Содержание к диссертации
Введение
1. Современные данные о фармакологической регуляции деятельности почек диуретическими средствами синтетического и растительного происхождения 8
1.1. Фармакологическая коррекция нарушений функции почек 8
1.2. Коррекция нарушений деятельности почек средствами растительного происхождения 15
2. Материалы и методы исследования 26
2.1. Характеристика используемых материалов 26
2.2. Методы фитохимического анализа 37
2.2.1. Определение алкалоидов 37
2.2.2. Определение дубильных веществ 37
2.2.3. Определение иридоидов 38
2.2.4. Определение кумаринов 38
2.2.5. Определение полисахаридов 39
2.2.6. Определение сапонинов 39
2.2.7. Определение флавоноидов 39
2.3. Методы фармакологического скрининга 40
3. Фитохимическии анализ растительного сырья и лекарственных сборов с васильком синим 49
3.1. Качественный анализ лекарственного растительного сырья, входящего в состав изучаемых сборов 49
3.2. Изучение химического состава настоев из растительных сборов с васильком синим 53
4. Изучение фармакологической активности сборов лекарственных растений с васильком синим 57
4.1. Первичная фармакологическая оценка и острая токсичность 57
4.2. Взаимодействие с барбитуратами настоев из растительных сборов с васильком синим 58
4.3. Изучение противосудорожной активности растительных сборов с васильком синим 64
4.4. Влияние настоев из растительных сборов с васильком синим на пороги эмоционального реагирования у крыс 68
4.5. Изучение анальгетической активности настоев из растительных сборов с васильком синим 75
4.6. Противовоспалительная активность настоев из растительных сборов с васильком синим 78
4.7. Диуретическая активность растительных сборов с васильком синим 81
4.8. Влияние растительных сборов на системное артериальное давление и дыхание кошек 85
4.9. Антиоксидантная активность настоев из растительных сборов с васильком синим 93
4.10. Антибактериальная и фунгицидная активность настоев из растительных сборов с васильком синим 96
5. Изучение диуретических свойств васмохвора 101
5.1. Влияние васмохвора на водный диурез 101
5.2. Влияние настоя васмохвора на спонтанный диурез 103
5.3. Влияние васмохвора на экскрецию воды, креатинина и электролитов после водной нагрузки 107
5.4. Влияние настоя васмохвора на экскрецию воды, креатинина и электролитов после солевой нагрузки 109
5.5. Влияние васмохвора на деятельность почек при курсовом применении 111
5.6. Влияние васмохвора на объем внутрисосудистой жидкости и концентрацию электролитов в плазме крови 114
5.7. Влияние васмохвора на уровень простагландинов ГЕТЕ, в плазме крови у крыс 117
5.8. Влияние настоя васмохвора на активность калликреин-кининовой системы 119
5.9. Изучение возможного ульцерогенного действия настоя васмохвора 121
5.10. Изучение острой токсичности 124
Заключение 125
Выводы 135
- Коррекция нарушений деятельности почек средствами растительного происхождения
- Методы фитохимического анализа
- Взаимодействие с барбитуратами настоев из растительных сборов с васильком синим
- Антиоксидантная активность настоев из растительных сборов с васильком синим
Введение к работе
Актуальность проблемы. Поиск новых лекарственных препаратов, осуществляющих регуляцию нарушенных жизненно важных функций почек, является важной задачей современной экспериментальной фармакологии.
Важное значение имеет создание препаратов на основе биологически активных веществ (БАВ) имеющихся в лекарственных растениях. Наличие в растительном сырье БАВ позволяет оказывать комплексное воздействие на организм больного. Врачи, осуществляющие лечение заболеваний лекарственными растениями, наблюдают высокий лечебный эффект, безвредность при рациональном использовании, поливалентность действия. Применение лекарственных растений целесообразно при лечении хронических заболеваний, а также для профилактики рецидивов болезни [12, 36, 38, 66].
Конец XX и начало XXI века характеризуется ростом количества нефроло-гических больных среди взрослого населения. Врачи нефрологического профиля отмечают значительное увеличение числа заболеваний почек на фоне эндокринных, аллергических заболеваний, связанных с алкоголизмом и наркоманией. В клинической медицине применяются лекарственные препараты: фуросемид, этак-риновая кислота, гипотиазид, диакарб и другие. Однако при их применении у больных могут наблюдаться осложнения: уменьшение выведения мочевой кислоты, метаболический алкалоз, гипокалиемия, гиперурикемия, возможны тошнота, гиперемия кожи, зуд, обратимое ухудшение слуха, головокружение и др. [58, 81].
При заболеваниях почек и мочевыводящих путей, наряду с производными сульфамоилантраниловой, сульфамоилбензойной и дихлорфеноксиуксусной кислотами, широко применяются лекарственные растения [44, 88, 112]. Благоприятные терапевтические эффекты, оправдывают интерес к дальнейшему изучению растительных сборов с целью создания на их основе эффективных лекарственных
препаратов позволяющих индивидуализировать лечение, получить высокий терапевтический эффект при лечении заболеваний почек [54, 57, 71, 82].
Работа выполнена в соответствии с планом научно-исследовательских работ Национального фармацевтического университета (номер государственной регистрации 0198U007011, шифр темы ВН 10.08.0036.99), а также целевой программы создания диуретических лекарственных средств.
Цель исследования. Целью настоящего исследования является изучение фармакологической активности растительных сборов с васильком синим, а также поиск и разработка потенциального диуретического растительного средства.
Задачи исследования. Для достижения цели необходимо было решить следующие задачи:
Провести качественный анализ настоев из 20 растительных сборов с васильком синим. В состав сборов входят также плоды боярышника однопестично-го, цветки календулы лекарственной, столбики с рыльцами кукурузы обыкновенной, солома овса посевного, трава пастушьей сумки, листья и молодые побеги почечного чая, трава пустырника сердечного, корни пырея ползучего, листья расто-ропши, трава репяшка обыкновенного, цветки ромашки лекарственной, листья черной смородины, трава хвоща полевого, побеги череды трехраздельной и створки стручков фасоли обыкновенной.
Провести фармакологический скрининг 20 растительных сборов с васильком синим на выявление диуретической, нейротропной, анальгетической, противовоспалительной, гипотензивной, антиоксидантной и антимикробной активностей.
Отобрать сбор, обладающий наибольшим диуретическим действием, для проведения углубленного фармакологического исследования.
Изучить специфическую фармакологическую активность отобранного потенциального диуретического средства растительного происхождения.
Научная новизна исследования. Изучен химический состав и впервые проведен фармакологический скрининг 20 сборов из лекарственных растений с васильком синим. Впервые в опытах на лабораторных животных исследована зависимость фармакологической активности от состава растительных сборов с васильком синим. Выявлены активные сборы, обладающие диуретической, депри-мирующей, психостимулирующей, противосудорожной, анальгетической, противовоспалительной, гипотензивной и антиоксидантной активностями.
Выявлен наиболее активный растительный сбор №7 (условное название «Васмохвор»), обладающий диуретической активностью. Проведено изучение острой токсичности. Впервые показано, что васмохвор обладает высокой специфической диуретической активностью и не проявляет ульцерогенного действия.
Практическая значимость работы. В результате проведенного фармакологического скрининга для дальнейшего доклинического изучения отобраны перспективные растительные сборы, обладающие диуретической, противовоспалительной, депримирующей, гипотензивной и антиоксидантной активностями.
Проведено изучение специфической фармакологической активности вас-мохвора, обладающего выраженным диуретическим действием, не вызывающего повреждения слизистой оболочки желудочно-кишечного тракта, что дает основание для дальнейших исследований по разработке и созданию нового потенциального диуретического препарата растительного происхождения.
Полученные результаты изучения специфической фармакологической активности васмохвора будут использованы при подготовке материалов на новое диуретическое средство растительного происхождения с целью представления в Министерства здравоохранения Российской Федерации и Украины для получения разрешения на проведение клинических испытаний.
Результаты анализа химического состава и изучения фармакологической активности исследованных растительных сборов с васильком синим используются в
учебном процессе на кафедрах фармакотерапии с фармакокинетикой, фармакологии, фармакогнозии и ботаники Национального фармацевтического университета, а также кафедрах фармакологии, фармакогнозии с курсом ботаники, неорганической и токсикологической химии Запорожского государственного медицинского университета.
Апробация работы. Отдельные фрагменты работы доложены на научно-практических конференциях молодых ученых Национального фармацевтического университета (Харьков, 2001, 2002, 2003); на Всеукраинской научно-практической конференции «Фармация XXI столетия» (Харьков, 2002), на международной научно-практической конференции «Лекарства - человеку» (Харьков 2002, 2003), на X Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2003).
Диссертационная работа доложена на совместном заседании кафедр фармакотерапии с фармакокинетикой, фармакологии, микробиологии, патологической физиологии, фармакогнозии, ботаники, биохимии, Национального фармацевтического университета (протокол № 10 от 4 декабря 2003 года).
Публикации. По теме диссертации опубликовано 14 печатных работ.
Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 158 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, результатов собственных исследований, заключения, выводов и практических рекомендаций. Работа иллюстрирована 26 таблицами и 25 рисунками. Указатель литературы включает 112 отечественных и 116 иностранных источников.
Основные положения выносимые на защиту:
Зависимость фармакологической активности от лекарственных растений входящих в состав сборов с васильком синим № 1- №20.
Васмохвор - потенциальное фармакологическое средство растительного происхождения, обладающее выраженным диуретическим действием.
Коррекция нарушений деятельности почек средствами растительного происхождения
Лечение заболеваний почек и мочевыводящих путей лекарственными растениями имеет многовековую историю. Был период, когда врачи-нефрологи мало использовали их в клинике. Этому, в определенной мере, способствовал бурный рост ассортимента синтетических препаратов. В последние годы лекарственные растения все шире стали использоваться в качестве лечебных средств, назначаемых терапевтами, нефрологами и урологами [10, 53, 54]. Народная медицина имеет многовековой опыт лечения воспалительных заболеваний почек лекарственными растениями. С развитием науки, благодаря многочисленным исследованиям ученых, опыт народной медицины о целебных свойствах растений нашел свое подтверждение [66]. В отличие от синтетических лекарственных средств препараты растительного происхождения по составу ближе к организму человека, вызывают минимум побочных действий, аллергических реакций, от них не бывает лекарственной болезни. Большое разнообразие растений, обладающих одинаковым видом действия, позволяет избежать эффекта привыкания. Важным является также то, что при лечении растениями не происходит угнетения иммунитета больного [13, 14]. Лекарственные растения содержат комплекс биологически активных веществ, благодаря чему каждое растение, имеет несколько видов действия, что важно при лечении больных с сопутствующей патологией. Обычно доминирует какая-либо одна или несколько видов активности, что и определяет применение данного растения при конкретном заболевании [69,70 ]. При воспалительных заболеваниях почек и мочевыводящих путей фитотерапия нормализует функцию этих органов, нормализует капиллярную проницаемость почечных клубочков, уменьшает отеки, нормализует сон и общее состояние больных. Уже через несколько дней после начала лечения лекарственными растениями у больных прекращаются боли, исчезает гематурия [47, 49]. При воспалительных заболеваниях почек в народной медицине используется очень большое количество лекарственных растений. Среди них наиболее часто применяются бадан толстолистный, береза бородавчатая, василек синий, грыжник голый, календула лекарственная [134], кукуруза обыкновенная, лабазник вя-золистный и обыкновенный, мелисса лекарственная [150], можжевельник обыкновенный, ортосифон тычиночный, подмаренник настоящий, подорожник боль- шой, спорыш, стальник полевой и колючий, толокнянка обыкновенная, тысячелистник обыкновенный, хвощ полевой и многие другие [170, 180]. Боярышник однопестичный (Crataegus monogyna Jacg.) - применяется при лечении заболеваний пищеварительной системы, одышки, камней в почках и сердечно-сосудистых заболеваний.
В настоящее время используются его сердечно-сосудистые эффекты, к которым относится способность улучшать коронарный кровоток. Флавоноиды обусловливают его фармакологические свойства [136]. Ингибирование циклической АМФ, возможно, лежит в основе кардиопро-текторной активности флавоноидов боярышника [205, 208, 215, 227]. Боярышник является важным источником природных антиоксидантов [13]. Полифенолы, ингибируя окисление липопротеинов низкой плотности, угнетают развитие атеросклероза. Экстракты как из свежих частей растения (почки, цветки, молодые листья, зелёные фрукты), так и из высушенных (цветки и цветущие верхушки) проявили себя эффективными ингибиторами окисления липидов [88]. Оксидативная активность тесно связана с общим количеством флавоноидов и обнаружена меньшая зависимость с общим количеством фенолов, антоциани-динов, общего количества протоцианидинов [13, 174]. Такие симтомы, как одышка и усталость, значительно уменьшались при лечении боярышником по сравнению с плацебо. Описанные побочные эффекты были нечасты, умеренны и преходящи; отмечались тошнота, головокружение, и кардиальные и желудочно-кишечные жалобы. Экстракт боярышника играет важную роль в комплексном лечении хронических заболеваний сердца [10]. Боярышник часто применяется у пациентов с заболеваниями сердца, т.к. он проявляет положительный инотропный эффект. К тому же, боярышник действует как антиаритмическое вещество благодаря пролонгированию рефракторного периода потенциала действия [12]. Экстракт боярышника, смесь флавоноидов и процианидинов, снижают сосудистый тонус или снижают продукцию цАМФ в аорте, но флавоноиды, входящие в состав экстракта (гиперозид, рутин и витексин) не влияют на тонус сосудов. Эндотелий-зависимое расслабление обусловлено наличием процианидино-вой фракции [136, 174]. Боярышник однопестичный применяется при сердечной недостаточности, стенокардии и аритмии. Тритерпеновая фракция боярышника однопестичного содержит основной компонент циклоартенол (80,87%), который проявляет противовоспалительные свойства, снижая инфильтрацию лейкоцитов. Эта фракция уменьшает отёк [112]. В медицинской практике цветки василька синего (Centaurea cyanus L.) применяются в виде настоя, как мочегонное и желчегонное средство при воспалении почек, мочевого пузыря, при циститах, как противолихорадочное средство. Цветы василька входят в состав некоторых мочегонных сборов. Растение обладает обезболивающим и ранозаживляющим действием. Листья прикладывают к ранам как для ускорения заживления. Ванны из травы применяют при кожных заболеваниях [20, 27]. Цветки календулы лекарственной (Calendula officinalis L.) оказывают противовоспалительное, спазмолитическое, желчегонное, антисептическим, гипотензивное, диуретическое, противоаллергическое, ранозаживляющее и другое действие. Они расслабляют гладкомышечные структуры желудка, кишечника и печени, ускоряют процессы регенерации тканей, способствуют нормализации сердечной деятельности, усиливают деятельность сердца, замедляют сердечный ритм, уменьшают отеки [134, 171, 175]. При воспалительных заболеваниях почек цветки календулы включают в растительные сборы благодаря их противовоспалительному, диуретическому, антисептическому, гипотензивному и другим видам действия [183, 195, 213].
Кукурузные рыльца (Stigmata Maydis) обладают мочегонным, желчегонным действием, способствуют растворению фосфатных, уратных и карбонатных камней в почках и мочевом пузыре. Успокаивают нервную систему. Применяются при отеках различного происхождения, холециститах, гепатитах, мочекаменной болезни, для профилактики и лечения атеросклероза [40, 44]. В настоящее время в практической медицине применяются кукурузные рыльца, листья и побеги брусники, листья земляники, листья и побеги толокнянки, плоды можжевельника, почечный чай, березовые почки, трава спорыша, трава хвоща полевого, цветки василька синего и др. лекарственные растения, обладающие мочегонным действием [16]. В народной медицине овес посевной (Avena sativa L.) в виде настоев употребляют как потогонное, мочегонное, при отеках почечного происхождения, ветрогонное, желчегонное и жаропонижающее средство. Настойка из зеленых высушенных стеблей обладает успокаивающими и снотворными свойствами. Свежий сок из зеленых стеблей применяют при бессоннице, нервном возбуждении, для улучшения аппетита [26]. Ежедневный приём в течение месяца пищи с добавками зёрен овса может предупредить нарушения реактивности сосудов (в сравнении с богатой жирами пищей) [27]. Другие источники говорят о том, что при регулярной добавке овса в пищу нельзя говорить о его кардиопротекторных свойствах и эффекте понижения кровяного давления. Отруби овса лечат диарею [39]. Алкоголь способствует расстройству желудка (диарее), что связано с эндотоксемией и повреждением печени. Овёс защищает от этих изменений. Отруби овса делают важный вклад в производство кальция в организме [66]. В народной медицине пастушья сумка (Capsella bursapastoris Medic.) и ее препараты используются при заболеваниях печени, почечной колике, болезнях почек и мочевого пузыря, нарушении обмена веществ, при кавернах в легких, кровотечениях [88, 114]. Алкалоиды и флавоноиды пастушьей сумки проявляют сильную противомикробную активность и имеют широкий спектр действия [83]. В качестве сырья у ортосифона тычиночного (почечного чая, Ortosiphon stamineus Benth.) используются листья и верхушечные побеги, обладающие умеренным мочегонным, способствует выведению из организма мочевины, мочевой кислоты и хлоридов, а также спазмолитическим действием. В виде настоя его применяют при острых и хронических заболеваниях почек и мочевого пузыря, сердечной недостаточности.
Методы фитохимического анализа
Извлечение А: 1 г измельченного ЛРС помещали в колбу на 100 мл, заливали 25 мл 1% раствора соляной кислоты и кипятили 5 мин на водяной бане. После охлаждения фильтровали через бумажный фильтр. Извлечение Б: 2 г измельченного ЛРС помещали в колбу на 100 мл, добавляли 1 мл 10%) раствора аммиака и 20 мл хлороформа и оставляли на 1 ч при периодическом перемешивании. Хлороформное извлечение отфильтровывали через вату в делительную воронку вместимостью 100 мл и алкалоиды извлекали 15 мл 1% раствора соляной кислоты. Извлечения А или Б разливали в пробирки по 1 мл и в каждую пробирку, по каплям добавляли соответствующие реактивы на алкалоиды и наблюдали выпадение осадков: 1) Реактив Майера - образовывался белый или желтоватый осадок; 2) Реактив Вагнера и Бушарда - наблюдалось выпадение бурого осадка; 3) Реактив /Драгендорфа - выпадал оранжево- или красно-бурый осадок. Для определения дубильных веществ извлечения готовили следующим образом: 1 г измельченного ЛРС заливали 100 мл воды и нагревали на водяной бане 20-30 минут, процеживали и проводили реакции: 1) Реакция с железоаммониевыми квасцами. К 2-3 мл извлечения прибавляли 4-5 капель раствора железоаммониевых квасцов, наблюдалось черно-синее окрашивание. 2) Реакция с раствором желатина. К 2-3 мл извлечения прибавляли по каплям 1% раствор желатина. Образовывалась муть, которая исчезала при добавлении избытка желатина. 2.2.3. Определение иридоидов Наличие иридоидов устанавливали с помощью качественных реакций с реактивом Шталя и Трим-Хилла: Приготовление извлечения: 1 г измельченного ЛРС заливали 10 мл воды, кипятили на водяной бане 15 минут, профильтровывали через фильтр. 1) Реакция с реактивом Шталя. К 5 мл извлечения приливали 5 мл реактива Шталя (п-диметиламинобензальдегида в 95% спирте), нагревали на водяной бане 5 минут; наблюдали сине-зеленое окрашивание; 2) Реакция Трим-Хилла. К небольшому количеству извлечения добавляли смесь уксусной, концентрированной соляной кислот и 0,2% раствора сульфата меди в соотношении 20:1:2. Раствор приобретал синий цвет, а затем выпадал фиолетово-черный осадок. Наличие кумаринов определяли в извлечениях из лекарственного растительного сырья, которые готовили так: 2 г измельченного ЛРС заливали 20 мл этилового спирта и кипятили 15 минут с обратным холодильником, после охлаждения фильтровали через бумажный фильтр и использовали для реакции.
Реакция с диазореактивом: к 3-5 мл спиртового извлечения приливали 10 капель 10% раствора гидроксида калия в метиловом спирте и нагревали в течение 5 минут на водяной бане (при наличии кумаринов раствор приобретал жел- тую окраску), затем добавляли 5 капель свежеприготовленного диазореактива Паули по Кутачеку; при наличии кумаринов раствор приобретал окрашивание коричнево-красное окрашивание). 2.2.5. Определение полисахаридов Для определения полисахаридов получали извлечение: к 1 г измельченного ЛРС добавляли 10 мл воды и кипятили на водяной бане в колбе с обратным холодильником в течение 15 минут; после охлаждения извлечение фильтровали через складчатый фильтр и проводили качественные реакции. 1) Реакция на слизи. К 1 мл извлечения добавляли 3 мл 96% этилового спирта. Выпадал хлопьевидный осадок полисахаридов. К этому осадку добавляли по каплям 10% натрия гидроксид. При наличии слизей образовывалось желтое окрашивание. 2) Реакция с ацетоном: к 1% раствору полисахарида в воде приливали двойной объем ацетона, немедленно выпадал осадок. 2.2.6. Определение сапонинов Определение сапонинов проводили в водных извлечениях: 1) реакция пенообразования: в одну пробирку вливали 5 мл 0,1 н. соляной кислоты, в другую - столько же ОД н. гидроксида натрия. К каждой из пробирок приливали по 2-3 капли извлечения и сильно взбалтывали. Если пена в обеих пробирках была одинаковой, это значило, что в извлечении содержатся тритерпеновые сапонины; если в пробирке с гидроксидом натрия пены получалось в несколько раз больше - стероидные сапонины; 2) реакция с основным ацетатом свинца: к 2 мл извлечения приливали несколько капель основного ацетата свинца, выпадал осадок; 3) реакция с ванилином и концентрированной серной кислотой: к 2 мл спирто-водного извлечения приливали 1 мл спиртового раствора ванилина и 3-4 капли концентрированной серной кислоты; нижний слой окрашивался в бурый цвет, а при разбавлении водой образовывались синие хлопья. Извлечение, для проведения качественных реакций на флавоноиды приготавливали следующим образом: 1 г измельченного ЛРС опускали в колбу на 25 мл, добавляли 10 мл этилового спирта и грели на водяной бане с обратным холодильником в течение 10 минут, после охлаждения содержимое колбы фильтровали через бумажный фильтр и использовали для реакций. 1) Цианидиновая проба. К 1 мл извлечения добавляли 2-3 капли концентрированной соляной кислоты и щепотку порошка металлического магния (или цинка). Наблюдали оранжево-красное окрашивание. 2) Реакция со щелочью. К 1 мл извлечения добавили 10% водно-спиртовой раствор КОН. Наблюдалось желтое окрашивание. 3) Реакция с раствором ванилина в концентрированной хлористо-водородной кислоте. При наличии катехинов наблюдали красно-малиновое окрашивание. 4) Реакция с основным ацетатом свинца. К 1 мл извлечения прибавляли 3-5 капель 2% основного ацетата свинца. Образовывалось желто-оранжевое окрашивание. 2.3. Методы фармакологического скрининга Исследование фармакологической активности водных настоев из растительного лекарственного сырья сборов проведено по методикам специального фармакологического скрининга [18, 64, 84, 95, 102]. Настои из растительных сборов готовили по правилам приготовления настоев [25]. Измельченное, высушенное и стандартизированное сырье заливали кипяченой водой в соотношении 1:10 и помещали в инфундирный аппарат (на кипящую водяную баню) на 15 минут.
Затем охлаждали при комнатной температуре в течение 45 минут, процеживали через марлю и в таком виде вводили лабораторным животным при проведении экспериментов. Изучение общего действия и острой токсичности исследуемых настоев из растительных сборов проведено на интактных белых мышах обоего пола массой 17-23 г по пять животных в серии. Исследуемые настои, вводили внутри-брюшинно в объеме не более 1 мл на 20 г массы животного. Контрольной груп- пе мышей вводили дистиллированную воду, в том же объеме, что и опытным группам. Мышей содержали на стандартном кормовом рационе. За животными наблюдали в течение 14-ти дней после однократного введения настоев. При наблюдения за животными обращали внимание на поведенческие реакции, нервно-мышечную возбудимость, состояние волосяного покрова, изменение массы тела, характер выделений и продолжительность жизни [2, 94]. Изучение нейротропной активности настоев из растительных сборов проведено по тесту взаимодействия с барбитуратами. Опыты проведены на белых беспородных крысах массой 120-160 г по семь животных в каждой группе. Контрольным группам животных внутрибрюшинно вводили этаминал-натрий, в дозе 30 мг/кг, и продолжительность, сна этой группы животных принимали за 100%. Исследуемые настои вводили внутрибрюшинно. Спустя 30 минут крысам внутрибрюшинно вводили этаминал-натрий, в дозе 30 мг/кг. О продолжительности медикаментозного сна судили по времени, в течение которого животные находились в боковом положении, т.е. с момента утраты рефлекса переворачивания. Режим дозирования настоев (ЕД50) вычисляли на основании результатов изучения зависимости «доза-эффект» [1 8. Н4]. Изучение антиконвульсивной активности настоев проведено по тесту взаимодействия со средствами, возбуждающими центральную нервную систему. Опыты выполнены на белых крысах массой 130-160 г., по пять животных в каждой серии. Исследуемые настои вводили внутрижелудочно за 30 минут до введения аналептиков. Экспериментальные судороги воспроизводили подкожным введением коразола в дозе 80 мг/кг, кордиамина - 300 мг/кг и камфоры -1,2 г/кг. Критерием оценки антиконвульсивной активности служило изменения латентного периода наступления судорог и их продолжительности [18].
Взаимодействие с барбитуратами настоев из растительных сборов с васильком синим
Учитывая опубликованные литературные данные, о фармакологических свойствах исследуемых лекарственных растений, впервые проведено изучение влияния приготовленных настоев из растительных сборов с васильком синим на центральную нервную систему по тесту взаимодействия с барбитуратами. Опыты выполнены на беспородных белых крысах массой 135-170 г. В качестве препарата сравнения использовали настой из корневищ с корнями валерианы лекарственной в дозах 1 мл/кг, 2 мл/кг, 3 мл/кг, настой из травы пустырника сердечного дозах 1 мл/кг, 2 мл/кг, 3 мл/кг и аминазин в дозе 5 мг/кг. Полученные результаты экспериментальных исследований представлены в табл.4.1 и на рис. 4.1. Исследование влияния настоев из растительных сборов с васильком синим на нервную систему показало, что большинство настоев исследуемых растительных сборов №1-№20 проявили синергизм к депримирую-щему действию этаминал-натрия. Наибольший агонистический эффект к действию барбитуратов был обнаружен у настоя сбора №3, который состоит из цветков василька синего, цветков календулы лекарственной, столбиков с рыльцами кукурузы обыкновенной, травы пустырника сердечного и трава хвоща полевого. Настой растительного сбора №3 при внутрижелудочном введении в дозе 2 мл/кг увеличивал продолжительность нахождения крыс в боковом положении на 91,2% (р 0,01). Замена в растительном сборе № 3 цветков календулы лекарственной и столбиков с рыльцами кукурузы обыкновенной, на плоды боярышника однопестичного, траву пастушьей сумки и листья смородины черной (сбор № 19, 2 мл/кг) приводила к снижению депримирующего эффекта с 91,2% (р 0,01)до69,8%(р 0,05). Включение в сбор № 11 плодов боярышника однопестичного, цветков василька синего, листьев и молодых побегов почечного чая, листьев расторопши, травы репяшка обыкновенного, травы хвоща полевого, побегов череды трехраздельной и створок фасоли обыкновенной, в дозе 2 мл/кг, снижало продолжительность барбитурового сна с 69,8% (р 0,05) до 56,3% (р 0,05). При замене в сборе №11 листьев и молодых побегов почечного чая, листьев расторопши, травы репяшка обыкновенного, побегов череды трехраздельной на столбики с рыльцами кукурузы обыкновенной, траву пастушьей сумки, траву пустырника сердечного, корни пырея ползучего, цветки ромашки лекарственной (сбор № 14) депримирующая активность этих настоев существенно не изменялась.
Под действием настоев из сборов №11 и №14, в дозе 2 мл/кг, у животных отмечалось увеличение продолжительности наркотического сна на 56,3% (р 0,05) и 49% (р 0,05), соответственно. Настой из сбора № 13, в состав которого входят: цветки василька синего, трава пастушьей сумки, листья и молодые побеги почечного чая, корни пырея ползучего, цветки ромашки лекарственной, трава хвоща полевого, в дозе 2 мл/кг, увеличивал продолжительность барбитурового сна на 36,6% (р 0,05), а при замене цветков ромашки лекарственной на створки фасоли обыкновенной (сбор № 10), в дозе 2 мл/кг, наблюдалось увеличение потенцирующего эффекта барбитуратов до 40,5%) (р 0,05). Настой из сбора № 7, в состав которого входят цветки василька синего, трава пастушьей сумки, листья и молодые побеги почечного чая, листья расторопши, листья черной смородины и трава хвоща полевого, в дозе 2 мл/кг, увеличивал время наркотического сна животных на 23,4% (р 0,05), в то время как настой из сбора № 4, отличающийся наличием столбиков с рыльцами куку-рузы обыкновенной, соломы овса посевного и отсутствием травы хвоща полевого увеличивал депримирующее действие этаминал-натрия на 27,4% (р 0,05). Сбор № 6, в состав которого входили цветки василька синего, цветки календулы лекарственной, столбики с рыльцами кукурузы обыкновенной, а также сбор № 2, в состав которого входят цветки василька синего, цветки ка-лендулы лекарственной, столбики с рыльцами кукурузы обыкновенной, трава пастушьей сумки, листья и молодые побеги почечного чая, трава пустырника сердечного, корни пырея ползучего и трава хвоща полевого, в дозе 2 мл/кг вызывали удлинение сна у крыс - соответ-ственно на 25,6% и 39,9%) (р 0,05). Антагонизм к действию барбитуратов проявили настой из сбора №5 в дозе 2 мл/кг, состоящий из плодов боярышника однопестичного, цветков василька синего, цветков календулы лекарственной, травы пастушьей сумки, травы пустырника сердечного, травы репяшка обык-новенного и травы хвоща полевого, а также настой из сбора № 12 в состав которого входят цветки василька синего, солома овса посевного, листья расторопши и цветки ромашки лекарственной. Эти настои при внутри-желудочном введении в дозе 2 мл/кг сущест- венно уменьшали продолжи-тельность этаминалового сна у крыс. Установлено, что депримирующее дейс-твие более выражено у настоев из сборов, в состав которых входили трава пус-тырника сердечного, цветки ромашки лекарственной и столбики с рыльцами ку-курузы обыкновенной. Настой из корневищ с корнями валерианы, в дозе 2 мл/кг, увеличивал продолжительность этаминал-натриевого сна на 48,2% (р 0,05), а настой травы пустырника - на 44,3% (р 0,05). На основании проведенных исследований для изучаемых настоев была вычислена ЕД5о по методу Б.М. Штабского [34], которая равна: для настоя из сбора №1 - 2,3 мл/кг; для настоя из сбора №2 - 2,1 мл/кг; для настоя из сбора №3 - 2,4 мл/кг; для настоя из сбора №4 - 2,2 мл/кг; для настоя из сбора №5- 2,3 мл/кг; для настоя из сбора №6 - 2,1 мл/кг; для настоя из сбора №7 - 2,6 мл/кг; для настоя из сбора №8 - 2,5 мл/кг; для настоя из сбора №9 - 2,3 мл/кг; для настоя из сбора №10-2,4 мл/кг; для настоя из сбора №11 - 2,2 мл/кг; для настоя из сбора №12-2,1 мл/кг; для настоя из сбора №13 - 2,3 мл/кг; для настоя из сбора №14 - 2,5 мл/кг; для настоя из сбора №15 -2,6 мл/кг; для настоя из сбора №16 -2,8 мл/кг; для настоя из сбора №17 - 2,5 мл/кг; для настоя из сбора №18 - 2,3 мл/кг; для настоя из сбора №19 - 2,2 мл/кг и для настоя из сбора №20 - 2,7 мл/кг, для настоя из травы пустырника - 2,4 мл/кг и для настоя из корней и корневищ из валерианы - 2,5 мл/кг.
Таким образом, наибольший депримирующий эффект был у настоя из растительного сбора № 3, который превосходит действие настоев из корневищ с корнями валерианы и пустырника на 32,3% и 36,2%), соответственно. Настои из сборов №5 и №12 проявили антагонизм к действию барбитуратов. 4.3. Изучение противосудорожной активности настоев из растительных сборов с васильком синим Изучение противосудорожной активности настоев из растительных сборов с васильком синим в дозе ЕД50 проводили по тесту взаимодействия с аналептика- ми (коразолом в дозе 80 мг/кг, кордиамином в дозе 300 мг/кг и кам-форой в дозе 1,2 г/кг). Эффект взаимодействия настоев из сборов №1-№20 и препаратов сравнения с аналептиками определяли по продолжительности латен-тного периода, длительности и степени тяжести течения экспериментальных судорог у лабораторных животных. Результаты, экспериментального исследова-ния антиконвульсивной активности настоев из сборов № 1-20, представлены в табл. 4.2. Установлено, что слабый защитный эффект от действия аналептиков наблюдали после введения настоев из сборов №2, №8, №9, №17 и №18 в дозах 2,1 мл/кг, 2,5 мл/кг, 2,3 мл/кг, 2,5 мл/кг, 2,3 мл/кг соответственно. Под их влиянием отмечалось удлинение латентного периода наступления первых судорожных реакций на 26,8-44,1% (р 0,05) при взаимодействии с коразолом, на 35,6-62,8% (р 0,05) - с кордиамином и на 23,6-43,1%) (р 0,05) - с камфорой. Отмечалось также уменьшение продолжительности проявления судорожных реакций: при взаимодействии с коразолом - на 15,2-41,7%) (р 0,05), с кордиамином - на 18,1-35,8% (р 0,05) и с камфорой - на 27,5-44,9%) (р 0,05). Данные настои из растительных сборов предотвращали гибель животных. Среди изученных сборов наиболее выраженное противосудорожное действие проявил настой из сбора №3 в дозе 2,4 мл/кг, в состав которого входили цветки василька синего, цветки календулы лекарственной, столбики с рыльцами кукурузы обыкновенной, травы пустырника сердечного и трава хвоща полевого. В опытах с коразолом этот настой увеличивал время наступления первых судорожных сокращений мышц скелетной мускулатуры у животных на 55,9% (р 0,05), с кордиамином - на 37,9% (р 0,05) и с камфорой - 39,6 (1X0,05). При этом продолжительность судорожных реакций уменьшалась на 58,9% (р 0,05), 59,3% (р 0,05) и 60,4%) (р 0,05), соответственно, в опытах с коразолом, кордиамином и камфорой. Все опытные животные выжили.
Антиоксидантная активность настоев из растительных сборов с васильком синим
Проведенное фармакологическое исследование анальгетической и противовоспалительной активности настоев из растительных сборов с васильком синим позволило выявить настой № 9, с выраженным ингибирующим влиянием на экссудативные проявления в очаге экспериментального воспаления. Установлено, что одним из ведущих механизмов в патогенезе воспалительного процесса является активация перекисного окисления липидов клеточных мембран, приводящая к явлению цитолиза и, вслед за этим проявлением экссудации и альтерации [33]. У большинства применяемых антифлогистиков прослеживается четкая корреляция выраженности противовоспалительного эффекта и антиоксидант-ной активности. Поскольку в составе действующих БАВ из растительных сборов содержатся полифенольные соединения, являющиеся естественными антиоксидантами [36], было проведено изучение антиоксидантной активности растительных сборов с васильком синим в опытах на беспородных белых крысах массой 130-160 г. Активацию перекисного окисления липидов моделировали при поражении печени белых крыс четыреххлористым углеродом при внутри-брюшинном пути введения. Исследуемые настои из растительных сборов вводили перорально за час до введения гепатоксина. Способность растительных препаратов угнетать развитие свободнорадикальной патологии оценивали по содержанию в гомогенатах печени опытных и контрольных групп животных малонового диальдегида (МДА) - конечного продукта деградации ненасыщенных жирных кислот мембранных фосфолипидов. Результаты изучения антиок-сидантных свойств настоев из растительных сборов с васильком синим представлены в табл. 4.12 и на рис. 4.8. Анализ представленных результатов показывает, что через сутки содержание МДА в ткани печени белых крыс опытной группы пораженной четырех- хлористым углеродом увеличилось в 1,56 раза по сравнению с интактными животными. Изучение антиоксидантных свойств настоев исследуемых растительных сборов с васильком синим №1-№20 показало, что наиболее выраженное ингибирование процессов перекисного окисления липидов (ПОЛ) наблюдалось после внутрижелудочного введения настоя растительного сбора №9, который вызывал уменьшение концентрации МДА в гомогенате печени крыс с ин-дуцированным СС14 поражением печени на 47,4% (р 0,05).
Сбор №9 состоит из следующих лекарственных растений: плоды боярышника однопестич-ного, цветки василька синего, цветки календулы лекарственной, солома овса посевного, листья и молодые побеги почечного чая, корни пырея ползучего и трава хвоща полевого. Замена в сборе №9 цветков календулы лекарственной и корней пырея ползучего на листья расторопши, траву репяшка обыкновенного, побеги череды трехраздельной и створки стручков фасоли обыкновенной (сбор №11) приводило к ослаблению антиоксидантных свойств [снижение уровня МДА в гомогенате печени на 39% (р 0,05)]. Под действием настоя из растительного сбора №7 перекисное окисление липидов возросло на 33,3%. Менее выраженное ингибирование процессов (ПОЛ) наблюдали после введения настоеи из растительных сборов № 8 и № 13. Эти настои вызывали уменьшение концентрации МДА в гомогенате печени в среднем на 34,3% (р 0,05) и 36,5% . Наименьшее антиоксидантное действие на уровне тенденции было установлено у сборов в состав которых входили: плоды боярышника однопестично-го, цветки василька синего, цветки календулы лекарственной, столбики с рыльцами кукурузы обыкновенной, трава пастушьей сумки, листья и мо-лодые побеги почечного чая (сбор №1) цветки василька синего, цветки календулы лекарственной, столбики с рыльцами кукурузы обыкновенной, трава пустырника сердечного и трава хвоща полевого (сбор №3). Таким образом, исследование антиоксидантной активности растительных сборов показало, что среди настоев наибольшей активностью обладает настой из сбора №9, но по действию уступает токоферолу. с васильком синим проводили в соответствии с методическими рекомендациями Фармакологического комитета. Изучение бактериостатического и фунгистатического действия растительных сборов с васильком синим проведено на коллекции тест-штаммов микроорганизмов, полученных из музеев животных культур Государственного НИИ стандартизации и контроля медицинских биологических препаратов им.Тарасе-вича (Москва) и Института усовершенствования врачей (г.Санкт-Петербург). Антибактериальная и фунгистатическая активность оценивалась по минимальной подавляющей концентрации (МПК), наименьшему количеству БАВ, которые полностью задерживало рост бактерий или грибов при выращивании. Эталонными препаратами служили фарингосепт, ампициллина натриевая соль и нистатин. Полученные результаты представлены в табл.4.13 и на рис.4.9. Анализ приведенных данных показывает, что настой из растительного сбора №1, содержащего плоды боярышника однопестичного, цветки василька синего, цветки календулы лекарственной, столбики с рыльцами кукурузы обыкновенной, травы пастушьей сумки, листья и молодые побеги почечного чая подавляет рост золотистого стафилококка, кишечной палочки, палочки брюшного тифа, спор антракоида, дрожжеподобного грибка и возбудителя микроспории, подавлял рост бактерий и грибов при МПК 250 мкг/мл. При замене плодов боярышника однопестичного на траву пустырника сердечного, корни пырея ползучего и траву хвоща полевого (сбор №2) спектр антимикробной активности расширился и увеличился в отношении синегной-ной палочки, вульгарного протея и возбудителя трихофитии МПК для большинства бактерий и грибов составила 125-250 мкг/мл.
Выраженный антимикробный эффект проявил настой из сбора №7 в состав которого входят следующие лекарственные растения: цветки василька синего, трава пастушьей сумки, листья и молодые побеги почечного чая, листья расторопши, листья смородины черной и трава хвоща полевого. Этот настой подавляют рост бактерий - золотистого стафилококка, кишечной палочки, палочки брюшного тифа, спор антра-коида, синегнойной палочки, вульгарного протея и грибов - дрожжеподобных грибов, возбудителя микроспории и трихофития при МПК 125-250 мкг/мл. Замена в сборе №12 цветков ромашки лекарственной на цветки календулы лекарственной, столбики с рыльцами кукурузы обыкновенной, листья и молодые побеги почечного чая, траву репяшка обыкновенного, побеги череды трехраздельной и створки стручков фасоли обыкновенной (сбор №16) способствует расширению спектра антибактериальной активности. МПК для бактерий золотистого стафилококка, кишечной палочки, палочки брюшного тифа, дизентерийной палочки, спор антракоида, синегнойной палочки и вульгарного протея настоя из сбора № 16 составила 125-250 мкг/мл. Настой из растительного сбора №17, в состав которого входят: цветки василька синего, цветки календулы лекарственной, столбики с рыльцами кукурузы обыкновенной, листья и молодые побеги почечного чая, корни пырея ползучего, листья расторопши, трава репяшка обыкновенного, цветки ромашки лекарственной, побеги череды трехраздельной и створки стручков фасоли обыкновенной, проявил антибактериальную и фунгистатическую активность при МПК 500 мкг/мл. Таким образом, оценка спектра возможного антимикробного действия настоев исследуемых растительных сборов с васильком синим №1-№20 выявила выраженный антимикробный эффект настоя сбора №13, но по действию он уступает эталонным препаратам сравнения. В результате проведенного фармакологического скрининга настоев из растительных сборов с васильком синим для углубленного доклинического изучения был выбран настой из растительного сбора № 7 («Васмохвор»), который обладает выраженной диуретической активностью. Результаты изучения специфической фармакологической активности настоя из растительного сбора № 7 представлены в пятой главе.
![Влияние растительных сборов с противовоспалительной активностью на процессы свободно-радикального окисления [Электронный ресурс]](/i/i/4506/196564.png "Влияние растительных сборов с противовоспалительной активностью на процессы свободно-радикального окисления [Электронный ресурс] Замятина Светлана Владимировна")