Введение к работе
Актуальность темы. Злокачественные новообразования являются второй (после заболеваний сердечно-сосудистой системы) ведущей причиной смертности в нашей стране и за рубежом. Одним из основных методов лечения онкологических больных является химиотерапия. Большинство схем комбинированного лечения злокачественных новообразований включает противоопухолевый антибиотик доксорубицин, обладающий, наряду с высокой эффективностью и широким спектром противоопухолевого действия, высокой системной токсичностью. В связи с этим перспективным направлением в терапии злокачественных новообразований является создание иммобилизованных лекарственных форм доксорубицина, обеспечивающих органоспецифичность и снижение общей токсичности антибиотика.
С точки зрения биологической совместимости, наиболее выгодны системы доставки, в которых используются собственные клетки организма (эритроциты, лейкоциты, тромбоциты), которые обеспечивают целенаправленную доставку лекарственного средства в определенные органы и ткани с созданием в них высоких терапевтических концентраций, снижают возможность возникновения побочных реакций от проникновения препаратов в здоровые ткани организма.
Для лечения злокачественных новообразований местной локализации рационально создание систем с определенными конструктивными особенностями, позволяющими депонировать действующее вещество в заданном временном интервале и сократить до минимума токсичность лекарственного средства. Примером таких систем являются биорастворимые лекарственные пленки, широкое применение которых открыло новые возможности для использования как новых, так и давно известных лекарственных средств.
Количественное определение доксорубицина согласно нормативной документации проводят микробиологическим методом диффузии в агар, который характеризуется большой трудоемкостью и длительностью, а его воспроизводимость в значительной степени зависит от состояния тест-культуры и качества
ПЬНА*| К* , А
%Ч1
РОС НАЦИОНАЛЬНА*| БИБЛИОТЕКА C.ntrep«)| о» W0
питательной среды. Для количественного определения доксорубицина в полимерных пленках и эритроцитарных носителях микробиологический метод имеет ограниченную пригодность, в связи с чем возникла необходимость разработки доступных, экспрессных и легковоспроизводимых методик анализа'анти-биотика в предложенных лекарственных формах: Известные методики количественного определения доксорубицина требуют дорогостоящего оборудования и реактивов, обладают низкой чувствительностью, селективностью и сложны в исполнении. В связи с этим разработка иммобилизованных лекарственных форм доксорубицина и экспрессных, точных методик его анализа является весьма актуальной.
Цель и задачи исследования. Целью работы явилась разработка методик анализа доксорубицина в субстанции, лиофилизированном порошке и крови с помощью метода высокоэффективной жидкостной хроматографии. (ВЭЖХ), разработка иммобилизованных лекарственных форм доксорубицина (эритроцитарные носители и полимерные пленки) и методик их анализа. Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:
Разработать более чувствительные, селективные и простые методики количественного определения доксорубицина в субстанции, лиофилизированном порошке и крови с помощью метода ВЭЖХ.
Изучить особенности включения доксорубицина в эритроцитарные носители, их стабильность, разработать методику количественного определения антибиотика, инкапсулированного в эритроцитарные носители.
Теоретически обосновать и экспериментально установить оптимальный состав лекарственных пленок с доксорубицином и разработать технологию их изготовления.
Разработать методики качественного и количественного определения доксорубицина в пленках, изучить стабильность полученной лекарственной формы в процессе хранения.
Изучить влияние доксорубицина, иммобилизованного в пленках, на ткани слизистой оболочки полости рта.
Научная новизна исследований. Разработаны более чувствительные,
селективные и простые методики количественного определения доксорубицина в субстанции, лиофилизированном порошке и крови с помощью метода ВЭЖХ. Впервые определены оптимальные условия выделения доксорубицина из биологического материала с помощью колоночного варианта гель-хроматографии.
Установлены оптимальные условия включения доксорубицина в эрит-роцитарные носители, разработана методика спектрофотометрического определения антибиотика, инкапсулированного в эритроцитарные носители; определены сроки их хранения.
Впервые теоретически обоснован и экспериментально установлен качественный и количественный состав полимерных пленок с доксорубицином для лечения местно локализованных злокачественных опухолей слизистых оболочек. Разработаны точные методики качественного (тонкослойная хроматография) и количественного (спектрофотометрия) анализа антибиотика в полимерных пленках. Установлено незначительное цитотоксическое действие доксорубицина на здоровые ткани слизистой оболочки полости рта в месте аппликации пленок, определено количественное содержание несвязанного антибиотика в тканях слизистой оболочки.
Новизна результатов исследования отражена в заявке (№ 2003137539 от 25.12.2003 г.) о выдаче патента на изобретение "Иммобилизованная форма доксорубицина".
Практическая значимость. Получены иммобилизованные лекарственные формы доксорубицина: полимерные пленки и эритроцитарные носители. Разработаны чувствительные и экспрессные методики количественного определения антибиотика в разработанных лекарственных формах и крови. Установлено незначительное цитотоксическое действие доксорубицина, иммобилизованного в пленках, на здоровые ткани слизистой оболочки полости рта в месте аппликации. На основании проведенных исследований разработаны и внедрены:
- методика количественного определения доксорубицина в субстанции
(акты о внедрении в научный процесс кафедр Курского государственного ме
дицинского университета (КГМУ): фармацевтической, химии. № 99 от
10.04.2003 г., органической химии № 99/2 от 15.01.2003 г.; практическую деятельность МУЗ «ЦКК и СЛС» № 99/1 от 23.12.2002 г.);
методика количественного определения доксорубицина в лиофилизиро-ванном порошке (акты о внедрении в научный процесс кафедры фармацевтической химии КГМУ № 100 от 10.04.2003 г.; практическую деятельность МУЗ «ЦКК и СЛС» № 100/1 от 23.12.2002 г.);
методика количественного определения доксорубицина в крови (акты о внедрении; в научный процесс кафедр КГМУ: фармацевтической химии-№ 101/1 от 15.10.2003 г., биологической химии № 101/2 от 8.12.2002 г. и клинической фармакологии № 101 от 11.02.2003 г.);
состав, показатели качества, методики анализа и технология полимерных пленок с доксорубицином (проект ФСП, лабораторный регламент «Производство пленок с доксорубицином» (акт апробации № 139 в лаборатории кафедры фармацевтической технологии КГМУ от 23.03.2004 г.), методические рекомендации «Изготовление и контроль качества пленок с доксорубицином», акт о внедрении в научный процесс кафедры фармацевтической технологии КГМУ № 104 от 17.12.2002 г.);
методика количественного анализа доксорубицина в пленках (акт о внедрении в научно-исследовательский процесс кафедры фармацевтической химии КГМУ № 105 от 26.03.2003 г.);
- модифицированная методика включения доксорубицина в эритроцитар-
ные носители- (удостоверение на рационализаторское предложение КГМУ
«Способ включения антибиотиков в эритроцитарные носители на примере док
сорубицина» № 1602-04 от 20.01.2004 г., акты о внедрении в научно-
исследовательский процесс кафедр КГМУ: фармацевтической технологии
№ 103/1 от 12.11.2002 г. и биологической химии № 103 от 16.10.2002 г.);
- методика количественного определения доксорубицина, инкапсулиро
ванного в эритроцитарные носители (акты о внедрении в научно-
исследовательский процесс кафедр КГМУ: фармацевтической химии № 102 от
18.02.2003 г. и биологической химии № 102/1 от 16.10.2002 г.).
Связь исследований с проблемным планом фармацевтических наук. Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом научно-исследовательских работ Курского государственного медицинского университета и соответствует проблеме «Фармация» межведомственного совета № 47 РАМН. Номер государственной регистрации 01.200.208415.
Основные положения выносимые на защиту:
методики количественного определения доксорубицина в субстанции, лиофилизированном порошке и крови с использованием метода ВЭЖХ;
методика включения доксорубицина в эритроцитарные носители;
спектрофотометрическая методика количественного определения доксорубицина, инкапсулированного в эритроцитарные носители;
состав и технология полимерных пленок с доксорубицином;
методики качественного и количественного анализа доксорубицина в полимерных пленках.
Апробация работы. Основные результаты диссертационной работы доложены и представлены на ГХ и X Российских национальных конгрессах "Человек и лекарство" (Москва 2002, 2003 гг.), 67-й и 68-й межвузовских научных конференциях студентов и молодых ученых (Курск 2002, 2003 г.), 67-й, 68-й и 69-й итоговых научных сессиях КГМУ и отделения медико-биологических наук Центрально-Черноземного научного центра РАМН (Курск 2002, 2003, 2004 гг.) и межкафедральной научно-практической конференции.
Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 141 странице машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, 4 глав экспериментальных исследований, общих выводов и библиографического указателя. Работа иллюстрирована 41 таблицей и 24 рисунками. Список литературы включает 215 источников, из них 86 на, иностранных языках.
