плаценты человека, при циклофосфановом угнетении лейкопоэза у мышей стимулируют восстановление количества лейкоцитов в периферической крови и вызывают более выраженный противоопухолевый эффект (Николин В.П. и соавт., 2006). У пациентов с плоскоклеточным раком головы и шеи, получавших лучевую терапию, пятилетняя выживаемость в группе с исходным содержанием гемоглобина 120-130 г/л составляла 58,2 % против 28,4 % у больных с исходной анемией. Возможно, гипоксия способна индуцировать селекцию клеток, резистентных к апоптозу. Помимо этого клетка в состоянии кислородного голодания включает механизмы приспособления. За счет переливания эритроцитарной массы можно добиться лишь кратковременного повышения уровня гемоглобина в крови. Для ликвидации этого фактора риска сейчас ведутся работы с рекомбинантным гемоглобином и эритропоэтином (Бойко А.В. и соавт., 2006).
Применение эритропоэтина для коррекции оксидативного стресса, вызванного доксорубицином, уменьшает его проявления (Саенко Ю.В. и соавт., 2005). Анемия, возникающая в результате лучевого или цитотоксического действия, сопровождается усилением генерации активных метаболитов кислорода, снижением потенциала антиоксидантной системы, повышением интенсивности ПОЛ в различных тканях. Поврежденными оказываются структура и функции иммуноцитов, гепатоцитов и миоцитов. Это служит причиной «разбалансирования» метаболических процессов, угнетения неспецифической резистентности и иммунологической реактивности. Функциональная активность иммуноцитов, гепатоцитов и миоцитов взаимосвязана. Эта связь опосредована цитокинами, синтезируемыми иммуноцитами, и метаболитами, выделяемыми в сосудистое русло клетками печени. Роль звена сопряжения в реализации активности этих соединений играют эритроциты. При изучении сочетанного применения препаратов гепато- и актопротекторного действия - эссенциале, рибоксина и элькара Лазарева А.Г. и Бровкин И.Л. установили, что совместное введение этих препаратов уменьшает выраженность угнетения гемопоэза, нормализуя окислительно-энергетический потенциал эритроцитов (Лазарева А.Г., 2006). Достаточно активно в коррекции нарушений свободнорадикальных процессов, модифицирующих клеточные структуры и инициирующие окислительное повреждение белков, липидов и ДНК в клетке, применяются флавоноиды. Заводник Л.Б. с соавт., при изучении биологической активности изофлавона генистеина-8-С-гликозида, выделенного из бутонов люпина желтого, выявили более выраженный глютатионсберегающий эффект по сравнению с антиоксидантом кверцетином и способность предотвращать образование продуктов ПОЛ и нарушений метаболизма глутатиона при окислительном стрессе, индуцированном в эритроцитах человека и гомогенатах печени крыс трет -бутилгидроперекисыо in vitro и облучением (Заводник Л.Б. и соавт., 2006). Перспективным активатором депресии эритропоэза является экстракт шлемника байкальского. Удут Е.В. и соавт. (2005) изучали
Исследование влияния мексидола на динамику нарушений гемопоэза, клеточного состава венозной крови некоторых показателей перекисного окисления липидов и антиоксидантнои защиты в плазме крови кроликов при экспериментальном радиационном воздействии
В серии № 3 для коррекции пострадиационных изменений использован мексидол. Мазки крови животных, получавших препарат в постлучевом периоде, содержали форменные элементы с признаками повреждения: разрушенные и/или гиперокрашенные клетки, нейтрофилы с гиперсегментацией ядер и нейтрофилы с токсогенной зернистостью, атипичные лимфоциты и лимфоциты с аберрацией ядер. Форменные элементы с морфологическими признаками повреждения были обнаружены в мазках на 8-й, 15-й и в меньшем количестве на 22-й день после облучения. Пробы крови, взятые на 29-е сутки наблюдения, поврежденных клеток не содержали. В крови животных контрольной серии на всех этапах эксперимента имелись форменные элементы с признаками повреждения. У животных, получавших мексидол, на 8-е сутки после облучения отмечались признаки нормохромной гипорегенераторной анемии, сохраняющейся до 22-ого дня, на 29-е сутки опыта появились признаки восстановления уровня эритроцитов. В конце опыта дефицит эритроцитов в этой группе составлял 24 % (Р 0,001). В контрольной серии развивались нормохромная гипоарегенераторная анемия тяжелой степени - дефицит численности эритроцитов на 29-е сутки составил 38% (Р 0,001) (рис.3.2.1). На фоне мексидола концентрация гемоглобина в венозной крови снижалась, на 22-й день после лучевого удара достигла минимальной величины - от 122,53±0,95 г/л до 94,60±0,40 г/л (Р 0,001), затем начала повышаться и в конце 4-й недели составила 103,00±0,26 г/л (Р 0,001). В контрольной серии уровень гемоглобина еженедельно уменьшался и в последнюю неделю опыта динамики восстановления отмечено не было, на 22-е сутки эксперимента определялось 85,78±0,94 г/л (Р 0,001) гемоглобина, При применение мексидола цветовой показатель в конце первой недели после воздействия практически не изменился, затем со второй недели имелась тенденция к увеличению до 0,77±0,01 (0,69±0,01 у интактных кроликов) (Р 0,05). Аналогичные результаты получены в контрольной серии. На фоне введения мексидола концентрация свободного гемоглобина в плазме крови и степень гемолиза эритроцитов на всех этапах наблюдения статистически значимо не отличалась от уровня интактных животных (Р 0,05). У животных данной серии через 7 дней после лучевого удара в пробах крови не было обнаружено ретикулоцитов. В конце 2-й недели 1 мкл крови содержал 30,00±5,00 (Р 0,001) ретикулоцитов (210,00±7,00/мкл у интактных животных).
На 22-е сутки опыта - увеличение количества до 130,00±12,00/мкл (Р 0,001), на 29-е повторное снижение до -60,00±7,00/мкл (Р 0,001). То есть сразу после облучения наблюдался 2-х недельный период глубокой абсолютной ретикулоцитопении, затем накопление данных клеток в крови и новое падение показателя в конце эксперимента без признаков нормализации. Динамика аналогична полученной в контрольной серии, но абсолютное количество ретикулоцитов во время абортивного подъема и в конце опыта имело тенденцию к более высоким цифрам. Применение мексидола обеспечило некоторую сохранность тромбоцитов венозной крови, если в группе контроля максимальный дефицит тромбоцитов составлял 80 % (Р 0,001), то в серии с мексидолом -45 % (Р 0,001) (рис. 3.2.2). Пострадиационная лейкопения со снижением показателя на 86 % (Р 0,001) на фоне дополнительного использования мексидола была зафиксирована на 8-е сутки, продолжалась 1 неделю, затем наблюдалось повышение уровня лейкоцитов. На 22-й день опыта - транзиторное увеличение показателя (Р 0,05) и повторное снижение на 29-й день с тенденцией к нормализации - дефицит лейкоцитов составил 19 % (Р 0,05). В контрольной группе отмечался более продолжительный и глубокий период лейкопении - 2 недели, уровень лейкоцитов во второй половине наблюдения был заметно ниже по сравнению с животными, защищенными мексидолом (рис. 3.2.3). У кроликов опытной серии № 3 в первые 2 недели после облучения в пробах венозной крови присутствовали миелоциты в количестве 16,00±2,00/мкл (Р 0,01) и 8,00±2,00/мкл (Р 0,01) на 8-е и 15-е сутки соответственно, в дальнейшем миелоциты при исследованиях не определялись. В лейкограмме их процентное содержание в указанные сроки равнялось 1,70±0,15 % (Р 0,05) и 1,00±0,26 % (Р 0,05). В группе контроля миелоциты появлялись в венозной крови на 15-й день и обнаруживались до окончания опыта. В серии с применением мексидола в крови определялись метамиелоциты. Они присутствовали в пробах, взятых на 8-й, 15-й и 22-й день после лучевого воздействия, их максимальное количество было отмечено на 22-е сутки - 81,00±7,00/мкл. В конце эксперимента данные клетки в крови не определялись.
У кроликов, не получавших мексидол, метамиелоциты присутствовали в венозной крови на всех этапах опыта, максимум содержания (150,00±10,00/мкл, Р 0,001) приходился на 29-е сутки наблюдения. На фоне регулярного введения соединения абсолютная палочкоядерная нейтропения развивалась через 2 недели после лучевого удара и продолжалась не более 1 недели. В этот период количество палочкоядерных нейтрофилов сократилось от 281,00±23,00/мкл до 101,00±3,00/мкл (Р 0,001). В последующие 2 недели содержание данных клеток в крови постоянно повышалось и в конце 4-й недели составило 691,00±29,00/мкл (Р 0,001). Относительное количество палочкоядерных нейтрофилов все время оставалось увеличенным в 3-4 раза (Р 0,01). У контрольных животных постлучевая палочкоядерная нейтропения была значительно глубже и продолжительнее, динамика восстановления выражалась в меньшей степени. У животных опытной серии № 3, несмотря на применение мексидола, сразу после радиационной травмы развивалась сегментоядерная нейтропения до 242,00±7,00/мкл (Р 0,001) (у интактных кроликов 1983,00±21,00/мкл), которая сохранялась в течение 2-х недель. В дальнейшем появилась тенденция к восстановлению и в конце наблюдения абсолютное количество сегментоядерных нейтрофилов увеличилось до 1152,00±36,00/мкл (Р 0,001). Процентное содержание данных клеток сразу
Сравнительное исследование влияния соединений с антиоксидантным типом действия деанола ацеглумата, БЭМГС и мексидола на состояние гемопоэза, клеточного состава венозной крови и некоторых показателей перекисного окисления липидов и антиоксидантной защиты в плазме крови кроликов при экспериментальном радиационном воздействии
Моделирование нами острой лучевой болезни вызвало реакцию органов кроветворения описанную в ряде источников (Муксинова К.Н., 1996; Лесничий В.В., 1996; Гринштейн О.Я., 2002 и др.). Развитие костномозговой формы ОЛБ привело к гибели 30 % подопытных животных в контрольной серии, в основном, с 7 по 15 сутки после облучения. Применение мексидола, БЭМГС и деанола ацеглумата в изученных дозах позволило предотвратить гибель животных после лучевого воздействия во всех сериях (РХ2 0,001). На фоне лучевого повреждения в венозной крови животных всех серий развивалась нормохромная гипорегенераторная анемия, в течение 3 недель эксперимента статистически значимого отличия в количестве эритроцитов у всех животных не отмечалось, к концу наблюдения во всех группах наметилась тенденция к повышению количества эритроцитов, статистически значимый рост показателя на 23 % относительно контрольных цифр отмечался в серии с дополнительным введением мексидола. При дополнительном введение деанола ацеглумата уровень гемоглобина крови снизился на 48 % (Ри 0,001) от исходной величины (122,53±0,95 г/л), в серии с коррекцией БЭМГС на 34 % (Ри 0,001), на фоне мексидола дефицит уровня гемоглобина был минимальным и составил 16 %, при этом статистически значимое превышение показателя от цифр в контрольной серии на 24 % (Рк 0,001) отмечалось в серии с мексидолом (Р 0,001). Динамика изменений абсолютного количества ретикулоцитов при применении всех соединений статистически значимо не отличалась от контрольной серии (Рк 0,05). Снизить послелучевые потери тромбоцитов на всем протяжении эксперимента позволило использование мексидола. К концу опыта в этой серии определялось максимальное количество тромбоцитов 160,00±4,71 в 1 мкл крови, в других сериях количество данных клеток не отличалось от величины в контрольной группе.
Общее количество лейкоцитов на 8-е было выше только в серии с деанола ацеглуматом (Рк 0,001), на 15-е сутки степень пострадиационной лейкопении была ниже при применении мексидола (Рк 0,05), с 22-ого дня во всех группах отмечалось повышение показателя. В сериях с деанола ацеглуматом и БЭМГС общее количество лейкоцитов к 29-ому дню статистически значимо не отличалось друг от друга и от величины в интактной серии (Р 0,05), в серии с мексидолом количество лейкоцитов было ниже интактной серии на 25 % (Ри 0,001) но превышало цифры в контрольной группе на 14 % (Рк 0,05) (рис. 3.5.1). Во всех сериях с дополнительным введением препаратов с антиоксидантным типом действия снижалась степень омоложение лейкоцитарного состава периферической крови. Тяжесть эозинопении корректировалась при дополнительном введении БЭМГС и мексидола и была ниже, чем в контрольной серии (Рк 0,01). Моноцитопения вызванная лучевым повреждением сохранялась во всех сериях первые две недели, во второй половине опыта численность клеток в мазках возрасла, статистически значимое пятикратное увеличение числа моноцитов по сравнению с контрольной серией на 22-е сутки отмечалось в сериях с БЭМГС и деанола ацеглуматом (Рк 0,001), на 29-е показатели в данных сериях достоверно не отличались друг от друга и контрольной серии. Под влиянием мексидола в этот период количество моноцитов снизилось на 24 % от величины в интактной серии (Ри 0,01). Мексидол продлевал пострадиационную лимфоцитопению до трех недель, затем наблюдался выраженный рост величины показателя - в конце опыта абсолютное количество лимфоцитов было на 18 % меньше интактной серии (Р 0,01) и превышало на 105 % значения контрольных животных (Рк 0,01). БЭМГС и деанола ацеглумат поддерживали количество данных клеток на протяжении всего эксперимента на более высоком уровне, но их величина достоверно не отличалась от показателей контрольной серии (Рк 0,05). После облучения в мазках крови кроликов, получавших деанола ацеглумат, встречались разрушенные, гигантских размеров палочкоядерные и сегментоядерные нейтрофилы с гиперсегментированными ядрами, лимфоциты с патологическими чертами. Морфологически измененные клетки крови имели место во всех сериях данного блока в первые три недели. В сериях с БЭМГС и мексидолом на 29-е сутки данные клетки не определялись. Лучевое воздействие вызвало резкое сокращение численности миелокариоцитов на 8-е и 15-е сутки в 6,8 и 3,5 раза (Р 0,001), к 22-м наблюдался значительный прирост клеточной массы пунктата - до 84000,00±464,81х107мкл, на 29-е сутки в 1 мкл костномозгового пунктата количество миелокариоцитов было в 1,5 раза больше исходного уровня (Р 0,01). На фоне деанола ацеглумата общее количество миелокариоцитов увеличилось на 8-е сутки от 15 767,5 0±3 89,45x103/мкл до 30000,00±942,81х103/мкл (Р 0,001).
В дальнейшем общий объем клеточной массы сокращался, на 29-й день 1 мкл костномозгового пунктата содержал не более 25 % данных клеток от величины в интактной серии (Р 0,001). У животных, получавших БЭМГС, миелокариоцитопения сохранялась, на 22-ые сутки отмечалась нормализация показателя, затем следовало его повторное снижение до 9000,00±471,40х103/мкл (Р 0,001). В группе с использованием мексидола практически отсутствовал период миелокариоцитопении, и к концу эксперимента наблюдалась нормализация показателя (Р 0,05). Деанола ацеглумат ограничивал сокращение мегакариоцитарного ростка, к 29-ому дню их дефицит в этой серии составлял 23 % (Р 0,05) от исходной величины. БЭМГС не лимитировал мегакариоцитопению, она сохранялась до конца наблюдения. Мексидол предотвращал сокращение численности мегакариоцитов на протяжении всего эксперимента (Р 0,05). Пострадиационное торможения пролиферативной функции костного мозга сохранялось в сериях с деанола ацеглуматом и БЭМГС - количество митозов в этих сериях до последнего этапа эксперимента включительно, не отличалось от показателей контрольной серии (Р 0,05). Мексидол стимулировал пролиферативные процессы в костном мозге - количество абсолютных митозов в этой серии увеличилось от 0,107±0,09х103/мкл до
Сравнительное исследование влияния сочетанного применения циклофосфана и соединений с антиоксидантным типом действия деанола ацеглумата, БЭМГС и мексидола на гемопоэз, клеточный состав венозной крови и некоторые показатели перекисного окисления липидов и антиоксидантной защиты в плазме крови кроликов
После применения циклофосфана в крови животных развивалась нормохромная гипорегенераторная анемия, при этом количество эритроцитов, гемоглобина и ретикулоцитов уменьшалось на протяжении всего периода наблюдения и в конце эксперимента дефицит этих показателей в контрольной группе составлял 63 % (Р 0,001), 76 % (Р 0,001) и 81 % (Р 0,001) соответственно от исходного уровня. Дополнительное применение деанола ацеглумата в дозе 120 мг/кг, мексидола в дозе 5 мг/кг и БЭМГС в дозе 5 мг/кг предотвратило развитие анемии в первые две недели эксперимента и снизило степень ее выраженности к концу наблюдения. Величины показателей красной крови в сериях с коррекцией соединениями с антиоксидантной активностью статистически значимо не отличались, их дефицит в этих сериях к концу эксперимента был в среднем на 30 % меньше, чем в контрольной группе (рис. 4.3.1). Все исследуемые соединения не изменяли степень гемолиза эритроцитов, стимулированную циклофосфаном во второй половине эксперимента. При анализе морфологических особенностей эритроцитов анизоцитоз и пойкилоцитоз, отмеченные при циклофосфановом воздействии на всем протяжении эксперимента, в сериях с дополнительным введением корректирующих соединений наблюдался только в течение первой недели после окончания введения цитостатика. Значительно ограничить степень тромбоцитопении позволило только введение мексидола, количество тромбоцитов в этой группе уменьшилось на 24 % (Р 0,001), в серии с БЭМГС - 33 % (Р 0,001) и на 49 % (Р 0,001) с деанола ацеглуматом. Все соединения предупреждали развитие циклофосфановой лейкопении в течение первых трех недель, в серии с введением мексидола на 22-е сутки не наблюдалось снижения лейкоцитов в среднем на 40 % от исходной величины (Р 0,001), как в двух других группах, в последующем у всех животных показатель не отличался от исходных цифр (рис. 4.3.1). Циклофосфан вызывал омоложение нейтрофильного состава гранулоцитов крови - индекс ядерного сдвига к концу эксперимента увеличился от 0,13±0,01 до 1,73±0,11 (Р 0,001). Дополнительное назначение мексидола и деанола ацеглумата снижало этот показатель до 0,46±0,04 и 0,29±0,01 соответственно (Р 0,001), в меньшей степени оказал влияние на индекс ядерного сдвига БЭМГС (0,50±0,03 (Р 0,001)).
Применение соединений с антиоксидантнои активностью позволило сохранить другие разновидности лейкоцитов - моноциты, эозинофилы и лимфоциты венозной крови, причем мексидол и БЭМГС обеспечивали эту сохранность на протяжении всего эксперимента, при дополнительном введении деанола ацеглумата отмечалось достоверное снижение количества этих клеток на 22-ой день, а затем восстановление до исходной величины. Курс циклофосфана вызывал сокращение общего объема клеточной массы в костном мозге до 1000,00±198,33/мкл (Р 0,001). Дополнительное введение деанола ацеглумата обеспечило сохранность миелокариоцитов на 8-е, 15-е и 22-е сутки опыта. На 8-е сутки от начала эксперимента в этой группе наблюдалось повышение митотической активности миелокариоцитов на 30 % (Р 0,001) и одновременно увеличился общий объем клеточной кроветворной массы от 15764,50±389,45/мкл до 17000,00±349,96/мкл (Р 0,05), что превышало данный показатель в контрольной серии на 70 % (Рк 0,001). При завершающем исследовании было отмечено значительное уменьшение клеточности костного мозга до 3500,00±182,57/мкл (Р 0,001, Рк 0,05). Применение БЭМГС в течение первых трех недель способствовало сохранности миелокариоцитов в меньшей степени - уровень количества данных клеток имел тенденцию к более высоких цифрам, хотя статистически значимо не отличался от контрольной серии (Рк 0,05), на 29 сутки соединение обеспечивало сохранность миелокариоцитов (10000,00±288,68/мкл, Р 0,001, Рк 0,001) в отличие от контрольной серии, где они определялись в минимальном количестве. Введение мексидол а ограничивало потери миелокариоцитов, к концу эксперимента показатель даже превышал исходные цифры на 27 % (Ри 0,001, Рк 0,001) (рис. 4.3.2). В условиях сочетанного использования циклофосфана и деанола ацеглумата в первые две недели наблюдалась костномозговая мегакариоцитопения с максимальной глубиной до 81,25±2,28/мкл (у интактных животных - 138,59±8,14/мкл, (Р 0,001, Рк 0,01), в контрольной серии -37,50±3,61/мкл (Р 0,001). Во второй половине опыта количество мегакариоцитов в костном мозге было восстановлено (Р 0,05). БЭМГС уменьшал потери мегакариоцитов в первые три недели эксперимента, на 29-е сутки их количество в этой серии составило 102,50±4,14/мкл (Р 0,001). Мексидол обеспечил сохранность мегакариоцитарного ростка в первой половине опыта, на 22-ые сутки отмечалось снижение показателя на 64 % от исходной величины (Р 0,001), а затем его восстановление до 118,75±2,95/мкл (Р 0,05). Циклофосфан вызывал супрессию пролиферативных процессов в костном мозге с сокращением количества митозов.
Применение деанола ацеглумата в комплексе с химиопрепаратом довольно долго обеспечивало достаточно высокую пролиферативную активность кроветворных клеток. В течение трех недель количество митозов даже несколько превышало исходный уровень. Так, на 15-е сутки опыта оно составляло 127,00±10,00/мкл (у интактных животных -108,00±10,00/мкл, Р 0,05), на 22-е - 150,00+10,00/мкл (Р 0,001), это превышало количество митозов в серии с дополнительным введением мексидола (Рм 0,05). Однако на 29-й день опыта был отмечен спад пролиферативной активности с сокращением показателя до 35,00±2,00/мкл (Р 0,001), тогда как применение мексидола способствовало его восстановлению до исходной величины 140,00±10,00/мкл (Р 0,05). БЭМГС не корректировал снижения пролиферативной активности, вызванной циклофосфаном на 8-е и 15-е сутки опыта, количество митозов в этой серии составляло 30,00±3,00/мкл (Рк 0,05), во второй половине эксперимента соединение способствовало восстановлению митотической
