Содержание к диссертации
Введение
Глава 1 Обзор литературы 10
1.1 Современные гепатопротекторные средства с точки зрения доказательной медицины 10
1.2 Фармакологические свойства адеметионина, его применение в медицине, лекарственные формы 12
1.3 Физико-химические свойства адеметионина 17
1.3.1 Физические свойства адеметионина как химического вещества 17
1.3.2 Химические свойства адеметионина 17
1.4 Методы качественного и количественного анализа адеметионина и его препаратов 1 8
1.5 Способы получения адеметионина 21
1.6 Стабильность адеметионина. Способы повышения стабильности адеметионина 25
1.6.1 Способы получения солей адеметионина с сульфокислотами 26
1.6.2 Способы получения солей адеметионина с производными таурина 27
1.6.3 Другие способы повышения стабильности адеметионина 29 Глава 2 Объекты, материалы и методы исследования 32
2.1 Объекты и материалы 32
2.2 Методы исследования 3 8
Глава 3 Разработка методик осаждения адеметионин-иона из растворов 5 1
3.1 Исследование условий осаждения адеметионин-иона с помощью производных таурина 51
3.1.1 Разработка способа получения стеарилтаурина 5 1
3.1.2 Выбор условий осаждения адеметионин-иона 54
3.2 Исследование условий осаждения адеметионин-иона с помощью сульфокислот 57
3.3 Разработка методик анализа солей адеметионина 64 3.3.1 Разработка методик анализа соли адеметионина со стеарилтаурином.. з
3.3.2 Разработка методик анализа соли адеметионина с лаурилсульфо-кислотой 70
3.3.3 Разработка методик анализа адеметионина с хондроитинсульфо-кислотой 76
Выводы по главе 85
Глава 4 Исследование условий получения субстанции адеметионина 87
4.1 Выделение дрожжевой массы 87
4.2 Разработка методики лизиса дрожжевых клеток 88
4.3 Разработка методики выделения адеметионин-иона из лизата 94 Выводы по главе 101 Глава CLASS 5 Разработка способа получения стабильной соли адеметионина с серной и п-толуолсульфокислотой 102 CLASS
5.1 Получение субстанции адеметионина 102
5.2 Разработка методик анализа двойной соли адеметионина с серной и п-толуолсульфокислотой 1 0 3
5.2.1 Разработка методик качественного анализа двойной соли 103
5.2.2 Разработка методик количественного анализа двойной соли адеметионина с серной и п-толуолсульфокислотой 106
Выводы по главе 1
Глава 6 Изучение стабильности и установление сроков годности солей адеметионина 1 14
Выводы по главе 113
Глава 7 Разработка нормативной документации для солей адеметионина со стеарилтаурином, лаурилсульфокислотой, хондроитинсульфокислотой, субстанции адеметионина с серной и п-толуолсульфокислотой 124
Выводы по главе 1 36
Заключение 137
Список литературы
- Фармакологические свойства адеметионина, его применение в медицине, лекарственные формы
- Выбор условий осаждения адеметионин-иона
- Разработка методик анализа двойной соли адеметионина с серной и п-толуолсульфокислотой
- Разработка методик количественного анализа двойной соли адеметионина с серной и п-толуолсульфокислотой
Введение к работе
Актуальность темы исследования. Согласно данным Всемирной
организации здравоохранения в современном мире заболеваемость
гепатобилиарной патологией превышает 2 млрд. человек. Во всем мире ведутся активные поиски гепатопротекторных лекарственных средств.
Нарушение функции печени возникает при различных патологических состояниях и сопровождается метаболическими расстройствами, иногда с развитием токсикозов.
Одним из тяжелых осложнений заболеваний печени является печеночная недостаточность. Фармакологическая коррекция заболеваний печени является одной из актуальных задач современной медицины и фармации.
В настоящее время именно адеметионин считается одним из наиболее эффективных гепатопротекторов. Это связано с тем, что наряду с высокой активностью он проявляет низкую токсичность, уменьшает воспалительный процесс, стимулирует регенерацию печени, улучшает естественный метаболизм в печени. Эти свойства адеметионина имеют доказательную клиническую базу.
На Российском фармацевтическом рынке присутствует несколько препаратов адеметионина. Российские фармацевтические фирмы Лэнс-фарм, Верофарм выпускают препарат Гептор (S-аденозилметионин) в виде таблеток, порошка для приготовления раствора для внутривенного и внутримышечного применения; компания Экомир предлагает адеметионин в виде биологически активной добавки к пище в таблетированной форме. Под торговым наименованием Гептрал (S-аденозилметионина1,4-бутандисульфонат и S-аденозилметионина дисульфат п-толуолсульфонат) в России реализуют свою продукцию зарубежные фирмы Эббот (США), Хоспира (США), Фамар (Франция), Эбботт С.п.А. (Италия).
Все эти препараты изготовлены из субстанции, произведенной в Китае фирмой Zhejiang hisun pharmaceutical, Сo.ltd. В России же субстанция адеметионина не выпускается.
Недостатками всех этих препаратов являются относительная дороговизна, химическая нестабильность (малый срок хранения ввиду постепенного распада действующего вещества) и низкая биодоступность при пероральном применении.
Таким образом, особо актуальным для Российской фармацевтической промышленности является поиск путей получения стабильной субстанции адеметионина для производства препаратов.
Степень разработанности темы исследования. Современной науке известны несколько способов получения адеметионина. Все они охраняются патентами на изобретения разных стран. Известные способы получения адеметионина можно разделить на химические и ферментативные. Они имеют свои недостатки, однако применяются при получении субстанций солей адеметионина с различными кислотными производными.
Несмотря на широкое производство лекарственных форм адеметионина, в настоящее время отсутствует российское производство субстанции адеметионина.
В этой связи разработка способов получения стабильных солей адеметионина для российского производства субстанции, является актуальной задачей.
Цель и задачи. Целью настоящей работы явилось разработка способов
получения стабильных солей адеметионина для фармацевтического
производства, разработка нормативной документации на данные субстанции.
Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:
-
Изучить условия осаждения адеметионин-иона из его водного раствора с помощью производных таурина и сульфокислот.
-
Разработать биосинтетический способ получения адеметионина.
-
Разработать способы получения солей адеметионина со стеарилтаурином, лаурилсульфокислотой, хондроитинсульфокислотой, а также с серной и п-толуолсульфокислотой.
-
Разработать методики анализа полученных солей.
-
Изучить стабильность и установить сроки годности солей адеметионина.
-
Разработать проект Фармакопейной статьи предприятия на двойную соль адеметионина с серной и п-толуолсульфокислотой.
Научная новизна. В результате проведенных исследований предложен
способ получения двойной соли адеметионина с серной и п-
толуолсульфокислотой.
Предложена схема получения стеарилтаурина. Установлены условия, при которых происходит полное формирование осадков солей адеметионин-иона со стеарилтаурином, лаурилсульфокислотой, хондроитинсульфокислотой. С помощью спектрометрического метода анализа установлено содержание адеметионин-иона в полученных солях.
Разработаны и валидированы методики анализа соединений
адеметионина со стеарилтаурином, лаурилсульфокислотой,
хондроитинсульфокислотой.
Усовершенствован способ получения субстанции адеметионина из дрожжевой массы. На стадии очистки раствора адеметионина используют 5% водный раствор пикролоновой кислоты. Для полученной субстанции разработаны и валидированы методики качественного и количественного анализа компонентов.
Получены соль адеметионина с хондроитинсульфокислотой и двойная соль адеметионина с серной и п-толуолсульфокислотой. Способы их получения заявлены как изобретения РФ.
Изучена стабильность и установлены сроки годности всех полученных солей адеметионина.
Теоретическая и практическая значимость.
Теоретическая значимость исследования заключается в расширении способов получения устойчивых солей адеметионина, в возможности получения субстанции адеметионина на территории Российской Федерации.
Полученные данные могут служить основанием для получения субстанции адеметионина.
Практическая значимость исследования заключается в том, что получена двойная соль адеметионина с серной и п-толуолсульфокислотой, установлен срок ее годности, и на ее основе предложена для промышленного производства в РФ субстанция адеметионина.
Разработан унифицированный подход к стандартизации субстанции в соответствии с современными требованиями.
Разработан проект ФСП «S-аденозилметионин, субстанция».
Методология и методы исследования. Методологической основой
работы послужили результаты зарубежных исследований по
совершенствованию способов получения адеметионина и его устойчивых солей.
Исследования проводились с использованием различных физико-химических методов: хроматография тонкослойная (ТСХ), спектрометрия в УФ-области спектра и ИК - спектроскопия.
Положения, выносимые на защиту:
-
Результаты исследований по выбору условий осаждения адеметионин-иона из водного раствора.
-
Результаты выбора методик анализа солей адеметионина со стеарилтаурином, луарилсульфокислотой и хондроитинсульфокислотой.
-
Результаты изучения возможности получения адеметионин-иона из дрожжевой массы.
-
Результаты получения соли адеметионина с хондроитинсульфокислотой.
-
Результаты получения двойной соли адеметионина с серной и п-толуолсульфокислотой.
-
Показатели и нормы качества субстанции адеметионина – двойной соли с серной и п-толуолсульфокислотой для разработки проекта нормативной документации.
-
Результаты изучения стабильности полученной субстанции.
Степень достоверности и апробация результатов. Оценка степени достоверности полученных результатов определяется большим объемом проанализированной информационной базы, использованием современных физико-химических методов анализа, позволяющих получать достоверные результаты, которые подвергнуты математико-статистической обработке. Все разработанные методики анализа валидированы.
Разработанный проект Фармакопейной статьи предприятия «S-аденозилметионин, субстанция» апробирован в условиях фармацевтического производства ФГУП «НПО Микроген» Минздрава России, филиал в г. Ставрополе «Аллерген» (акт апробации от 25.01.2014 года).
Предложенные методики анализа апробированы также в ГУЗ «Республиканский центр контроля качества и сертификации лекарственных средств» МЗ Республики Северная Осетия-Алания (акт апробации от 08.10.2013 года).
Материалы исследования доложены и обсуждены на региональных конференциях «Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции» (г. Пятигорск, 2013 г., 2014 г.), Всероссийской научной Интернет-конференции с международным участием «Спектрометрические методы анализа», г. Казань, 2013 г.
По теме диссертации опубликовано 8 научных работ, из них 5 - в изданиях, рекомендованных ВАК.
Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 155 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, главы «Объекты и методы исследования», пяти глав экспериментальной части, заключения, списка литературы и приложений. В работе содержится 53 таблицы, 20 рисунков. Список литературы включает 144 источника, из них – 127 - на иностранных языках.
Фармакологические свойства адеметионина, его применение в медицине, лекарственные формы
Тонкослойная хроматография. Хроматографируют в системе растворителей спирт этиловый 95% - уксусная кислота - вода (64:1:35). Значения Rf для каждого вещества в этой системе растворителей: адеметионин - 0,3; АМФ -0,44; АДФ - 0,28; АТФ - 0,23; аденозин - 0,59; аденин - 0,63; метилтиоаденозин (МТА) - 0,75; гомосерин - 0,63; метионин - 0,72. В качестве проявителя используют ацетоновый раствор нингидрина 5%, а полученные пятна идентифицируют в УФ – свете при длине волны 254 нм. С помощью тонкослойной хроматографии можно отличить адеметионин от главного продукта его распада - метилтиоаденозина, за счет большой разницы в значении Rf [34].
Ионно-обменная хроматография. Данная процедура позволяет очистить адеметионин от сопутствующих веществ после окончания процесса биосинтеза.
Для выполнения процедуры используют катион-обменную смолу DOWEX-50 сильнокислотной формы.
Кислотный экстракт, содержащий адеметионин, помещается в колонку длиной 35 мм и диаметром 7 мм. Вымывают кислотой серной 0,5М до тех пор, пока оптическая плотность элюата при 256 нм будет менее чем 0,01. Элюат, полученный добавлением кислоты серной 0,5М содержит примеси аденина, а также незначительное количество адеметионина. Элюирование продолжают водным раствором кислоты серной 3М. Адеметионин начинает элюироваться моментально [34].
Для анализа субстанции адеметионина с серной и п-толуолсульфокислотой используют методы ИК - спектроскопии, ВЭЖХ. Количественный анализ компонентов проводят методом ВЭЖХ [140].
Субстанция адеметионина (адеметионин дисульфат п-толуолсульфонат) представляет собой кристаллический порошок белого или почти белого цвета, гигроскопичен. Легко растворим в воде, практически не растворим в органических растворителях.
Подлинность субстанции подтверждают с помощью ИК - спектроскопии. Инфракрасный спектр препарата в области от 4000 до 600 см-1 (диски с бромидом калия, 5 мг препарата в 400 мг бромида калия), по положению и относительной интенсивности полос поглощения должен соответствовать полосам поглощения ИК спектра рабочего стандартного образца адеметионина дисульфата п-толуолсульфоната.
Подлинность адеметионин-иона устанавливают с помощью ВЭЖХ. Времена удерживания пиков изомеров адеметионин-иона на хроматограмме испытуемого раствора должны соответствовать временам удерживания пиков изомеров адеметионин-иона на хроматограмме раствора СО адеметионина дисульфата п-толуолсульфоната.
Подлинность п-толуолсульфоновой кислоты устанавливают методом ВЭЖХ. Время удерживания одного из основных пиков на хроматограмме испытуемого раствора должно соответствовать времени удерживания основного пика на хроматограмме раствора СО п-толуолсульфоновой кислоты.
Помимо этого НД требует определения показателя удельного вращения (поляриметрический метод), посторонних примесей (метод ВЭЖХ), а также остаточных органических растворителей (метод ГЖХ) [143].
Количественное определение адеметионина проводят методом ВЭЖХ, используя в качестве стандарта СО адеметионина дисульфоната п 21 толуолсульфоната (в пересчете на сухое вещество не менее 48,5% и не более 53,0%) [135]. Количественное определение п–толуолсульфокислоты проводят методом ВЭЖХ, используя в качестве стандарта раствор СО п-толуолсульфокислоты (не менее 20,0% и не более 24,0% в пересчете на безводное вещество) [143]. На Российском фармацевтическом рынке присутствует препарат гептрал (адеметионина 1,4–бутандисульфат) таблетки, покрытые кишечнорастворимой оболочкой, а также лиофилизированный порошок [14].
Анализ адеметионин-иона в данных лекарственных формах проводят методом ВЭЖХ.
Идентификацию 1,4-бутандисульфоновой кислоты проводят методом ВЭЖХ. Помимо этого, НД требует определения содержания оптически активного S,S-изомера, не менее 55,0%, (метод ВЭЖХ). Также определяют удельное вращение (поляриметрический метод), посторонние примеси (метод ВЭЖХ), содержание воды (метод Фишера). Количественное определение адеметионин-иона проводят методом ВЭЖХ, используя в качестве стандарта СО адеметионина 1,4-бутандисульфоната (содержание адеметионина не менее 48,5% и не более 53,5% в пересчёте на безводное вещество) [126]. 1.5 Способы получения адеметионина Впервые адеметионин был изучен и синтезирован итальянским ученым Кантони Д. в 1952 году, который приготовил его из аденозинтрифосфата (АТФ) и метионина в присутствии очищенного печеночного фермента [34]. На сегодняшний день, данный метод не применяется, так как является трудоемким, дает небольшой выход целевого продукта, а также требует наличие очищенного печеночного фермента.
Выбор условий осаждения адеметионин-иона
Из литературных данных известно, что ацилтаурины способны образовывать с адеметионином соли, которые осаждаются из раствора в виде белого твердого вещества. Соли отличаются высокой стабильностью и биодоступностью, а также низкой токсичностью [142].
В литературе описано приготовление стабильных солей адеметионина с ацилтауринами следующей формулы: SAMn[R-CO-NH-(CH2)2-SO3--]n, где: R-CO это С12 - С26 предельный, непредельный, линейный, разветвленный ацил; n - от 3 до 6, согласно заряду SAM.
Процесс приготовления ацилтаурина состоит из трех стадий. На первой стадии получают хлорангидрид кислоты. На второй стадии полученный хлорангидрид конденсируют в присутствии третичного амина (диметиламинопиридина) с таурином.
Данную реакцию проводят в органических растворителях в том случае, если ацилирующий агент является твердым веществом. При использовании жидких ацилирующих агентов органические растворители не требуются. На заключительной стадии полученный ацилтаурин промывают дважды петролейным эфиром и высушивают. Полученное соединение представляет собой белое смолистое вещество, легко растворимое в спирте этиловом 95%, умеренно растворимое в воде, практически нерастворимое в хлороформе. Полученный ацилтаурин используется для осаждения адеметионина из водного раствора и лизата. [34].
Нами разработан трехстадийный способ получения ацилтаурина на примере стеариновой кислоты и таурина. На первой стадии нами был получен хлорангидрид стеариновой кислоты. Для получения хлорангидрида наиболее подходящим из двух хлорирующих агентов оказался тионилхлорид, так как в процессе синтеза происходит образование газообразных продуктов (хлор и диоксид серы), которые легко удаляются в процессе синтеза.
Реакция получения хлорангидрида стеариновой кислоты с хлоридом фосфора(V) не представляется возможной, так как происходит обугливание вещества и образуется хлорангидрид, загрязненный продуктами разложения. На второй стадии, полученный хлорангидрид конденсировали с таурином в присутствии триэтиламина в качестве катализатора. На заключительной стадии, полученный стеарилтаурин осаждали подходящим органическим растворителем. Для получения хлорангидрида стеариновой кислоты растворяли 2 г стеариновой кислоты в 20 мл хлороформа, добавляли 3 капли диметилформамида в качестве катализатора и 0,8 мл тионилхлорида. Реакционную смесь нагревали в колбе с обратным холодильником в течение 2 часов при температуре 50-60 С. Избыток тионилхлорида удаляли, охлаждали и добавляли при перемешивании суспензию, состоящую из 1,1 г таурина в 1,5 мл триэтиламина.
Полученную смесь нагревали в колбе с обратным холодильником в течение 5 часов при температуре 45-50 С. По окончании реакции избыток таурина и образовавшийся триэтиламина гидрохлорид удаляли фильтрацией. Хлороформный раствор промывали кислотой хлористоводородной для удаления остатка триэтиламина. Хлороформный слой упаривали и после охлаждения добавляли к нему двойное количество диэтилового эфира – появлялся белый осадок.
Полученное вещество представляет собой белую смолистую массу, растворимую в воде и легко растворимую в спирте, ацетоне, практически нерастворимую в хлороформе и эфире (рисунок 1). Рисунок 1 - Схема получения стеарилтаурина Подлинность полученного соединения подтверждали с помощью качественных реакций.
Остаток таурина идентифицировали по реакции с нингидрином. Для этого к спиртовому раствору стеарилтаурина 5% добавляли 1 мл водного раствора натрия гидроксида 0,5М и 0,02 г нингидрина, после нагревания при температуре около 100 С в течение 10 минут появлялось сине-фиолетовое окрашивание.
Наличие амидной группы подтверждали по реакции образования гидроксамовой кислоты (гидроксамовая проба). Навеску стеарилтаурина (около 0,05 г) растворяли в 1 мл смеси спирта этилового 95% - воды (1:1), добавляли 0,5мл водного раствора гидроксиламина гидрохлорида 2% и 0,5 мл водного раствора натрия гидроксида 0,5М, кипятили в течение 5 минут, охлаждали и добавляли водный раствор кислоты хлористоводородной 0,5М до значения рН среды 5,0-6,0, затем добавляли 0,2 мл водного раствора железа(III) хлорида - появлялось розовое окрашивание.
Разработка методик анализа двойной соли адеметионина с серной и п-толуолсульфокислотой
Из литературных данных известно три способа получения адеметионина.
Получение адеметионин-иона с помощью специфического фермента АТФ–метионинаденозилтрансферазы. Данный метод является трудоемким, так как требует выделения специфического фермента из дрожжевого экстракта, кроме того в процессе синтеза возможно ингибирование целевого продукта [34].
Суть метода заключается в метилировании S–аденозил–L–гомоцистеина различными веществами. Существовало несколько попыток осуществить синтез адеметионина химическим путем, однако это не принесло успеха в коммерческих масштабах, так как в результате синтеза образуется незначительное количество активного (S,S)-изомера, а именно 35 - 45%, в то время как неактивного (S,R)-изомера 55- 65%.
Помимо этого, указанный способ дает большое количество примесей [133].
Биосинтетический способ получения адеметионин-иона. Сущность метода заключается в накоплении адеметионин-иона в клетках дрожжей, помещенных в метионинсодержащую среду; далее проводят лизис дрожжевых клеток, с целью получения раствора адеметионин-иона, который затем подвергают очистке различными способами. На конечной стадии получают стабильную соль адеметионин-иона с различными кислотами и солями [142]. Этот способ является наиболее успешным для получения адеметионина в коммерческих масштабах.
Выделение дрожжевой массы
В качестве продуцента адеметионин-иона нами использовались активные сухие дрожжи - Saccharomyces cerevisiae. А в качестве питательной среды была выбрана среда Шлёнка, так как в состав данной среды входит метионин, необходимый для синтеза адеметионин-иона.
В колбу вместимостью 10 л, снабженную мешалкой и устройством аэрации, добавляли 5 литров среды, содержащей следующие компоненты (г): Калия дигидрофосфата 10,0 Калия гидрофосфата 5,0 Аммония сульфата 10,0 Натрия цитрата 5,0 Магния хлорида гексагидрата 1,5 Марганца сульфата гептагидрата 0,5 Кальция хлорида 0,5 Цинка сульфата гептагидрата 0,5 Глюкозы 75,0 L-метионина 3,75 Температуру полученной среды поддерживали около 30 С с помощью тепловой лампы, добавляли 65,0 г сухих дрожжей, оставляли на 24 часа. По истечении 8 часов добавляли 50,0 г глюкозы.
Через 24 часа дрожжи отделяли от ферментативной жидкости с помощью центрифугирования и промывали дважды избытком холодной воды.
Разработка методики лизиса дрожжевых клеток Согласно литературным данным лизис дрожжевых клеток можно проводить различными способами [34]. Для разработки методики лизиса дрожжевых клеток нами были проведены исследования, в которых для лизиса использовали различные кислоты и условия.
Промытые водой дрожжи экстрагировали 4 объемами кислоты хлорной 1,5М при комнатной температуре в течение 1 часа.
Полученный лизат содержит большое количество примесей, что подтверждается методом тонкослойной хроматографии (рисунок 9), а также его трудно отделить от остатков дрожжей. Рисунок 9 – Схема хроматограммы в тонком слое сорбента лизата, содержащего адеметионин (1) и раствора СО адеметионина сульфата (2)
В результате лизиса дрожжевых клеток с использованием смеси муравьиной и уксусной кислот при температуре 60 С получали лизат, содержащий преимущественно метилтиоаденозин и аденин – основные продукты разложения адеметионин-иона (рисунок 10).
Очевидно, это связано с неустойчивостью адеметионина при температуре выше комнатной даже в кислой среде.
Наличие примесей в лизате подтверждали методом тонкослойной хроматографии. Рисунок 10 – Схема хроматограммы в тонком слое сорбента лизата, содержащего адеметионин (1) и раствора стандартного образца адеметионина сульфата (2).
Как следует из рисунка 10, после лизиса дрожжевых клеток с использованием смеси муравьиной и уксусной кислот при температуре 60 С, в лизате, кроме адеметионина, присутствуют примеси аденина (Rf 0,63) и метилтиоаденозина (Rf 0,75) [34].
Наиболее продуктивной оказалась методика, при которой лизис дрожжевых клеток осуществляется с использованием органического растворителя и разбавленной серной кислоты при комнатной температуре.
В качестве органического растворителя использовали этилацетат, который добавляется к дрожжам, обогащенным адеметионином, при комнатной температуре; полученную смесь энергично перемешивали в течение 30 минут. Далее к полученной смеси добавляли раствор кислоты серной 0,15М.
Данный способ позволяет получить около 90% адеметионин-иона присутствующего в дрожжах, с минимальным содержанием примесей, которые легко удаляются на последующих стадиях очистки субстанции.
Экспериментально было изучено оптимальное время проведения лизиса. Для этого к дрожжам, обогащенным адеметионином, добавляли этилацетат и воду (1:1), перемешивали при комнатной температуре в течение 30 минут, к полученной смеси добавляли раствор кислоты серной 0,15М и перемешивали при комнатной температуре. Контроль за содержанием адеметионин-иона в лизате осуществляли спектрофотометрическим методом, с использованием раствора СО адеметионина сульфата.
Каждые 15 минут отбирали 5 мл порции лизата, помещали в мерную колбу вместимостью 50 мл и доводили объем раствора в колбе до метки водой, спектрофотометрическим методом определяли содержание адеметионина при длине волны 258 нм.R
Разработка методик количественного анализа двойной соли адеметионина с серной и п-толуолсульфокислотой
Подлинность.УФ-спектр водно-спиртового (1:3) раствора препарата 0,0025% в области от 200 до 300 нм имеет максимума поглощения при 258±2 нм и по положению максимума должен быть идентичен УФ-спектру водно спиртового раствора (1:3) стандартного образца адеметионина сульфата 0,00155%.
Прозрачность раствора. Раствор 1 г препарата в 20 мл спирта этилового 95% должен быть прозрачным (ГФ ХII). Цветность раствора. Раствор препарата, приготовленный для определения прозрачности, должен быть бесцветным (ГФ ХII). Вода. Навеску препарата предварительно обрабатывают кислотой уксусной ледяной, определение проводят по методу Фишера (ГФ ХII). Содержание влаги в препарате должно быть не более 2,5% . Посторонние примеси. Определение проводят методом ТСХ. На хроматограмме испытуемого образца допускается наличие пятен примесей по совокупности не превышающих величину пятна СО (сумма примесей не более 4,5%) (глава 4). Количественное определение. Количественное определение компонентов проводят методом УФ-спектроскопии по методике приведенной в главе 2. Содержание адеметионин-иона в соли должно быть от 32,50 до 35,00% в пересчете на безводное вещество. Упаковка. Соль хранят в полиэтиленовом пакете, который помещают в алюминиевый контейнер. Каждый пакет снабжают этикеткой.
Маркировка. На этикетке на русском и английском языках указывают название фирмы-производителя, страну, название препарата, международное непатентованное название, вес нетто, условия хранения, номер серии, дату изготовления, срок годности, предупредительную надпись «Для приготовления нестерильных лекарственных форм». Хранение. В плотно укупоренной таре, вдали от агрессивных сред, при температуре от +15 до +25 С, открывать тару с субстанцией в атмосфере с содержанием влаги не более 25%.
Описание Визуальный Кристаллический порошок белого или почти белого цвета
Подлинность: адеметионина лаурилсульфонат УФ-спектроскопияХимический УФ-спектр водно-спиртового (1:3) раствора препарата 0,0025% в области от 200 до 300 нм имеет максимума поглощения при 258±2 нм и по положению максимума должен быть идентичен УФ-спектру водно-спиртового (1:3) раствора стандартного образца адеметионина сульфата 0,00155%Красно – фиолетовое окрашивание с водным раствором нитропруссида натрия 10%. (тио-группа)Сине-фиолетовое окрашивание со спиртовым раствором нингидрина 0,5% (первичная алифатическая аминогруппа).
Количественное определение: адеметионина лаурилсульфонат УФ-спектро-фотометрия, Содержание адеметионин-иона от 32,50 до 35,00% (в пересчете на безводное вещество) Маркировка В соответствии с требованиями ФСП Упаковка По 0,5 кг, 1 кг, 2 кг, 2,5 кг, 5 кг, 10 кг, 15 кг, 20 кг, 25 кг, 50 кг в полиэтиленовый пакет. Пакет помещают в алюминиевый контейнер. Хранение В плотно укупоренной таре, вдали от агрессивных сред, при температуре от +15 до +25 С , открывать тару с субстанцией в атмосфере с содержанием влаги не более 25%. Срок хранения 1,5 года Выводы по главе 1. В соответствии с отраслевым стандартом установлены нормы качества для солей адеметионина со стеарилтаурином, лаурилсульфокислотой, хондроитинсульфокислотой, а также для субстанции адеметионина с серной и п-толуолсульфокислотой и лактозой. 2. Нормы качества субстанции адеметионина с сетрной и п толуолсульфокислотой с добавлением лактозы в соотношении 1:1 включены в проект ФСП «S-аденозилметионин, субстанция». 137
Заключение В результате выполненных исследований можно сделать следующее заключение: - Разработан способ получения стеарилтаурина. Найдены условия осаждения адеметионина из его водных растворов производными сульфокислот. Показано, что при концентрации адеметионина 0,5% и значении рН среды 2-3 последний осаждается в виде соли со стеарилтаурином; при концентрации адеметионина 1,0% и при таком же значении рН среды - происходит осаждение адеметионина лаурилсульфокислотой. Установлено, что образование стабильной соли адеметионина с хондроитинсульфокислотой возможно в водно-спиртовой среде, при использовании в качестве осадителя ацетона, а минимальная концентрация адеметионина при которой, происходит образование осадка соли с хондроитинсульфокислотой составляет 0,4%. - Разработаны и валидированы методики прямого спектрофотометрического анализа солей адеметионина со стеарилтаурином и лаурилсульфокислотой. Показана возможность использования метода Фирордта в анализе соли адеметионина с хондроитинсульфокислотой. Разработана и валидирована методика анализа данной соли. - Осуществлено получение адеметионина путем его накопления в дрожжевых клетках в среде Шлёнка. Выбраны условия для лизиса дрожжевых клеток. Выход адеметионина составил около 90%, (что было подтверждено методом УФ-спетроскопии) с минимальным содержанием примесей, которые легко удаляются на последующих стадиях очистки.
![Разработка параметров качества сырья наперстянки шерстистой Digitalis lanata Ehrh. Определение ланатозида С и активности эндогенных ферментов [Электронный ресурс]](/i/i/4381/182678.png "Разработка параметров качества сырья наперстянки шерстистой Digitalis lanata Ehrh. Определение ланатозида С и активности эндогенных ферментов [Электронный ресурс] Балакина Мария Владимировна")
