Введение к работе
Актуальность темы. В последние годы отмечается повышенный интерес к применению комплексных лекарственных средств растительного происхождения. Такие лекарственные средства, включающие в свой состав несколько видов лекарственного растительного сырья, содержат комплекс биологически активных веществ с разносторонним фармакологическим действием, что расширяет диапазон лечебных свойств, обеспечивая длительный корригирующий и заместительный эффект при различных заболеваниях.
Представителями группы мультиисточниковых фитопрепаратов являются оригинальные отечественные средства «Простанорм» и «Фито Ново-Сед» (ЗАО «ФПК ФармВИЛАР», Москва). Препарат Простанорм представляет собой водно-спиртовой экстракт смеси четырех видов лекарственного растительного сырья – травы зверобоя продырявленного Нypericum perforatum L., травы золотарника канадского Solidago Canadensis L., корня солодки Glycyrrhiza glabra L., корневищ с корнями эхинацеи пурпурной Echinacea purpurea (L.) Moench в равных соотношениях. В состав препарата включены растительные источники, обладающие простатотропной активностью, улучшающие микроциркуляторные процессы в предстательной железе, нормализующие мочеотделение, оказывающие противовоспалительное, капилляропротекторное, анальгетическое и антимикробное действие.
Препарат Фито Ново-Сед содержит водно-спиртовой экстракт из травы пустырника - Leonurus cardiaca L.; травы мелиссы лекарственной - Melissa officinalis L.; плодов боярышника - Fructus Crataegi, плодов шиповника - Fructus Rosae, травы эхинацеи пурпурной - Herba Echinacea purpureae (L.) Moench в массовых соотношениях 2:2:1:2:1. Фито Ново-Сед оказывает кардиотоническое действие, повышает устойчивость сердечно-сосудистой системы к повышенной нагрузке, стабилизирует уровень артериального давления.
Многокомпонентность состава комплексных препаратов, наличие сложного матрикса биологически активных веществ различной химической природы обусловливает необходимость разработки оптимальных путей их фармацевтического анализа. Существующие методы стандартизации препаратов Простанорм и Фито Ново-Сед включают качественные реакции на фенольные соединения и спектрофотометрическое определение суммы флавоноидов. До начала работы не был установлен качественный и количественный состав препаратов, достоверные критерии идентификации индивидуальных соединений, а также методы контроля комбинации действующих веществ в составе препаратов и методы контроля лекарственных источников, составляющих препарат. Наиболее перспективными методами для решения этих задач являются хроматографические, сочетающие эффективность разделения компонентов сложных смесей с избирательностью и чувствительностью детектирования.
Цель исследования. Целью исследования являлась разработка оптимизированных способов хроматографического анализа биологически активных веществ препаратов Простанорм и Фито Ново-Сед, идентификация основных компонентов и совершенствование системы стандартизации препаратов.
Задачи исследования. Для реализации поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:
-
изучить физико-химические характеристики (положение и интенсивность полос в УФ-спектрах, хроматографическая подвижность в различных системах) экстрактов препаратов, экстрактов отдельных видов лекарственного сырья, входящего в состав препаратов, и индивидуальных соединений — биологически активных веществ;
-
выявить оптимальные пути пробоподготовки лекарственного сырья и лекарственных форм комплексных препаратов для анализа;
-
разработать оптимальные способы разделения многокомпонентных смесей веществ, входящих в состав лекарственного растительного сырья и препаратов Простанорм и Фито Ново-Сед;
-
идентифицировать основные компоненты препаратов и лекарственного сырья, входящего в их состав;
-
выявить маркерные (индикаторные) соединения, характерные для каждого вида сырья, входящего в состав препаратов и предложить методики их определения, как характеристику подлинности препаратов;
-
разработать селективные хроматографические методики количественного анализа основных компонентов с учетом специфичности состава комплексных фитопрепаратов;
-
валидировать разработанные методики на основе изучения соответствующих валидационных характеристик с целью их последующего применения для стандартизации лекарственных форм препаратов;
-
апробировать разработанные методики в анализе серий образцов препаратов различных производителей.
Научная новизна. Научная новизна представленной работы заключается в следующем:
Впервые предложены оптимизированные и валидированные методики анализа индивидуальных компонентов оригинальных комплексных отечественных фитопрепаратов Простанорм и Фито Ново-Сед на основе вариантов метода ВЭЖХ.
Впервые идентифицирован комплекс биологически активных веществ экстрактов смеси лекарственного сырья, составляющих основу фитопрепаратов, и, тем самым, определен качественный состав компонентов препаратов Простанорм и Фито Ново-Сед.
Установлены индикаторные (маркерные) компоненты, характеризующие наличие каждого вида сырья в составе фитопрепаратов. Разработаны методики определения подлинности препаратов Простанорм и Фито Ново-Сед методом ТСХ, базирующиеся на анализе маркерных компонентов.
На основе оригинальных способов пробоподготовки с использованием твердофазной экстракции и последовательного двухкратного градиентного анализа методом ВЭЖХ, впервые осуществлена количественная оценка содержания основных индивидуальных компонентов в составе препаратов Простанорм и Фито Ново-Сед различных серий и производителей.
Разработанные методики качественного и количественного определения содержания компонентов препаратов составляют основу системы их стандартизации.
Практическая значимость работы и внедрение результатов в практику Предложены и внедрены методы определения подлинности препаратов Простанорм и Фито Ново-Сед с использованием метода ТСХ на основе анализа маркерных компонентов, характеризующих каждый вид лекарственного сырья в составе комплексных фитопрепаратов. Разработаны оригинальные методики качественного и количественного определения компонентов препаратов на основе обращенно-фазового градиентного варианта метода ВЭЖХ. Осуществлена количественная оценка содержания биологически активных компонентов в различных сериях исследуемых препаратов. Методики качественного анализа препаратов Простанорм и Фито Ново-Сед внедрены в работу отдела контроля качества ЗАО «ФПК ФармВИЛАР», а также контрольных лабораторий Министерства Здравоохранения республики Беларусь. (имеются акты внедрения)
Разработан и внедрен в учебный курс «Физико-химические методы исследования органических соединений» на кафедре органической химии ГБОУ ВПО Первого МГМУ им. И.М. Сеченова методологический подход к анализу комплексных фитопрепаратов Простанорм и Фито Ново-Сед методами ВЭЖХ и ТСХ. (имеется акт внедрения).
Основные положения, выносимые на защиту.
Результаты изучения спектральных и хроматографических характеристик экстрактов препаратов, экстрактов отдельных видов лекарственного сырья, входящего в состав препаратов, и компонентов препаратов Простанорм и Фито Ново-Сед.
Способы пробоподготовки и проведения анализа многокомпонентных смесей, составляющих экстракты исследуемых препаратов и отдельных видов сырья.
Разработанные оптимизированные и валидированные методики качественного и количественного анализа компонентов препаратов методом ВЭЖХ.
Результаты установления состава препаратов и экстрактов отдельных видов лекарственного сырья, входящего в их состав.
Предложенные методики определения подлинности фитопрепаратов.
Количественная оценка индивидуальных биологически активных веществ в производственных сериях фитопрепаратов.
Апробация работы. Основные положения и результаты исследования диссертационной работы были доложены и обсуждены на IV Всероссийской c международным участием научно-методической Конференции «Фармобразование 2010» (Воронеж, 2010 г.); на XVII Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2010 г.); на итоговой научной конференции студентов и молодых исследователей с международным участием «Татьянин день» (Москва, 2010 г.); на XVIII Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2011 г.); на XIII Школе молодых исследователей «Фундаментальные науки и прогресс клинической медицины» (Москва, 2011 г.) и на XIX Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2012 г.).
Личный вклад автора. Автору принадлежит ведущая роль в проведении экспериментальных исследований, анализе и обобщении полученных результатов. В работах, выполненных в соавторстве, автором лично разработаны методики качественного и количественного анализа фитопрепаратов, проведена аналитическая и статистическая обработка результатов. Вклад автора является определяющим и заключается в непосредственном участии на всех этапах исследования: от научного обоснования и постановки целей и задач, их экспериментальной реализации до аналитической и статистической обработки, обобщения и обсуждения полученных результатов и рекомендаций по их внедрению в практику.
Соответствие диссертации паспорту научной специальности. Научные положения диссертации соответствуют формуле специальности 14.04.02 – фармацевтическая химия, фармакогнозия. Результаты проведенного исследования соответствуют области исследования специальности, конкретно пунктам 2 и 3 паспорта специальности фармацевтическая химия, фармакогнозия.
Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтических наук. Диссертационная работа выполнена в рамках научно-исследовательской программы ГБОУ ВПО Первый МГМУ им. И.М. Сеченова «Разработка современных технологий подготовки специалистов с высшим медицинским и фармацевтическим образованием на основе достижений медико-биологических исследований» (номер государственной регистрации 01.2.006 06352). Тема включена в план научных исследований кафедры органической химии «Разработка способов анализа и стандартизации флавоноидсодержащих лекарственных средств, изучение их антиоксидантной активности и фармакокинетики».
Публикации. По результатам диссертационного исследования опубликовано 11 печатных работ, в том числе четыре в изданиях, рекомендуемых ВАК РФ.
Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 158 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, четырех глав, отражающих собственные экспериментальные исследования и обсуждения полученных результатов, выводов, списка литературы и приложения. Работа иллюстрирована 21 таблицами, 42 рисунками. Библиографический список включает 205 источника литературы, из них 157 отечественных и 48 зарубежных источников.
