Содержание к диссертации
Введение
Глава 1 Обзор литературы 11
Глава2 Материалы и методы исследования 38
Глава 3 Динамика показателей липидного обмена и функциональной активности эритроцитов при остром билиар-ном панкреатите
3.1. Макроскопическая и лабораторная оценка состояния поджелудочной железы при остром билиарном панкреатите
3.1.1. Макроскопическая оценка динамики воспалительного процесса в ткани поджелудочной железы 46
3.1.2. Интенсивность процессов перекисного окисления липидови активность ферментов в ткани поджелудочной железы 49
3.1.3. Динамика показателей липидного состава тканевых структур поджелудочной железы 52
3.2. Морфофункциональное состояние эритроцитов при остром били арном панкреатите
3.2.1. Функциональная активность эритроцитов 57
3.2.2. Интенсивность процессов перекисного окисления липидов и активность ферментов в эритроцитах 59
3.2.3. Динамика показателей липидного состава эритроцитов 61
Глава 4 Оценка эффективности витамина е в коррекции нарушений липидного обмена и функциональной активности эритроцитов при остром билиарном панкреатите
4.1. Макроскопическая оценка состояния поджелудочной железы при остром билиарном панкреатите на фоне применения витамина Е 67
4.2. Морфофункциональное состояние эритроцитов при остром панкреатите на фоне применения витамина Е
4.2.1. Функциональная активность эритроцитов при остром били-арном панкреатите 68
4.2.2. Интенсивность процессов перекисного окисления липидов и активность ферментов в эритроцитах 69
4.2.3. Интенсивность процессов перекисного окисления липидов и активность ферментов в эритроцитах 72
Глава 5 Оценка эффективности димефосфона в коррекции нарушений липидного обмена и функциональной активности эритроцитов при остром билиарном панкреатите
5.1. Макроскопическая оценка состояния поджелудочной железы при остром билиарном панкреатите на фоне применения димефосфона...76
5.2. Морфофункциональное состояние эритроцитов при остром панкреатите на фоне применения димефосфона
5.2.1. Функциональная активность эритроцитов при остром билиарном панкреатите 77
5.2.2. Интенсивность процессов перекисного окисления липидов и активность ферментов в эритроцитах 79
5.2.3. Интенсивность процессов перекисного окисления липидов и активность ферментов в эритроцитах 82
Глава 6 Оценка эффективности винпоцетина в коррекции нарушений липидного обмена и функциональной активности эритроцитов при остром билиарном панкреатите
6.1. Макроскопическая оценка состояния поджелудочной железы при остром билиарном панкреатите на фоне применения димефосфона
6.1.1. Макроскопическая оценка динамики воспалительного процесса в ткани поджелудочной железы 86
6.1.2. Интенсивность процессов перекисного окисления липидов и активность ферментов в ткани поджелудочной железы 88
6.1.3. Интенсивность процессов перекисного окисления липидов и активность ферментов в ткани поджелудочной железы 91
6.2. Морфофункциональное состояние эритроцитов при остром панкреатите на фоне применения димефосфона
6.2.1. Функциональная активность эритроцитов при остром били-арном панкреатите 95
6.2.2. Интенсивность процессов перекисного окисления липидов и активность ферментов в эритроцитах 97
6.2.3. Интенсивность процессов перекисного окисления липидов и активность ферментов в эритроцитах 99
Обсуждение 107
Выводы 119
Практические рекомендации 120
Список литературы 121
- Макроскопическая оценка динамики воспалительного процесса в ткани поджелудочной железы
- Функциональная активность эритроцитов
- Морфофункциональное состояние эритроцитов при остром панкреатите на фоне применения витамина Е
- Морфофункциональное состояние эритроцитов при остром панкреатите на фоне применения димефосфона
Введение к работе
Актуальность работы.
Неуклонный рост заболеваемости острым панкреатитом, низкая эффективность фармакотерапии, высокий уровень послеоперационной летальности при: деструктивных формах панкреатита, обуславливают важность разработки новых методов: и схем;лечения данной, патологии (Полуэктов Л.П. и др., 1996; Сажин В.П: и др., 1996; Федоров В.Д; и др:, 1999; Гринберг А.А., 2000; Губергриц Н:Б:, Христич Т.Пі, 2000; Beger H.JP., КаиБ:А., 1995). Актуален и социальный аспект проблемы, поскольку большинство больных, страдающих этим заболеванием; - лица трудоспособного возраста.
Неотъемлемой составляющей поиска; новых методов и схем лечения является детальное изучение этиологических механизмовм патогенетических аспектов развития заболевания (ЄергиенкоВ;И. и др;, 1999):
В патогенезе острого воспаления поджелудочной железы особое место отводится стойкому изменению процессов; липидного; обмена (Мещишен И.Ф. и др., 1992; Сологуб Т.В. и др., 2002; Genu В., 1992), при котором особую значимость приобретает интенсификация свободнорадикального окисления; липидов, повышение фосфолипазной активности и снижение антиок-сидантной защиты организма, являющиеся основными факторами дестабилизации* мембран железистого аппарата железы (Белявский А.Д. и др., 1998; Петросян Э.А. и др., 1998; Власов А.П.и др., 2000; Cuzzocrea S. et al., 1999; FukuharaК. et al., 1999; Tokyay R. et;alCl999).
В последнее время; все большее внимание" уделяется изучению морфо-функционального состояния эритроцитов при различных патологических состояниях (КумероваА.СХ и др., 1996; Доровских В.А. и др., 1998; Азизова О.А. и др., 2002; Прокопьева В.Д; и др., 2002; Рязанцева Н;В. и др., 2002; Нои HJ. et al., 1992), оценка которого, с одной стороны, позволяет косвенно судить о выраженности мембранодеструктивных процессов в клеточных струк-
турах различных органов. С другой стороны, нарушение функциональной активности эритроцитов может выступать одним из звеньев в патогенезе основного заболевания.
Принимая во внимание, что в патогенезе острого панкреатита ведущее место отводится нарушению липидного обмена и изменению морфофунк-ционального состояния фосфолипидного бислоя мембран клеточных структур поджелудочной железы, становится очевидной целесообразность оценки в экспериментальных условиях терапевтической эффективности антиокси-дантов при деструктивных формах острого панкреатита. Из внушительного арсенала препаратов, обладающих антиоксидантным действием, для исследований были отобраны антиоксиданты - альфа-токоферола ацетат, диме-фосфон и винпоцетин. И хотя последний препарат относится к фармакологической группе «Корректор мозгового кровообращения», известно, что он обладает значительными антиоксидантными свойствами.
Цель работы
Оценить цитопротекторный эффект препаратов антиоксидантного типа действия на модели острого билиарного панкреатита.
Задачи исследования
Предполагалось решить следующие задачи:
Изучить липидный состав, интенсивность процессов ПОЛ, активность фосфолипазы Аг тканевых структур поджелудочной железы и эритроцитов на модели экспериментального панкреатита.
Оценить терапевтическую эффективность лекарственных препаратов, обладающих антиоксидантным действием; - альфа-токоферола ацетата, димефосфона и винпоцетина на течение острого панкреатита и функциональную активность эритроцитов при данном виде патологии.
Выявить возможность фармакологической коррекции нарушений липидного метаболизма в тканевых структурах поджелудочной железы и эритроцитах при применении альфа-токоферола ацетата, димефосфона, винпоцетина.
Исследовать влияние препаратов на течение процессов ПОЛ, антиоксидантную и фосфолипазную активность в тканевых структурах поджелудочной железы.
Установить взаимосвязь показателей терапевтической эффективности изученных лекарственных препаратов с их способностью корригировать липидный обмен.
Научная новизна
Показано, что при остром панкреатите на фоне повреждения антиокси-дантной системы, развития синдрома липиднои пероксидации и активизации фосфолипазы А2 в тканевых структурах поджелудочной железы и эритроцитах отмечаются значительные модификации липидного состава их мембран, сопряженные с выраженностью воспалительного процесса в поджелудочной железе и нарушением функциональной активности эритроцитов.
Продемонстрировано, что включение альфа-токоферола ацетата, диме-фосфона и винпоцетина в схему терапии острого билиарного панкреатита способствует снижению выраженности воспалительного процесса в ткани поджелудочной железы и более быстрому восстановлению функциональной активности эритроцитов у экспериментальных животных.
При экспериментальном остром панкреатите установлены высокие показатели цитопротекторного эффекта антиоксидантов, проявляющеюся не только на органном, но и на организменном уровнях в виде быстрого восстановления липидного состава биомембран тканевых структур поджелудочной железы и эритроцитов.
Выявлено, что липидстабилизирующий эффект альфа-токоферола ацетата, димефосфона, винпоцетина реализуется за счет способности данных препаратов снижать интенсивность процессов липопереокисления и фосфолипазную активность, восстанавливая антиоксидантный потенциал исследованных тканевых структур поврежденного органа.
Показано, что высокая; цитопротекторная активность исследованных препаратов обусловлена их способностью, корректировать липидный обмен в организме:
Установлено, что терапевтическая эффективность димефосфона и особенно винпоцетина существенно выше, чем у препарата сравнения — альфа-токоферола ацетата.
Практическая ценность работы
Определено направление в совершенствовании терапии данного вида патологии, которое заключается в использовании в общей: схеме консервативного лечения препаратов, обладающих антиоксидантным; эффектом.
Результаты исследований могут стать основой для включения отдельных показателей липидного метаболизма; в перечень диагностических тестов, оценивающих степень выраженности патологического процесса и эффективность проводимой терапии.
Основные положения, выносимые на защиту
1 -.. При моделировании острого панкреатита на фоне повреждения ан-тиоксидантной системы, развивается синдром липидной* пероксидацищ сопровождающийся активизацией фосфолипазы А2 в тканевых структурах поджелудочной железы и эритроцитах. Наблюдаемые явления сопряжены с выраженным воспалительным; процессом в поджелудочной железе и нарушением функциональной активности эритроцитов.
Применение при. экспериментальном панкреатите препаратов анти-. оксидантного типа действия (альфа-токоферола ацетата, димефосфона и винпоцетина) приводит к положительной динамике клинико-лабораторных показателей.
Высокая фармакотерапевтическая эффективность исследованных лекарственных средств связана^ с их: цитопротекторными свойствами. Наибольший липидрегулирующий эффект выявлен при использовании винпоцетина, наименьший при включении в схему терапии альфа-токоферола ацетата.
4. Применение указанных препаратов в терапии острого панкреатита способствует быстрому восстановлению липидного состава биологических мембран тканевых структур поджелудочной железы и эритроцитов за счет снижения интенсивности процессов ПОЛ, фосфолипазной активности и восстановления антиоксидантного потенциала исследованных тканевых структур.
Внедрение в практику
Положения, разработанные в диссертации, включены в программу обучения студентов на кафедре фармакологии Московского государственного медико-стоматологического университета.
Личный вклад автора
Лично была проведена серия экспериментов на 50 беспородных разнополых собаках, использованы современные методики исследования: фотометрия, тонкослойная хроматография, денситометрия, определение сорбци-онной способности эритроцитов, определение жесткости эритроцитарных мембран, макро- и микроскопия. С применением лабораторных методов исследования, произведена оценка фармакологического воздействия (антиоксидантного эффекта) лекарственных препаратов при экспериментально смоделированном остром панкреатите).
Апробация работы
Основные результаты работы доложены и обсуждены на VII Международной конференции «Биоантиоксидант» (М., 2006), на межрегиональной научной конференции «Актуальные проблемы медицинской науки и образования» (Пенза, 2007), на I Конференции молодых ученых медико-биологической секции Поволжской ассоциации государственных университетов (Ульяновск, 2007), на Огаревских чтениях - научно-практической конференции Мордовского государственного университета (Саранск, 2007).
Апробация диссертации проведена на совместном заседании кафедр фармакологии и клинической фармакологии и фармакотерапии Московского государственного медико-стоматологического университета (протокол № 2 от «25» февраля 2008г.).
Публикации
По теме диссертации опубликовано шесть работ, в том числе одна в журнале, рекомендованном ВАК Минобрнауки РФ для публикаций материалов диссертационных исследований.
Объем и структура диссертации
Работа изложена на 148 страницах машинописного текста. Состоит из шести глав: введение; обзор литературы; материалы и методы исследования; результаты собственных исследований; обсуждение; выводы; практические рекомендации; список литературы, включающий 186 отечественных и 6Т иностранных источников. Работа содержит 18 таблиц и 29 рисунков.
Макроскопическая оценка динамики воспалительного процесса в ткани поджелудочной железы
Для макроскопической оценки состояния поджелудочной железы при остром панкреатите на всех этапах исследования экспериментальным животным проводили релапаротомию. Эксперименты показали, что у животных после моделирования патологического процесса описанным ранее методом в 10 случаях из 15 развивалась отечная форма острого панкреатита.
Было установлено, что на первые сутки эксперимента при отечной форме острого воспаления поджелудочной железы интраоперационно отмечались отек и гиперемия паренхимы поджелудочной железы с небольшими участками кровоизлияний под капсулу органа и гиперемией окружающих тканей.
На третьи сутки после моделирования патологического процесса отмечалось прогрессирование воспалительных явлений в ткани поджелудочной железы в виде нарастания отека паренхимы, усиления гиперемии органа и окружающих тканей. Исследования показали, что на пятые сутки эксперимента воспалительный процесс в органе при отечной форме панкреатита начинал регрессировать. Отек паренхимы поджелудочной железы уменьшался, снижалась выраженность гиперемии органа и окружающих тканей.
Несмотря на использование методики для воспроизведения медленно прогрессирующей формы острого панкреатита, у части животных (трех из десяти) было зафиксировано развитие деструктивной формы заболевания, которая сопровождалась ранней летальностью животных. Так, на третьи сутки умерли три собаки, на пятые - две. При аутопсии животных, погибших на третьи сутки после моделирования острого панкреатита, были выявлены значительные структурные изменения поджелудочной железы, свидетельствующие о значительной выраженности воспалительного процесса. Было установлено, что отек и гиперемия паренхимы органа и окружающих ее тканей сочетались с участками некроза и обширных кровоизлияний (рис.3.2). Рис. 3.2. Макроскопическая картина поджелудочной железы с прилежащими к ней тканями собаки, погибшей на третьи сутки развития острого панкреатита
При вскрытии собак, погибших на пятые сутки развития заболевания, ткань железы имела темно-коричневый цвет, определялись участки расплавления омертвевших тканей железы и окружающих тканей. Это неоспоримо свидетельствовало о наличии распространенного некротического процесса по всей паренхиме поджелудочной железы с переходом воспалительного процесса на окружающие ткани.
Таким образом, макроскопическая оценка состояния поджелудочной железы при остром панкреатите показала наличие выраженных признаков воспалительного процесса в ткани пораженного органа в виде отека, гиперемии, кровоизлияний, а в ряде случаев - участков некроза паренхимы органа. Было установлено, что при формировании отечной формы острого панкреатита максимальной выраженности воспалительные явления достигали к третьим суткам эксперимента, а на пятые уже отмечалась положительная динамика макроскопической картины органа. Развитие панкреонекроза наблюдалось реже, сопровождаясь прогрессивным нарастанием воспалительного процесса в органе, что в итоге приводило к тотальному некрозу паренхимы поджелудочной железы, обуславливая летальность животных на ранних сроках эксперимента. 3.1.2. Интенсивность процессов перекисного окисления липидов и активность ферментов в ткани поджелудочной железы
Важная роль липидов в молекулярной организации и функционировании живых структур (Степанов А.Е. и др., 1991; Рад М.Р., 1993; Derosier С. et al., 1986; Montalto G. et al., 1994; Zhou W., Ohashi K., 1994) обуславливает патогенетическую значимость нарушений липидного обмена при различных патологиях, в том числе и при остром панкреатите. Известно, что сохранность структурно-функциональной архитектоники клетки во многом зависит от сбалансированности процессов перекисного окисления липидов (Власов А.П. и др., 2000). Другим не менее значимым липидмодифицирующим фактором выступает фосфолипаза А2. Изучение интенсивности процессов липо-переокисления и ферментативной активности в тканях поджелудочной железы при остром панкреатите на фоне применения традиционной терапии показало следующие результаты (табл. 3.1).
Экспериментально установлено, что при остром панкреатите содержание диеновых и триеновых конъюгатов в ткани органа было повышено на всех этапах наблюдения. Так, на первые сутки динамического наблюдения показатели диеновых и триеновых конъюгатов превосходили норму на 86,96 и 95,00 % (р 0,05) соответственно, на третьи были выше исхода на 152,17 и 140,00 % (р 0,05) соответственно. К концу лечения количество диеновых конъюгатов несколько уменьшалось, но оба показателя превышали норму на 113,04 и 160,00 % (р 0,05) соответственно.
Функциональная активность эритроцитов
Известно, что важным звеном в патогенезе острого панкреатита, обуславливающим тяжелое течения заболевания является фермент- и токсине-мия. Согласно литературным данным, проникающие в кровь продукты ферментной аутоагрессии способствуют инициации и прогрессированию пере 58
кисного окисления липидов на организменном уровне (Биленко М.В., 1989; Song D.K., Luo L.Y., 1990; Luo Z.Y. et al., 1992), что нашло свое подтверждение и в данной серии экспериментов. Доказан тот факт, что эритроциты способны адекватно отражать общий статус клеток всего организма, что является одной из причин повышенного интереса исследователей к морфофункцио-нальному состоянию красных клеток крови при различных патологических состояниях (Кумерова А.О. и др., 1996; Доровских В.А. и др., 1998; Азизова-О.А. и др., 2002; Прокопьева В.Д. и др., 2002; Рязанцева Н.В. и др., 2002; Нои HJ. et al., 1992). Сорбционнаяспособностьэритроцитов, % 40,01±0,23 46,42±0,54 52,02±1,03 47,63±0,7б Жесткость эритроцитар-ных мембран, % 5б,85±1,62 63,15±1,25 74,59±1,80 67,26±1,42 Индекс деформабельности эритроцитов, усл. ед. 0,78±0,02 0,66±0,03 0,54±0,02 0,62±0,01 Примечание: - достоверность изменений по отношению к норме р 0,05 Исследованиями установлено, что индекс деформабельности эритроцитов снижался в динамике патологического процесса. На первые сутки развития острого панкреатита данный индекс составлял 84,62 % (р 0,05) от нормы. На третьи сутки эксперимента отмечалось снижение изучаемого показателя, который был ниже исхода уже на 30,77 % (р 0,05). К концу динамического наблюдения индекс деформабельности эритроцитов начинал восстанавливаться, но все еще оставался меньше первоначального показателя на 20,51% (р 0,05).
Выявлено, что жесткость эритроцитарных мембран на фоне развития острого панкреатита возрастала с третьих суток эксперимента, когда превышала исход на 31,20 % (р 0,05). На конечном этапе традиционной терапии данный показатель начинал снижаться, но все еще превосходил норму на 18,31 %(р 0,05). Динамика показателей морфофункцноналышго состояния эритроцитов при остром панкреатите (-J- - достоверность отличия по отношению к исходу р 0,05)
При изучении сорбционной способности эритроцитов было обнаружено заметное увеличение данного показателя на всех этапах эксперимента. На первые сутки после моделирования острого панкреатита показатель сорбционной способности эритроцитов достоверно превышал норму на 16,02 %. На третьи сутки рост данного показателя продолжался, и он превосходил норму на 30,02 % (р 0,05). На пятые сутки эксперимента сорбционная способность эритроцитов несколько снижалась, но оставалась выше нормы на 19,05 % (р 0,05) (рис. 3.7). Таким образом, при остром панкреатите отмечалось существенное изменение морфофункционального статуса эритроцитов в виде уменьшение эластичности, увеличения жесткости и неспецифической проницаемости их мембран, зафиксированное в виде снижения индекса деформабельности и повышения сорбционной способности и жесткости биомембран красных клеток крови. Подобные изменения функционального статуса эритроцитов согласно данным литературы снижают способность к продвижению в капиллярах, увеличивают вероятность сладж-феномена, ухудшению реологических параметров крови, нарушению процессов микроциркуляции, нарушению снабжения органов и тканей кислородом (Прокопьева В.Д. и др., 2002; Шурхина Е.С. и др., 2003; Бессмельцев С.С. и др., 2004; Преснякова М.В. и др., 2005; ТерехинаН.А и др., 2005). Следует отметить, что нарушение функционально активности эритроцитов коррелировало с выраженностью воспалительного процесса в поджелудочной железе, достигая максимальных проявлений на третьи сутки эксперимента.
В исследованиях Збровской И.А. с соавт. (1995) и Сторожук П.Г. с со-авт. (1998) в эритроцитах имеются все предпосылки для ферментативной и неферментативной генерации активных форм кислорода в большом объеме, инициирующих патологические цепные реакции ПОЛ, приводящие к повреждению биомембран красных клеток крови.
Изучение выраженности процессов перекисного окисления липидов, активности фосфолипазы А2, антиоксидантных ферментов эритроцитов показало следующие результаты (табл. 3.4).
В ходе экспериментальных исследований было выявлено, что на сутки после моделирования патологического процесса содержание диеновых и триеновых конъюгатов было сопоставимо с исходом. Показатель малонового диальдегида в эритроцитах превосходил норму на 97,44 % (р 0,05). Уровень фосфолипазы А2 значительно возрастал и был выше исхода на 316,28 % (р 0,05). Активность супероксиддисмутазы снижалась на 20,92 % (р 0;05) относительно нормы. При исследовании уровня активности каталазы-последний достоверных отличий от нормы не имел.
Исследования показали, что на третьи сутки применения традиционной терапии острого панкреатита количество первичных и- вторичных продуктов ПОЛ в эритроцитах возрастало относительно нормы и предыдущего этапа эксперимента. Содержание диеновых конъюгатов и малонового диальдегида на данном этапе эксперимента превышало норму на 17,28 и 136,26 % (р 0,05) соответственно.
Морфофункциональное состояние эритроцитов при остром панкреатите на фоне применения витамина Е
Определение функциональной активности эритроцитов на фоне включения альфа-токоферола ацетата в терапию острого панкреатита показало следующие результаты (табл. 4.1).
Было установлено, что на первые сутки применения альфа-токоферола ацетата показатели функционального статуса красных клеток крови статистически значимо от результатов контрольной группы не отличались.
Примечание: I-контрольная группа; П-опытная группа; - достоверность по отношению к исходному показателю при р 0,05; жирный шрифт - достоверность разницы между данными контрольной и опытной групп.
На третьи сутки применения препарата индекс деформабельности эритроцитов и жесткость их мембран изменялись аналогично контрольным показателям, в то время как сорбционная способность эритроцитов на третьи сутки эксперимента была ниже контрольного уровня на 10,02 % (р 0,05), оставаясь выше нормы (рис. 4.1).
Экспериментально показано, что на пятые сутки использования альфа-токоферола ацетата уровни сорбционной способности и жесткости мембран эритроцитов снижались относительно контроля на 11,55 и 14,67 % (р 0,05) соответственно, причем первый показатель не достигал нормальных цифр. Индекс деформабельности эритроцитов превосходил контрольное значение на 19,35 % (р 0,05) и достоверно от нормы не отличался.
Таким образом, следует отметить, что применение альфа-токоферола ацетата в лечении острого панкреатита способствует восстановлению функциональной активности эритроцитов только на пятые сутки терапии - конечном этапе динамического наблюдения. В ходе экспериментальных исследований было установлено, что на первые сутки применения альфа-токоферола ацетата показатели ПОЛ, актив ности фосфолипазы А2, каталазы и супероксиддисмутазы эритроцитов статистически значимо от контроля не отличались.
Установлено, что на третьи сутки применения апробируемого препарата содержание диеновых конъюгатов снижалось относительно контроля на 15,79 % (р 0,05), достигая исходных значений. Показатели других продуктов ПОЛ статистически значимых отличий от контроля не имели. Уровень активности фосфолипазы А2 достоверно от контроля не отличался, но все еще превосходил норму. Активность каталазы и супероксиддисмутазы на данном этапе эксперимента были сопоставимы с контролем .
Показатели перскисного окисления липидов и активности фосфолипазы Аг эритроцитов на фоне терапии альфа-токоферола ацетатом при остром панкреатите ( - значения показателя, достоверно отличающиеся от контроля р 0,05; к— контрольная группа; о - опытная группа)
Экспериментально установлено, что на пятые сутки применения альфа-токоферола ацетата показатели диеновых конъюгатов и малонового диальде-гида эритроцитов были ниже контрольных на 20,41 и 19,13 % (р 0,05) соответственно, причем содержание диеновых конъюгатов было сопоставимо с исходом. Показатели активности каталазы и супероксиддисмутазы эритроцитов па фоне терапии альфа-токофсрола ацетатом при остром панкреатите ( - значения показателя, достоверно отличающиеся от контроля р 0,05; к — контрольная группа; о - опытная группа)
На данном сроке терапии уровень активности каталазы продолжал изменяться аналогично контрольному. Показатель активности супероксиддис-мутазы нормальных значений не достигал, но увеличивался относительно контроля на 30,53 % (р 0,05) (рис. 4.3).
Таким образом, использование альфа-токоферола ацетата в лечении острого панкреатита способствует некоторому снижению интенсивности процессов перекисного окисления липидов, активности фосфолипазы Аг и восстановлению собственного антиоксидантного потенциала красных клеток крови. Положительный эффект препарата отмечался с пятых суток его применения.
Экспериментально установлено, что на первые сутки применения альфа-токоферола ацетата все исследуемые показатели липидного спектра биомембран эритроцитов статистически значимых отличий от контроля не имели. Следует указать, что уровень триацилглицеролов резко снижался и был меньше нормы и контроля. Исследования показали, что на третьи сутки апробируемой терапии отмечалось снижение содержания свободных жирных кислот и лизофосфо-липидов относительно контроля на 17,05 и 18,67 % (р 0,05) соответственно, при этом уровни данных липидов были выше нормы. Удельный вес остальных показателей на третьи сутки применения альфа-токоферола ацетата изменялся аналогично таковому в контрольной группе исследования.
На пятые сутки эксперимента уровни эфиров холестерола, триацилгли-церолов и свободных жирных кислот снижались относительно контроля на 19,92, 19,18 и 15,14 % (р 0,05) соответственно, показатели эфиров холестерола триацилглицеролов достигали исходного значения. Показатель суммарных фосфолипидов был выше исхода на 12,31 % (р 0,05), статистически значимо от нормы не отличаясь .
Динамика уровня лнпидов эритроцитов на фоне терапии альфа-токоферола ацетатом при остром панкреатите ( — значения показателя, достоверно отличающиеся от контроля р 0,05; к - контрольная группа; о - опытная группа)
Исследование качественного состава фосфолипидов показало, что удельный вес лизофосфолипидов на конечном этапе эксперимента снижался относительно контроля на 25,84 % (р 0,05), продолжая превышать норму на 69,23 % (р 0,05). Показатель фосфатидилсерина был ниже контрольных данных на 14,46 % (р 0,05). Уровень фосфатидилэтаноламина возрастал относительно контроля на 20,39 % (р 0,05), достоверно от нормы не отличаясь.
Таким образом, проведенные исследования показали, что применение альфа-токоферола ацетата в терапии острого панкреатита незначительно улучшает восстановление липидного состава биомембран эритроцитов. Положительный эффект препарата отмечается с пятых суток его использования, указывая на невысокий липидрегулирующий эффект альфа-токоферола ацетата.
В заключение данной серии экспериментов, следует отметить, что применение альфа-токоферола ацетата в терапии острого панкреатита незначительно снижает выраженность воспалительных изменений в поджелудочной железе, улучшая состояние животных и уменьшая летальность лишь» на пятые сутки его применения. Противопанкреатический эффект препарата был сопряжен с его способностью корригировать нарушения липидного обмена на организменном уровне, что было установлено на примере эритроцитов, за счет снижения интенсивности ПОЛ и фосфолипазной активности на пятые сутки эксперимента.
Морфофункциональное состояние эритроцитов при остром панкреатите на фоне применения димефосфона
Примечание: I-контрольная группа; Ш-онытная группа; - достоверность по отношению к исходному показателю при р 0,05; жирный шрифт - достоверность разницы между данными контрольной и опытной групп.
На третьи сутки применения препарата было выявлено заметное улучшение исследуемых показателей относительно контроля. Индекс деформабельности эритроцитов на данном этапе превышал контрольные значения на 38,89 % (р 0,05), исходных значений не достигая. Показатель сорбционной способности эритроцитов на третьи сутки эксперимента был ниже контрольного на 13,44 % (р 0,05), оставаясь выше нормы (рис. 5.1).
Исследования показали, что на пятые сутки эксперимента положительный эффект препарата был более выражен. Уровни сорбционной способности и жесткости мембран эритроцитов снижались относительно контроля на 17,59 и 13,72 % (р 0,05) соответственно, причем первый показатель нормальных цифр так и не достигал. Индекс деформабельности эритроцитов превосходил контрольное значение на 27,42 % (р 0,05) и достоверно от нормы не отличался.
Таким образом, анализируя выше представленный фактический материал, следует отметить, что применение димефосфона в лечении острого панкреатита способствует восстановлению функциональной активности эритро цитов с третьих суток терапии, проявляясь в уменьшении неспецифической проницаемости и увеличении деформабельности биомембран красных клеток крови.
Изучение выраженности процессов перекисного окисления липидов, активности фосфолипазы А2, антиоксидантных ферментов эритроцитов при включении димефосфона в терапию острого панкреатита показало следующие результаты . Исследования показали, что на первые сутки применения димефосфона активность фосфолипазы А2 эритроцитов уменьшалась относительно контроля на 43,02 % (р 0,05), значительно возрастая по сравнению с исходом на 137,21 % (р 0,05). Показатели ПОЛ, активности каталазы и супероксиддис-мутазы эритроцитов на данном этапе эксперимента статистически значимо от контроля не отличались.
Установлено, что на третьи сутки применения апробируемого препарата содержание диеновых конъюгатов и малонового диальдегида снижалось относительно контроля на 12,63 и 18,29 % (р 0,05) соответственно, оставаясь выше нормы. Уровень активности фосфолипазы Аэ продолжал уменьшаться относительно контроля на 49,58 % (р 0,05), но все еще превосходил норму. Активность каталазы на данном этапе эксперимента достоверно от контроля не отличалась. Супероксиддисмутазная активность на фоне применения димефосфона в терапии острого панкреатита превосходила контроль на 58,23 % (р 0,05), достоверно от нормы не отличаясь. Показатели псрекисного окисления липидов и активности фосфолипазы А2 эритроцитов на фоне терапии димефосфоном при остром панкреатите ( - значения показателя, достоверно отличающиеся от контроля р 0,05; к - контрольная группа; о - опытная группа)
Экспериментально установлено, что на пятые сутки применения диме-фосфона показатели диеновых и триеновых конъюгатов, малонового диаль-дегида и фосфолипазной активности эритроцитов были ниже контрольных на 13,27 и 19,48, 48,42 и 34,63 % (р 0,05) соответственно, причем содержание диеновых конъюгатов было сопоставимо с исходом. На данном сроке терапии уровень активности каталазы продолжал изменяться аналогично контрольному. Уровень активности супероксидцисмутазы оставался сопоставимым с исходом при его увеличении относительно контроля на 46,32 % (р 0,05) (рис. 5.3).
Таким образом, следует отметить, что использование димефосфона в лечении острого панкреатита способствует снижению интенсивности процессов перекисного окисления липидов, активности фосфолипазы А2 и восстановлению собственного антиоксидантного потенциала красных клеток крови.
Примечание: I-контрольная группа; Ш-опытнап группа; - достоверность по отношению к норме р 0,05; жирный шрифт - достоверность изменений по отношению к контрольным данным р 0,05. Экспериментально установлено, что на первые сутки применения ди-мефосфона отмечалось снижение удельного веса лизофосфатидилхолина и фосфатидилсерина по сравнению с контролем на 21,69 и 19,83 % (р 0,05) соответственно. Следует отметить, что уровень фосфатидилсерина достоверно от нормы не отличался, в то время как содержание лизофосфатидилхолина значительно превышало норму. Остальные показатели липидного спектра биомембран эритроцитов на данном этапе эксперимента статистически значимых отличий от контроля не имели.
Исследования показали, что на третьи сутки апробируемой терапии содержание триацилглицеролов и свободных жирных кислот было ниже контроля на 10,65 и 22,32 % (р 0,05) соответственно, при этом уровни данных липидов были выше нормы. Удельный вес суммарных фосфолипидов увеличивался относительно контроля на 12,21 % (р 0,05) и достоверно от исхода не отличался. Показатели эстерифицированного и неэстерифицированного холестерола на третьи сутки применения димефосфона изменялись аналогично таковым в контрольной группе исследования.
Показано, что на третьи сутки эксперимента уровни фосфатидилсерина, фосфатидилинозита и лизофосфолипидов были ниже контроля на 18,18, 22,37 и 43,47 % (р 0,05) соответственно, нормальных значений не достигая. Количество фосфатидилэтаноламина на третьи сутки терапии димефосфоном возрастало по сравнению с контролем на 11,04 % (р 0,05), но оставалось меньше нормы. Содержание фосфатидилинозита достоверных отличий от нормы не имело. Показатель фосфатидилхолина и сфингомиелина были сопоставимы с контролем (рис. 5.4)
Динамика уровня линндов эритроцитов на фоне терапии димсфосфоном при остром панкреатите ( - значения показателя, достоверно отличающиеся от контроля р 0,05; к - коптролЕ пая группа; о - опытная группа)/ Таким образом, проведенные исследования показали, что применение димефосфона в терапии острого панкреатита приводит к восстановлению ли-пидного состава биомембран эритроцитов. Положительный эффект препарата отмечается с первых - третьих суток его использования.
Делая заключение данной серии экспериментов, следует отметить, что применение димефосфона в терапии острого панкреатита способствует снижению выраженности воспалительных изменений в поджелудочной железе, улучшая состояние животных и уменьшая летальность. Противопанкреати-ческий эффект препарата был сопряжен с его способностью корригировать нарушения липидного обмена на организменном уровне, что было установлено на примере эритроцитов, за счет снижения интенсивности ПОЛ и фос-фолипазной активности. Положительный липидрегулирующий и лечебный эффекты димефосфона отмечались на первые-третьи сутки его применения.
При включении винпоцетина в терапию острого панкреатита отмечалось существенное улучшение состояния подопытных животных. На фоне применения данного препарата ни в одном из пятнадцати случаев не было зафиксировано развитие панкреонекроза, что значительно снижало летальность животных (на 100 %). Макроскопическое исследование состояния поджелудочной железы показало, что у всех животных развивалась отечная форма острого панкреатита, в отличие от собак контрольной группы, где в трех случаях было зафиксировано формирование очагов некроза паренхимы органа, свидетельствуя о развитии деструктивной формы острого панкреатита.
Следует отметить, что на всех сроках эксперимента при релапаротомии нами выявлялись изменения состояния поджелудочной железы, аналогичные таковым в контроле, но значительно меньшей выраженности. Так, на первые сутки после моделирования патологического процесса и применения винпо-цетина мы, как и в контрольной серии экспериментов, в большинстве случаев отмечали формирование отека и гиперемии паренхимы железы при незначительной гиперемии окружающих тканей.
При релапаротомии на третьи сутки динамического наблюдения мак- роскопическая оценка состояния поджелудочной железы показала следующее. В некоторых случаях прогрессирование патологического процесса продолжалось, но в целом при макроскопии состояние органа было сходно с предыдущим этапом наблюдения. Следует отметить наличие отека паренхимы поджелудочной железы. Сохранялась гиперемия органа и окружающих тканей. У нескольких животных отмечались кровоизлияния в паренхиму поджелудочной железы.
