Введение к работе
Актуальность темы. Обеспечение населения высококачественными лекарственными средствами - одна из важнейших задач, стоящих перед здравоохранением и фармацевтической наукой.
Одной из главных проблем современной медицины является лечение заболеваний, связанных с нарушением мозгового кровообращения легкой и средней тяжести, состояний тревоги, страха, повышенной раздражительности, абстиненции у больных алкоголизмом (Анцыперов В.В, 2008; Громова О.А., 2004)
Объектами настоящего исследования являются лекарственные средства, улучшающие мозговое кровообращение: циннаризин и пикамилон.
Критический анализ данных литературы, нормативных документов и Зарубежных Фармакопеи показал, что методы анализа указанной группы препаратов несовершенны и не позволяют объективно оценить их качество. Так, для контроля чистоты пикамилона применяют метод тонкослойной хроматографии с использованием сложных и высокотоксичных систем растворителей (ФСП 42-0290-1295-06; ФСП 42-0290-1618-05). Поэтому исследования по выбору селективной и экспрессной методики для обнаружения и разделения специфических примесей никотиновой кислоты и у-аминомасляной кислоты в пикамилоне являются актуальными.
Количественное определение лекарственных веществ исследуемой группы препаратов проводится ацидиметрией в среде ледяной уксусной кислоты, метиэтилкетона или уксусного ангидрида (НД 42-11672-01; ФСП 42-0290-1618-05). Указанный метод является длительным, трудоемким, неселективным, требует использования высокотоксичных растворителей. Анализ лекарственных форм препаратов исследуемой группы проводится спектрофотометрическим методом, отличающимся доступностью, простотой методик анализа, экспрессностью, высокой чувствительностью, воспроизводимостью, низкой токсичностью (ФСП 42-0290-1295-06; ФСП 42-0263-3676-02). Более широкому использованию данного метода для анализа субстанций препятствует отсутствие государственных образцов сравнения. Выпуск таких стандартных образцов является дорогостоящим, поэтому они малодоступны для многих лабораторий. В связи с этим оптимизация спектрофотометрического определения объектов исследования с использованием внешних (оптических) образцов сравнения является важнейшей задачей фармацевтического анализа.
Благодаря ноотропной активности циннаризин и пикамилон широко используют в разных областях медицины, в том числе в психиатрической практике в комплексной терапии с антипсихотическими нейролептиками и трициклическими антидепрессантами. Пикамилон и циннаризин в соответствии с приказом Минздрава России № 460 от 29 декабря 2000 г «Об утверждении учетной документации токсикологического мониторинга» включены в «Перечень наименований токсичных веществ, наиболее часто встречающихся при острых отравлениях». В данном списке циннаризину согласно Международной
классификации болезней (МКБ-10) присвоен код - Т 46.3, а пикамилону - Т 43. Встречаются случаи отравления больных циннаризином и пикамилоном в сочетании с психотропными лекарственными средствами: амитриптилином, аминазином, азалептином, трифтазином, неулептилом и галоперидолом.
В литературе имеются сведения о химико-токсикологическом исследовании биологических объектов на наличие амитриптилина, аминазина, азалептина, трифтазина, неулептила и галоперидола (Томилин В.В., 2001; Саломатин Е.М., 1999). Однако отсутствуют сведения по химико - токсикологическому исследованию циннаризина и пикамилона в сочетании с этими психотропными лекарственными веществами. Поэтому поиск унифицированных условий хроматографирования комбинированных сочетаний циннаризина, пикамилона и психотропных лекарственных веществ в биологических объектах является важной и актуальной проблемой.
Целью настоящего исследования является совершенствование методов
анализа и стандартизация пикамилона и циннаризина в субстанции и
лекарственных формах, а также разработка методик химико -
токсикологического анализа при сочетании их с психотропными лекарственными средствами с использованием методов спектрофотометрии и хроматографии.
Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:
изучить закономерности хроматографического поведения пикамилона и его специфических примесей (никотиновой кислоты, у-аминомасляной кислоты) в системах растворителей с различными значениями рН, определить оптимальные условия разделения для разработки методики контроля чистоты пикамилона;
обосновать выбор оптимальных условий и разработать унифицированные методики количественного спектрофотометрического определения пикамилона и циннаризина в субстанции и лекарственных формах с использованием оптических образцов сравнения;
разработать методики определения однородности дозирования и теста «растворение» циннаризина и пикамилона в таблетках спектрофотометрическим методом с использованием оптических образцов сравнения;
осуществить выбор оптимальных условий и разработать методики количественного определения циннаризина и пикамилона в таблетках методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ); провести их сравнительную оценку с данными спектрофотометрического анализа по оптическим образцам сравнения;
разработать и представить проекты изменений ФСП на исследуемую группу препаратов;
- обосновать условия разделения пикамилона и циннаризина в сочетании с
амитриптилином, аминазином, азалептином, трифтазином, неулептилом и
галоперидолом в извлечениях из мочи методами тонкослойной и
высокоэффективной жидкостной хроматографии; разработать методики их
качественного определения при совместном присутствии.
Научная новизна работы. Теоретически обоснован и экспериментально подтвержден критерий выбора оптимальной системы растворителей для определения чистоты пикамилона. Установлено, что хроматографическое разделение пикамилона и возможных примесей (никотиновой кислоты, у-аминомасляной кислоты) достигается при рН 11,67 в системе растворителей ацетон - 25% раствор аммиака (10:1,5).
Определены оптимальные условия (влияние рН среды, растворитель, аналитическая длина волны, уравнение градуировочного графика, оптический образец сравнения) и разработаны методики спектрофотометрического определения пикамилона и циннаризина в субстанциях и таблетках по оптическим образцам сравнения.
Установлены условия количественного определения пикамилона и циннаризина методом ВЭЖХ и проведена сравнительная оценка методик анализа пикамилона и циннаризина методом ВЭЖХ и спектрофотометрическим методом по оптическим образцам сравнения, которая показала их высокую воспроизводимость и точность.
Обоснован и экспериментально подтвержден выбор оптимальных систем растворителей для идентификации пикамилона и циннаризина при сочетании с психотропными лекарственными веществами в извлечениях из мочи методом тонкослойной хроматографии (ТСХ).
Обоснованы условия разделения пикамилона и циннаризина при сочетании с психотропными лекарственными веществами в извлечениях из мочи методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) на колонке Prontosil, элюент: 0,2 М раствор перхлората лития - хлорная кислота (рН 2,8) и ацетонитрил, режим элюирования - градиентный.
Разработаны и экспериментально подтверждены методики качественного определения пикамилона и циннаризина при сочетании с психотропными лекарственными веществами в извлечениях из мочи методами ТСХ и ВЭЖХ.
Практическая значимость работы. По результатам исследований разработаны: методики определения посторонних примесей в субстанции и таблетках пикамилона; 16 методик количественного определения циннаризина и пикамилона в субстанциях и таблетках с использованием спектрофотометрического метода, основанного на применении оптических образцов сравнения; 2 методики количественного определения пикамилона и циннаризина в таблетках методом ВЭЖХ; методики качественного определения комбинированных сочетаний пикамилона и циннаризина с амитриптилином, аминазином, азалептином, трифтазином, неулептилом и галоперидолом в извлечениях из мочи методами ТСХ и ВЭЖХ.
Разработанные методики апробированы в ОКК ОАО «Фармасинтез» (г. Иркутск), ЗАО «НІЖ ЭХО», внедрены в практику работы судебно-химического отделения Иркутского областного бюро судебно-медицинской экспертизы (г. Иркутск), судебно-химического отделения ГБУЗ «Республиканское бюро судебно-медицинской экспертизы» (г. Улан-Удэ), химико-токсикологической
лаборатории Иркутского областного психо-неврологического диспансера и в учебный процесс кафедры фармацевтической и токсикологической химии ГБОУ ВПО ИГМУ Минздрава России. Получено 38 актов апробации и внедрения результатов данной работы. Разработанные методики защищены патентно-лицензионными документами: получен Патент РФ на изобретение № 2424515 на «Способ определения циннаризина», направлена заявка на изобретение № 2013103946/005692 на «Способ определения пикамилона». Разработаны проекты изменений ФСП на исследуемые лекарственные средства.
Работа выполнена в соответствии с планом научно-исследовательских работ ИГМУ по проблеме «Контроль качества лекарственных средств с использованием современных методов анализа» (номер Госрегистрации 01.91.0008620) и соответствует направлению проблемной комиссии по фармации.
Апробация работы. Основные положения диссертационной работы обсуждались на международной научно-практической конференции «Фармация Казахстана: интеграция науки, образование и производства» (Шимкент, 2009 г.); 64-й, 65-й, 66-й, 67-й, 68-й межрегиональной конференции по фармации и фармакологии «Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции» (Пятигорск, 2009, 2010, 2011, 2012, 2013 г.г.); XII Международной школе-семинаре «Люминесценция и лазерная физика» (Иркутск, 2010г.); Международной молодежной конференции «Люминесценция и лазерная физика» (Иркутск, 2012г.); межрегиональной научно-практической конференции «Актуальные вопросы фармации» (Тюмень, 2011 г.); II Международной научно-практической конференции «Кластерные подходы фармацевтического союза: образование, наука и бизнес» (Белгород, 2012 г.); Российской научно-практической конференции «Актуальные вопросы повышения последипломной подготовки фармацевтических кадров» (Казань, 2012 г.); 1-ой Всероссийской заочной научно-практической конференции (Бийск, 2012).
Публикации. По теме диссертации опубликовано 19 работ, в том числе 6 статей в периодических изданиях, рекомендованных ВАК МО и науки РФ, получен 1 Патент РФ на изобретение.
Основные положения, выносимые на защиту: -критерии выбора оптимальной системы растворителей с использованием метода «латинского квадрата» для хроматографического контроля чистоты пикамилона;
-сравнительная оценка методик спектрофотометрического анализа с использованием оптических образцов сравнения и ВЭЖХ анализа циннаризина и пикамилона в субстанциях и лекарственных формах;
-идентификация пикамилона и циннаризина в комбинированных сочетаниях с психотропными лекарственными веществами в извлечениях из мочи методами ТСХ и ВЭЖХ.
Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 157 страницах машинописного текста. Работа состоит из введения, обзора литературы, 5 глав экспериментальной части, общих выводов, 58 таблиц, 48
рисунков, списка литературы, включающего 121 источник, из них 39 на иностранных языках. В приложении представлены материалы по апробации и внедрению разработанных методик.
