Содержание к диссертации
Введение
ГЛАВА 1 Способы синтеза и биологическая активность производных пиримидин–4–она и хиназолин–4–она (Обзор литературы) 12
1.1 Современные способы синтеза пиримидин–4–онов 12
1.1.1 Модификация производных пиримидин–4–она 18
1.2 Способы синтеза производных хиназолин–4–она 20
1.2.1. Модификация производных хиназолин–4–она с использованием реакционных центров 24
1.3 Биологическая активность производных пиримидин–4–она и хиназолин–4–она 26 1.3.1 Биологическая активность производных пиримидин–4–она 26
1.3.2. Биологическая активность производных хиназолин–4–она 28
1.4. Современные методы молекулярного моделирования биологически активных соединений 30
Заключение по обзору литературы 33
ГЛАВА 2 Молекулярное конструирование целевых соединений 35
2.1 Компьютерный прогноз и молекулярное моделирование гетероциклических производных 1H–пиримидин–4–онов и их ациклических предшественников 38
2.1.1 Прогнозирование биологической активности гетерилзамещенных 1H–пиримидин–4–онов и их ациклических предшественников 38
2.1.2 Молекулярное моделирование гетерилзамещенных 1H–пиримидин– 4–онов и их ациклических предшественников 40
2.2 Компьютерный прогноз и молекулярное моделирование 2–стирилпроизводных–1H–пиримидин–4–онов 43
2.2.1 Прогнозирование биологической активности целевых 2–стирилпроизводных–1H–пиримидин–4–онов 43
2.2.2 Молекулярное моделирование 2–стирилпроизводных–1H– пиримидин–4–онов 47
2.3 Компьютерный прогноз и молекулярное моделирование гетерилзамещенных 2,3–дигидро–1H–хиназолин–4–она 50
2.3.1 Прогноз гетерилзамещенных 2,3–дигидро–1H–хиназолин–4–она 50
2.3.2 Молекулярное моделирование противовоспалительной активности гетерилзамещенных 2,3–дигидро–1H–хиназолин–4–она 51
2.3.3 Молекулярное моделирование анксиолитической активности гетерилзамещенных 2,3–дигидро–1H–хиназолин–4–она 55 Выводы по главе 57
ГЛАВА 3 Получение и анализ целевых соединений 58
3.1 Синтез N–гетерилзамещенных–5–фенил–1H–пиримидин–4–онов и их ациклических предшественников 58
3.2 Синтез 2–стирил и 2–виниленгетерилзамещенных–1H–пиримидин– 4–онов 67
3.3 Синтез гетерилзамещенных–2,3–дигидро–1H–хиназолин–4–онов 74
Выводы по главе 84
ГЛАВА 4 Материалы и методы 85
4.1 Программное обеспечение, приборы и методы исследования 85
4.2 Получение N1–гетерилпроизводных 1H–пиримидин–4–онов 86 4.3. Получение ациклических аддуктов (предшественников) 1H–пиримидин–4–она 88
4.4 Получение 2–стирил– и 2–виниленгетерилзамещенных–1H– пиримидин–4–онов 89
4.5 Получение гетерилзамещенных–2,3–дигидро–1H–хиназолин–4–она 96
4.6. Получение гидрохлоридов 2–стирил–1H–пиримидин–4–онов 98
ГЛАВА 5. Итоги фармакологических исследований 100
5.1 Гетерилзамещенные производные 1H–пиримидин–4–она и их ациклические предшественники 100
5.1.1 Анксиолитическая активность 100
5.2 Стирилпроизводные–1H–пиримидин–4–она 103
5.2.1 Противовоспалительная активность 103
5.3 Гетерилзамещенные 2,3–дигидро–1H–хиназолин–4–оны 105
5.3.1 Противовоспалительное действие 105
5.3.2 Анксиолитическое действие 107
5.3.3 Психотропная активность 110
5.3.4 Антигипоксическая активности 112
5.4 Определение острой токсичности «соединений–лидеров» по методу Кербера 114
5.5 Изучение взаимосвязи структура–активность целевых соединений 116
5.5.1 Изучение взаимосвязи структура–активность гетерилзамещенных 2,3–дигидро–1H–хиназолин–4–онов 116
Выводы по главе 122
Заключение 124
Литература 127
- Способы синтеза производных хиназолин–4–она
- Молекулярное моделирование гетерилзамещенных 1H–пиримидин– 4–онов и их ациклических предшественников
- Синтез 2–стирил и 2–виниленгетерилзамещенных–1H–пиримидин– 4–онов
- Получение гетерилзамещенных–2,3–дигидро–1H–хиназолин–4–она
Способы синтеза производных хиназолин–4–она
Эволюция компьютерных технологий, позволяет в кратчайшие сроки осуществлять автоматизированный поиск и анализ структур по различным базам данных. Что в свою очередь способствовало бурному развитию молекулярного моделирования и переходу молекулярного конструирования лекарственных веществ на более высокий уровень [113, 53, 110, 50, 81].
Достаточно быстрым и эффективным методом поиска фармакологически активных соединений является использование баз данных, на основе которых возможен предварительный прогноз структурных аналогов с заданной фармакологической активностью. Чаще всего с этой целью используются программы, которые основаны на методе отображение структур в плоскости (2D). При этом процесс поиска перспективных соединений осуществляется при помощи виртуального скрининга [89, 69, 75].
По такому принципу работает программа компьютерного прогнозирования PASS (Prediction of Activity Spectra for Substances) [35], который основан на принципе сравнения виртуальной структуры с обучающей выборкой, содержащей массивы уже описанных фармакологически активных соединений. Алгоритм работы PASS предполагает анализ структурных дескрипторов многоуровневых атомных окрестностей. При этом в случае отсутствия в базе данных сведений биологической активности еще не описанных групп химических соединений или механизмов их фармакологического действия PASS не может реально оценить биологические свойства прогнозируемых соединений.
Использование онлайн баз данных информационно–поисковой системы REAXYS при разработке новых фармакологически активных соединений с одной стороны предотвращает возможность получения уже описанных соединений, а с другой – помогает проводить глобальный поиск близкородственных структур. REAXYS содержит базу экспериментально подтвержденных данных, включающую структуры, реакции (в том числе и многостадийные), их зо характеристики и параметры. Поиск сопровождается ссылками на патенты и статьи. Информационно–поисковая система REAXYS объединяет три крупнейшие в мире базы данных: MDL CrossFire Beilstein – электронную коллекцию органических реакций; Gmelin – информацию за два столетия по неорганической и металлоорганической химии, а также Patent Chemistry Database – содержащую 3,4 млн. химических реакций, упомянутых в различной патентной информации и сведения о 4,2 млн. различных химических веществ.
В последние годы используются аннотированные банки данных, позволяющие предсказывать аффинность новых соединений к известной биологической мишени. Преимуществом такого подхода является пространственное отображение структур (3D) и наличие экспериментальных данных, позволяющих получать более точные результаты. В Волгоградском государственном медицинском университете П.М. Васильевым разработана информационная технология (ИТ) компьютерного прогноза фармакологической активности химических структур на основе комплексного подхода. В рамках данного подхода разработан специализированный язык описания структуры химических соединений [6, 10, 7]. Принцип «суперпозиции» предполагает, что вещества, проявляющие сходную активность по отношению к одной и той же белковой мишени, должны обладать и сходным расположением в пространстве структурных элементов. Следовательно, чтобы сравнить ряд комплексов одного белка с несколькими лигандами можно вычислить схожесть пространственного строения и распределение электронной плотности известных веществ с прогнозируемыми структурами.
Разработан метод описания количественной связи «структура– фармакологическая активность» Molecular SPACE (MSpace), который основан на сравнении трехмерного распределения электронной плотности в молекулах биологически активных веществ и тестового (обучающего) набора. Программа позволяет оценить степень сходства структур путем сравнительного анализа молекулярного поля (CoMFA), при этом в процессе поиска оптимального расположения меняются и конформации молекул [27].
Целый ряд программ основан на анализе молекулярных полей: GRID, MOE, HINT, ISOSTAR/SUPERSTAR [74, 112, 52].
Широкое распространение методов молекулярного докинга получило исследование взаимодействия лиганд–рецептор [84, 51, 64, 41, 21] и лиганд– фермент [90, 54].
В настоящее время существует целый ряд компьютерных программ молекулярного моделирования, основанных на принципах молекулярного докинга: Dock, AutoDock, Gramm, zDock, FlexX, Molegro Virtual Docker и некоторые другие [62, 88].
Следует отметить, что полученные различными программами данные сложно интерпретировать вследствие относительной достоверности их оценочных функции и алгоритмов. Как правило, они создавались и проверялись на небольших выборках белковых мишеней и структур. В силу этого необходимо использовать комплексный подход путем использования набора различных программ для достижения поставленной цели.
Дизайн биологически активных соединений с успехом используется для разработки лекарственных препаратов, многие из которых с успехом применяются на практике: ингибитор АПФ–каптоприл, ряд противовирусных препаратов, таких как лопинавир, озелтамивир, ампренавир, нелфинавир (Вирасепт), противоглаукомное средство дорзоламид (Трусопт). Разные методы молекулярного моделирования имеют как положительные, так и отрицательные качества; применение же комплекса программ приводит к повышению достоверности прогноза фармакологической активности конструируемых соединений.
Молекулярное моделирование гетерилзамещенных 1H–пиримидин– 4–онов и их ациклических предшественников
Из массива более 200 виртуальных структур нами отобрано 9 соединений, для которых вероятность проявления фармакологической активности выше 55%. С этой целью нами использована программа PASS (Prediction of Activity Spectra for Substances), которая позволила выявить вероятность проявления фармакологической активности для исследуемого ряда соединений. Данные представлены в таблицах 2.1–2.2.
Из таблицы 2.1, приведенной ниже, видно, что все соединения в ряду 1H–пиримидин–4–онов, вероятно, могут характеризоваться высокой активностью в качестве агонистов встраивания в мембрану (72–90%). Значительный процент проявления анксиолитической активности прогнозируется для соединений 1,2 и 6. Все вещества исследуемого ряда характеризуются высокой вероятностью противовоспалительного, противоэпилептического, противодиабетического и антидепрессантного действия. Вероятность антигистаминной активности в ряду 1H–пиримидин–4–онов находится в пределах 64–82%, за исключением соединения 3, для которого этот вид активности не прогнозируется. Обезболивающим действием с высокой долей вероятности могут обладать соединения 1,2,6. Лечение аутоиммунных заболеваний с вероятностью 57–86% прогнозируется для соединения 1,2,5,6. Таблица 2.1 - Прогноз биологической активности Ш–пиримидин-4-онов
1H–пиримидин–4–онов и их ациклических предшественников Как известно одним из важных факторов, влияющих на уровень фармакологического эффекта, является энергия связывания лиганда с ферментом: чем ниже энергия связывания, тем прочнее комплекс лиганда с белковой мишенью и тем сильнее эффект (агониста или антагониста).
Выше было показано, что исследование виртуальных соединений 1–10 с помощью программы PASS позволило выявить у них вероятный анксиолитический эффект. Далее мы сочли целесообразным провести молекулярный докинг лигандов с бензодиазепиновым сайтом связывания ГАМКА рецептора, отвечающего за анксиолитическое действие. Известно, что одновременное присутствие – и –субъединиц является необходимым для возможности аллостерического регулирования ГАМКА–рецептора с помощью бенздиазепинов.
При помощи демо–версии программы Molegro Virtual Docker (версия 5.5), нами осуществлен расчет энергии взаимодействия исследуемых лигандов с ГАМКА рецептором в бензодиазепиновом участке связывания. Данные об энергии лиганд–рецепторного комплекса представлены в таблице 2.3.
Примечание: (+/– %) – увеличение/уменьшение степени сродства относительно энергии связывания с диазепамом, в % В качестве препарата сравнения в подобных случаях используется классический транквилизатор – диазепам. Из таблицы 2.3 очевидно, что в целом все соединения характеризуются минимальной энергией взаимодействия с бензодиазепиновым участком связывания ГАМКА рецептора на уровне диазепама. Соединение 6 характеризуется наиболее низкой энергией связывания и превосходит препарат сравнения диазепам.
Ниже показано наиболее оптимальное расположение диазепама в бензодиазепиновом участке связывания ГАМКА рецептора (рис 2.3).
Оптимальное расположение диазепама в бензодиазепиновом участке связывания ГАМКА рецептора Как видно из представленного рисунка 2.3 диазепам имеет участки связывания с остатками следующих аминокислот: His102; Ser159; Ser205; Ser206; Tyr160; Tyr210; Val203; Val212; Arg185; Asp192; Phe77; Thr142; Thr193; Tyr58.
На рисунке 2.4 показано наиболее оптимальное расположение соединения– лидера (6) в бензодиазепиновом участке связывания ГАМКА рецептора. Рисунок 2.4 – Оптимальное расположение соединения–лидера (6) в бензодиазепиновом участке связывания ГАМКА рецептора
Как видно из представленного рисунка 2.4 соединение–лидер (6) имеет участки связывания с остатками следующих аминокислот: His102; Lys156; Ser159; Ser205; Ser206; Tyr160; Tyr210; Val203; Val211; Val212; Ala79; Arg185; Asp192; Phe77; Thr142; Thr193; Tyr58.
Для соединения 6 и диазепама выявлена общность в отношении связывания со следующими аминокислотными остатками: His102; Ser159; Ser205; Ser206; Tyr160; Tyr210; Val203; Val212; Arg185; Asp192; Phe77; Thr142; Thr193; Tyr58. Можно сделать вывод о том, что анксиолитическое действие во многом обусловлено связыванием именно с этим набором аминокислотных остатков.
Синтез 2–стирил и 2–виниленгетерилзамещенных–1H–пиримидин– 4–онов
На основании данных литературы [1, 17, 19, 23, 32] и в продолжение работ, проводимых на кафедре органической химии, нами осуществлено молекулярное моделирование гетерилзамещенных–2,3–дигидро–1H–хиназолин–4–онов (глава 2).
Накоплен значительный опыт (глава 1) в области синтеза производных хиназолин–4–онов, поскольку этот класс соединений характеризуется широким спектром биологической активности [34, 23, 33, 1, 17, 19].
Одним из путей синтеза 2,3–дигидро–1H–хиназолин–4–онов является взаимодействие амида антраниловой кислоты с альдегидами. В некоторых случаях используют труднодоступные катализаторы, такие как галлия трифлат, бисглицирилборная и гетерополифосфорновольфрамовая кислота [40, 67].
В этой связи одной из задач наших исследований является разработка экономически выгодных условий проведения реакции, позволяющих значительно увеличить выходы целевых 2,3–дигидро–1H–хиназолин–4–онов. С этой целью нами предлагается использовать в качестве реакционной среды ледяную уксусную кислоту [3]. В условиях кислотного катализа можно предположить следующий механизм реакции взаимодействия амида антраниловой кислоты с гетерилальдегидами. Механизм представлен на рисунке 3.8. О н Н
Мы предположили, что протонированная форма амида антраниловой кислоты (I) легче вступает в реакцию конденсации с альдегидной группой. Частично отрицательно заряженный атом кислорода альдегидной группы за счет электростатических сил взаимодействует с положительно заряженным четвертичным атомом азота аминогруппы. По–видимому, наибольший вклад в прохождение реакции вносит зарядовый контроль. После отщепления молекулы воды формируется двойная связь протонированной иминной группы (II), которая далее перегруппируется в более устойчивый карбкатион (III), приводящий к циклизации (IV) и при депротонировании образованию целевого продукта (V). Схема синтеза гетерилзамещенных 2,3–дигидро–1H–хиназолин–4–онов представлена на рисунке 3.9. о
Синтез гетерилзамещенных 2,3-дигидро–Ш–хиназолин-4-онов При получении прогнозируемых структур нами в качестве катализатора использована ледяная уксусная кислота. Поскольку ядро фурана характеризуется ацидофобностью, то во избежание осмоления реакционную смесь не следует подвергать чрезмерному нагреванию. Общая методика получения гетерилпроизводных 2,3-дигидро–Ш–хиназолин-4-она заключалась во взаимодействии исходного амида антраниловой кислоты и соответствующего альдегида в 5 мл ледяной уксусной кислоты с кратковременным нагреванием при 100 С в течение 2–10 мин.
Целевой продукт осаждали водой, отделяли и кристаллизовали из этанола. Некоторые параметры синтезированных нами гетерилзамещенных 2,3-дигидро–Ш–хиназолин-4-онов представлены в таблице 3.4. Таблица 3.4 – Некоторые характеристики гетерилзамещенных–2,3–дигидро–1H– хиназолин–4–онов
Исходя из представленного выше механизма реакции, следует, что на процесс циклоконденсации существенное влияние оказывает величина частичного отрицательного заряда на карбонильном кислороде. Чем больше – на атоме кислорода альдегидной группы, тем легче протекает реакция. Исходя из этого осуществлен расчет распределения зарядов на альдегидной группе полуэмпирическим методом (AM1) при помощи программы HyperChem версия 8.0.8, данные представлены в таблице 3.5.
Мы сочли целесообразным изучить эти закономерности и выявить взаимосвязь между практическим выходом целевого продукта и частичным отрицательным зарядом на атоме кислорода альдегидной группы. Графики на рисунке 3.10 и 3.11 наглядно отражают данную зависимость. Выходы целевых 2,3–дигидро–1H–хиназолин–4–онов, в % 92] 88 901 79 67154 62 61 J t429 і 32 33 /і34 135 № соединения Рисунок 3.10 – Выход целевых 2,3–дигидро–1H–хиназолин–4–онов, в %
Величина 29 30 431 32 33 34 і35 № соединения Рисунок 3.11 – Заряд на атоме кислорода у исходных альдегидов Сопоставление данных двух графиков позволяет сделать вывод о том, что между частичным отрицательным зарядом на атоме кислорода и выходом целевых соединений имеет место определенная зависимость, что подтверждается для соединений 28, 29, 30, 31. Снижение выходов для соединения 32–35 можно объяснить вызванными стерическими затруднениями из–за присутствия в исходных альдегидах фенильных и бензильных заместителей. В качестве примера мы приводим спектральные характеристики модельного 2–фуран–2–ил–2,3– дигидро–1H–хиназолин–4–она (28) (рисунок 3.12). Рисунок 3.12 – ИК–спектр модельного 2–фуран–2–ил–2,3–дигидро–1H–хиназолин–4–она (28) В ИК–спектре 2–фуран–2–ил–2,3–дигидро–1H–хиназолин–4–она (28) присутствуют максимумы поглощения N–H связей в области 3253 см–1 и 3181 см–1, С=О 1641 см–1, С=С 1611 см–1 и 1521 см–1.
В спектре 1Н ЯМР соединения 2–фуран–2–ил–2,3–дигидро–1H–хиназолин– 4–она (28) присутствуют сигналы семи ароматических протонов фурильного фрагмента и сигналы протонов бензаннелированного ядра хиназолинона. Протон в положении 2 ядра 2,3–дигидро–1H–хиназолин–4–она проявляется в виде однопротонного триплета с величиной химического сдвига 5,73 м.д. Протон NH фрагмента в положении 1 ядра 2,3–дигидро–1H–хиназолин–4–она фиксируется в виде однопротонного дублета с величиной химического сдвига 6,25 м.д., а однопротонный синглет NH в положении 3 с величиной химического сдвига 8,38 м.д. (рисунок 3.13).
В спектре 1Н ЯМР соединения 2–(5–йод–фуран–2–ил)–2,3–дигидро–1H– хиназолин–4–он (29) присутствуют сигналы шести ароматических протонов фурильного фрагмента и сигналы протонов бензаннелированного ядра хиназолинона. Протон в положении 2 ядра 2,3–дигидро–1H–хиназолин–4–она проявляется в виде однопротонного синглета с величиной химического сдвига 5,75 м.д. Протон NH фрагмента в положении 1 ядра 2,3–дигидро–1H–хиназолин– 4–она фиксируется в виде однопротонного дублета с величиной химического сдвига 618 м.д., а однопротонный синглет NH в положении 3 с величиной химического сдвига 8,38 м.д. (рисунок 3.14).
Получение гетерилзамещенных–2,3–дигидро–1H–хиназолин–4–она
Компьютерное прогнозирование целевых соединений 28,29,30,31,32,34,35 с вероятностью от 30 до 92 % показало возможное противовоспалительное действие (глава 2, раздел 2.3.1). Молекулярное моделирование выявило возможных лидеров противовоспалительной активности (глава 2, раздел 2.3.2). С целью подтверждения прогноза экспериментально на модели «ватной гранулемы» изучено противовоспалительное действие синтезированных соединений 28,29,30,31,32,34,35.
Исследование проведено на 54 крысах–самках линии Wistar весом 180–200 г (на момент начала эксперимента). Белых крыс вводили в состояние хлоралгидратного сна (доза 350 мг/кг), и в области спины выстригалась шерсть. В асептических условиях делался разрез кожи и подкожной клетчатки, куда помещали простерилизованный ватный шарик массой 15 мг, затем на рану накладывалось два шва. В течение всего опыта (7 суток) крысам в пищевод при помощи зонда вводили исследуемые соединения. Подопытных животных разделили на 9 групп по 6 особей в каждой: 1 группа – контрольная, которой вводили физиологический раствор; животным 2–й группы вводили препарат сравнения – диклофенак (в дозе соответствующей в пересчете на массу взрослого человека); группам 3–9 – вводили исследуемые вещества в виде суспензий (в дозе 50 мг/кг). На восьмые сутки опыта имплантированный шарик с образовавшейся вокруг него грануляционной тканью извлекался, взвешивался, затем высушивался до постоянной массы при 60–65оС. О величине экссудативной фазы воспаления судили по разнице масс (мг) шарика до и после высушивания, о величине пролиферативной фазы – по разнице в массе (мг) высушенного шарика с его исходной массой 15 мг. Данные представлены в таблице 5.3.
Примечание: – достоверно по отношению к контролю ( P 0.05)# – достоверно по отношению к диклофенаку (# P 0.05)PD – процент относительно диклофенакаPK – процент относительно контроля
Как видно из данных таблицы, соединения 28–32 и 34 относительно диклофенака снижают достоверно экссудацию соответственно на 36 %; 39 %; 20 %; 36 %; 25 %; 15 %. Соединение 35 на уровне диклофенака влияет на стадию экссудации. Соединения 28,29,31,32 снижают пролиферацию достоверно по отношению к диклофенаку на 17 %; 13 %; 17 %; 7 %. Соединение 30 по сравнению с диклофенаком увеличивает пролиферацию на 17 %, а 35 на 40 По результатам исследования выявлены 3 соединения–лидера противовоспалительного действия, статистически достоверно относительно препарата сравнения диклофенак снижающие процесс экссудации на 36–39%.
Следует подчеркнуть, что во время эксперимента на 2–3 сутки после вшивания ватного шарика, практически у всех животных получавших исследуемые соединения, наблюдалось заживление шва. Шов был сухой, покраснение минимально, в отличие от контроля и препарата сравнения диклофенака, у которых данная закономерность отмечалась на 5 и 7 сутки соответственно. В силу этого можно делать вывод о высоких регенеративных способностях гетерилзамещенных 2,3–дигидро–1H–хиназолин–4–она [24].
Компьютерный анализ соединений 28,29,30,31,32,34,35 показал вероятность проявления у них анксиолитического действия (глава 2, раздел 2.3.1). Молекулярное моделирование в бензодиазепиновом сайте связывания ГАМКА рецептора показало высокую вероятность связывания исследуемых соединений с белковой мишенью (глава 2, раздел 2.3.3). Чтобы подтвердить прогноз мы сочли целесообразным экспериментально в тесте «открытое поле» изучить возможный анксиолитический эффект целевых соединений 28,29,30,31,32,34,35.
В фармакологическом тесте «открытое поле» оценена анксиолитическая активность исследуемых соединений. [29, 30]. Для проведения эксперимента были использованы 48 крыс–самок линии Wistar весом 180–200 г (на момент начала эксперимента), содержащиеся в стандартных условиях вивария при свободном доступе к воде и пище. С целью изучения нейропсихического статуса крыс (исследования психо–эмоциональной, двигательной и исследовательской активности животных), на фоне введения исследуемых веществ использовали тест «открытое поле».
Исследуемые соединения 28,29,30,31,32,34,35 вводили соответствующим группам животных однократно в дозе 10 мг/кг в виде мелкодисперсной суспензии, солюбилизированной твином–80, что было обусловлено плохой растворимостью. Контрольная группа животных получала физиологический раствор в эквивалентном объеме. Вещества вводили перорально с помощью принудительного зондирования за 30 – 45 минут до проведения эксперимента.
В каждой группе животных проводилось тестирование психоневрологического статуса. В течение 3–х минут пребывания крысы в «открытом поле» регистрировали двигательную активность (число пересечнных секторов), эмоциональный статус (количество стереотипных движений – груминг, фекальных болюсов) и ориентировочно–исследовательскую активность (вставание на задние лапы). В каждой экспериментальной группе использовали по 6 животных. Для изучения психоневрологического статуса в динамике, исследование проводили в первые, затем на 4 и 7 сутки после введения исследуемых веществ. Полученные экспериментальные данные статически обработаны и представлены в сводной таблице 5.4 [22].
![Синтез, свойства и биологическая активность производных галоген(Н)антраниловых кислот, 3,1-бензоксазин-4(3Н)-онов, хиназолинонов и изучение взаимосвязи структура - активность [Электронный ресурс]](/i/i/4391/182559.png "Синтез, свойства и биологическая активность производных галоген(Н)антраниловых кислот, 3,1-бензоксазин-4(3Н)-онов, хиназолинонов и изучение взаимосвязи структура - активность [Электронный ресурс] Курбатов Евгений Раисович")
