Содержание к диссертации
Введение
ГЛАВА 1. Обзор литературы
1.1 .Эндотелиальная дисфункция как предиктор ряда сердечно сосудистых заболеваний 11
1.2. Принципы фармакологической коррекции эндотелиальной дисфункции и основные группы эндотелиопротекторных препаратов 22
1.3. Потенциальные эндотелиопротекторы 32
1.4. Эндотелиопротективные свойства резвератрола 33
1.4.1. Ангиогенные свойства резвератрола 36
1.4.2. Кардиопротективные свойства резвератрола 37
ГЛАВА 2. Материалы и методы
2.1. Моделирование L-NAME-индуцированного дефицита оксида азота и оценка эндотелийзависимых и эндотелийнезависимых сосудистых реакций 40
2.2. Проведение функциональных проб в острых экспериментах на наркотизированных крысах 40
2.3. Оценка степени развития эндотелиальной дисфункции и ее коррекция исследуемыми препаратами 41
2.4. Биохимические маркеры эндотелиальной дисфункции 42
2.5. Морфологические методы оценки сердечно-сосудистых изменений при моделировании L-NAME-индуцированной ЭД 43
2.6. Исследуемые химические соединения и дизайн эксперимента 44
2.7. Статистическая обработка результатов исследования 46
ГЛАВА 3. Результаты собственных исследований
3.1. Количественная оценка развития эндотелиальной дисфункции при L-NAME - индуцированной модели дефицита NO в эксперименте с использованием результатов функциональных проб, биохимических маркеров и результатов морфологических исследований 50
3.2. Исследование эндотелиопротективной активности резвератрола, амлодипина и индапамида при L-NAME- индуцированной модели дефицита NO с использованием результатов функциональных проб, биохимических маркеров и морфологических исследований 70
3.3. Изучение эндотелиопротективной активности сочетанного применения резвератрола и блокаторов кальциевых каналов дигидропирининового ряда - амлодипина при L-NAME-индуцированной модели дефицита NO 84
3.4. Изучение эндотелиопротективной активности сочетанного применения резвератрола и тиазидоподобного диуретика - индапамида при L-NAME-индуцированной модели дефицита NO 97
Заключение
Выводы 109
Список литературы 122
- Принципы фармакологической коррекции эндотелиальной дисфункции и основные группы эндотелиопротекторных препаратов
- Проведение функциональных проб в острых экспериментах на наркотизированных крысах
- Исследуемые химические соединения и дизайн эксперимента
- Исследование эндотелиопротективной активности резвератрола, амлодипина и индапамида при L-NAME- индуцированной модели дефицита NO с использованием результатов функциональных проб, биохимических маркеров и морфологических исследований
Введение к работе
По современным представлениям эндотелиальная дисфункция (ЭД)
является одним из ведущих патогенетических звеньев сердечно-сосудистых
заболеваний. Так, доказана роль дисфункции эндотелия в патогенезе ряда
наиболее распространенных заболеваний и патологических состояний:
атеросклероза, артериальной гипертензии, легочной гипертензии, сердечной
недостаточности, дилатационной кардиомиопатии, ожирения,
гиперлипидемии, сахарного диабета, гипергомоцистеинемии [10, 18, 41, 48, 57, 74, 76, 79, 118, 192, 223, 238, 250, 262].
Основным механизмом, лежащим в основе ЭД, является снижение образования и биодоступности оксида азота (N0), при одновременном повышении уровня супероксиданиона и продукции мощных вазоконстрикторов [65].
Таким образом, дисфункция эндотелия проявляется дисбалансом между медиаторами, обеспечивающими в норме оптимальное течение всех эндотелийзависимых процессов [36, 65, 99, 103, 106, 176, 215, 216, 249].
Нарушения продукции, взаимодействия, разрушения эндотелиальных вазоактивных факторов наблюдаются одновременно с аномальной сосудистой реактивностью, изменениями в структуре и росте сосудов, которым сопутствуют сосудистые заболевания [85, 96, 109, 117, 130, 171, 219, 248].
NO синтезируется из L-аргинина под влиянием эндотелиальной NO-синтазы (eNOS) путем присоединения молекулярного кислорода к конечному атому азота гуанидиновой группы L-аргинина [31, 42, 136, 242, 248, 270].
Изучение состояния сосудистой стенки и поиск возможностей целенаправленного лечения ЭД является важной клинико-экспериментальной задачей, но вместе с тем в настоящее время не существует препаратов для ее специфической коррекции.
Одной из важных точек приложения терапевтического воздействия при ЭД является восстановление дефицита NO [5], что возможно путем активации фермента eNOS.
Научные исследования в области изыскания эндотелиотропных средств
указывают на активизацию нитроксидергической системы природным
веществом резвератролом (3,5,4'-тригидрокси-транс-стильбен),
содержащимся в красных сортах виноградных вин [177, 180, 197, 207, 224, 232, 239].
Многочисленные экспериментальные исследования показали, что резвератрол наряду с гиполипидемической, антиоксидантной, эстрогенной, антиагрегационной кардиопротективной и эндотелиотропной активностью в опытах in vitro. Эндотелиотропная активность резвератрола обусловлена активацией фермента eNOS [177, 197, 207, 224.].
В связи с вышеизложенным являлось актуальным изучение эндотелиопротективных свойств резвератрола и его комбинаций с антагонистом кальциевых каналов дигидропиридинового ряда амлодипином и тиазидоподобным диуретиком индапамидом при экспериментальном дефиците оксида азота.
Номер государственной регистрации темы - 01.2.00 950903
Цель исследования: провести оценку эндотелио- и кардиопротективных эффектов резвератрола и его комбинаций с амлодипином и индапамидом в эксперименте.
Для достижения поставленной цели необходимо решить следующие задачи исследования:
Изучить развитие эндотелиальной дисфункции при L-NAME-индуцированном дефиците NO, а также оценить степень корреляционной зависимости между морфологическими и функциональными показателями.
Изучить эндотелио- и кардиопротективную активность резвератрола при L-NAME-индуцированном дефиците NO.
3.Изучить эндотелио- и кардиопротективную активность антагониста кальция дигидропиридинового ряда амлодипина при L-NAME-индуцированном дефиците N0.
4. Изучить эндотелио- и кардиопротективную активность тиазидоподобного диуретика индапамида при L-NAME-индуцированном дефиците NO.
5.Изучить эндотелио- и кардиопротективную активность сочетанного применения резвератрола и антагониста кальция дигидропиридинового ряда амлодипина при L-NAME-индуцированном дефиците NO.
6. Изучить эндотелио- и кардиопротективную активность сочетанного применения резвератрола и тиазидоподобного диуретика индапамида при L-NAME-индуцированном дефиците NO.
Научная новизна исследования. В работе продемонстрировано, что
резвератрол 0,15 и 2,0 мг/кг (однократно внутрибрюшинно в течение 7 суток)
оказывает эндотелиопротективное действие на модели L-NAME-
индуцированной NO-дефицитной ЭД. Амлодипин 0,5 мг/кг и индапамид
2,0 мг/кг (однократно внутрижелудочно в течение 7 суток) как монотерапия
также обладали эндотелиопротективными эффектами на выбранной модели
патологии. Сочетанное использование резвератрола с антагонистом кальция
дигидропиридинового ряда амлодипином и тиазидоподобным диуретиком
индапамидом показало положительное фармакодинамическое
взаимодействие.
Научная новизна подтверждается четырьмя рационализаторскими предложениями.
Практическая значимость. В работе обоснована эффективность сочетанного применения резвератрола с антагонистом кальция дигидропиридинового ряда амлодипином и тиазидоподобным диуретиком индапамидом для коррекции L-NAME-индуцированной NO-дефицитной ЭД в эксперименте. Показано, что их сочетанное использование позволяет нормализовать изменение соотношения сосудистых реакций на ацетилхолин
8 (эндотелийзависимая вазодилатация) и нитропруссид натрия (эндотелийнезависимая вазодилатация) с увеличением коэффициента эндотелиальной дисфункции (КЭД) в 5 раз, предотвратить снижение показателей биохимических маркеров (Total NO, экспрессию NO-синтетазы), а также добиться положительной динамики морфофункциональных показателей сердечно-сосудистой системы (диаметр миокардиоцитов, прирост давления при пробе на нагрузку сопротивлением и адренореактивности, и т.д.).
Полученные данные позволяют рекомендовать целенаправленные клинические испытания комбинаций резвератрола с амлодимином и индапамидом при состояниях, сопровождающихся эндотелиальной дисфункцией.
Внедрение результатов научных исследований. Материалы
диссертационного исследования, касающиеся антигипертензивной и
эндотелиопротективной активности антагониста кальция
дигидропиридинового ряда амлодипина («Амлотоп», производства «Макизфарма») и тиазидоподобного диуретика индапамида («Индапамид», производства ОАО «Фармстандарт-Лексредства»), включены в состав документов, поданных на регистрацию в МЗ РФ (РУ № 000084/01).
Материалы диссертационного исследования, касающиеся изучения эндотелиопротективной активности резвератрола и его комбинаций, используются и в лекционных курсах БелГУ.
Апробация работы. Материалы работы доложены на II Национальном конгрессе терапевтов - 2007, на III Всероссийской конференция молодых ученых, Воронеж, 2009. Апробация диссертации проведена на научно-практической конференции кафедр фармакологии, клинической фармакологии, анатомии человека, гистологии, внутренних болезней № 2, НИИ экологической медицины КГМУ. По материалам диссертации опубликовано 11 печатных работ.
9 Апробация подтверждается получением диплома за первое место в ежегодном областном конкурсе инновационных проектов «Инновация и изобретение года» в номинации «Качество жизни и здоровья населения».
Положения, выносимые на защиту:
Резвератрол в дозах 0,15 и 2,0 мг/кг однократно в течение 7 суток внутрибрюшинно оказывает дозозависимое эндотелиопротективное действие на модели L-NAME-индуцированной NO-дефицитной ЭД. Амлодипин 0,5 мг/кг и индапамид 2,0 мг/кг также обладали эндотелио- и кардиопротективными эффектами на выбранной модели патологии. Также выявлена корреляционная зависимость между морфологическими и функциональными показателями.
Сочетанное использование резвератрола (2,0 мг/кг) с амлодипином 0,5 мг/кг оказывает выраженное эндотелио- и кардиопротективное действие на модели L-NAME-индуцированного дефицита NO, что выражается в снижении КЭД, а также в предотвращении снижения содержания нитрит-ионов. При этом достигаются целевые цифры АД, в отличие от монотерапии отдельно резвератролом и амлодипином. Результаты нагрузочных проб выявили способность комбинации предотвращать повышение адренореактивности на фоне снижения реакции на реоксигенацию. Морфологические исследования кардиомиоцитов обнаружили предотвращение увеличения поперечного диаметра кардиомиоцитов под влиянием комбинации резвератрола с амлодипином.
3. Комбинированное использование резвератрола (2,0 мг/кг) с
индапамидом 2,0 мг/кг оказывает эндотелио- и кардиопротективное действие
на модели L-NAME-индуцированного дефицита NO, выражающееся в
снижении КЭД, в положительной динамике результатов нагрузочных проб и
морфологических исследований, а также в предотвращении снижения
содержания нитрит-ионов. При этом не достигаются условные цифры
артериального давления.
10 Структура и объем работы. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, результатов исследования, обсуждения полученных результатов, выводов и списка используемой литературы, включающего 283 источник, из них 120 - отечественных и 163 - зарубежных авторов. Диссертация изложена на 152 страницах машинописного текста, содержит таблиц - 16, рисунков -40, схем-3.
Принципы фармакологической коррекции эндотелиальной дисфункции и основные группы эндотелиопротекторных препаратов
Точками приложения терапии ЭД являются восстановление равновесия описанных выше факторов, ограничение действия одних эндотелиальных медиаторов и компенсация дефицита других. Нитраты восстанавливают дефицит N0; ингибиторы АПФ (ИАПФ) блокируют синтез AT II и препятствуют разрушению кининов; антагонисты кальция (АК) тормозят активность AT II и эндотелина в гладких мышцах сосудов, усиливая вазодилатирующий эффект N0; ингибиторы эндотелинпревращающего фермента и блокаторы эндотелиновых рецепторов тормозят действие этого пептида. Однако в настоящее время не существует препаратов для специфической коррекции ЭД. В связи с этим большой интерес представляют данные о влиянии разных лекарственных средств на функциональное состояние эндотелия. Антагонисты кальция АК дигидропиридинового ряда (нифедипин, амлодипин, лацидипин, пранидипин, фелодипин) в эксперименте и в клинических исследованиях улучшают эндотелиизависимую вазодилатацию за счет увеличения уровня N0 [3, 10, 14, 41, 50, 54, 61, 77, 163]. Выявлено несколько механизмов усиления высвобождения N0 на фоне лечения АК. Пранидипин достоверно увеличивал концентрацию цГМФ в ГМК, культивируемых совместно с эндотели альными клетками, не влиял на базальную экспрессию эндотелиальной N0-синтазы в эндотелиальных клетках и не оказывал эффекта в присутствии ингибитора NO-синтазы. Он также повышал активность супероксиддисмутазы в эндотелиальных клетках, что блокировало разрушение NO. Таким образом, основными механизмами повышения уровня NO являются антиоксидантное действие АК, увеличение активности супероксиддисмутазы, предупреждение N0 [97, 104, 108, 218].
В экспериментах было показано, что лацидипин увеличивает уровень эндотелиальной NO-синтазы в ткани аорты [204, 269]. Можно утверждать, что антиатеросклеротические (усиление гидролиза холестерина, снижение внутриклеточной аккумуляции липидов), антипроли-феративные (подавление миграции и пролиферации ГМК и макрофагов) и антиагрегационные свойства АК дигидропиридинового ряда обусловлены их влиянием на N0. Кроме того, АК оказывают ангиопротективный эффект, обусловленный снижением тока Са2+ через L-каналы, торможением агрегации тромбоцитов, уменьшением адгезии моноцитов и пролиферации ГМК, инактивацией эндо-телина. АК также ингибируют экспрессию молекул адгезии VCAM-1 и ICAM-1. В исследованиях VHAS (верапамил), PREVENT (амлодипин), INSIGHT (нифедипин) и ELSA (лацидипин) результаты оценки толщины комплекса интима-медиа показали, что АК замедляют развитие атеросклеро-тического поражения сонных артерий у больных АГ [14, 15, 41, 45, 69, 76, 97, 135]. Восстанавливают ли АК нарушенную эндотелийзависимую вазодила-тацию коронарных артерий - пока неизвестно. Изучению этого вопроса посвящены испытания ENCORE I и II (400 и 600 больных), в которых изучается влияние нифедипина пролонгированного действия на эндотелийзависимую вазодилатацию коронарных артерий и коронарный резерв. Кроме того, в испытании ENCORE II и части больных в исследовании CAMELOT (750 человек) будет оцениваться влияние нифедипина и амлодипина на динамику поражения коронарного русла по данным повторного внутрисосудистого УЗИ, что позволит более точно, чем обычная коронарография, охарактеризовать эти изменения. Можно надеяться, что указанные исследования помогут объяснить механизмы влияния АК на течение атеросклероза. Данных оценки совместного использования представителя группы ди-гидропиридина амлодипина и активатора eNOS - резвератрола для коррекции дефицита оксида азота нами в доступной литературе не обнаружено. Для терапии в целях коррекции эндотелиальной дисфункции интерес представляет также тиазидоподобный диуретик индапамид, который кроме гипотензивного эффекта оказывает прямое вазодилатирующее действие за счет увеличения синтеза эндотелиального простациклина и обладает антиок-сидантными свойствами, повышая биодоступность NO [54, 35, 134, 185].
По результатам экспериментального исследования W. Bocker и соавт. [169], индапамид вызывал регрессию гипертрофии миокарда, обусловленную перегрузкой давлением за счет снижения активности АПФ в плазме крови и миокарде с уменьшением активности тРНК АПФ в миокарде и уровня альдосте-рона в плазме крови. Экспериментальные данные свидетельствуют также о способностях индапамида блокировать потенциалозависимые кальциевые каналы, что сопровождается уменьшением входа в клетку ионов кальция и высвобождением его из эндоплазматической сети в ответ на введение ангио-тензинаП [170]. При исследовании на животных было показано положительное влияние индапамида на нарушенную эндотелийзависимую вазодилатацию аорты, коронарных и бедренных артерий. Механизм действия индапамида на функцию эндотелия, вероятно связан с салуретическим эффектом, который повышает чувствительность на-трийзависимых механорецепторов эндотелия и потенциированием эндоте-лийзависимой продукции циклического гуанозинмонофосфата для брадики-нина, способствующего выработке базального вазодилататора — оксида азота [76].
Проведение функциональных проб в острых экспериментах на наркотизированных крысах
Опыты проводились на белых крысах-самцах линии Wistar массой 250-300 г. N-нитро-Ь-аргинин метиловый эфир (L-NAME) вводился ежедневно один раз в сутки, внутрибрюшинно, в дозе 25 мг/кг. На 7 день от начала эксперимента под наркозом (этаминал-натрия 50 мг/кг) вводили катетер в левую сонную артерию для регистрации показателей, болюсное введение фармакологических агентов осуществляли в правую бедренную вену. Показатели гемодинамики: систолическое артериальное давление (САД), диастолическое артериальное давление (ДАД) и частоту сердечных сокращений (ЧСС) измеряли непрерывно посредством датчика и компьютерной программы "Bioshell". Функциональные пробы: проба на эндотелийзависимую вазодилатацию (ЭЗВД) в ответ на внутривенное введение ацетилхолина (40 мкг/кг) [205] и проба на эндотелийнезависимую вазодилатацию (ЭНВД) в ответ на внутривенное введение нитропруссида натрия (30 мкг/кг) [25]. Исследование сократимости миокарда после моделирования патологии проводили у наркотизированных крыс, находящихся на управляемом дыхании. Полость левого желудочка зондировали иглой через верхушку сердца и посредством датчика P23ID «Gould», США, АЦП L-154 и компьютерной программы «Bioshell» регистрировали показатели кардиогемодинамики (левожелудочковое давление (ЛЖД), максимальную скорость сокращения (+dp/dt max), максимальную скорость расслабления (-dp/dt max), частоту сердечных сокращений (ЧСС) и интенсивность функционирования структур (ИФС) (произведение частоты сердечных сокращений и давления, развиваемого левым желудочком (мм рт. ст. х уд. мин) [34, 43, 44]. Для оценки функциональных возможностей миокарда у животных проводили нагрузочные пробы в представленной последовательности: 1.
Нагрузка объёмом (внутривенное одномоментное введение 0,9 % раствора NaCl, из расчёта 0,4 мл на 100 г) [34, 43, 44]. 2. Проба на адренореактивность (внутривенное одномоментное введение раствора адреналина гидрохлорида Г10"5моль/л, из расчёта 0,1 мл на 100 г. При проведении данной пробы проводилась оценка максимального подъема ЛЖД в ответ на введение адреналина [34, 43, 44]. 3. Нагрузка сопротивлением (пережатие восходящей аорты на 30 сек После проведения данной пробы рассчитывался показатель исчерпания миокардиального резерва (выраженный в процентах), равный отношению прироста ЛЖД на 5 секунде пережатия аорты к приросту ЛЖД на 25 секунде пережатия аорты [34, 43, 44]. 4. 3 - минутную гипоксию [84, 86]. Степень эндотелиальной дисфункции у экспериментальных животных, а также степень ее коррекции исследуемыми препаратами оценивали по расчетному коэффициенту эндотелиальной дисфункции (КЭД). Формула расчета коэффициента эндотелиальной дисфункции впервые предложена в лаборатории кардиофармакологии НИИ экологической медицины коллективом авторов под руководством профессора М.В.Покровского [67]. При оценке результатов функциональной пробы на ЭЗВД с введением ацетилхолина 40 мкг/кг используется площадь треугольника над кривой восстановления АД. При этом за меньший из катетов данного треугольника принималась разность между точкой окончания кардиального компонента и точкой восстановления артериального давления после сосудистой реакции.
При оценке результатов ЭНВД с введением нитропруссида в дозе 30 мкг/кг используется площадь треугольника над кривой восстановления артериального давления, точками меньшего катета которого являлась точка максимального падения артериального давления при сосудистой реакции и точка выхода уровня артериального давления на «плато». Большими катетами в этих треугольниках являлись показатели времени восстановления сосудистой реакции в ответ на внутривенное введение ацетилхолина и нитропруссида, выражаемое в секундах. Площадь исчисляемых треугольников выражается в условных единицах (усл. ед.). Предложенный в лаборатории кардиофармакологии НИИ ЭМ КГМУ коэффициент эндотелиальной дисфункции (КЭД) является отношением площади треугольника над кривой восстановления АД в ответ на введение НП (ЭНВД) к площади треугольника над кривой восстановления АД в ответ на введение АХ (ЭЗВД) [79 ]: SAM НП Нами использована модификация метода определения стабильных метаболитов NO, позволяющая после депротеинизации сыворотки крови проводить одноэтапное количественное определение суммарных нитратов и нитритов [68]. Принцип метода заключается в одновременном восстановлении нитратов в нитриты в присутствии хлористого ванадия и реакции диазотирования с последующим развитием окраски, интенсивность которой определяли спектрофотометрически при длине волны 540 нм. Анализ 100 мкл депротеинизированной сыворотки проводили в 96 луночных планшетах с плоским дном. Чувствительность метода на приборе Labsystems
Исследуемые химические соединения и дизайн эксперимента
Исследована эндотелиотропная активность резвератрола производства Greensyn (Guangzhou).,Ltd в дозе 0,15 мг/кг, что соответствует разрешенной суточной дозе в России по Сан. ПИН - М.Р.2.3.1.1915 (2004), и в дозе 2 мг/кг, которая была определена нами, учитывая максимальное содержание его в экстраординарных сортах вин (10 мкмоль/л, 600 мл/сут.). Согласно литературных данных именно в этой дозе резвератрол, проявляет максимальные эндотелио- и кардиотропные эффекты [141, 143, 177, 180, 197, 211, 224, 232, 239, 251]. табл.2.1. В хронических экспериментах при моделировании L-NAME-опосредованного дефицита оксида азота резвератрол вводился в соответствующих дозах один раз в сутки внутрибрюшинно в течение 7 дней через 30 минут после введения L-NAME. Принятая схема соответствует основной массе экспериментальных исследований на крысах [193, 194, 221, 264]. Основные антигипертензивные препараты вводили внутрижелудочно, один раз в сутки в течение 7 через 30 минут после введения L-NAME. Антагонист кальция дигидропиридинового ряда амлодипин («Амлотоп», производства «Макизфарма») и тиазидоподобный диуретик индапамид («Индапамид», производства ОАО «Фармстандарт-Лексредства»), использовали в дозах 0,5 мг/кг и 2 мг/кг соответственно, что соответствует данным доступной литературы и выявляет эффективное гипотензивное и кардиопротективное действие препаратов в экспериментах, ранее проведённых в нашей лаборатории. Комбинированное использование резвератрола - 2 мг/кг (внутрибрюшинно), амлодипина 0,5 мг/кг (внутрижелудочно) и индапамида 2 мг/кг (внутрижелудочно) проводилось по вышеописанному протоколу один раз в сутки в течение 7 дней на фоне введения L-NAME. Дизайн эксперимента представлен на схеме. 2.1. Он состоит из следующих блоков: 1. Контрольная группа. 2.
Оценка эндотелио- и кардиопротективного действия резвератрола - 2 мг/кг, амлодипина 0,5 мг/кг, индапамида 2 мг/кг. 3. Оценка эффективности эндотелио- и кардиопротективного действия сочетанного применения резвератрола - 2 мг/кг с амлодипином 0,5 мг/кг и индапамидом 2 мг/кг. Протокол и дизайн эксперимента представлен на схеме 2.1. Протокол состоит из следующих разделов: 1. Моделирование L-NAME-индуцированного дефицита оксида азота и его коррекция с помощью резвератрола, амл оди пина, индапамида и сочетаний амлодипина, индапамида с резвератролом в течение 7 суток. 2. На 8-е сутки в условиях этаминал-натриевого наркоза оценка эндотелийзависимых и эндотелийнезависимых реакций артериального давления на внутривенное одномоментное введение ацетилхолина и нитропруссида натрия. 3. Перевод животного на искусственную вентиляцию лёгких, катетеризация левого желудочка, регистрация ЛЖД, +dp/dt, -dp/dt, ЧСС, ИФС. Проведение нагрузочных проб для оценки функциональных резервов сократимости миокарда. 4. Выведение животного из эксперимента и взятие крови из грудного отдела аорта для биохимических исследований. 5. Морфологические исследования. изменений параметров наблюдавшихся при действии исследованных препаратов, как в абсолютных значениях, так и в процентах от исходного уровня, определяли разностным методом вариационной статистики с нахождением средних значений сдвигов (М), средней арифметической (+т) и вероятности возможной ошибки (Р) по таблицам Стьюдента. Различия оценивали как достоверные, начиная с р 0,05. Для расчётов использовали программу для статистического анализа Microsoft Excel 2003. Зависимость между различными параметрами внутри одной группы оценивали с помощью коэффициента корреляции
Пирсона (г), а также посредством построения точечных диаграмм с проведением линий регрессии. Биохимические исследования показателей Total NO проведены в соответствии с договором (предмет договора «Биохимическое определение маркёров функционального состояния эндотелия», № 15/12 от 27 декабря) о научно-техническом сотрудничестве между КГМУ и Государственным учреждением «Государственный Научно-исследовательский центр профилактической медицины МЗ РФ (ГНИЦ ПМ МЗ РФ)», г. Москва на базе лаборатории под руководством профессора В.А. Метельской, за что выражаем сотрудникам глубокую благодарность. Морфологические исследования проведены на базе морфологической лаборатории НИИ ЭМ КГМУ и патанатомического отделения Курской областной клинической больницы при консультативной и методической помощи доцента В.Т. Дудки, доцента А.В. Иванова и зав. отделением В.Г. Пирогова, за что выражаем им глубокую благодарность.
Исследование эндотелиопротективной активности резвератрола, амлодипина и индапамида при L-NAME- индуцированной модели дефицита NO с использованием результатов функциональных проб, биохимических маркеров и морфологических исследований
Согласно дизайну исследования, в контрольной группе животных эндотелиальную дисфункцию моделировали ежедневным в течение 7 суток внутрибрюшинным введением L-NAME. Исследуемые препараты резвератрол в дозах 0,15 мг/кг, 2 мг/кг, вводили внутрибрюшинно, амлодипин 0,5 мг/кг и индапамид 2 мг/кг внутрижелудочно однократно за 30 мин до L-NAME в течение 7 суток. По протоколу на восьмые сутки наркотизированное животное брали в эксперимент. Влияние резвератрола, амлодипина и индапамида на исходные показатели артериального давления у наркотизированных крыс с моделированием L-NAIVffi-индуцированной патологии представлены нарис. 3.15. Примечание: - р 0,05 - в сравнении с интактными Обнаружено, что изучаемые препараты не предотвращали развития выраженной гипертензии и значения САД и ДАД, были достоверно выше соответствующих значений интактных животных во всех сериях экспериментов (рис. 3.15). Коэффициент эндотелиальной дисфункции. В таблице 3.7. и рис. 3.16. представлены результаты функциональных проб на эндотелийзависимое (ацетилхолин 40 мкг/кг в/в) и эндотелийнезависимое (нитропруссид 30 мг/кг в/в) расслабление сосудов у животных с L-NAME индуцированной патологией на фоне лечения резвератролом 0,15 и 2 мг/кг, амлодипином 0,5 мг/кг и индапамидом 2 мг/кг. С последующим расчетом КЭД. Обнаружено, что резвератрол 0,15 и 2 мг/кг снижали КЭД до 2,1 ±0,3 и 1,2±0,1, соответственно, тогда как в группе животных, получавших L-NAME, он составлял 5,4±0,6. Монотерапия антагонистом кальция дигидропиридинового ряда амлодипином (0,5 мг/кг) оказала равнозначное действие в сравнении с монотерапией резвератролом в дозе 0,15 мг/кг и менее выраженное в сравнении с монотерапией резвератролом 2 мг/кг, КЭД в этой группе составил 2,1±0,3. Монотерапия тиазидоподобным диуретиком индапамидом (2 мг/кг) оказала достоверно менее выраженное эндотелиопротективное действие по сравнению с монотерапией резвератролом в двух дозах, КЭД в этой группе составил 3,3±0,4.
Обращает на себя внимание, что резвератрол в использованных дозах, а также амлодипин 0,5 мг/кг и индапамид 2 мг/кг снижали КЭД на фоне L-NAME-индупированной патологии, не приводя цифры давления к заданному уровню. Это, с одной стороны, свидетельствует о том, что КЭД имеет самостоятельное значение, а с другой - то, что L-NAME-индуцированная артериальная гипертензия на 7-сутки вовлекает в патогенетический процесс не только нитроергическую систему, но и все элементы гуморального и нейрогенного контуров регуляции системы кровообращения. В то же время, очевидно, что использованные дозы амлодипина и индапамида в качестве монотерапии нуждаются в коррекции в сторону повышения и/или сочетанного применения с одним из гипотензивных препаратов основных групп. Таким образом, полученные результаты свидетельствуют об эффективном снижении КЭД под влиянием резвератрола, амлодипина и индапамида у животных с моделированием L-NAME индуцированной артериальной гипертензии при недостижении заданных цифр артериального давления. При переводе животных на управляемое дыхание обнаружено, что исходные показатели сократимости левого желудочка у животных, получавших L-NAME на фоне резвератрола 0,15 и 2 мг/кг, амлодипина 0,5 мг/кг и индапамида 2 мг/кг, достоверно оказались меньше, чем в контрольной группе. Наиболее выраженное гиподинамическое действие оказывал резвератрол в дозе 0,15 мг/кг, значения ЛЖД которого не отличались от группы интактных животных (табл. 3.8). При этом позволим предположить, что повышение ЛЖД, +dp/dt, -dp/dt в условиях L-NAME-индуцированной патологии вызвано как повышением постнагрузки на левый желудочек, связанное с повышением общего периферического сопротивления, так и включением ангиотензинзависимыми механизмами гипертрофии миокардиоцитов.
Похожие диссертации на Исследование эндотелиопротективного эффекта резвератрола и его комбинаций с амлодипином и индапамидом
