Получение и стандартизация органических солей магния и их таблетированных лекарственных препаратов [Электронный ресурс] Григорян Ирина Валериковна

Содержание к диссертации

Введение

Глава 1 Биологическая роль и применение солей магния, кислоты аспарагиновой, кислоты никотиновой в медицинской практике. методы анализа лекарственных препаратов магния, кислоты аспарагиновой и кислоты никотиновой 10

1.1 Применение солей магния в медицинской практике и методы их анализа 10

1.1.1 Биологическая роль ионов магния 10

1.1.2 Магнийсодержащие лекарственные препараты 14

1.1.3 Методы анализа ионов магния 17

1.1.3.1 Методы идентификации 17

1.1.3.2 Методы количественного определения 18

1.2 Применение кислоты аспарагиновой в медицине и методы ее анализа 20

1.2.1 Фармакологические свойства кислоты аспарагиновой 20

1.2.2 Лекарственные препараты, содержащие соли кислоты аспарагиновой 21

1.2.3. Методы анализа кислоты аспарагиновой 21

1.2.3.1 Методы идентификации 22

1.2.3.2 Методы количественного определения 23

1.3 Кислота никотиновая, применение в медицине, методы анализа 25

1.3.1 Фармакологические свойства кислоты никотиновой 25

1.3.2 Лекарственные препараты кислоты никотиновой 27

1.3.3 Методы анализа кислоты никотиновой 28

1.3.3.1 Методы идентификации 29

1.3.3.2 Методы количественного определения 30

Выводы по обзору литературы 31

Глава 2 Получение магния l-аспарагината и магния никотината и установление их состава 35

2.1 Получение магния L-аспарагината и магния никотината 35

2.1.1 Получение магния L- аспарагината и магния никотината методом выпаривания 35

2.1.2 Получение магния L- аспарагината и магния никотината методом осаждения органическим растворителем 38

2.2. Изучение состава магния L-аспарагината и магния никотината 42

2.2.1 Исследование ИК-спектров магния L-аспарагината и магния никотината 42

2.2.2 Определение содержания воды в магния L-аспарагинате и магния никотинате 44

2.2.3 Термогравиметрический анализ магния L-аспарагината и магния никотината 46

2.2.4 Количественное определение ионов магния в магния Егаспарагинате и магния никотинате 49

2.2.5 Количественное определение аниона кислоты аспарагиновой в магния L-аспарагинате 50

2.2.6 Изучение возможности использования спектрофотометрического определения аниона кислоты никотиновой в магния никотинате 56

2.2.7 Разработка спектрофотометрической методики определения аниона кислоты никотиновой в магния никотинате 58

2.2.8 Изучение элементного состава магния L- аспарагината и магния никотината 60

Выводы по главе 2 62

Глава 3 Стандартизация магния l-аспарагината и магния никотината в субстанциях 64

3.1 Стандартизация субстанции магния L-аспарагината 64

3.2 Стандартизация субстанции магния никотината 76

3.3 Определение посторонних примесей в субстанции магния L- аспарагината и магния никотината 82

3.3.1 Определение посторонних примесей в субстанции магния L- аспарагината 82

3.3.2 Определение посторонних примесей в субстанции магния никотината 86

Выводы по главе 3 89

Глава 4 Получение и стандартизация таблеток, содержащих магния l-аспарагинат и магния никотинат 91

4.1 Обоснование состава таблеток магния L-аспарагината и таблеток магния никотината 91

4.2 Стандартизация таблеток, содержащих магния L-аспарагинат и таблеток, содержащих магния никотинат 94

4.2.1 Стандартизация таблеток магния L-аспарагината 94

4.2.2 Стандартизация таблеток магния никотината 104

4.3 Изучение посторонних примесей магния L-аспарагината и магния никотината в таблетках и установление сроков их годности 113

Выводы по главе 4 117

Глава 5 Изучение биологической доступности магния l-аспарагината и магния никотината в таблетках методом in vivo 118

5.1 Фармакокинетические исследования таблеток магния L-аспарагината 118

5.2 Фармакокинетические исследования таблеток магния никотината 126

Выводы по главе 5 129

Общие выводы 130

Литература 132

• Применение кислоты аспарагиновой в медицине и методы ее анализа
• Получение магния L- аспарагината и магния никотината методом осаждения органическим растворителем
• Определение посторонних примесей в субстанции магния L- аспарагината и магния никотината
• Стандартизация таблеток, содержащих магния L-аспарагинат и таблеток, содержащих магния никотинат

Введение к работе

Актуальность темы. Для регуляции нарушений уровня магния в крови долгое время применялись неорганические соединения магния. Однако, неорганические соединения магния имеют ряд существенных недостатков, основными из которых являются быстрое выведение из организма и не всегда достаточно выраженный эффект. Анионы этих солей практически не усиливают действие катионов, а некоторые из них способны привести к побочным эффектам. Соли магния с анионами органических кислот проявляют большую фармакологическую активность и меньшую токсичность по сравнению с его неорганическими солями.

За рубежом выпускается ряд лекарственных средств, содержащих магний в виде органических солей. В России выпускается только лекарственный препарат "Аспаркам".

В последние двадцать лет возросший интерес к элементу магнию определяется достижениями фундаментальных наук по выявлению его роли в физиологической регуляции различных органов и систем организма. Большую значимость ионов магния определяет его кофакторная роль в активности ферментных систем - в первую очередь энергетического обмена, синтеза биологически активных веществ, ионотранспортных систем, синтеза белка, регуляции сократительных белков, иммунной системы. Магний может уменьшать интенсивность метаболизма богатых энергией фосфатов и, следовательно, снижать потребность миокарда в кислороде.

Кислота аспарагиновая усиливает потребление кислорода пораженным миокардом, а её соли оказывают противоаритмическое действие вследствие усиленного проникновения ионов калия и магния.

В настоящее время интерес ученых привлекает комбинация ионов магния с кислотой никотиновой, которая усиливает сократительную функцию пораженного миокарда, увеличивает сердечный выброс, повышает скорость кровотока, а также, обладая гиполипидемической активностью, замедляет

прогрессирование и отчасти вызывает обратное развитие атеросклеротических изменений в коронарных артериях.

Цель и задачи исследований. Получение и стандартизация органических солей магния - магния L-аспарагината, магния никотината, и таблеток на их основе.

Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

Разработать методики получения и установить состав солей магния L-аспарагината и магния никотината.

Обосновать методики анализа и провести стандартизацию субстанций магния L-аспарагината и магния никотината.

Изучить технологические характеристики субстанций магния L-аспарагината и магния никотината и провести стандартизацию таблеток, полученных на их основе.

Провести фармакокинетические исследования полученных лекарственных препаратов методами in vivo.

Научная новизна. Показана возможность и изучены условия получения солей магния с L-аспарагиновой и никотиновой кислотами для создания новых отечественных лекарственных препаратов.

Установлено, что оптимальным для получения магния L-аспарагината является метод осаждения органическим растворителем, а для получения магния никотината - метод выпаривания раствора смеси исходных веществ.

На основе комплекса физических, физико-химических методов, элементным анализом установлен состав полученных органических солей магния. Методом ИК-спектроскопии подтверждено образование связи иона магния с карбоксильной группой соответствующей кислоты. Методами высушивания, титрованием по К. Фишеру, методом термического анализа установлено, что в состав солей магния входят 4 молекулы воды. При проведении элементного анализа магния L-аспарагината и магния никотината установлено, что они имеют следующий состав: CsH^oOn^Mg и

C^HieOs^Mg, соответственно. To есть, в каждой соли подтверждено наличие 4-х молекул воды.

Обоснованы и установлены нормы качества магния L-аспарагината и магния никотината в субстанции и таблетках.

Найдены оптимальные условия спектрофотометрического анализа магния L-аспарагината по реакции с нингидрином для установления количественного содержания аниона кислоты аспарагиновой в субстанции и действующего вещества в таблетках. При разработке норм качества магния L-аспарагината введен показатель - определение остаточного содержания ацетона.

Обоснованы условия УФ-спектрофотометрической методики определения магния никотината по аниону кислоты никотиновой в субстанции и таблетках. Показано, что оптимальным растворителем является 0,1 моль/л раствор кислоты хлористоводородной. В результате проведенной валидационной оценки методики установлено отсутствие систематической ошибки при ее выполнении.

Найдены оптимальные условия определения методом тонкослойной хроматографии и установлены нормы посторонних примесей, образующихся в процессе хранения магния L-аспарагината и магния никотината, в субстанциях и таблетках.

При проведении фармакокинетических исследований в экспериментах на животных подтверждено увеличение биодоступности таблеток магния L-аспарагината по сравнению с лекарственным препаратом сравнения («Аспаркам»). Для таблеток магния никотината рассчитаны основные фармакокинетические параметры.

Практическая значимость работы. Предложены методики получения магния L-аспарагината и магния никотината.

Разработаны методики качественного и количественного анализа, определения посторонних примесей в субстанциях магния L-аспарагината и магния никотината. По установленным нормам качества определена стабильность субстанций и сроки годности в условиях «ускоренного старения»,

которые составили 15 лет - для магния L-аспарагината и 20 лет - для магния никотината.

Разработаны методики идентификации, определения посторонних примесей и количественного содержания магния L-аспарагината и магния никотината в лекарственных препаратах. На основании разработанных методик предложены нормы качества исследуемых лекарственных препаратов. Установлен срок годности таблеток магния L-аспарагината - 2 года и таблеток магния никотината — 5 лет.

По результатам исследований разработаны проекты фармакопейных статей предприятия и пояснительные записки на субстанции магния L-аспарагината, магния никотината и таблетки магния L-аспарагината по 0,2 г, таблетки магния никотината по 0,05 г.

Результаты изучения биологической доступности предлагаемых лекарственных препаратов и предварительных доклинических испытаний, проведенных в Волгоградском государственном медицинском университете, позволяют рекомендовать их для дальнейшего углубленного доклинического исследования с целью создания эффективных сердечно-сосудистых лекарственных препаратов.

Внедрение результатов исследования в практику. Работа выполнялась по договору №1 от 01.02.2001 г. с НИИ фармакологии Волгоградского государственного медицинского университета. Таблетки магния аспарагината и таблетки магния никотината переданы в Волгоградский государственный медицинский университет для дальнейшего углубленного доклинического исследования (акты внедрения).

Апробация и публикация результатов исследования. Основные положения диссертационной работы доложены на региональных научно-практических конференциях по фармакологии, фармации и подготовке кадров (г. Пятигорск, 2002-2005 гг.) По материалам диссертации опубликовано 8 работ.

Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтических наук. Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом научно-исследовательских работ ГОУ ВПО "Пятигорская государственная фармацевтическая академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию" (номер государственной регистрации 01.960.009193) в рамках проблемы "Фармация" секции №38 Ученого совета Минздравсоцразвития РФ.

Положения, выносимые на защиту:

результаты исследований по разработке методик получения магния L-аспарагината и магния никотината;

исследования по изучению состава магния L-аспарагината и магния никотината;

данные по стандартизации магния L-аспарагината и магния никотината в субстанции;

результаты стандартизации таблеток магния L-аспарагината и таблеток магния никотината;

результаты изучения биологической доступности таблеток магния L-аспарагината и магния никотината методом in vivo.

Объем и структура диссертации. Работа изложена на 146 страницах машинописного текста, содержит 31 таблицу, 19 рисунков, состоит из "Введения", "Обзора литературы", 4 глав собственных исследований, общих выводов, списка литературы, включающего 144 источников, в том числе 29 иностранных.

Применение кислоты аспарагиновой в медицине и методы ее анализа

Кислота аспарагиновая является важным метаболитом нервной ткани, участвует в биосинтезе нуклеотидов, нейроспецифических белков, субстратов цикла Кребса, переносе аминогрупп. Кроме того, кислота аспарагиновая, взаимодействуя со специфическими рецепторами головного мозга, участвует в передаче сенсорной информации различной модальности, в процессах памяти, в осуществлении психических и двигательных функций. Однако применение кислоты аспарагиновой в качестве цереброваскулярного средства становится под сомнение данными о ее слабом проникновении через гематоэнцефалический барьер и о нейротоксическом эффекте аминокислоты как медиатора при цереброваскулярных ишемиях, процессах старения. Кислота аспарагиновая стимулирует цикл трикарбоновых кислот, усиливает потребление кислорода пораженным миокардом [1, 9, 47, 111, 128, 130], а соли этой кислоты оказывают противоаритмическое действие, вследствие усиленного проникновения ионов калия и магния [4].

Показано, что L-стереоизомер калия магния аспарагината (аспаркам-L) приводит к более быстрой компенсации дефицита магния и калия в организме при лекарственной интоксикации (фуросемидной и дигоксиновой), а также к более быстрому восстановлению уровня магния при алиментарной гипомагнезиемии по сравнению с его DL- и D-стереоизомерами. [104].

К препаратам кислоты аспарагиновой относится "Аспаркам" (Россия, Украина) [116], "Панангин" (Венгрия). "Аспаркам" выпускается в виде таблеток, содержащих по 0,175 г калия DL-аспарагината и магния DL-аспарагината, а также в виде раствора для инъекций в ампулах по 5 и 10 мл, содержащих в 1 мл по 0,045 г (45 мг) калия DL-аспарагината и 0,40 (40 мг) DL-магния аспарагината [93, 94]. "Панангин" выпускается в виде драже и в ампулах. Одно драже содержит 0,158 г калия DL-аспарагината и 0,14 г магния DL-аспарагината; одна ампула (10 мл) содержит 0,452 калия DL-аспарагината и 0,4 г DL-магния аспарагината. Препараты калия и магния аспарагината применяются при нарушениях ритма сердца, связанных с интоксикацией препаратами наперстянки, при пароксизмах мерцания предсердий, недавно появившейся желудочковой экстрасистолии. Используется в лечении ишемической болезни сердца [21, 59]. За рубежом широко применяется такой препарат как "Карадол" - магния аспарагината дигидрохлорид (200 мг элементарного магния в 12,5 мл) [105]. Кислота аспарагиновая относится к группе а-аминокислот, содержит в своей структуре асимметрический атом углерода и поэтому может существовать в виде стериоизомеров. Кислота аспарагиновая является амфотерним соединением, что обусловлено одновременным присутствием; в молекуле основной (алифатической аминогруппы) и кислотной (карбоксильной) групп. И в кристаллическом состоянии, и в среде, близкой к нейтральной, кислота аспарагиновая существуют в виде внутренней соли -диполярного иона, или же цвиттер-иона. В сильнокислой среде в аминокислотах полностью протонирована аминогруппа и не диссоциирована карбоксильная группа. В сильнощелочной среде напротив, свободна аминогруппа и полностью ионизирована карбоксильная. Так как кислота аспарагиновая содержит дополнительную карбоксильную группу, то она относится к кислым аминокислотам и превосходит по кислотности кислоту уксусную. Кислотно-основные свойства кислоты аспарагиновой и обусловливают возможность ее разделения, идентификации и количественного определения в лекарственных препаратах [62, 64]. Для испытания на подлинность препаратов аминокислот используют общую реакцию с нингидрином. В результате реакции образуется аммонийная соль енольной формы дикетогидринденкетогидринамина сине-фиолетового цвета, имеющая максимум поглощения при длине волны 570 нм [64]. С помощью нингидриновой реакции а-аминокислоты обнаруживаются визуально на хроматограммах, а также спектрофотометрически с использованием автоматических анализаторов аминокислот. Высокая чувствительность метода позволяет обнаружить 10" моль (менее 1 мкг) аминокислоты [64]. Однако, недостатком этой реакции является ее групповая специфичность на аминокислоты. 0,2% раствор нингидрина в спирте н-бутиловом предлагается фармакопейной статьей ФС-42-1598-98 в качестве проявителя при определении примесей в магния аспарагинате методом тонкослойной хроматографии на пластинках Силуфол в системе растворителей: спирт н-бутиловый - кислота уксусная ледяная -кислота муравьиная - вода (4:1:1:1). При взаимодействии с солями меди (II) аминокислоты образует комплексные соединения, имеющие темно-синюю окраску [108]. В качестве реагента на первичные аминогруппы аминокислот также используется 0,05% раствор флуорескамина в ацетоне. При этом наблюдают флуоресцирующие пятна [108]. При проведении бумажной хроматографии учитывается способность аминокислот реагировать со свободными альдегидными группами, содержащимися в бумаге. Образующиеся основания Шиффа дают синюю флуоресценцию в УФ - свете. Для проявления пятен в УФ-свете предлагаются также такие реагенты, как 0,01% раствор 1,2-нафтохинон-4-сульфоната (реактив Фолина) в метаноле и 0,2% раствор салицилового альдегида в ацетоне [108]. Рядом авторов предложена методика определения кислоты аспарагиновой методом ТСХ на пластинках Силуфол в системе растворителей н-бутанол -вода - уксусная кислота (2:1:1). В качестве проявителя использовали хлорамин Б. Реакция специфична для кислоты аспарагиновой [39]. Данная методика может быть использована для определения примесей в кислоте аспарагиновой. Для количественного определения препаратов аминокислот и их синтетических аналогов могут быть использованы различные методы. Одним из них является метод, основанный на определении азота в органических соединениях - метод Кьельдаля [19, 64, 124]. Аминокислоты, содержащие первичную аминогруппу, подвергаются дезаминированию в реакции с азотистой кислотой. Используя эту реакцию, известную как метод Ван Слайка (1910), количественно определяют аминокислоты по объему выделившегося азота [64]. Аминокислоты могут быть оттитрованы по методу Серенсена. Для этого аминокислоту предварительно обрабатывают избытком формалина, что приводит к образованию достаточно устойчивого N-гидроксиметильного производного, в котором основные свойства аминогруппы значительно понижены. В результате становится возможным титрование полученного продукта по карбоксильной группе. Этот метод называется также формольным титрованием [64, 124]. Разработан комлексонометрический метод количественной оценки "Аспаркама" по аминокислотному остатку, основанный на способности аминокислот образовывать комплексы с ионами меди (II) [63]. В Запорожском медицинском институте в качестве цветореагента был изучен аллоксана гидрат. При взаимодействии магния аспарагината с аллоксаном образуется окрашенное соединение - мурексид, имеющий максимум светопоглощения в видимой области спектра [85]. Также был разработан оригинальный метод спектрофотометрического определения кислоты аспарагиновой после обработки фталевым альдегидом и 2-меркаптоэтанолом [131]. Болгарскими учеными разработан метод анализа таблеток DL-аспарагинатов калия и магния, основанный на потенциометрическом титровании в смеси уксусного ангидрина и кислоты муравьиной [37]. Анализ литературных данных показывает, что для идентификации "и количественного определения аминокислот применяются как химические, так и физико-химические методы. Среди них наиболее чувствительной является спектрофотометрическая методика, основанная на реакции с нингидрином.

Получение магния L- аспарагината и магния никотината методом осаждения органическим растворителем

В связи с тем, магния L-аспарагинат невозможно получить методом выпаривания, нами была выбрана методика осаждения целевого продукта органическими растворителями, в качестве которых были выбраны ацетон и спирт этиловый. Но при осаждении спиртом этиловым магния L-аспарагинат образовывался в виде тонкой взвеси, что не позволяло его отделить от раствора, поэтому в дальнейшем мы отказались от использования этого осадителя. В виду того, что по литературным данным [92] растворимость в воде кислоты аспарагиновой составляет 1:30 нами для проведения реакции использовалась следующая методика: стехиометорические соотношения исходных веществ - 1 г кислоты аспарагиновой и 0,15 г магния оксида помещали в колбу, добавляли 30 мл воды и нагревали до полного растворения исходных веществ. Раствор охлаждали, фильтровали и осаждали 10-кратным количеством (300 мл) ацетона [101]. Полученный осадок отделяли от раствора, промывали ацетоном, сушили в темном месте и растирали до образования порошка. В виду того, что 10-кратный объем ацетона использован нами исходя из литературных данных, мы посчитали возможным изучить зависимость выхода целевого продукта от количества добавляемого ацетона. С этой целью осаждение ацетоном проводили после максимального концентрирования исходного раствора путем выпаривания. Количество ацетона, необходимое для осаждения, брали в различных соотношениях по отношению к концентрированному раствору.

При этом было установлено, что выход при осаждении 5-кратным и 10-кратным количеством ацетона практически одинаков и составил 96,4% и 96,8%, соответственно (рисунок 2). Соединение, получаемое при осаждении 5-кратным количеством ацетона, представляло собой густую сиропообразную массу, которая требовала дополнительного выпаривания. При соотношении водный раствор : ацетон более 1:7 целевой продукт осаждался в виде мелкокристаллического осадка. И только при соотношении 1:10 магния L-аспарагината осаждался в виде оформившихся кристаллов. Таким образом, нами определено, что наиболее целесообразно использовать 10-кратное количество ацетона. При этом для получения 1 части целевого продукта расходуется 30 частей ацетона, т.е. расход органического растворителя сокращается в 10 раз.

Схема получения магния L-аспарагината методом осаждения органическим растворителем представлена на рисунке 3. Магния оксид + Кислота L-аспарагиновая (кислота никотиновая) При осаждении органическим растворителем, затрачивается меньше времени, порошок, получаемый при этом, легко измельчается, что имеет важное значение для производства. Таким образом, для получения магния L-аспарагината в качестве оптимального нами предложен метод осаждения органическим растворителем. Методика получения магния L-аспарагината (на 10,0 г целевого продукта): 7,39 г кислоты L-аспарагиновой и 1,11 г магния оксида растворяли в колбе в 300 мл воды очищенной при постоянном перемешивании на водяной бане. После охлаждения раствор фильтровали. Фильтрат упаривали на водяной бане при температуре 80С до объема 30 мл, охлаждали и при перемешивании медленно выливали в стакан с 300 мл ацетона. Остаток раствора смывали с колбы дополнительным количеством (5-10 мл) воды очищенной. Выделившийся осадок отделяли от раствора, дополнительно растирали с 20 мл ацетона, сушили при температуре 40-60С 2 часа. Полученный магния L-аспарагинат представляет собой белый кристаллический порошок. Выход магния L-аспарагината определяли гравиметрическим методом. Результаты по определению выхода магния L-аспарагината при использовании различных методов получения представлены в таблице 2. Таким образом, было установлено, что выход продукта увеличивается при осаждении ацетоном и составляет в среднем 96,4%. При получении магния никотината методом осаждения органическим растворителем с использованием как спирта этилового, так и ацетона, осадок выпадал в виде тонкой взвеси, что не позволяло его отделить от водного раствора. В результате предварительных исследований было установлено, что при использовании ацетона выход целевого продукта не превышал 65%. Кроме того, предварительные исследования показали, что необходимо брать соотношение водного раствора магния никотината к ацетону 1:20, что не является экономичным в условиях производства. Это позволило нам остановиться на методе выпаривания, описанным ранее в п. 2.1.1. Таким образом, на основании проведенных исследований, нами предложены методики получения магния L-аспарагината методом осаждения органическим растворителем (с выходом 96,4%) и магния никотината методом выпаривания (с выходом 98,2%).

Состав полученных соединений устанавливали исследованием ИК-спектров, элементным анализом, а также с использованием химико-физических методов и термического анализа [22, 23]. В ИК-спектре кислоты аспарагиновой (рисунок 4) наблюдаются две полосы поглощения при 2364, 2076 см 1, характерные для большинства аминокислот. Помимо полосы при 1516 см", связанной с деформационными колебаниями ИЩ, в спектре имеются полосы вблизи 1600 см"1, обусловленные наличием ионизированной карбоксильной группой, связанной с NH3 группой. Наличие полосы в области 1240 см"1 может свидетельствовать, что вторая карбоксильная группа неионизированная. В ИК-спектре магния L-аспарагината, представленном на рисунке 4, полоса неионизированной карбоксильной группы отсутствует. Появляется полоса при 1384 см"1, характерная для ионизированной карбоксильной группы [12], что подтверждает образование связи иона магния со второй карбоксильной группой кислоты аспарагиновой.

Определение посторонних примесей в субстанции магния L- аспарагината и магния никотината

Посторонние примеси в магния L-аспарагинате устанавливали методом тонкослойной хроматографии. Для выбора оптимальной системы разделения посторонних примесей в магния L-аспарагинате была изучена доступная литература по хроматографическому анализу аминокислот. В литературе имеется достаточно много сведений по определению аминокислот методом тонкослойной хроматографии [45, 119, 120, 108]. В данной работе нами в качестве оптимальной нами выбрана система растворителей спирт н-бутиловый - вода - кислота уксусная ледяная (2:1:1), которая позволяет выявить примесь кислоты аспарагиновой в магния L-аспарагинате [39]. В качестве проявителей использовали 0,25% спиртовый раствор нингидрина и пары йода.

Для установления хроматографических характеристик продуктов деструкции и стабильности магния L-аспарагината его растворы подвергали термической обработке, действию окислителей, концентрированных кислот и щелочей.

С этой целью готовили 1% растворы магния L-аспарагината (раствор А). 0,5 мл раствора А разбавляли водой до 100 мл (раствор - свидетель). Образцы раствора А хранили при комнатной температуре в течение 10 дней, нагревали в течение 10 минут с 2 мл пергидроля, подвергали термической обработке при 105С в течение 10 дней.

При разработке методики в качестве стандартного образца вещества свидетеля был взят раствор кислоты аспарагиновой, в который прибавляли стехиометрическое количество оксида магния. Кислота аспарагиновая без добавления оксида или гидроксида магния не может быть использована в качестве стандартного образца, так как при хроматографировании ее подвижность больше, чем подвижность магния L-аспарагината.

Приготовленные растворы СОВ С магния L-аспарагината могут быть использованы в течение 1 суток.

Исследуемые растворы наносили на линию старта пластинки "Сорбфил" ПТСХ-А (ТУ 26-11-17-89) размером 6x10 см по 0,01 мл (100 мкг). Рядом в качестве свидетеля наносили 10 мкл 0,005% раствора (0,5 мкг), что соответствует 0,5 % примесей. Пластинку с нанесенными пробами высушивали на воздухе в течение 10 минут, затем хроматографировали восходящим способом в выбранной системе растворителей. Когда фронт растворителей проходил до конца пластинки, ее вынимали из камеры и высушивали на воздухе в течение 30 минут. Пластинку обрабатывали 0,25% спиртовым раствором нингидрина, сушили в вытяжном шкафу при комнатной температуре в течение 10 минут, затем выдерживали в сушильном шкафу при температуре 90С 10 минут.

В результате при проявлении пятен 0,25%) спиртовым раствором нингидрина на всех хроматограммах появлялось только одно пятно. На хроматограмме раствора магния L-аспарагината, подвергшегося термической обработке, после проявления в парах йода появляется одно дополнительное пятно с Rf=0,73±0,05, после воздействия окислителей появляются два дополнительных пятна с Rf=0,73±0,05 и Rf=0,2±0,05. Это может свидетельствовать о том, что примеси, образующиеся при хранении магния L-аспарагината, не имеют в структуре аминогруппы. Полученные хроматограммы представлены на рисунке 14.

Таким образом, использованные нами хроматографические условия пригодны для нормирования посторонних примесей в субстанции магния L-аспарагината. При этом, считая, что первоначальный продукт деструкции, не имея в свой структуре алифатической аминогруппы, не будет в остальном отличаться от строения исследуемого вещества, можно использовать в качестве СОВС раствор смеси кислоты аспарагиновой и магния оксида. Ввиду того, что в магния аспарагинате посторонних примесей должно быть не более 0,5% нами предложено наносить раствор СОВС в количестве 0,5 % от нанесенной пробы исследуемого вещества.

Методика определения: 0,1 г вещества растворяли в 10 мл воды. На линию старта пластинки "Сорбфил" ПТСХ-А (ТУ 26-11-17-89) размером 6x10 см наносили 10 мкл (100 мкг) полученного раствора. Рядом наносили 10 мкл (0,5 мкг) раствора СОВ С. Пластинку с нанесенными пробами высушивали на воздухе в течение 10 минут, затем хроматографировали восходящим способом в выбранной системе растворителей. Когда фронт растворителей проходил до конца пластинки, ее вынимали из камеры и высушивали на воздухе в течение 30 минут. Пластинку обрабатывали парами йода.

При появлении пятен их фиксировали и далее пластинку обрабатывали 0,25% спиртовым раствором нингидрина, сушили в вытяжном шкафу при комнатной температуре в течение 10 минут, затем выдерживали в сушильном шкафу при температуре 90С 10 минут. На хроматограмме исследуемого вещества допускается наличие не более двух пятен (проявляемых в парах йода), которые по величине и интенсивности окраски не должны превышать пятно СОВС (0,5%). Предварительно для определения посторонних примесей магния никотината нами была использована система растворителей, предложенная фармакопейной статьей на кислоту никотиновую.

Для этого 0,5 г вещества растворяли в 25 мл воды - испытуемый раствор А. Для установления хроматографических характеристик продуктов деструкции и стабильности магния никотината его растворы подвергали термической обработке при температуре 105С в течение 10 суток (раствор Б), действию окислителя (раствор В) и концентрированных кислот и щелочей (раствор Г).

На линию старта пластинки "Сорбфил" ПТСХ-А (ТУ 26-11-17-89) размером 6x10 см наносили по 5 мкл раствора А (100 мкг), 5 мкл раствора В (ЮОмкг) и рядом наносили 5 мкл (0,5 мкг), что соответствует 0,5% примеси. При разработке методики в качестве стандартного образца вещества сравнения (СОВС) был взят раствор никотиновой кислоты, в который прибавляли стехиометрическое количество оксида магния (раствор Д). Приготовленный раствор магния никотината может быть использован в течение 1 месяца.

Пластинку с нанесенными пробами высушивали на воздухе в течение 15 минут, помещали в камеру со смесью растворителей: пропанол-1 - кислота муравьиная безводная — вода (85:10:5). Когда-фронт растворителей доходил до конца пластинки, ее вынимали из камеры, высушивали на воздухе в течение 10 минут и просматривали в УФ-свете при длине волны 254 нм. Однако данная система растворителей не позволила определить продукты деструкции магния никотината, т.к. на хроматограмме проявлялось только одно пятно, соответствующее по хроматографическим параметрам пятну СОВС магния никотината. Для выбора оптимальной системы разделения посторонних примесей в магния никотинате была изучена доступная литература по хроматографическому анализу кислоты никотиновой [56, 108].

Стандартизация таблеток, содержащих магния L-аспарагинат и таблеток, содержащих магния никотинат

Стандартизацию таблеток магния L-аспарагината по 0,2 г проводили согласно ОСТ 91500.05.001-00. Основные показатели качества и их нормы были взяты из фармакопейной статьи на таблетки «Аспаркам». Разработку норм качества проводили на 5 лабораторных сериях таблеток. Описание. Таблетки магния L-аспарагината имеют правильную форму, цельные края без выщербленных мест, гладкую однородную поверхность, белого цвета. Размеры таблеток по 0,2 г составляют 8,0±0,2 мм в диаметре и 2,0±0,2 мм в высоту, т.е. отношение высоты к диаметру составляет не более 30%, что соответствует требованиям Государственной фармакопеи XI издания.

Среднюю массу таблеток и отклонения в массе отдельных таблеток определяли взвешиванием 20 таблеток с точностью до 0,001 г и полученный результат делили на 20. Затем взвешивали 20 таблеток порознь и сравнивали со средней массой. Отклонение в массе отдельных таблеток допускается от 0,198 до 0,23 г. Средняя масса таблетки 0,214 г. Допустимые отклонения в массе отдельных таблеток не превышали ± 7,5%, что соответствует требованиям Государственной фармакопеи XI издания. Результаты по определению средней массы таблетки представлены в таблице 23. Подлинность. С целью идентификации таблеток магния L-аспарагината предложены характерная реакция на магний (ГФ XI, вып. 1. с. 159), и реакция на аминокислоту с нингидрином. Массу порошка растертых таблеток магния L-аспарагината, необходимую для проведения анализа, рассчитывали с учетом чувствительности реакций и требований Государственной фармакопеи XI издания. 0,5 г порошка растертых таблеток взбалтывали с 10 мл горячей воды в течение 5 мин, охлаждали и фильтровали через бумажный фильтр. Ион магния определяли по методике, рекомендованной Государственной фармакопеи XI изд. (стр.162). К 5 мл фильтрата прибавляли 1 мл раствора хлорида аммония, 0,5 мл раствора фосфата натрия, 1 мл раствора аммиака. В результате образуется белый кристаллический осадок, растворимый в кислоте уксусной. К оставшимся 5 мл фильтрата, полученного для определения иона магния, прибавляли 1 мл свежеприготовленного раствора нингидрина и нагревали на кипящей водяной бане в течение 10 мин. Появляется синё-фиолетовое окрашивание. Определение подлинности аниона кислоты аспарагиновой в таблетках проводили с помощью метода ТСХ в системе растворителей: н-бутанол -ледяная уксусная кислота - вода (2:1:1) (см. п.3.3.1). Для этого 0,1 г порошка растертых таблеток взбалтывали с 10 мл воды в течение 10 минут и фильтровали. В качестве стандартного образца вещества сравнения (СОВС) был взят 1% раствор магния L-аспарагината, приготовленный из полученной нами субстанции. На линию старта пластинки «Сорбфил» наносили 10 мкл полученного фильтрата и 10 мкл раствора СОВС магния L-аспарагината и далее поступали как описано в разделе 3.3.1. Пластинку проявляли 0,25% спиртовым раствором нингидрина (см. п. 3.3.1). На хроматограмме исследуемого препарата появляется одна зона с Rf = 0,3±0,05, сходная по величине Rf, форме и окраске с зоной СОВС магния L-аспарагината. Прочность на истирание таблеток анализировали по методике Государственной Фармакопеи XI издания. Средние значения, полученные из 6 последовательных опытов, находятся в пределах 98,2% (таблица 23). Распадаемость. Испытание проводили согласно требованиям Государственной Фармакопеи XI. При этом установлено, что все анализируемые таблетки распадаются в течение 7-8 минут (таблица 23). Растворение.

Определение процента высвобождения магния L-аспарагината из таблеток проводили трилонометрическим методом с использованием прибора «Вращающаяся корзинка». В качестве среды растворения использовали воду очищенную, так как магния L-аспарагинат растворим в воде. Методика определения. Одну таблетку помещали в сухую корзинку, которую опускали в среду растворения объёмом 200 мл. Данный объем воды был взят из фармакопейной статьи на «Аспаркам» и связан с небольшим содержанием магния L-аспарагината в таблетке. Сосуд закрывали крышкой, затем приводили корзинку во вращение с режимом 100 об/мин. Через 45 минут раствор фильтровали через бумажный обеззоленный фильтр, отбрасывая первые 10 мл фильтрата. 100 мл раствора помещали в коническую колбу вместимостью 250 мл, прибавляли 10 мл аммиачного буферного раствора и титровали при тщательном перемешивании 0,05 моль/л раствором Трилона Б до синего окрашивания (индикатор - кислотный хром черный специальный). Содержание магния L-аспарагината (X, %) в таблетке рассчитывали по формуле: где Va, VK — соответственно, объемы титрованного раствора, израсходованные на титрование анализируемого и контрольного опытов, мл; К- поправочный коэффициент титрованного раствора; Т— титр рабочего раствора по определяемому веществу, г/мл; с - содержание магния L-аспарагината в таблетке, г. 1 мл 0,05 моль/л раствора Трилона Б соответствует 0,018012 г магния L-аспарагината (C4H6N04)2Mg 4Н20. Результаты определения растворения 5 серий таблеток представлены в сводной таблице 23. Для количественного определения магния L-аспарагината в таблетках использовали комплексонометрическое титрование. Методика определения: Около 0,4 г (точная масса) порошка растёртых таблеток помещали в коническую колбу вместимостью 250 мл, прибавляли 100 мл воды и взбалтывали 5 минут и далее поступали, как описано в разделе 2.2.4 Содержание магния L-аспарагината {X, г) в таблетке рассчитывали по формуле: где Р - средняя масса таблетки, г. а - масса порошка растертых таблеток магния L-аспарагината,.г. 1 мл 0,05 моль/л раствора трилона Б соответствует 0,018012 г магния L-аспарагината, которого должно быть от 0,19 г до 0,21 г, считая на среднюю массу одной таблетки.

Похожие диссертации на Получение и стандартизация органических солей магния и их таблетированных лекарственных препаратов [Электронный ресурс]

Фармакогностическое изучение представителей семейства яснотковых с целью получения лекарственных препаратовПулатова, Ташбиби

Теоретическое и экспериментальное обоснование использования лекарственных растений, содержащих фенилпропаноиды, для получения гепатопротекторных и иммуномодулирующих препаратовАвдеева Елена Владимировна

Лекарственные растения, содержащие фенилипропаноиды, как источник получения гепатопротекторных и иммуномодулирующих препаратовАвдеева Елена Владимировна

Исследование химического состава, оценка биологической активности пчелиного расплода и получение на его основе лекарственных препаратовЛазарян, Джоник Седракович

Теоретическое обоснование, получение и исследование новых дезагрегантов на основе известных лекарственных препаратовВотинцев, Николай Павлович

Получение сухих экстрактов из растений и создание на их основе препаратов и биологически активных добавокДавыдова, Валентина Николаевна

Разработка способа получения и стандартизации экстракта шалфея масляногоАсанов, Эрнис Бекович

Получение и стандартизация стоматологических гелей и жидких лекарственных средств на основе корневища и корней хрена обыкновенного и бутонов гвоздичного дереваНейман, Полина Леонидовна

Разработка способа получения и стандартизация экстракта жидкого противодиабетическогоСмольникова, Валентина Петровна

Получение и стандартизация нового пробиотика "Хилафор"Шевелева Мария Александровна