Введение к работе
Актуальность темы
В современном мире проблема качества лекарственных средств является важнейшим фактором повышения уровня жизни, экономической, социальной и экологической безопасности.
Критерии качества лекарственных средств, установленные Всемирной организацией здравоохранения включают в числе обязательных элементов соответствие требованиям спецификаций качества, устанавливающим тщательно отобранные нормы, методы испытаний и др. Как правило, спецификации качества содержатся в таких нормативных документах, как общие фармакопейные статьи (ОФС), фармакопейные статьи (ФС), фармакопейные статьи предприятия (ФСП), а также ГОСТы, ОСТы, ТУ и др.
Это предусматривает, гармонизацию требований, предъявляемых различными производителями одних и тех же ЛС к их качеству и методикам определения этого качества.
Анализ нормативных документов зарубежных стран и отечественных производителей свидетельствует о том, что во всем мире прослеживается четкая тенденция к внедрению в практику фармацевтического анализа современных инструментальных методов, обеспечивающих специфичность аналитических методик. Это и обуславливает тот факт, что в последние годы при оценке качества ЛС широкое распространение получили различные методы физико-химического анализа, такие как спектрофотометрия, хроматография, ЯМР-спектроскопия, флуориметрия, капиллярный электрофорез и другие.
Это актуально и в случае анализа витаминсодержащих ЛС и биологически активных добавок БАД.
В настоящее время витаминсодержащие ЛС и БАД занимают лидирующие позиции в перечне лечебно-профилактических средств, повседневно используемых населением разных стран мира. Только на территории РФ зарегистрировано порядка 3000 лекарственных средств и БАД, содержащих витамины и витаминоподобные субстанции, употребляемые в лечебных и профилактических целях.
Это является основанием к совершенствованию методик контроля качества витаминов, поскольку в нормативной документации на одну и ту же субстанцию и лекарственные препараты (ЛП) на ее основе довольно часто приводятся совершенно разные методики качественного и количественного анализа. В частности, до сих пор в большинстве случаев для количественного определения кислоты аскорбиновой (КА) применяются традиционные титриметрические методы. Несмотря на неоспоримые достоинства титриметрии, этот метод имеет ряд ограничений, к числу которых следует отнести: невозможность получения достоверного результата в присутствии других компонентов, входящих в состав лекарственного средства; высокая лабильность и способность к окислению.
Вместе с тем, активное участие этого витамина в обменных процессах человеческого организма и обеспечивает довольно широкую область его применения в виде различных лекарственных средств, в том числе как в индивидуальном виде, так и в составе комплексных препаратов.
Другим витамином, принимающим не менее активное, чем кислота аскорбиновая, участие в ферментативных реакциях человеческого организма в качестве кофермента является кислота фолиевая (КФ). Кислота фолиевая применяется и в качестве индивидуального лекарственного средства (таблетки) и входит в состав железосодержащих лекарственных средств и поливитаминных препаратов. Методики анализа кислоты фолиевой также требуют совершенствования.
Применительно к анализу витаминов такой метод анализа как флуоресцентный метод характеризуется высокой специфичностью, позволяющей осуществлять оценку качества определяемого вещества в присутствии других компонентов и чувствительностью, близкой, в некоторых случаях, к чувствительности радиохимических методов. Все это дает возможность для использования метода флуориметрии при проведении качественного и количественного анализа не только субстанций и монопрепаратов, но и комплексных витаминосодержащих лекарственных средств, лекарственного растительного сырья, растительных лекарственных средств и препаратов.
В связи с этим разработка флуориметрических методик анализа кислоты аскорбиновой и кислоты фолиевой представляет собой актуальную задачу, решение которой будет способствовать повышению уровня современного фармацевтического анализа в области оценки качества витаминов.
Цель работы - разработка методик флуоресцентного качественного и количественного анализа кислоты аскорбиновой и кислоты фолиевой в витаминосодержащих лекарственных средствах и препаратах, в том числе растительного происхождения.
Задачи исследования:
1. Изучить целесообразность использования метода флуориметрии для определения подлинности кислоты аскорбиновой и разработать соответствующую методику.
2. Подобрать оптимальные условия для проведения количественного анализа кислоты аскорбиновой флуориметрическим методом в ЛС и провести валидационные испытания этой методики.
3. Разработать флуориметрическую методику определения подлинности и количественного содержания кислоты аскорбиновой в ЛС и ЛП, в том числе растительного происхождения.
4. Разработать оптимальные условия качественного и количественного флуориметрического анализа кислоты фолиевой в ЛС и осуществить валидационную оценку предложенной методики.
5. Разработать флуориметрическую методику определения подлинности и количественного содержания кислоты фолиевой в ЛС и ЛП, в том числе растительного происхождения.
6.Составить методические рекомендации для оценки качества кислоты аскорбиновой и фолиевой в ЛС и ЛП, в лекарственном растительном сырье (ЛРС), ЛС и ЛП растительного происхождения.
Научная новизна.
Впервые предложено использовать флуориметрический метод анализа как для качественной так и для количественной оценки таких широко используемых в медицинской практике витаминов, как КА и КФ, реализуя принцип сквозной стандартизации «Субстанция-ЛС».
Для проведения флуориметрического качественного и количественного анализа кислоты аскорбиновой предложено осуществить оценку интенсивности флуоресценции продукта конденсации кислоты дегидроаскорбиновой с о-фенилендиамином (ОФДА). При этом для проведения реакции окисления КА в КДА следует в качестве катализатора этой реакции использовать меди (II) ионы. Впервые экспериментально определены условия проведения реакции окисления КА в КДА и ее последующей конденсации с ОФДА, включая концентрацию реагентов, рН среды, время проведения реакции, температуру. Экспериментально установлено, что для качественного и количественного анализа кислоты аскорбиновой, проводимого флуориметрическим методом следует использовать длину волны возбуждения 340 нм и длину волны регистрации 425 нм. Определен оптимальный состав раствора сравнения, включающий, в частности, натрия эдетат, в качестве реагента, позволяющего предотвратить реакцию окисления кислоты аскорбиновой.
Впервые проведена оценка пригодности разработанной методики по валидационным показателям в соответствии с требованиями ГОСТ Р ИСО 5725-2002.
Впервые разработана и апробирована методика флуориметрического анализа кислоты фолиевой, исключающая ее предварительное окисление. Подобраны оптимальные условия определения: время, рН среды, длины волн. Экспериментально установлено, что для качественного и количественного анализа кислоты фолиевой флуориметрическим методом следует использовать длину волны возбуждения 275 нм и длину волны регистрации 335 нм. Впервые проведена оценка пригодности разработанной методики по валидационным показателям в соответствии с требованиями ГОСТ Р ИСО 5725-2002.
Практическая значимость и внедрение результатов исследований.
Разработаны флуориметрические методики определения кислоты аскорбиновой и кислоты фолиевой по показателям «Подлинность», «Количественное определение» в ЛС, в лекарственном растительном сырье и различных лекарственных препаратах.
Суть методик отражена в виде «Методических рекомендаций по определению кислоты аскорбиновой и кислоты фолиевой в субстанциях и лекарственных формах», которые прошли апробацию в лабораториях СПб ГУЗ «СЗЦККЛС» и ООО «ВИС». Методические рекомендации предназначены для применения в практической деятельности лабораторий по контролю качества ЛС и БАД к пище.
Связь задач исследования с проблемным планом НИР.
Диссертационная работа выполнена в соответствии с тематикой и планом научно-исследовательских работ Всероссийского научно-исследовательского института лекарственных и ароматических растений по "Плану Фундаментальных и приоритетных прикладных исследований Россельхозакадемии по научному обеспечению развития АПК Российской Федерации на 2011-2015 гг.", заданию 04.13. Разработать научные основы лекарственного растениеводства, создать высокоэффективные профилактические и лечебные средства, разработать методы контроля качества и безопасности лекарственных препаратов из растительного сырья с использованием молекулярных тест-систем.
Апробация работы.
Основные результаты исследований доложены на юбилейной конференции «Подготовка кадров для фармацевтической промышленности», посвященной 60-летию факультета промышленной технологии лекарств ГОУ ВПО СПХФА (Санкт-Петербург, 2005), региональной научно-практической конференции с международным участием, посвященной 40-летию фармацевтического факультета ГОУ ВПО КГМУ (Курск, 2006), научно-практической конференции «Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции» (Пятигорск, 2007), региональной научной конференции студентов и аспирантов «Молодые ученые - практическому здравоохранению» (Санкт-Петербург, 2007).
Положения, выносимые на защиту:
1. Результаты исследований по разработке методики качественного и количественного анализа кислоты аскорбиновой в субстанциях с использованием флуориметрии.
2. Результаты исследований по разработке методики флуориметрического определения подлинности и количественного содержания кислоты аскорбиновой в лекарственном растительном сырье и в лекарственных препаратах.
3. Результаты исследований по разработке методик качественного и количественного анализа кислоты фолиевой в субстанциях с использованием флуориметрии.
4. Результаты исследований по разработке методики флуориметрического определения подлинности и количественного содержания кислоты фолиевой в лекарственном растительном сырье и в лекарственных препаратах.
Публикации: По теме диссертации опубликовано 7 научных работ, в том числе одна работа в научных изданиях, входящих в перечень ВАК.
Структура и объем диссертации:
