Введение к работе
Актуальность темы. В последние десятилетия отмечается значительный рост числа дерматологических заболеваний, среди которых особое место занимают грибковые инфекции, витилиго, псориаз. По данным ВОЗ 40 % населения земного шара являются носителями грибковых инфекций, больные витилиго составляют от 0,5 до 4 % всего населения земного шара, а это около 40 млн. человек.
Причинами кожных заболеваний служат острые и хронические инфекции, травмы, снижение уровня жизни в сочетании с ухудшающейся экологической обстановкой и неблагоприятными социальными факторами, а также применение в медицинской практике антибиотиков широкого спектра действия. Множество факторов, способствующих возникновению патологий кожи, обусловливает необходимость комплексного лечения, требующего длительного времени и достаточно дорогих синтетических препаратов, обладающих не только терапевтической активностью, но и высокой токсичностью, что ограничивает возможности их приема при продолжительном лечении. Следовательно, многие пациенты, страдающие этими заболеваниями, не могут получить адекватной терапии.
В связи с этим, заметно возрастает спрос на лекарственные средства растительного происхождения, поскольку они являются менее дорогостоящими по сравнению с продуктами химического синтеза и имеют ряд преимуществ (оказывают терапевтический эффект с наименьшим количеством противопоказаний для пациента, имеют низкую токсичность), что позволяет проводить лечение этими препаратами в различных возрастных группах в течение длительного времени.
Однако, ассортимент растительных лекарственных средств, для лечения дерматологических заболеваний в настоящее время весьма ограничен.
Перспективными, в этом отношении можно рассматривать плоды Амми большой - Ammi majus L., семейства Сельдерейные -Apiaceae. Применение в официнальной и народной медицине России, а также наличие достаточной отечественной сырьевой базы
для промышленных заготовок сырья этого культивируемого растения представляет особый интерес для расширения номенклатуры лекарственных средств.
Плоды амми большой не описаны ни в одной фармакопее, в отечественных и зарубежных источниках имеются весьма ограниченные данные об их химическом составе и методах анализа. В Реестр лекарственных средств плоды амми большой включены с 1996 г. (№ 71/609-13) и предназначены для производства субстанции «Аммифурин» и препаратов в лекарственных формах - таблетки «Аммифурин» 20 мг (№ 70/151/48) и растворы «Аммифурин» 2% (70/151/47) и 0,3% (№ 83/914/9). Автором препаратов и разработчиком нормативной документации на лекарственное растительное сырье является Всероссийский научно-исследовательский институт лекарственных и ароматических растений (ВИЛАР) РАСХН. Уровень имеющейся нормативной документации на плоды амми большой (ФС 42-1996-83) не соответствует современным стандартам качества на лекарственное растительное сырье. В связи с этим, плоды амми большой были нами выбраны в качестве актуального объекта исследования - в качестве сырьевого источника препаратов «Аммифурин» и «Анмарин».
Цель и задачи исследования. Целью настоящих исследований является комплексное изучение химического состава плодов амми большой и разработка методов контроля их качества.
Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:
провести углубленное изучение диагностических признаков плодов амми с использованием макроскопического и микроскопического анализа.
с использованием современных физико-химических методов анализа исследовать химический состав плодов на присутствие и содержание различных групп биологически активных веществ (БАВ) в том числе кумаринов, фурокумаринов, высших жирных кислот, аминокислот, фенольных соединений, Сахаров, жирного масла, дубильных веществ, макро- и - микроэлементов;
оценить микробиологическую чистоту и содержание радионуклидов;
подобрать оптимальные условия для разработки методик количественного определения фурокумаринов методом ВЭЖХ;
провести валидацию методик количественного определения суммы фурокумаринов в пересчете на ксантотоксин и мармезина в плодах амми большой;
разработанную методику количественного определения суммы фурокумаринов применить к оценке качества субстанции «Аммифурин» и таблеток «Аммифурин»;
разработать и оформить проект ФС «Амми большой плоды» с целью включения в ГФ XII издания.
Научная новизна работы. Информационно-аналитическими исследованиями показана необходимость проведения всесторонних исследований химического состава плодов амми большой и разработки современных методик идентификации и количественного определения фурокумаринов и мармезина.
На основании макро- и микроскопического анализа установлены диагностически значимые признаки плодов амми большой.
Методом ВЭЖХ с использованием достоверных образцов охарактеризован качественный состав и количественное содержание суммы основных фурокумаринов (бергаптен, изопимпинеллин, ксантотоксин) и количественное содержание мармезина в плодах амми большой. Методики количественного определения основных биологически активных веществ (БАВ) в плодах амми большой валидированы.
Хромато-масс-спектрометрическим методом охарактеризован компонентный состав кумаринов.
Впервые методом ВЭЖХ проведена идентификация аминокислотного состава плодов амми большой, обнаружено 20 аминокислот.
Впервые определено содержание жирного масла (18,72%).
Методом масс-спектрометрии в сочетании с хроматографи-ческим способом разделения компонентов смеси в плодах амми большой изучен состав высокомолекулярных жирных кислот, который представлен насыщенными (миристиновой, пальмитиновой, стеариновой) и ненасыщенными (олеиновой, линолевой) кислотами;
Впервые в плодах амми большой методом ВЭЖХ изучен состав Сахаров, определена сумма полисахаридов в сырье (менее 1%). Установлено наличие дубильных веществ (0,72%).
Определен макро- и микро элементный состав плодов, который представлен калием, кальцием, железом и селеном.
С учетом современных требований к растительному сырью, разработаны критерии подлинности и нормы содержания БАВ в плодах амми большой. Подобраны условия анализа фурокумаринов в растительном сырье, которые позволили разработать сквозную методику стандартизации от растительного сырья к лекарственному средству.
Практическая значимость работы.
На основании проведенных исследований разработаны и внедрены:
- Проект ФС «Амми большой плоды» (Акт внедрения методики количественного определения суммы фурокумаринов в плодах амми большой во Всероссийском научно-исследовательском институте лекарственных и ароматических растений (ВИЛАР) РАСХН;
-Акт внедрения методики количественного определения суммы фенольных соединений в пересчете на хлорогеновую кислоту в плодах амми большой в Государственном учреждении здравоохранения «Центр сертификации и контроля качества лекарств Департамента здравоохранения г. Москвы» (ГУЗ «ЦС и ККЛ ДЗ»);
Методики идентификации и количественного определения основных БАВ (фурокумаринов) апробированы и рекомендованы для включения в нормативную документацию на субстанцию и таблетки «Аммифурин».
Основные положения, выносимые на защиту
результаты анализа номенклатуры и методов контроля качества фотосенсибилизирующих средств растительного происхождения, включенных в Реестр лекарственных средств РФ;
результаты морфолого-анатомического изучения с установлением диагностических признаков сырья - плодов амми большой;
результаты исследований качественного состава и количественной оценки биологически активных веществ (БАВ)
плодов амми большой с использованием современных физико-химических методов;
итоги разработки и определение показателей качества сырья -плодов амми большой;
методики количественного определения основных БАВ в плодах амми большой, обеспечивающие сквозную стандартизацию от растительного источника к лекарственному средству.
Апробация работы. Основные положения диссертационной
работы доложены и обсуждены на XVI Российском национальном
конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2009), VII
Международном симпозиуме по фенольным соединениям (Москва, 2009), XIX Московской Международной Гомеопатической Конференции (Москва, 2009).
Связь задач и исследования с проблемным планом фармацевтической науки. Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом НИР и ИЭКЛС ФГУ НЦ ЭСМП «Совершенствование нормативной базы по стандартизации лекарственного растительного сырья и препаратов из лекарственного растительного сырья» на 2006-2010 гг.
Публикации. По материалам диссертации опубликовано 13 научных работ, из них 6 - в изданиях, рецензируемых ВАК.
Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 154 страницах компьютерного текста, состоит из введения, обзора литературы (глава 1), четырех глав экспериментальной части, выводов, списка литературы, включающего 120 источников, в том числе 36 иностранных, приложений. Работа иллюстрирована 46 рисунками, содержит 31 таблицу.
![Исследования по стандартизации и созданию лекарственных средств на основе плодов расторопши пятнистой [Silybum marianum (L.) Gaertn.].](/i/i/4243/375120.png "Исследования по стандартизации и созданию лекарственных средств на основе плодов расторопши пятнистой [Silybum marianum (L.) Gaertn.]. Рыжов Виталий Михайлович")
![Изучение промышленных отходов фармацевтического производства как дополнительных источников биологически активных соединений (на примере шрота плодов боярышника и шрота листьев мяты) [Электронный ресурс]](/i/i/4447/187679.png "Изучение промышленных отходов фармацевтического производства как дополнительных источников биологически активных соединений (на примере шрота плодов боярышника и шрота листьев мяты) [Электронный ресурс] Зинченко Лариса Александровна")