Введение к работе
Актуальность темы.
Одной из главных проблем современной медицины является профилактика и лечение туберкулёза. Это связано с увеличением заболеваемости населения в регионах со сложной социально-экономической обстановкой, появлением тяжелых форм туберкулеза со смертельным исходом (Zignol M., 2006; Якубов М.Р., 2007). В связи с этим возрастает потребность в качественных противотуберкулезных лекарственных средствах.
Эффективность и качество анализа лекарственных средств непосредственно связаны с использованием современных физико–химических методов исследования – спектрофотометрических, хроматографических, в том числе высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ), которые обеспечивают высокую чувствительность, специфичность и экспрессность анализа.
Объектами настоящего исследования являются противотуберкулёзные лекарственные средства: производные пиразина, пиперазина, пиридина и натрия пара-аминосалицилат, которые представляют собой препараты первого и второго ряда и отмечены как наиболее эффективные (Мишин В.Ю., 2001).
Критический анализ данных литературы и нормативной документации показал, что методы количественного анализа указанной группы препаратов несовершенны и не позволяют объективно оценить их качество. Количественное определение лекарственных веществ исследуемой группы препаратов проводится химическими методами анализа: ацидиметрией в среде ледяной уксусной кислоты, нитритометрией (НД № 42-1305204; ФСП № 42-0173197501). Указанные методы являются длительными, токсичными, неселективными, что особенно важно в связи с проблемой фальсификации лекарственных средств. Исследование, проведенное Ассоциацией международных фармацевтических производителей, показало, что на фармацевтическом рынке России доля фальсифицированных противотуберкулёзных препаратов составляет около 30%. В последнее время выявляется большое количество фальсифицированных комбинированных противотуберкулёзных препаратов (Ушкалова Е. А., 2005).
В связи с вышеизложенным, разработка новых и совершенствование существующих методик анализа исследуемых препаратов с использованием современных физико-химических методов, позволяющих исключить прохождение контроля фальсифицированными препаратами, представляется актуальной задачей.
Целью настоящего исследования является совершенствование методов анализа однокомпонентных и многокомпонентных противотуберкулёзных лекарственных средств с использованием модифицированного варианта спектрофотометрии, отличающегося применением внешних образцов сравнения, и высокоэффективной жидкостной хроматографии.
Для достижения указанной цели необходимо было решить следующие задачи:
– осуществить выбор оптимальных условий спектрофотометрического определения рифампицина, пиразинамида, ломефлоксацина, этионамида, протионамида, пиридоксина гидрохлорида, натрия пара-аминосалицилата; разработать унифицированные методики количественного спектрофотометрического определения исследуемых лекарственных веществ в субстанциях и лекарственных формах с использованием внешних образцов сравнения;
– разработать методики определения теста «растворение» и однородности дозирования твердых дозированных лекарственных форм исследуемой группы препаратов спектрофотометрическим методом с использованием внешних образцов сравнения;
– обосновать условия хроматографического разделения изониазида, рифампицина и пиридоксина гидрохлорида; изониазида и пиразинамида; изониазида, пиразинамида и пиридоксина гидрохлорида методом высокоэффективной жидкостной хроматографии; разработать методики качественного и количественного определения многокомпонентных лекарственных форм «Тубавит», «Фтизопирам», «Фтизопирам+В6» с использованием метода ВЭЖХ;
– разработать проекты изменений ФСП на исследуемую группу препаратов.
Научная новизна работы:
Обоснованы и экспериментально подтверждены оптимальные условия спектрофотометрического анализа рифампицина, ломефлоксацина, пиразинамида, пиридоксина гидрохлорида, этионамида, протионамида и натрия пара-аминосалицилата (оптимальный растворитель, аналитическая длина волны, уравнение градуировочного графика), обеспечивающие максимальную воспроизводимость и правильность получаемых результатов.
Обоснован выбор внешних образцов сравнения диметилового желтого, фенолфталеина, кислоты бензойной, калия феррицианида, калия хромата для спектрофотометрического анализа исследуемых противотуберкулёзных лекарственных средств.
Впервые разработан и экспериментально подтверждён модифицированный вариант спектрофотометрического анализа рифампицина, пиразинамида, ломефлоксацина, этионамида, протионамида, пиридоксина гидрохлорида, натрия пара-аминосалицилата в субстанции и однокомпонентных лекарственных формах, основанный на применении внешних образцов сравнения; в результате проведенной валидационной оценки разработанных методик установлено наличие высокой воспроизводимости, точности, отсутствие систематической ошибки.
Экспериментально подтверждены условия разделения (выбор колонки, сорбента, условий градиентного элюирования, подбор подвижной фазы, температуры, объема пробы) изониазида, рифампицина и пиридоксина гидрохлорида; изониазида и пиразинамида; изониазида, пиразинамида и пиридоксина гидрохлорида методом ВЭЖХ.
Предложены и экспериментально подтверждены методики качественного и количественного определения многокомпонентных лекарственных форм «Тубавит», «Фтизопирам», «Фтизопирам+В6» с использованием метода ВЭЖХ; в результате проведенной валидационной оценки разработанных методик установлено наличие высокой воспроизводимости, точности, отсутствие систематической ошибки.
Практическая значимость работы:
Разработано 15 методик количественного определения субстанций исследуемой группы препаратов и 37 методик анализа однокомпонентных лекарственных форм с использованием модифицированного варианта спектрофотометрического метода, основанного на применении внешних образцов сравнения. Разработано 6 методик качественного и количественного определения многокомпонентных лекарственных форм «Тубавит», «Фтизопирам», «Фтизопирам+В6» методом ВЭЖХ. Разработанные методики апробированы в ОКК ОАО «Фармасинтез» (г. Иркутск), судебно-химическом отделении Иркутского областного бюро судебно-медицинской экспертизы (г. Иркутск) и внедрены в учебный процесс кафедры фармацевтической и токсикологической химии ГОУ ВПО «ИГМУ». Получено 35 актов апробации и внедрения результатов данной работы. Разработанные методики защищены патентно-лицензионными документами: получены 4 Патента РФ на изобретения. Разработаны проекты изменений ФСП на исследуемые лекарственные средства.
Апробация работы. Основные положения диссертационной работы обсуждались на: Х, XI Международной школе-семинаре «Люминесценция и лазерная физика» (Иркутск, 2007, 2008); 62-й, 63-й, 64-й, 65-й межрегиональных конференциях по фармации и фармакологии «Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции» (Пятигорск, 2007, 2008, 2009, 2010); научной конференции «Естествознание и гуманизм» (2007, 2008); международной конференции «Оптика-2007» (Санкт-Петербург, 2007); научно-практической конференции «Современные вопросы теории и практики лекарствоведения» (Ярославль, 2007); международной научной конференции «Оптика кристаллов и наноструктур» (Хабаровск, 2008); международной научно-практической конференции «Кластерные подходы в современной фармации и фармацевтическом образовании» (Белгород, 2008); научно-практической конференции «Фармация из века в век» (Санкт-Петербург, 2008); международной научно-практической конференции «Фармация Казахстана: интеграция науки, образования и производства» (Шимкент, Казахстан, 2009).
Публикации. По теме диссертации опубликовано 23 работы, в том числе 5 статей в периодических изданиях, рекомендованных ВАК МО и науки РФ, 1 монография, 4 Патента РФ на изобретения.
Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтических наук. Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом научно-исследовательских работ ИГМУ по проблеме «Контроль качества лекарственных средств с использованием современных методов анализа» (номер Госрегистрации 01.91.0008620) и соответствует направлению проблемной комиссии по фармации и фармакологии.
Основные положения, выносимые на защиту:
–результаты выбора и обоснования оптимальных условий и внешних образцов сравнения для спектрофотометрического анализа рифампицина, пиразинамида, ломефлоксацина, этионамида, протионамида, пиридоксина гидрохлорида, натрия пара-аминосалицилата;
–разработанные унифицированные методики спектрофотометрического анализа исследуемых противотуберкулёзных лекарственных средств с использованием внешних образцов сравнения и их валидационная оценка;
–результаты исследований по разработке методик анализа многокомпонентных лекарственных форм «Тубавит», «Фтизопирам», «Фтизопирам+В6» методом ВЭЖХ и их валидационная оценка.
Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 185 страницах машинописного текста. Работа состоит из введения, обзора литературы, 5 глав экспериментальной части, общих выводов, 60 таблиц, 36 рисунков, списка литературы, включающего 189 источника, из них 58 на иностранных языках. В приложении представлены таблицы экспериментальных данных, материалы по апробации и внедрению разработанных методик.
