Содержание к диссертации
Введение
Глава 1. Обзор литературы 12
1.1. Современные аспекты этиологии и патогенеза воспалительных заболеваний внутренних женских половых органов 12
1.2. Характеристика методов лечения воспалительных процессов матки и ее придатков 19
1.2.1. Современное состояние фармакотерапии эндометритов и сальпингитов 19
1.2.2. Препараты растительного происхождения, применяемые при повреждениях матки и ее придатков 21
Глава 2. Материалы и методы исследования 32
2.1. Химико-фармакологическая характеристика сухого экстракта и фракций ортилии однобокой 32
2.2. Методы, использованные для определения фармакологической активности сухого экстракта и фракций ортилии однобокой 36
2.3. Характеристика моделей повреждений матки и ее придатков и методов, использованных для определения фармакотерапевтической эффективности сухого экстракта ортилии однобокой 42
2.3.1. Описание способа моделирования воспалительного заболевания матки у белых крыс - острого эндометрита 42
2.3.2. Характеристика модели воспалительного заболевания придатков матки у кроликов - острого сальпингита 46
2.4. Методы, использованные для определения влияния фракций, извлеченных из ортилии однобокой, на репродуктивную систему белых крыс в эксперименте 48
Глава 3. Фармакологические свойства сухого экстракта и фракций ортилии однобокой 51
3.1. Определение острой токсичности сухого экстракта ортилии однобокой 51
3.2. Влияние сухого экстракта и фракций ортилии однобокой на течение основных фаз воспалительной реакции 51
3.2.1. Определение влияния сухого экстракта и фракций ортилии однобокой на течение экссудативной фазы 51
3.2.2. Влияние сухого экстракта ортилии однобокой на течение альтеративной фазы воспалительной реакции 53
3.2.3. Влияние сухого экстракта ортилии однобокой на образование фиброзно-грануляционной ткани 54
3.3. Изучение жаропонижающего свойства сухого экстракта ортилии однобокой 55
3.4. Исследование анальгезирующей активности сухого экстракта ортилии однобокой 56
3.5. Определение спазмолитического действия сухого экстракта ортилии однобокой 56
3.6. Изучение антибактериальной активности сухого экстракта ортилии однобокой 57
3.7. Влияние сухого экстракта ортилии однобокой на систему гемокоагуяции 59
3.8. Влияние сухого экстракта ортилии однобокой на функциональное состояние центральной нервной системы 60
3.8.1. Определение влияния сухого экстракта ортилии однобокой на продолжи .ельность гексеналового сна 60
3.8.2. Влияние сухого экстракта ортилии однобокой на течение судорожной реакции, вызванной введением тиосемикарбазида и стрихнина 60
3.8.3. Влияние сухого экстракта ортилии однобокой на ориентировочно-исследовательское поведение и эмоциональную реакцию крыс в тесте "открытое поле" 62
3.9. Изучение влияния сухого экстракта ортилии однобокой на функциональное состояние почек 64
3.10. Влияние фракций, извлеченных из ортилии однобокой, на репродуктивную систему белых крыс в эксперименте 65
Глава 4. Фармакотерапевтическая эффективность сухого экстракта ортилии однобокой 71
4.1. Влияние сухого экстракта ортилии однобокой на течение острого эндометрита у белых крыс 71
4.2. Влияние сухого экстракта ортилии однобокой на клеточную инфильтрацию матки крыс с острым эндометритом 89
4.3. Влияние сухого экстракта ортилии однобокой на течение острого сальпингита у кроликов 91
Глава 5. Изучение механизмов противовоспалительного действия сухого экстракта и фракций ортилии однобокой 102
5.4. Изучение антиокислительной активности сухого экстракта ортилии однобокой 102
5.5. Определение мембраностабилизирующего действия сухого экстракта и фракций ортилии однобокой 103
Глава 6. Обсуждение полученных результатов 106
Заключение 113
Выводы 115
Список использованной литературы 116
- Современные аспекты этиологии и патогенеза воспалительных заболеваний внутренних женских половых органов
- Методы, использованные для определения влияния фракций, извлеченных из ортилии однобокой, на репродуктивную систему белых крыс в эксперименте
- Влияние сухого экстракта ортилии однобокой на течение острого эндометрита у белых крыс
- Определение мембраностабилизирующего действия сухого экстракта и фракций ортилии однобокой
Введение к работе
Актуальность темы. Воспалительные процессы матки и ее придатков занимают одно из первых мест в структуре гинекологических заболеваний (Краснопольский В.И., 2006; Banikarim Е., 2010; Сухих Г.Т., Шуршалина А.В., 2013). За последние годы отмечен рост патологии указанного профиля в республике Бурятия (Кожевников В.В., 2013). Многочисленные исследования гинекологов, морфологов, онкологов, вирусологов указывают на развитие системной воспалительной реакции, наличие связи между генитальными инфекциями, нарушениями гормональной регуляции при патологии шейки матки (Вихляева Е.М., 2002; Серов В.Н., 2004; Литвинова Т.М., Русакевич П.С, 2006; Киселев В.И., Молочков А.В., 2009; Ганцев Ш. X., 2011). Ряд авторов указывают на увеличение частоты заболеваемости раком шейки матки (Barten, 2007; Прилепская В.Н., 2009; Liaw K-L., Giuliano A., Hillman R. et al., 2010; Хачатурян A. P., 2011; Роговская С. И., 2013). Возросший в настоящее время интерес специалистов к изучению воспалительных заболеваний гениталий определяется полиморфизмом микробных ассоциаций, существованием антибиотикорезистентных штаммов, атипичностью клинической картины, появлением маломанифестных затяжных вариантов течения (Макаров О.В., 2005; Бакулев А. Л., Василенко Л. В., 2008; В. Н. Кузьмин, 2011; Lauper, 2008; Wimalasena, 2010). Наличие в арсенале акушеров-гинекологов лекарственных средств не решает данную проблему. Несвоевременное и неадекватное лечение заболеваний органов малого таза ухудшает качество жизни, приводит к снижению трудоспособности женщин в возрасте социальной активности, ухудшает репродуктивное здоровье (Сушинская Т.В., 2000; Буянова С.Н., 2006; Жовтун Л.М., 2006; Кулаков В.И., 2007; Sh.Ahamed, 2010). В последние годы сохраняющаяся угроза депопуляции, низкий уровень здоровья женщин фертильного возраста вызывают большую тревогу (Радзинский В.Е., 2011), особенно в регионах Сибири и Дальнего Востока.
В Посланиях Федеральному собранию Президента Российской Федерации (РФ), «Стратегии национальной безопасности Российской Федерации до 2020 года» указано на фундаментальное значение положительной демографической ситуации в стране. Разработка и реализация комплекса мероприятий для решения проблем в сфере охраны материнства и детства по сохранению и укреплению репродуктивного здоровья населения в соответствии с Указом Президента РФ от 7 мая 2012 года №606 «О мерах по реализации демографической политики Российской Федерации» является одной из главных задач. Работа Совета по реализации приоритетных национальных проектов и демографической политике по осуществлению «Концепции демографического развития Российской Федерации на период до 2025 года» должна привести к укреплению репродуктивного здоровья женщин (Указ Президента РФ от 9 октября 2007 г. № 1351).
Основным принципом лечения заболеваний матки и ее придатков, наряду с ликвидацией патологического процесса, является терапия тех изменений в организме, которые поддерживают длительное течение заболевания. Используемые в настоящее время в гинекологии лекарственные препараты нередко оказывают побочное действие, многие из них имеют ограниченное применение ввиду имеющихся противопоказаний (Болевич СБ., Синельникова Т.Г., 2000; Страчунский Л.С., 2002; Яковлев СВ., 2002; Авдеева В.Б., 2003). Кроме того, медикаментозные методы фармакотерапии указанной патологии не всегда позволяют добиться полной реабилитации больных и предотвратить рецидивы воспалительного процесса. Это можно объяснить тем, что при
заболеваниях матки и ее придатков в патологический процесс вовлекаются все звенья репродуктивной системы, центральная и вегетативная нервная, сердечнососудистая, мочевыделительная, иммунная системы, нарушаются гемостаз и обмен веществ, что приводит к нарушению специфических функций женского организма (Бодяжина В.И., 1978; Айламазян Э.К., 2008; Пестрикова Т.Ю., Юрасов И. В., Юрасова Е. А., 2009).
В связи с этим, тактика лечения в таких случаях предполагает использование средств, оказывающих действие на основные звенья патологического процесса и обеспечивающих комплексное воздействие на организм, а также устраняющих сопутствующие нарушения. Поэтому проблема изыскания новых высокоэффективных, безвредных, удобных в применении лекарственных средств остается весьма актуальной (Вайс Р.Ф., Финтельман Ф., 2004; Никонов Г.К., Мануйлов Б.М., 2005; Савинов В.А., 2008; Кукес В.Г., 2009; Белоусов Ю.Б., 2010; Чучалин А.Г., 2009).
Сведения об использовании растений в народной и традиционной медицине являются ориентиром для выбора направления поиска новых видов лекарственного сырья. В качестве объектов исследования служили ортилия однобокая - Orthilia secunda (L.) House, семейства Pyrolaceae, панцерина шерстистая Panzeria lanata (L.) Moench, семейства Lamiaceae, какалия копьевидная Cacalia hastata L. Compositae, которые издавна известны в Сибири как лекарственные растения, применяемые при лечении гинекологических заболеваний. Это является особенно ценным фактом, так как в справочной литературе отсутствуют разделы, касающиеся растительных средств, используемых для лечения и профилактики заболеваний матки и ее придатков. Кроме того, ортилия однобокая, панцерина шерстистая, какалия копьевидная произрастают на территории Сибири и являются доступными для их промышленных заготовок (Телятьєв В.В., 2004; Турищев С.Н., 2007).
Наиболее часто указанные растения используются для приготовления настоев и отваров, что крайне невыгодно с точки зрения рациональности использования сырья. В современной фармации предложена перспективная лекарственная форма - экстракт сухой, представляющий собой легкорастворимый в воде или водно-спиртовых смесях комплекс биологически активных веществ из лекарственных растений в концентрированном виде. Показатели его качества и содержание биологически активных веществ являются стабильными. Кроме того, использование фитопрепаратов в такой лекарственной форме удобно для применения больными. При терапии заболеваний шейки матки и влагалища во многих случаях предпочтительным признается интравагинальное применение препаратов из-за снижения системной абсорбции препаратов, что сводит к минимуму потенциальные возможности нежелательных эффектов.
С учетом этого разработаны новые растительные средства - экстракт сухой ортилии однобокой {Orthilia secunda (L.) House), экстракт сухой панцерины шерстистой (Panzerina lanata (L.) Moench), экстракт сухой какалии копьевидной (Cacalia hastata L.) и его 5% линимент.
Цель работы - определить основные фармакологические свойства и оценить фармакотерапевтическую эффективность экстрактов сухих ортилии однобокой (Orthilia secunda (L.) House), какалии копьевидной (Cacalia hastata L.) и панцерины шерстистой (Panzerina lanata (L.) Moench) при повреждениях матки и ее придатков в эксперименте.
Для достижения указанной цели были сформулированы следующие задачи:
1) определить основные фармакологические свойства экстрактов сухих ортилии однобокой, какалии копьевидной и панцерины шерстистой;
2) исследовать фармакотерапевтическую эффективность указанных
растительных средств при экспериментальных повреждениях матки и ее
придатков - остром эндометрите у белых крыс, хроническом сальпингите у
кроликов, эктопии шейки матки у белых крыс;
-
выявить общие закономерности в специфическом действии экстрактов сухих и фракций ортилии однобокой, панцерины шерстистой и какалии копьевидной, а также особенности их влияния на течение патологического процесса в матке и ее придатках;
-
определить роль отдельных групп биологически активных веществ, входящих в состав хлороформной, этилацетатной, бутанольной и водной фракций ортилии однобокой, панцерины шерстистой и какалии копьевидной, в реализации фармакотерапевтического эффекта;
5) сопоставить фармакотерапевтическую эффективность испытуемых
растительных средств и препаратов сравнения при экспериментальных
повреждениях матки и ее придатков;
6) выявить особенности в фармакотерапевтическом влиянии экстрактов
сухих ортилии однобокой, панцерины шерстистой и какалии копьевидной;
7) определить безопасность разработанных фитоэкстрактов ортилии
однобокой, панцерины шерстистой.
Научная новизна работы, теоретическая значимость. Впервые
установлено, что полученные фитоэкстракты ортилии однобокой, панцерины
шерстистой и какалии копьевидной обладают выраженной
фармакотерапевтической эффективностью при экспериментальных повреждениях матки и ее придатков - остром эндометрите, хроническом сальпингите, эктопии шейки матки, способствуя нормализации морфофункционального состояния матки и ее придатков у животных на более ранних сроках патологического процесса.
Общим и одним из основных механизмов в действии указанных экстрактов растений является наличие выраженной мембраностабилизирующей активности, ингибирование активности пиклооксигеназы 2, реализация которых обеспечивается антиоксидантным действием содержащегося в этих растительных средствах комплекса биологически активных веществ. Причем, хлороформная и этилацетатная фракции, извлеченные из ортилии однобокой, панцерины шерстистой и какалии копьевидной, с высоким содержанием флавоноидов в виде гликозидов и флавоноловых агликонов (кемпферол и кверцетин) и галлотанинов, оказывают наиболее выраженное мембраностабилизирующее и противовоспалительное действие. Выраженная общая антиоксидантная активность их связана как с прямым радикалперехватывающим действием фенольных соединений, входящих в их состав, так и опосредованным, обусловленным их хелатирующей активностью, активацией эндогенной антиоксидантной системы организма. Доказано стимулирующее влияние хлороформной и этилацетатной фракций ортилии однобокой на репродуктивную систему с повышением содержания гонадотропинов в сыворотке крови и увеличением массы репродуктивных органов.
Особенностями в их фармакотерапевтическом влиянии являются: экстракт
сухой ортилии однобокой оказывает более выраженное противовоспалительное
действие при остром эндометрите, экстракт сухой панцерины шерстистой - при
хроническом сальпингите, линимент экстракта какалии копьевидной - при
эктопии шейки матки. Показана возможность и целесообразность
фармакотерапии заболеваний матки и ее придатков указанными средствами растительного происхождения.
Практическая значимость работы. На основании проведенных исследований разработан и предложен важный патогенетически обоснованный подход к фармакотерапии заболеваний матки и ее придатков с использованием средств растительного происхождения, обладающих антиоксидантной, мембраностабилизируюшей, противовоспалительной активностью. Разработаны и предложены «Способ получения экстракта сухого ортилии однобокой, обладающего антиоксидантной и противовоспалительной активностью» (положительное решение на патент за № 2002115666/14(06475) от 12.11.2012); «Способ получения средства, обладающего антиокислительной и противовоспалительной активностью» (заявка № 2012152178/20 (положительный результат формальной экспертизы от 16.04.2013); «Способ получения средства, обладающего противовоспалительной активностью» (заявка № 2013114909/20 (положительный результат формальной экспертизы от 23.03.13). Подготовлены по материалам исследований и изданы методические рекомендации "Применение метода фитотерапии в гинекологической практике", учебное пособие «Применение лекарственных растений в акушерстве и гинекологии», рекомендованное Учебно-методическим объединением по медицинскому и фармацевтическому образованию ВУЗов России.
Результаты диссертационной работы используются в курсе лекций и практических занятий по фармакологии, клинической фармакологии и фитотерапии, гинекологии на медицинском факультете ФГБОУ ВПО «Бурятский государственный университет» (акт внедрения от 09.09.2013).
Основные положения, выносимые на защиту:
- базисными механизмами в фармакотерапевтическом влиянии экстрактов сухих и фракций ортилии однобокой, панцерины шерстистой и какалии копьевидной являются наличие у них выраженной антиоксидантной, мембраностабилизирующей и противовоспалительной активности и связанного с этим широкого спектра фармакологических свойств, что обусловливает целесообразность их применения при повреждениях матки и ее придатков;
отличия в фармакотерапевтическом влиянии указанных средств заключаются в том, что более выраженную эффективность при острых повреждениях матки (остром эндометрите) оказывает экстракт сухой ортилии однобокой; при хроническом сальпингите - экстракт сухой панцерины шерстистой, при эктопии шейки матки у белых крыс - линимент экстракта какалии копьевидной;
фармакотерапевтическая эффективность исследуемых средств превосходит по некоторым показателям, а по другим сопоставима с эффектами препаратов сравнения.
Апробация работы. Результаты исследования и основные положения данной работы доложены и обсуждены на: научно-практической конференции с международным участием «Тибетская медицина Бурятии - достояние России», посвященной 10-летию Центра восточной Медицины МЗ РБ (Улан-Удэ, 2000); II Международном Тихоокеанском конгрессе «Традиционная медицина: научные и практические аспекты» (Владивосток, 2001); VIII, IX и XVII Российском Национальном Конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2001, 2002, 2010); Всероссийской научной молодежной конференции с международным участием «Биологически активные добавки и здоровое питание» (Улан-Удэ, 2001); III Международном Конгрессе молодых ученых и специалистов «Науки о человеке» (Томск, 2002); The International conference «Integrated system of traditional and modern medicines - Дорно-Орнийн анагаах ухааны хосолмол тогтолцоо» (Ulaanbaatar, Mongolia, 2005); Международном Конгрессе «Практическая
гинекология: от новых возможностей к новой стратегии» (Москва, 2006); The 4 International Symposium on Traditional Medicine and Innovative Drugs (Erdos, China, 2009); The III International scientific conference «Traditional medicine: a current situation and perspectives of development» (Ulan-Ude, 2008); II International scientific conference «The clinical and theoretical features of modern medicine» (Moscow, 2010); 69-ой Всероссийской итоговой научной конференции, посвященной 200-летию со дня рождения Н.И. Пирогова (Томск, 2010); II International scientific conference of young scientists of National academy of sciences of Belarus «Moral, reproductive health, demography» (Minsk, Belarus, 2010); научно-практической конференции, посвященной 25-летию кафедры клинической фармакологии ИГИУВа (Иркутск, 2011); VI Leiden International Medical Conference «LTMSC-2011» (Leiden, Netherlands, 2011); IV International scientific conference «Problems and prospects of development of modern medicine» (Gomel, Belarus, 2012); V International scientific conference «SCIENCE4HEALTH» (Moscow, 2013); VI Международной конференции молодых ученых «Современные вопросы акушерства, гинекологии и перинатологии» (Москва, 2013).
Диссертационное исследование выполнено в Федеральном государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Бурятский государственный университет» в соответствии с программой и планом научно-исследовательских работ (№ гос. per. 01.2.00304320) по теме «Изучение перспективных лекарственных растений Восточной Сибири», а также Федеральной комплексной целевой программы «Прогнозирование, ранняя диагностика, профилактика и лечение инфекционно-воспалительных заболеваний органов женской половой сферы».
Публикации. По теме диссертации опубликовано 59 научных работ, из них: 19 статей - в рецензируемых научных журналах, рекомендованных ВАК Минобрнауки РФ для опубликования основных научных результатов диссертаций; 2 монографии; 2 учебных пособия, в которых отражены основные результаты проведенного исследования.
Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 271 странице компьютерного текста и состоит из введения, 5 глав, заключения, выводов и списка использованной литературы, включающего 438 источников, из которых 128 - на иностранных языках. Работа иллюстрирована 38 таблицами, 8 рисунками и 29 микрофотографиями.
Современные аспекты этиологии и патогенеза воспалительных заболеваний внутренних женских половых органов
Предупреждение и лечение воспалительных заболеваний женских половых органов представляет важнейшую часть проблемы охраны здоровья женщин. Научно обоснованная и правильно организованная лечебно-профилактическая помощь больным с воспалительными заболеваниями гениталий существенно влияет на трудоспособность, социальные, семейные, бытовые условия жизни женщины, ее репродуктивную функцию [3,6,20,24,42,49,50,65,110,127,129]. Успешная терапия воспалительных заболеваний женских половых органов (ВЗПО) имеет значение не только в восстановлении функций половой системы, но и в устранении сопутствующих нарушений эндокринной, нервной и других систем организма. Несвоевременное и неадекватное лечение ВЗПО приводит к хронизации процесса и является причиной бесплодия, внематочных беременностей, тазовых болей, причиняющих страдания и даже инвалидизирующих женщин в возрасте социальной активности [21,22,23,25,63,88,99,107].
Актуальность проблемы воспалительных заболеваний половых органов определяется и их высокой частотой, склонностью к длительному течению, развитием полисистемных расстройств.
Во всех странах мира в последние годы отмечено повышение частоты ВЗПО на 13% в общей популяции женщин репродуктивного периода [43,49,132]. Оценивая прямые и косвенные затраты более чем одного миллиона пациенток, ежегодно вынужденных обращаться к гинекологам в США, Balbi G. (1996) называет цифру, превышающую 4,2 млрд. долларов [21]. Отмеченный во многих странах мира рост ВЗПО является следствием возрастающей миграции населения, урбанизации, изменения полового поведения. В структуре гинекологических заболеваний ВЗПО занимают первое место во всем мире [107,110,112] и составляют 35-60% от числа всех заболеваний [6,21,22,66,88]. Воспалительные процессы матки и ее придатков характеризуются частым, в 45-70% случаев, переходом в хроническое рецидивирующее течение [23]. По данным литературы, больные с ВЗПО составляют 60-65% из всех гинекологических больных, обратившихся в женскую консультацию, и 30% - среди направляемых на лечение в стационар [26,43,99,107,110].
Следует отметить, что наибольший удельный вес в структуре ВЗПО имеют поражения придатков матки (от 67,6 до 98,8%), реже встречаются эндометриты (1-1,9%) [6,107]. Чаще наблюдается сочетание воспалительных заболеваний матки и ее придатков [6,20,21,22,107].
За последние годы накоплено много данных об этиологии воспалительных заболеваний внутренних половых органов женщин (ВЗПО).
Согласно современным представлениям, воспалительная реакция состоит из следующих связанных компонентов: изменений паренхимы, сосудистых реакций с экссудацией, высвобождения биологически активных веществ, фагоцитоза, физико-химических изменений в тканях и пролиферативных процессов, которые направлены на устранение воспалительного агента и восстановление поврежденной ткани [6,22,110,112,127,128,129,135]. В течение первых суток воспалительного процесса развивается лейкоцитарная фаза с образованием лейкоцитарного вала, концентрацией нейтрофилов и началом их массовой гибели. Соотношение нейтрофил: мононуклеар на этот срок составляет 3:1. На вторые сутки процесса формируется клеточный вал с преобладанием в нем макрофагов (макрофагальная фаза). Начиная с третьих суток, формируется фиброластическая капсула, толщина которой максимальна на десятые сутки. Затем капсула уплотняется, толщина ее уменьшается и к 20 суткам воспалительный процесс завершается образованием плотной соединительно-тканной капсулы. Пусковым механизмом в развитии ВЗПО является воздействие микробного фактора, которое определяет формирование очага воспаления и возникновение начальных проявлений заболевания.
Анализ структуры патогенной микрофлоры показал, что аэробный компонент микробных ассоциаций преимущественно представлен энтерококками и энтеробактериями (кишечная палочка, протей, клебсиелла, стрептококк, стафилококк, псевдомонады), считающимися условно-патогенной флорой [6,22,23,66,88,99,127]. Некоторые авторы считают, что аэробы играют особую роль в бактериальном синергизме, которая состоит в усилении патогенности анаэробов в присутствии аэробов [20,26,50,55]. Видовой состав анаэробной микрофлоры полости матки при эндометрите чаще всего представлен бактероидами, фузобактериями, пептококками [6,15,43,49,70]. О ведущей роли стафилококка как возбудителя ВЗПО свидетельствуют результаты исследований, выявившие стафилококки в чистой культуре при ВЗПО у 66,7% больных, в ассоциациях с кишечной палочкой, стрептококками -у 18,5%. Кишечная палочка в чистой культуре обнаружена у 14,8% больных [2,6,31,55,107,110].
Течение ВЗПО зависит от количественного и видового состава микрофлоры, ее антибиотикорезистентности и синергидного взаимодействия в анаэробно-аэробных ассоциациях.
Основная «точка приложения» бактериальных инфекций половых органов женщины - матка и маточные трубы. В половых органах инфекция распространяется гематогенным, лимфогенным и интраканаликулярным путями. Ведущим является последний путь. При нем поражается в первую очередь слизистая оболочка матки и маточной трубы [50,99]. В настоящее время сальпингит, будучи по существу осложнением ранее сформировавшихся воспалительных поражений дистально расположенных отделов репродуктивного тракта, приобретает черты изолированно протекающего заболевания [43,49,66,81,107]. При этом склероз и фиброз стенок маточных труб, матки бывают настолько значи 15
тельными, что нормальная функция маточных труб становится невозможной [6,20,22,81,107].
С позиций современной патофизиологии ВЗПО рассматривают как полисистемные заболевания с расстройствами половой, иммунной, нервной, эндокринной и других систем [6,20,22,23,49,50,66,88,99,108,131,132].
Обильная иннервация половых органов женщин обусловливает вовлечение в воспалительный процесс центральной и периферической нервной системы, в связи с чем развивается своеобразная клиническая картина заболевания [107]. Патологические импульсы из половых органов при остром воспалении вызывают изменение функционального состояния коры головного мозга [6,20,22,107]. Изменения в нервной системе носят характер восходящего процесса, распространяющегося на нервную систему органов малого таза, систему солнечного сплетения, вегетативные центры гипоталамуса и другие подкорковые структуры.
В настоящее время хорошо известны анатомические и функциональные связи между гипофизом, гипоталамусом и другими отделами центральной нервной системы. Поэтому вполне понятно возникновение вторичных расстройств функции гипофиза при нарушениях нервной системы. При этом наблюдается уменьшение содержания как общих гонадотропинов, так и лютеи-низирующего и фолликулостимулирующего гормонов [107]. Изменение активности гипофиза происходит вследствие изменений, протекающих не только в нервной системе, но и в яичниках, возникающих вследствие дефицита кровоснабжения (склероз сосудов) и развития рубцово-спаечных изменений. При этом нарушается рецепторная система яичников и снижается их способность реагировать на действие гонадотропных гормонов [20,21]. Возникшая гипофункция яичников, в свою очередь, оказывает неблагоприятное влияние на характер и исход воспалительного процесса, являясь фактором, предрасполагающим к развитию микробов, занесенных в половые органы [20,21,22,108]. Известно, что только при нормальном содержании гормонов яичника осуществляются синтез гликогена в слизистой оболочке влагалища, секреция желез шейки матки и другие процессы, тормозящие проникновение патогенных микробов в верхние отделы половых органов. Эстрогены оказывают противовоспалительное действие. Известно, что снижение энергетического потенциала клеток, реализующих воспаление, является одной из основных причин затяжного течения воспалительного процесса [108]. Половые гормоны повышают активность ферментов, которые способствуют накоплению в матке функционально активных белков, РНК, ДНК, образованию и повышению активности ферментов, участвующих в переносе водорода [56]. Они стимулируют дегидро-геназу изолимонной кислоты и благодаря этому ускоряют процесс превращения изоцитрата в альфа-кетоглютарат в цикле трикарбоновых кислот Кребса. Эстрогены служат коферментами, участвующими в реакциях переноса водорода между восстановленным никотинамид-аденин-динуклеотид-фосфатом (НАДФ + Н) и никотинамид-аденин-динуклеотидом (НАД), увеличивая содержание НАДФ-акцептора водорода, повышают в матке количество АТФ, акто-миозина и креатин-фосфата [21,56,110]. Поэтому гипофункция яичников оказывает неблагоприятное влияние на характер и исход воспалительного процесса, оказывает тормозящее влияние на регенеративные процессы в патологическом очаге, задерживает развитие циклических изменений в эндометрии, синтез гликогена в эпителии влагалища, нарушает двигательную активность маточных труб, физиологические изменения в истмусе и шейке матки.
Методы, использованные для определения влияния фракций, извлеченных из ортилии однобокой, на репродуктивную систему белых крыс в эксперименте
Опыты выполнены на белых крысах женского пола линии Вистар массой 180-190 г.
Самок крыс перед началом опытов в течение двух недель выдерживали в условиях вивария с регулярной 12-часовой сменой освещения. В это время у них брали влагалищные мазки с целью отбора животных с регулярным 4-5 дневным эстральным циклом [31,34,56]. Крыс с нерегулярным половым цик лом выбраковывали. Отсев животных в каждой партии колебался от 10 до 20%. Мазки брали в утренние часы (9.00-10.00ч.) по общепринятой методике [47,76]. Стеклянной глазной палочкой брали соскоб эпителия влагалища. Со держимое мазка помещали в каплю воды на предметном стекле и высушивали при комнатной температуре, затем анализировали под микроскопом (ув.х80) клеточный состав неокрашенного мазка [311,34,56].
Во влагалище характерные изменения происходят под действием эстрогенов. У неполовозрелых крыс и мышей влагалище представляет собой узкий мешок, дистальная часть которого имеет вид сплошного эпителиального тяжа и лишена просвета. Только в возрасте около двух месяцев влагалище превращается в полую трубку, открывающуюся наружу половым отверстием. Введение эстрогенов вызывает уже через несколько десятков часов «открытые» влагалища у совсем молоденьких грызунов в возрасте 3-4 недель. У кастрированных самок мышей и крыс влагалище имеет небольшие размеры и выстлано очень тонким эпителием. После введения эстрогенов у них происходит быстрый рост влагалища, эпителий его утолщается и подразделяется на слои. Более старые слои отодвигаются к поверхности более молодыми слоями. Их клетки, содержащие ядра, слущиваются и оказываются в просвете влагалища. Клетки последующих слоев становятся зернистыми, а затем ороговевают и также слущиваются в просвет влагалища. Влагалищные мазки содержат слущившиеся клетки влагалищного эпителия и другие форменные элементы, количество и состав которых характерны для каждой фазы полового цикла. Эти изменения влагалищного мазка связаны с определенными циклическими изменениями в яичниках и матке и поэтому могут служить для установления фаз полового цикла и функционального состояния самок у многих грызунов [31,73].
У самок крыс, содержащихся изолированно от самцов, наблюдаются укороченные половые циклы, называемые эстральными, и соответствующие только пролиферативной (фолликулярной) стадии половых циклов. Эти циклы продолжаются 4-5 суток и повторяются непрерывно в течение всего года, если только не произойдет спаривание и не наступит беременность [56].
Каждый такой эстральный цикл состоит из 4 фаз: предтечки, течки, по-слетечки и межтечки [34].
Предтечка (prooestrus) характеризуется быстрым ростом влагалищного эпителия. Влагалищный мазок содержит многочисленные округлые или вере-теновидные клетки с довольно крупным ядром и зернистой цитоплазмой.
Течка (oestrus) характеризуется ороговением поверхностных слоев влагалищного эпителия и слущиванием ороговевших остатков его клеток, имеющих вид крупных плоских безъядерных чешуек.
Послетечка (metoestrus) представляет собой короткую фазу, во время которой восстанавливается прежняя структура влагалищного эпителия. Влагалищный мазок содержит эпителиальные клетки и ороговевшие чешуйки, а также лейкоциты.
Межтечка (dioestrus) представляет собой фазу, когда влагалищный эпителий состоит из немногих рядов клеток: единичных эпителиальных клеток, слизи и большого количества лейкоцитов.
Для более детального изучения механизмов действия этилацетатную, хлороформную, бутанольную и водную фракции, извлеченные из ортилии однобокой, вводили крысам-самкам через зонд в желудок в течение 14 дней в экспериментально - терапевтической дозе 30 мг/кг массы животных. Крысы контрольной группы получали дистиллированную воду в эквиобъемном количестве. На 15-й день в соответствии со стадией эстрального цикла (проэструс) животных декапитировали и собирали кровь от каждого животного. При этом определяли концентрацию ЛГ и ФСГ с целью изучения влияния испытуемого фитоэкстракта и его фракций на гонадотропную активность гипофиза. Содержание ЛГ и ФСГ в сыворотке крови крыс определяли иммуноферментным методом с использованием анализатора "Cobas EIL" (Швейцария) и наборов реактивов "Диа-Плюс-Рош" (Москва) [53,82,107].
Кроме того, при этом на 15-й день экспериментов с целью изучения влияния фракционного состава ортилии на репродуктивную систему определяли массу матки и яичников, а также ритмические изменения фаз эстрального цикла. Массу половых органов определяли на медицинских весах [34]. О фазах полового цикла крыс судили по влагалищным мазкам [31,56]. После установления массы половых органов их забирали для гистологического исследования. Данный патоморфологический материал фиксировали в 10% растворе нейтрального формалина, заливали в целлоидин-парафин. Срезы окрашивали гематоксилин-эозином и по ван Гизону [83]. Полученные экспериментальные данные обработаны методами вариационной статистики с использованием параметрического t-критерия Стьюдента и непараметрического и-критерия Вил-коксона - Манна - Уитни [16,72,87].
Влияние сухого экстракта ортилии однобокой на течение острого эндометрита у белых крыс
Задачей настоящего исследования явилось определение степени фарма-котерапевтической эффективности сухого экстракта ортилии однобокой при экспериментальном эндометрите.
Результаты эксперимента представлены в таблицах 4.1.1. - 4.1.3. В течение всего периода эксперимента наблюдали за общим состоянием животных.
В контрольной группе состояние крыс на 1-е сутки эндометрита расценивалось как тяжелое. Наблюдалась гиподинамия, увеличение температуры до 39,1 С, снижение аппетита. Животные много пили. Дефицит массы тела был равен 28,4 г от исходной. Отмечали тахипное. Из половых путей выделения были обильные слизисто-гнойные. Крысы были вялые, с синюшными слизистыми и грязной шерстью.
На 3-й сутки эксперимента дефицит массы тела составил 52,0 г от исходной. Сохранялись гиподинамия, тахипноэ, снижение аппетита, гипертермия.
На 5-е сутки дефицит массы тела был прежний. Сохранялись гиподинамия, гипертермия, тахипноэ и снижение аппетита.
На 7-е сутки крысы стали активнее. Дефицит массы тела снизился до 43,0 г. Ректальная температура также снизилась до 38,5 С. Частота дыхания уменьшилась до нормальной. Однако у животных сохранялись гиподинамия и снижение аппетита.
На 10- и 15-е сутки дефицит массы тела составил 21,0 г. Ректальная температура не повышалась. Аппетит, частота дыхания были в норме. Рана на передней брюшной стенке зажила вторичным натяжением на 15 сутки.
Из данных, представленных в таблице 4.1.1., видно, что при развитии экспериментального эндометрита у всех подопытных животных, особенно в контрольной группе, развивается выраженный воспалительный процесс, сопровождающийся повышением СОЭ, лейкоцитозом, нейтрофилезом.
О развитии воспалительной реакции также свидетельствует наличие ги 73
О развитии воспалительной реакции также свидетельствует наличие ги-перфибриногенемии и диспротеинемии у животных контрольной группы (табл. 4.1.2.). Уровень общего белка в контрольной группе незначительно снижен. Содержание гамма-глобулина у крыс контрольной группы в сыворотке крови в 1,5 раза выше, чем таковое у интактных животных. О развитии острой воспалительной реакции и интенсификации процессов перекисного окисления липи-дов в эксперименте также свидетельствует увеличение содержания малонового диальдегида (МДА) в сыворотке крови крыс контрольной группы в среднем на 32,5%.
Кроме того, были проведены патоморфологические исследования тканей воспаленной матки. При вскрытии брюшной полости визуально отмечали выраженный спаечный процесс. Определялись множественные, непрозрачные спайки, удаляемые с напряжением. Маточные рога были несколько отечны и гиперемированы, нередко покрыты гнойно-фибринозным налетом. Просвет рогов матки не имел заметного расширения, но был заполнен гнойным содержимым. Париетальная и висцеральная брюшина были умеренно гиперемированы. В брюшной полости имелось незначительное количество свободной экссуда-тивной жидкости.
При патоморфологическом исследовании также установлено, что у животных контрольной группы в стенке рога матки наблюдался выраженный воспалительный процесс.
В норме микроскопически эндометрий состоит из однослойного призматического покровного эпителия, простых трубчатых желез эндометрия, которые ичогда местами дихотомически ветвятся вблизи миометрия, проникая в него на небольшую глубину, и стромы эндометрия, содержащей многочисленные фибробластоподобные клетки, лимфоциты, гистиоциты и тучные клетки. Между клетками располагается сеть коллагеиовых и ретикулярных волокон. Железы эндометрия имеют цилиндрический эпителий, сходный с покровным. изменениям были подвергнуты все слои матки. Стенка эндометрия была инфильтрирована разнообразными клетками, среди которых преобладали макрофаги и фибробласты. В его эпителии встречались клетки, подверженные гид-ропической или "балонной" дистрофии, наблюдались некроз и детрит. Были увеличены в размерах маточные железы, эпителий которых отходил от базаль-ной мембраны. Кровеносные сосуды были расширены и полнокровны. В утолщенном слое миометрия определялся отек с выраженной инфильтрацией ней-трофилами, полнокровие капилляров и некроз. Серозная оболочка матки была расширена и полнокровна.
На первые и третьи сутки эксперимента у крыс контрольной группы в просвете рога матки определялся гнойно-фибринозный экссудат с множеством эритроцитов, макрофагов, фибробластов и десквамированным эпителием. Во всех слоях матки наблюдалась выраженная инфильтрация. Артерии, артериолы и капилляры становились более полнокровными по сравнению с таковыми в предыдущий срок, появлялись кровоизлияния. В многочисленных, разнообразных по форме и размерам маточных железах отмечались деструкция, некроз и отторжение клеток, которые были также разных размеров. Некоторые клетки были "вздуты", другие же - дистрофически уплощены.
На пятые сутки исследования в контрольной группе эндометрий был инфильтрирован лимфоцитами, эозинофилами и фибробластами. Наблюдалось кистозное разрастание желез, эпителий которых был десквамирован. Определялась незначительная гипертрофия эндометрия за счет увеличения количества и просвета желез. Миометрий был несколько отечен. Стенки серозного слоя были разволокнены и пропитаны тканевой плазмой. Наблюдался периваску-лярный отек, в просветах сосудов выявлялась агрегация эритроцитов.
На 7-е сутки эксперимента у животных контрольной группы отмечали повсеместную альтерацию верхнего слоя слизистой оболочки с пропитыванием ее экссудатом и некротическим распадом (рис.5).
Определение мембраностабилизирующего действия сухого экстракта и фракций ортилии однобокой
Так как в основе патологических изменений любой воспалительной реакции лежат процессы свободнорадикального окисления липидов, интересным представлялось определение мембраностабилизирующих свойств испытуемого фитоэкстракта.
Установлено, что экстракт ортилии вызывает значительное снижение степени осмотического гемолиза (в среднем на 51,4-60,15%); причем процент гемолиза имеет тенденцию к снижению при повышении концентрации препарата в реакционной среде. Данный фитоэкстракт также вызывает уменьшение процента гемолиза эритроцитов, индуцированного добавлением в модельную систему in vitro реактива Фентона. При этом испытуемое средство в диапазоне концентраций от 0,1 до 1,0 мг/мл снижает гемолиз в 2 раза по сравнению с контролем (рис.23).
Кроме того, в другой серии опытов было проведено изучение мембраностабилизирующего действия разных фракций, извлеченных из ортилии однобокой. Выявлено, что хлорформная и этилацетатная фракции в дозе, соответствущей условно-терапевтической, вызывают наиболее значительное снижение степени осмотического и перекисного гемолиза (в среднем на 56,9 - 65,9%).
Отмеченное уменьшение степени гемолиза эритроцитов, возможно, обусловлено ингибированием образованных при распаде реактива Фентона гидроксильных радикалов под влиянием соединений, наличествующих в использованном экстракте. Вследствие этого предотвращается инициация перекисного окисления липидов и повышается устойчивость эритроцитарных мембран.
Сопоставление результатов, полученных в двух описанных выше сериях экспериментов, позволяет заключить, что сухой экстракт ортилии однобокой обладает мембраностабилизирующими свойствами, причем данный вид активности более выражен в условиях моделирования в экспериментах in vitro осмотического, нежели перекисного гемолиза.
Наличие у фитоэкстракта мембраностабилизирущих свойств может рассматриваться как один из составных механизмов, реализующих его противовоспалительное действие, обеспечивая целостность клеточных мембран и мембран субклеточных органелл от повреждающего действия лизосомальных ферментов.
