Содержание к диссертации
Введение
ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 16
2.1. Индукторы цитохромов Р450 „ „ 17
Индукторы фенобарбиталового типа „ „ 17
Индукторы 3-метилхолантренового (MX) типа „ 25
Индукторы глюкокортикоидного (ГК) типа 28
Пролифераторы пероксисом ....„ 33
Индукторы этанольного типа 35
2.2. Экспрессия и регуляция изоферментов цитохромов Р-450 при патологических состояниях 36
2.3. Перспективы клинического применения индукторов монооксигеназной системы печени 46
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Характеристика использованных в работе соединений и реактивов 60
Соединения и лекарственные препараты 60
Реактивы. 61
2.2. Экспериментальные животные — 63
2.3 Методы. 63
Выделение микросомальной фракции 63
Определение общего количества белка в микросомальной фракции 64
Определение количества цитохромов 64
Определение активности NADPH-цитохром Р450-редуктазы 65
Метод иммунных реплик (иммуноблоттинг) 65
Определение каталитической активности цитохромов Р450 ....66
Каталитическая активность CYP1A1, CYP1A2 и CYP2B1 67
Определение каталитической активности CYP2E1 67
Определение каталитической активности CYP3A4 „ — „.67
Гексеналовый сон ....68
Барбиталовый сон „. „ 68
Тест «открытое поле» „ „ —68
Метод определения острой токсичности и средней эффективной дозы 70
Методы изучения хронической токсичности „ 70
Изучение мутагенных свойств „ „ 71
Методы определения антигипоксических свойств препаратов 72
Острая гипобарическая гипоксия 72
Острая гемическая гипоксия _ „...74
Острая гистотоксическая гипоксия 74
Острая гипоксия с гиперкапнией в гермообъеме „ 74
Методы исследования иммунотропных свойств -.....74
Первичный гуморальный иммунный ответ „ 74
Клеточный иммунный ответ 75
Фагоцитоз 75
Определение осмотической резистентности эритроцитов 76
Определение кислотной резистентности эритроцитов 76
Хемилюминесцентные методы исследования 77
Экспериментальные модели патологических состояний 78
Острый токсический гепатит 78
Обратимый подпеченочный холестаз 78
Внутрипеченочный холестаз. 79
Викасоловая гипербилирубинемия ....79
Изучение связи «структура - активность» 80
Макро-микроскопические методы исследования 83
Статистическая обработка данных 83
ГЛАВА 3. ПОИСК МОДУЛЯТОРОВ МОНООКСИГЕНАЗНОИ СИСТЕМЫ ПЕЧЕНИ В РЯДУ ПРОИЗВОДНЫХ БЕНЗИМИДАЗОЛА И КСАНТИНА 85
ГЛАВА 4. СРАВНИТЕЛЬНЫЙ ФАРМАКОЛОГИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ ЭФФЕКТОВ ДИГИДРОТИАЗОЛОКСАНТИНАХ-68, ТИЕТАНИЛКСАНТИНАХ-191 И БЕНЗОНАЛА 96
ГЛАВА 5. ИССЛЕДОВАНИЕ ЗАВИСИМОСТИ МЕЖДУ СТРОЕНИЕМ АЗОЛОВ И ИХ МОСИНДУЦИРУЮЩИМ ЭФФЕКТОМ 104
5.1. Формирование моделей распознавания индукторов МОС 104
5.2. Анализ влияния отдельных элементов строения азолов на активность МОС 107
Влияние циклических фрагментов 107
Влияние ациклических фрагментов 108
Анализ элементов модификации базовых структур 112
ГЛАВА 6. ХАРАКТЕРИСТИКА ИЗОФЕРМЕНТНОГО ПРОФИЛЯ ИНДУКЦИИ МОСДИГИДРОТИАЗОЛОКСАНТИНОМ Х-68 И ТИЕТАНИЛКСАНТИНОМ Х-191. МЕХАНИЗМ ИНДУКЦИИ 115
6.1. Влияние дигидротиазолоксантина Х-68 и тиетанилксантина Х-191 на содержание цитохромов Р450, Ь5 и концентрацию микросомального белка в печени крыс 115
6.2. Влияние дигидротиазолоксантина Х-68 и тиетанилксантина Х-191 на активность NADPH-цитохром Р450-редуктазы 118
6.3. Качественная оценка влияния дигидротиазолоксантина Х-68 и тиетанилксантина Х-191 на основные изоформы цитохромов Р450 119
6.4. Изучение каталитической активности основных изоформ цитохромов Р450 печени под действием ДГТК Х-68 и ТК Х-191 123
6.5. Изучение механизма МОС-индуцирующего действия Х-68 128
ГЛАВА 7. ОСНОВНЫЕ ФАРМАКОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА И ТОКСИКОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ДИГИДРОТИАЗОЛОКСАНТИНА Х-68132
7.1. Изучение антигипоксантных и антиоксидантных свойств Х-68 132
7.2. Влияние дигидротиазолоксантина Х-68 на центральную нервную систему 139
7.3. Иммунотропные свойства дигидротиазолоксантина Х-68 144
7.4. Изучение общетоксического действия дигидротиазолоксантина Х-68 ...150
ГЛАВА 8. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ОБОСНОВАНИЕ ЭФФЕКТИВНОСТИ ГЕПАЗАНА ПРИ ПАТОЛОГИЧЕСКИХ СОСТОЯНИЯХ С ДОКАЗАННОЙ ЗАВИСИМОСТЬЮ ОТ
ФУНКЦИОНИРОВАНИЯ МОНООКСИГЕНАЗНОЙ СИСТЕМЫ 164
8.1. Влияние гепазана на тетрахлорметановый токсический гепатит 164
8.2. Изучение МОС-корригирующей активности гепазана на модели обратимого подпеченочного холестаза „ 176
8.3. Исследование лечебного эффекта гепазана при экспериментальном внутрипеченочном холестазе 186
8.4. Профилактическая и лечебная эффективность гепазана на модели викасоловой гипербилирубинемии 203
8.5. Влияние гепазана на активность МОС в условиях эндотоксемии 207
ГЛАВА 9. ОБСУЖДЕНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ 216
ВЫВОДЫ ..252
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ 255
- Экспрессия и регуляция изоферментов цитохромов Р-450 при патологических состояниях
- Определение количества цитохромов
- ПОИСК МОДУЛЯТОРОВ МОНООКСИГЕНАЗНОИ СИСТЕМЫ ПЕЧЕНИ В РЯДУ ПРОИЗВОДНЫХ БЕНЗИМИДАЗОЛА И КСАНТИНА
- СРАВНИТЕЛЬНЫЙ ФАРМАКОЛОГИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ ЭФФЕКТОВ ДИГИДРОТИАЗОЛОКСАНТИНАХ-68, ТИЕТАНИЛКСАНТИНАХ-191 И БЕНЗОНАЛА 96
- ИССЛЕДОВАНИЕ ЗАВИСИМОСТИ МЕЖДУ СТРОЕНИЕМ АЗОЛОВ И ИХ МОСИНДУЦИРУЮЩИМ ЭФФЕКТОМ
Введение к работе
Проблема детоксикации как одна из глобальных проблем медицины, по значимости далеко превосходящая потребности частных задач фармакологии, до сих пор далека от решения. Особенно слабо разработаны фармакологические аспекты регуляции монооксигеназной ферментной системы (МОС), ключевым звеном которой является суперсемейство гем-тиолатных ферментов - цитохромов Р-450 (Р450), осуществляющих катаболизм эндогенных биологически активных веществ и ксенобиотиков [436; 437; 587; 605; 776].
Образовавшийся разрыв между уровнем знаний по физиологии МОС и способам фармакологической коррекции её активности стал особенно ощутим в последние десятилетия. Стремительно растет объём информации о влиянии ксенобиотиков, в том числе и лекарств, на активность МОС, однако до настоящего времени нет отдельного фармакологического класса индукторов монооксигеназ. [538; 653]. В то же время этот феномен давно и хорошо изучен, его относят к разряду приспособительно-адаптивных реакций, сформировавшихся в результате длительных эволюционных процессов и направленных главным образом на детоксикацию организма [351; 435; 588; 589].
Группа индукторов, используемых в клинике с целью регуляции го-меостаза и повышения детоксицирующих свойств печени, крайне малочисленна. Родоначальник этого класса фенобарбитал (ФБ) и сегодня остается наиболее применяемым средством [175]. Появление флумецинола (зиксори-на) и бензобарбитала (бензонала) существенно не изменило представлений о фармакологии модуляторов МОС. Не внесло принципиально нового и изучение индуцирующих свойств кордиамина, уступающего классическому ФБ. Кроме того, все известные корректоры МОС - вещества широкого спектра действия, внутри которого активация Р450 не является ведущей, а высокая токсичность и ряд серьезных побочных эффектов существенно затрудняют их применение [9; 74; 153]. Необходимы новые эффективные низкотоксичные индукторы, способные оказывать хотя бы относительно избирательное
9 Р450-стимулирующее действие. Поэтому возрождение интереса к препаратам данного класса не случайно. Так, недавно разработана методология скрининга и проведен масштабный поиск индукторов цитохромов Р450 (Р450) среди ациклических и гетероциклических производных мочевины [9; 155; 154; 175]. Если до недавнего времени индукторы использовали, в основном, для лечения гипербилирубинемий различной этиологии (синдром Клиглера-Найара, Жильбера-Мейленграхта, Дубина-Джонсона, гемолитическая болезнь новорожденных и др.), то в настоящее время появились перспективные разработки в области новых сфер их потенциального применения [48; 340; 365; 669; 679; 705; 723; 739]. Таким образом, отчетливо определились фармакотерапевтические ниши индукторов МОС, но существующие препараты единичны и не вполне удовлетворяют запросам клиники. Серьёзно осложняет проблему неразработанность единых патогенетически обоснованных принципов терапии ферментиндуцирующими средствами.
Дефицит индукторов МОС особенно ощутим в гепатологии. Депрессия Р450 существенно осложняет фармакотерапию, ведет к снижению резистентности к экзо- и эндотоксинам, дисфункции гуморальных регуляторных механизмов и, в итоге, к усугублению патологических нарушений [168; 292; 415; 466; 584]. Важно, что наиболее известные гепатопротекторы (силибинин, си-либор, конвафлавин, эссенциале, гептрал), устраняя цитолиз гепатоцитов, не улучшают их нарушенную детоксикационную функцию [30; 73].
Не вызывает сомнений целесообразность их применения в токсикологии при отравлении соединениями (включая лекарственные препараты), метаболиты которых менее токсичны, чем исходные вещества [116; 496; 600; 767]. Накоплен обширный фактический материал о перспективах использования индукторов при внепеченочной патологии: облучении, острой ожоговой токсемии, почечной недостаточности, псориазе, ревматоидном артрите, эндогенных интоксикациях различного генеза [153]. Недавно обнаружены гастропротекторные свойства бензонала [253]. Экспериментально обоснована целесообразность их профилактического и лечебного применения при
10 ишемии печени [95; 242], гипокинезии, синдроме длительного сдавления [173; 174], показана эффективность при терапии пневмонии [200], туберкулеза и ряда других инфекционных заболеваний [128; 144]. Обозначены перспективы для коррекции МОС-тропных эффектов полихлорированных углеводородов [48], повышения эффективности противоопухолевых препаратов [194].
Таким образом, проблема поиска модуляторов функций МОС несомненно актуальна. В качестве источника особенно интересен класс азолов. Показано, что азот ароматического гетероцикла, вследствие наличия у него неподеленной пары электронов, способен формировать связь с железом гема Р450, тем самым регулируя активность МОС [583], а большинство известных индукторов фенобарбиталового типа (ФБ-типа) - азотсодержащие гетеро-циклы [175].
Цель исследования. Поиск модуляторов МОС среди оригинальных производных бензимидазола и ксантина. Характеристика фармакологического профиля МОС-стимулирующего эффекта и экспериментальное обоснование эффективности нового индуктора 6,8-диметил-2-пиперидинометил-2,3-дигидротиазоло[2,3-і]ксантина (гепазана) в условиях патологии, сопряженной с синдромом снижения детоксицирующей функции печени.
Задачи исследования.
Провести скрининг модуляторов монооксигеназной системы печени среди оригинальных производных азолов (тиетанилбензимидазолов, тиетанилк-сантинов, дигидротиазолоксантинов) на модели «гексеналового сна». Охарактеризовать МОС - модулирующие свойства наиболее активных азолов.
Изучить связь «структура-активность» в ряду азольных производных и построить математическую модель для прогноза цитохром-Р450- модулирующей активности бензимидазолов и ксантинов.
Исследовать профиль индукции МОС под действием 6,8-диметил-2-пиперидинометил-2,3-дигидротиазоло[2,3-і]ксантина (Х-68) и 1,3-диметил-8-бутокси-7-(тиетанил-3)ксантина(Х-191).
Экспериментально обосновать эффективность 6,8-диметил-2-пиперидинометил-2,3-дигидротиазоло[2,3-і]ксантина (Х-68, гепазана) как нового корректора МОС при остром токсическом гепатите, обратимом подпеченочном и внутрипеченочном холестазах, гемолитической викасо-ловой гипербилирубинемии новорожденных крысят и модели эндотоксе-мии.
Дать первичную токсикологическую характеристику и оценить основные фармакологические свойства 6,8-диметил-2-пиперидинометил-2,3-дигидротиазоло[2,3-і]ксантина (Х-68, гепазана), сопряженные с эффектом индукции МОС (иммунотропная, антигипоксическая, антиоксидантная активность).
Научная новизна.
Критериям научной новизны соответствует вся совокупность результатов проведенного исследования. Впервые в сравнительном аспекте изучена способность модулировать активность цитохромов Р450 у ряда оригинальных бензимидазолов и ксантинов, среди которых найдены соединения, обладающие выраженным цитохром-Р450-модулирующим эффектом, сравнимым или превосходящим эффект эталонных модуляторов МОС. На основе результатов скрининга построена математическая модель, позволяющая прогнозировать направленность эффекта азолов на Р450.
Установлено, что наиболее активными модуляторами МОС являются соединения Х-241, Х-111/1, вызывающие Р450 - ингибирующий эффект, а также 6,8-диметил-2-пиперидинометил-2,3-дигидротиазоло[2,3-г]ксантин (X-68, гепазан) и 1,3-диметил-8-бутокси-7-(тиетанил-3)ксантин (Х-191), проявляющие стабильные Р450-индуцирующие свойства, сравнимые с эффектом
12 референтного индуктора бензонала, а по ряду характеристик превосходящие его.
С помощью иммунохимических и биохимических методов исследования впервые дана характеристика изоферментного профиля Р450-индуцирующего эффекта соединений Х-68 (гепазан) и Х-191. Показано, что они является типичными индукторами фенобарбиталового типа.
Получены данные о выраженной МОС-корригирующей активности гепазана при остром тетрахлорметановом токсическом гепатите, обратимом подпеченочном и внутрипеченочном холестазе, при воздействии эндотоксина; показана высокая эффективность перинатальной профилактики гепазаном гемолитической гипербилирубинемии новорожденных крысят. Дана сравнительная характеристика лечебного и профилактического эффекта гепазана с эталонным индуктором МОС бензоналом.
Новым является установление возможности корригировать гепазаном повышение токсичности некоторых лекарственных средств, вызванное эндотоксином, а также выявление синергидного характера взаимодействия гепазана и дексаметазона в отношении МОС при эндотоксемии. Впервые изучены антигипоксические, антиоксидантные, иммунотропные свойства гепазана, дана его первичная токсикологическая характеристика.
Научно-практическая значимость работы.
Найден новый низкотоксичный индуктор МОС фенобарбиталового типа - гепазан (6,8-диметил-2-пиперидинометил-2,3-дигидротиазоло[2,3-і]ксантин), который, в отличие от производных барбитуровой кислоты, лишен седативного действия и превосходит их по терапевтическому индексу.
Обоснована возможность применения гепазана в качестве средства, усиливающего процессы детоксикации в организме, в терапии синдромов под- и внутрипеченочного холестаза, неконъюгированной гипербилирубинемии новорожденных, токсического гепатита и эндотоксемии.
Токсикологическая характеристика гепазана, а также комплексная оценка антитоксической, антигипоксической, антиоксидантной и иммуно-тропной активности нового индуктора обосновывают перспективность его дальнейших исследований. Результаты работы представляют комплекс доклинических испытаний потенциального лекарственного средства «гепазан».
На основе изученной связи «структура - МОС-индуцирующая активность» в ряду новых тиазолов и тиетанов на основе бензимидазола и ксанти-на построена математическая модель, которая может быть использована для направленного синтеза соединений с Р450-регуляторными свойствами и вне-экспериментального прогноза активности азолов в отношении монооксигеназ печени.
Основные положения, выносимые на защиту.
Тиазолы и тиетаны на основе бензимидазола и ксантина - класс соединений с выраженным разнонаправленным Р450-регуляторным эффектом.
Гепазан - 6,8-диметил-2-пиперидинометил-2,3-дигидротиазоло[2,3-і]ксантин - новый оригинальный индуктор МОС фенобарбиталового типа, отличающийся от производных барбитуровой кислоты отсутствием седативного действия, бимодальности эффекта и существенно превосходящий их по терапевтическому индексу.
Применение гепазана эффективно при патологии печени, сопряженной с депрессией монооксигеназной системы, - остром токсическом гепатите, под - и внутрипеченочном холестазе. Гепазан адекватно корригирует детоксицирующую функцию печени и проявляет умеренные гепато-протекторные свойства.
Перинатальное профилактическое введение гепазана предупреждает развитие викасоловой гипербилирубинемии новорожденных крысят.
Гепазан обеспечивает эффективную коррекцию угнетения активности МОС при воздействии эндотоксина и нормализацию повышенной ток-
14 сичности некоторых лекарственных средств в условиях супрессии МОС эндотоксином.
Сочетанное использование дексаметазона и гепазана, в отличие от комбинации с бензоналом, обеспечивает синергидную протекцию МОС при экспериментальной эндотоксемии.
Гепазан повышает устойчивость организма к острой гипобарической гипоксии, обладает умеренной антирадикальной и иммуномодули-рующей активностью и не проявляет мутагенных свойств.
Апробация работы.
Основные положения диссертации представлены на Пленуме правления Российского научного общества фармакологов «Фармакология и современная медицина» (С-Пб, 1999), международных конференциях «Фармация в 21 веке: инновации и традиции» (С-Пб, 1999) и «Современные информационные технологии» (Пенза, 2000), Всероссийской научно-технической конференции «Компьютерные технологии в науке, проектировании и производстве» (Ниж. Новгород, 2000), научно-практической конференции "Актуальные вопросы иммунореабилитации больных" (Тюмень, 2000), Всероссийской научной конференции «Новые достижения в химии карбонильных и гетероциклических соединений» (Саратов, 2000), 3-ем Российском научном форуме "Санкт-Петербург - Гастро-2001" (Санкт-Петербург, 2001), V Всероссийской конференции "Актуальные вопросы инфекционной патологии и современные методы лечения" (Пенза, 2001), V международном Симпозиуме «Проблемы саногенного и патогенного эффектов экологического воздействия на внутреннюю среду организма» (Чолпон-Ата, 2001), VIII и IX Всероссийском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2001, 2002), III Международном конгрессе молодых ученых «Науки о человеке»» (Томск, 2002), II съезде Российского научного общества фармакологов (Москва, 2003), IV Всероссийском научном семинаре «Химия и медицина» (Уфа, 2003).
15 Публикации.
По материалам диссертации опубликовано 44 работы и получено 3 патента на изобретение.
Объем и структура диссертации.
Диссертация изложена на 306 страницах машинописного текста, иллюстрирована 63 рисунками, содержит 47 таблиц, состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, результатов собственных исследований, обсуждения, выводов и списка литературы. Библиографический указатель включает 253 отечественных и 535 зарубежных источника литературы.
class1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ class1
Экспрессия и регуляция изоферментов цитохромов Р-450 при патологических состояниях
Традиционно под феноменом ферментативной индукции понимают синтез фермента de novo как результат повышенной транскрипции гена в ответ на стимуляцию [495]. В отношении Р450 термин «индукция» применяют для обозначения обратимого увеличения содержания и/или активности ферментов цитоплазматическои сети, при этом механизм, лежащий в ее основе (активация процессов транскрипции и трансляции или стабилизация фермента субстратом, ведущая к новому устойчивому равновесию между его синтезом и деградацией), хотя и принимается во внимание, не является классифицирующим [495].
Изучение индукции барбитуратами МОС берет начало с работ Герберта Реммера о механизме толерантности к производным барбитуровой кислоты [660; 663] и одновременно опубликованных исследований Аллана Коннея о стимуляции ими скорости собственного метаболизма [260;330].
С этого времени ФБ становится прототипным индуктором большой группы структурно разнородных веществ, способных стимулировать экспрессию CYP2A, 2В, 2С, 2Н, ЗА, 6А, CYP 102/106 и в меньшей степени 1А [480; 567; 591; 627; 713; 774]. Среди стимулируемых ФБ подсемейств Р450 наиболее индуцибельным считают CYP2B, экспрессия которого возрастает в 30-50 раз по сравнению с конститутивным уровнем [713]. Именно эта группа активаторов МОС нашла применение в клинической практике.
Имеющиеся сведения о связи структуры этих соединений и Р-450-индуцирующей активностью не позволяет дать однозначный ответ на вопрос: какие параметры молекулы ксенобиотика необходимы для проявления индуцирующей активности по ФБ-типу? Тем не менее, для индукторов ФБ-типа найден ряд общих физико-химических свойств (структурных особенностей), определяющих их ферментиндуцирующую активность. Все они являются типичными трудноокисляемыми поляризуемыми липофильными ксенобиотиками (среди них нет эндогенных биологически активных веществ). Геометрия их молекул обеспечивает комплементарность ароматических сегментов к активным центрам вероятных клеточных рецепторов. Кроме того, для них характерно: а) наличие фенилалкиламидной группы (характерно для фармакологически активных барбитуратов, пиримидинов); б) присутствие одновременно 2 фенилалкиламиноацильных групп (характерно для ациклических мочевин, бензгидриламидов, производных изоиндолинона, хиназолинонов, моно- и бициклических мочевин); в) наличие 1,2-дифенилэтанового фрагмента - (характерно для активных бициклических и моноциклических мочевин, производных имидазола); г) присутствие бензгидрильной или бифе-нильной групп в ациклической или циклической форме; д) наличие связей с явно выраженными электроноакцепторными свойствами гетероатома; е) отсутствие выраженных гидрофильных свойств [74; 175].
Определение количества цитохромов
Определение количества цитохромов Р450 и Ь5 в микросомах печени проводили по методу [601]. Измерения проводили в двулучевом режиме на спектрофотометре «Hitachi 556» (Япония), снабженном X-Y-самописцем модели «Hitachi-057» или SPECORD «Carl Ceiss М400» в 0,1 М калий-фосфатном буфере (рН 7,4), содержащем 20%-ый глицерин.
Количество Ь5 определяли из дифференциального спектра по разнице между восстановленной дитионитом натрия (опытная кювета) и окисленной (кювета сравнения) формами цитохрома. Количественно Р450 оценивали после восстановления цитохрома в обеих кюветах дитионитом натрия (Na2S204) и последующего продувания суспензии микросом в опытной кювете окисью углерода в течение 1 мин.
Количество Ь5 и Р450 рассчитывали по разности экстинкций между максимумом и минимумом поглощения: ДА 428-408 нм ДЛЯ Ь5 И ДА 450-490нм Для Р450. Коэффициенты экстинкций: 91см_,тМ 1 и бсм тМ-1 для Р450 и Ь5 соответственно. Содержание Р450 и Ь5 рассчитывали на 1 мг микросомального белка.
Поиск модуляторов монооксигеназнои системы печени в ряду производных бензимидазола и ксантина
Поиск модуляторов МОС проведен среди 198 производных тиетанов и тиазолов на основе бензимидазола и ксантина, синтезированных на кафедре фармацевтической химии БГМУ (зав. каф. д.ф.н., профессор Халиуллин Ф.А.). В качестве скринингового теста использована модель «гексеналового сна», информативность и экономичность которой позволяют рассматривать ее как одну из базовых для проведения масштабных исследований подобного рода [9; 154].
МОС-модулирующий эффект азолов исследовали в двух дозах: 5 и 50 мг/кг. Следовать классическим путем (изучать эффект при введении в экви-токсических дозах) было довольно трудно ввиду сложности лабораторного синтеза соединений в количествах, необходимых для определения DL5o, тем более что класс азолов характеризуется низкой токсичностью [85; 114; 140; 207; 211; 220; 235]. Кроме того, по данным литературы, именно в этом диапазоне доз чаще всего регистрируется модулирующий эффект производных азолов в отношении МОС [34; 72; 169].
Соединения ex tempore разводили на 2% крахмальной слизи и вводили неинбредным мышам-самцам двукратно внутрижелудочно с интервалом 24 ч. Спустя сутки с момента последнего введения проводили гексеналовую пробу.
Данные экспериментов ГС оценивали по индексу модуляции (Jm). Jm -относительная величина, выражающая в процентах разность длительности ГС контрольных и опытных групп животных:
СРАВНИТЕЛЬНЫЙ ФАРМАКОЛОГИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ ЭФФЕКТОВ ДИГИДРОТИАЗОЛОКСАНТИНАХ-68, ТИЕТАНИЛКСАНТИНАХ-191 И БЕНЗОНАЛА 96
Характеристика МОС-стимулирующего эффекта нового ферментинду-цирующего средства на первом этапе исследований предполагает проведение. сравнительного фармакологического анализа с классическим стимулятором МОС [154], в качестве которого нами был выбран бензонал (бензобарбитал). Подобно фенобарбиталу, он является эталонным индуктором МОС, но превосходит его по степени индукции ферментов I и II фаз биотрансформации, активации электронтранспортных процессов в NADPH- и NADH-зависимых цепях ЭПР [12; 125; 155] и характеризуется минимальными побочными эффектами: маловыраженной седацией [186], невысокой токсичностью и отсутствием угнетающего действия на дыхательный центр [146; 229]. ED5o исследовали на белых половозрелых мышах-самцах параллельно с определением DL5o. Соединения вводили по принятой схеме внутрь, через сутки после последнего введения мышей тестировали на модели ГС. ED5o рассчитывали по методу [171]. Как видно из таблицы 4.2, с точки зрения безопасности наиболее выгодное положение занимает Х-191: при самой низкой токсичности (цифровые значения которой не определены вследствие невозможности введения в дозе, вызывающей гибель мышей) его молекулярная масса (табл. 4.1) близка к Mr двух других индукторов МОС, что обуславливает количественно равные эквимолярные дозы этих веществ. Бензонал и X-68 являются умеренно опасными соединениями (III класс опасности по [56]), однако Х-68 превосходит бензонал в 12,5 раз по Т;, что является несомненным преимуществом перед эталонным индуктором МОС.
ИССЛЕДОВАНИЕ ЗАВИСИМОСТИ МЕЖДУ СТРОЕНИЕМ АЗОЛОВ И ИХ МОСИНДУЦИРУЮЩИМ ЭФФЕКТОМ
В данной главе представлены результаты исследования ССА индукторов МОС, найденных в результате скрининга азолов в ряду оригинальных производных ТБИ, ТК и ДГТК (гл. 3). ССА изучали с помощью системы компьютерного моделирования «SARD»1 [124], подробное описание алгоритмов работы которой приведено в работе [214].
В качестве исходных данных использованы результаты экспериментов на модели ГС. Из 198 изученных соединений было сформировано три альтернативных класса МОС-тропных средств: «индукторов», «индифферентных» и «ингибиторов». Критерием разделения на классы служила статистически значимая (критический уровень значимости А был принят за 0,05) разница длительности ГС контрольных и опытных групп животных. На основе двух первых классов был сформирован массив обучения системы «SARD» и построен ряд экспериментальных моделей, различающихся степенью распознавания тестируемых структур. Принадлежность структур массива обучения к альтернативным классам определялась на основании двух алгоритмов, реализованных в «SARD»: «геометрия» и «голосование». Наиболее высоким процентом распознавания структур массива обучения характеризовались три модели (М-1, М-2 и М-3) (табл. 5.1). Проверку их корректности осуществляли путем прогнозирования активности серии соединений - производных азолов с известным (по литературным данным) влиянием на МОС. Для этого использованы индукторы МОС: омепразол [599], кофеин [487], пимозид [473], ФБ [774], К-134 [190], ДГТК Х-68, ДГТК Х-126 и ТК Х-103-2; а также ТК MB-14 и Х-158, ТБИ Л-16, Л-95 и Л-84 и бендазол (дибазол), не проявляющие по нашим данным МОС-модулирующих эффектов.
